Protein (Crude) in Animal Feed
Copper Catalyst Kjeldahl Method
First Action 1984
(Caution: See safety notes on sulfuric acid and sodium hydroxide.)
A. Principie
Sample is digested in H 2SO 4, using CuSO 4 as catalyst, con•
verting N to NH 3 which is distd and titrd.
B. Reagents
(a) Sodium hydroxide.-Pellets, flakes, or soln witn sp. gr.
~ 1.36, low N. Dissolve ca 450 g NaOH in H20, cool, dil. to
1 L.
(b) Alundum.-Boiling stones, 8-14 mesh (Thornas Sci•
entific Co., No. 1590-018).
(e) Methyl red indicaror.-Dissolve l g Me red (Na salt)
in 100 mL MeOH.
(d) Hydrochloric or sulfuric acid std soln.-0.5N. Prep. as
in 936.15 or 890.01.
(e) Sodiumhydroxidestdso/11.-0.IN. Prep. asin936.16.
After srdzg both acid and base by rnethods suggested in (d) and (e), also check one against the other. ln addn,
check entire method by analyzing NlST Stcl Ref. Material No. 194, NH 4H 2PO 4, certified 12.15% N, and
high purity lysine.HCI.
C. Apparatus
(a) Digestion.-Use Kjeldahl flasks with capacity of 500-
800 mL.
(b) DistWation.-Use digestion tlask (Corning Glass Works, or equiv .) connected to distn trap by rubber
stopper. Distn trap
is connected to condenser with low-S tubing. Outlet of con•
denser tube should be <4 mm diam.
D. Determination
Weigh 0.250-1.000 g sample into digestion flask. Acle! 15 g K2SO 4, 0.04 g anhyd. CuSO 4, 0.5-1.0 g
alundum granules, and 20 mL H2SO 4. (Add addnl 1.0 mL H2SO 4 for each 0.1 g fat or 0.2 g other org. matter if
sample wt is > 1 g.)
Include at Jeast one sample of high purity lysine.HCl in each day's run as check of correctness of digestion
parameters. 1f recovery is not complete, make appropriate adjustments.
Heat flask at 5-min boil rate (burner preheated and adjusted to bring 250 mL H 2O at 25º to rolling boil in 5 min)
until dense white fumes clear bulb of flask, swirl gently, continue heating adclnl 90 min. (Note: Reagent
proportions, heat input, and digestion time are critica) factors-do not change.) Cool, cau• tiously add 250 mL
H2O, and cool to room temp. (Note: If
bumping occurs during distn, vol. of H 20 may be increased
to ca 275 mL.)
Prep. titm beaker by adding accurately measured appropri• ate vol. std acid soln to amt of H2O such that
condenser tip will be sufficiently imrnersed. Add 3-4 drops indicator soln (e).
Acld 2-3 drops of tributyl citrate to digestion flask to reduce foaming; add another 0.5-1.0 g alundum granules.
Slowly down side of flask, add sufficient NaOH soln (a) such that mixt. will be strongly alk. Immediately connect
tlask to disto app., mix completely, and distil at ca 7.5-min boil rate until :2150 mL distillate is collected in titrn
beaker.
Titr. excess std acid in distillate with std NaOH soln. Cor•
rect for blank detn on reagents. Cale. % N:
% N = [(Nacid)(mLaci.J) - (mLbk)(NN,OH)
- (mLNaoH)(NN,oH)][l400.67]/mg sarnple
where mLNaOH = mL std base needed to titr sample; mLaciJ = mL std acid used for that sarnple; mLbk = mL std
base needed to titr. 1 rnL std acid minus mL std base needed to titr. reagent
blank carried thru method and distd into I mL std acid; Nacic1
= norrnality of std acid; Nb,sc = norrnality of std base. Cale.
o/o crude protein, defined as 6.25 x % nitrogen, or 5.7 X %
nitrogen for wheat grains. Ref.: .IAOAC 67, 869(1984).
Proteína (cruda) en la alimentación animal
Método Kjeldahl del catalizador de cobre
Primera acción 1984
(Precaución: consulte las notas de seguridad sobre
el ácido sulfúrico y el hidróxido de sodio).
A. Principie
La muestra se digiere en H2SO4, usando CuSO4
como catalizador, con •
vertiendo N a NH3 que se distribuye y se titula.
B. Reactivos
(a) Hidróxido de sodio.-Pellets, escamas o soln witn
sp. gramo.
~ 1,36, bajo N. Disolver aproximadamente 450 g de
NaOH en H2O, enfriar, diluir. a
1 L.
(b) Alundum.-Piedras hirviendo, malla 8-14
(Thornas Sci •
entific Co., No. 1590-018).
(e) Indicador de rojo de metilo. Disuelva l g de rojo
de metilo (sal de Na).
en 100 ml de MeOH.
(d) Solución estándar de ácido clorhídrico o
sulfúrico: 0,5 N. Deberes. como
en 936.15 o 890.01.
(e) Hidróxido de sodio o / 11.-0.IN. Deberes.
asin936.16.
Después de evaluar tanto el ácido como la base por
los métodos sugeridos en (d) y (e), verifique
también uno contra el otro. Además, verifique el
método completo analizando NlST Stcl Ref.
Material No. 194, NH4H2PO4, certificado 12.15%
N y lisina de alta pureza. HCI.
C. Aparato
(a) Digestión. -Utilice matraces Kjeldahl con
capacidad de 500-
800 mL.
(b) Destilación. -Use una botella de digestión
(Corning Glass Works, o equivalente) conectada a
la trampa de destilación mediante un tapón de
goma. Trampa diferente
está conectado al condensador con tubería baja-S.
Salida de estafa •
El tubo más denso debe tener <4 mm de diámetro.
D. Determinación
Pesar 0,250-1,000 g de muestra en un matraz de
digestión. ¡Acle! 15 g de K2SO4, 0,04 g anhidro.
CuSO4, 0,5-1,0 g de gránulos de alundum y 20 ml
de H2SO4. (Agregue 1.0 mL de H2SO4 adicionales
por cada 0.1 g de grasa u 0.2 g de otra materia
orgánica si el peso de la muestra es> 1 g.)
Incluya en Jeast una muestra de lisina.HCl de alta
pureza en la ejecución de cada día como
comprobación de la corrección de los parámetros de
digestión. Si la recuperación no es completa, realice
los ajustes necesarios.
Calentar el matraz a una velocidad de ebullición de
5 min (quemador precalentado y ajustado para
llevar 250 ml de H2O a 25º hasta que hierva en 5
min) hasta que los humos blancos densos eliminen
el bulbo del matraz, agite suavemente y continúe
calentando durante 90 min. (Nota: las proporciones
de reactivo, la entrada de calor y el tiempo de
digestión son factores críticos); no cambian. Enfríe,
agregue • con cuidado 250 ml de H2O y enfríe a
temperatura ambiente. (Nota: si
el golpe se produce durante el distn, vol. de H20
puede aumentar
hasta aproximadamente 275 ml.)
Deberes. vaso de precipitados titm mediante la
adición de volumen apropiado medido con
precisión. solución ácida estándar a una cantidad de
H2O de modo que la punta del condensador quede
suficientemente sumergida. Agregue 3-4 gotas de
solución indicadora (e).
Ponga 2-3 gotas de citrato de tributilo en el matraz
de digestión para reducir la formación de espuma;
agregue otros 0.5-1.0 g de gránulos de alundum.
Lentamente en el lado del matraz, agregue
suficiente solución de NaOH (a) para mezclar. será
fuertemente alcalino. Conecte inmediatamente el
matraz a la aplicación de destilación, mezcle
completamente y destile a una velocidad de
ebullición de aproximadamente 7,5 min hasta que se
recojan 2150 ml de destilado en un vaso de
precipitados de titulación.
Titr. exceso de ácido estándar en el destilado con
solución estándar de NaOH. Cor •
rect para detn en blanco en reactivos. Cale. % N:
% N = [(Nacid) (mLaci.J) - (mLbk) (NN, OH)
- (mLNaoH) (NN, oH)] [l400.67] / mg sarnple
donde mLNaOH = mL de base estándar necesaria
para titular la muestra; mLaciJ = mL de ácido
estándar usado para ese producto; mLbk = mL de
base estándar necesaria para titular. Se necesita 1
rnL de ácido estándar menos mL de base estándar
para la titulación. reactivo
el blanco se llevó a cabo mediante el método y se
distribuyó en 1 ml de ácido estándar; Nacic1
= normalidad del ácido estándar; Nb, sc =
normalidad de la base estándar. Cale.
o / o proteína cruda, definida como 6.25 x% de
nitrógeno, o 5.7 X%
nitrógeno para granos de trigo. Ref .: .IAOAC 67,
869 (1984).
