Rev Méd Chile 2003; 131: 837-845

Fenotipos bioquímicos y fagotipos

de cepas de Salmonella enteritidis
aisladas en Antofagasta, 1997-2000
Juan Silva Aa, Carmen Aravena Mb, Jorge Araya Rc,
Patricia Colque-Navarrod, Inger Kühne, Roland Möllbyf.

Biochemical phenotypes and phage

types of Salmonella enteritidis strains
isolated in Antofagasta during the
period 1997-2000
Background: PhP-S48 (Phene Plate Techniques AB), a method
based on biochemical phenotypes has been developed and used successfully to typify S enteritidis
strains in epidemiological studies. Aim: To identify phenotypes of S enteritidis isolated from eggs,
chicken meat and infected humans in Antofagasta during the period 1997-2000. Material and
Methods: PhP-S48 and phage typing were used to identify phenotypes of 33 S enteritidis strains,
sixteen isolated from poultry and 17 from clinical sources. S enteritidis ATCC17036 was used as
control strain. Results: Twelve biochemical phenotypes (BTs) including 4 common (C) and 8 single
(S) were identified. BTs C1 y C3 containing 16 and 5 strains, respectively, accounted for 63.6% of
the isolates. BT C1 was found in poultry and human sources in the period 1997-2000, and BT C3
was isolated from humans, in the period 1999-2000. Using phage typing, 5 phage types (PT) and 3
strains could be not typed (NTs). PT1 and PT21 were the dominant phage types, with 14 and 13
strains respectively. Strains of PT1 were isolated from poultry and human sources in the period
1997-2000. PT21 was found in poultry samples in the period 1997-1998 and in clinical samples, in
the period 1997-1998. Combination of biochemical phenotypes and phage typing divided the strains
into 5 phenotypes (BT:PT). Two phenotypes were the most frequently isolated, phenotype C1:1 with 8
isolates found in eggs and humans in 1999, and phenotype C1:21 with 5 strains isolated in 1997-
1999. Conclusions: These results indicate the presence of one persistent and one recently emerged
phenotype among S enteritidis in Antofagasta, Chile. PhP-S48 also provided information about a
relationship among the strains (Rev Méd Chile 2003; 131: 837-45).
(Key-words: Eggs; Poultry products; Salmonella enteritidis; Salmonella phages)
Recibido el 30 de septiembre, 2002. Aceptado en versión corregida el 10 de junio, 2003.
Trabajo financiado por proyecto FNDR-3328, Gobierno II Región, Chile y PEI BO11 DINV,
Universidad de Antofagasta.
Departamento de Tecnología Médica-INDES, Universidad de Antofagasta, Antofagasta, Chi-
le. Microbiology and Tumorbiology Center, Karolinska Institute, Estocolmo, Suecia.
aTecnólogo Médico, Magíster en Microbiología, PhD en Biología. bBioquímico, Magíster en Cien-
cias Biomédicas (C). cTecnólogo Médico, Doctor en Microbiología e Inmunología. dIngeniero
Agrónomo, Licenciado en Microbiología. ePhD en Microbiología. fMédico, PhD en Microbiología.

Correspondencia a: Dr. Juan Silva. Departamento Tecnología Médi-

ca-INDES. Universidad de Antofagasta. Avenida Coloso s/n.
Antofagasta, Chile. Fonofax: (56-55) 637 207. E mail: [email protected]

837
 Rev Méd Chile 2003; 131: 837-845

D urante las últimas dos décadas, Salmonella

enteritidis ha sido reconocido como uno de
los principales agentes etiológicos que causa
dos los laboratorios. Uno de ellos, es la tipifica-
ción por bacteriófagos, que permite la separación
de las cepas de acuerdo a su patrón de lisis por
infecciones gastrointestinales a nivel mundial1,2. diferentes virus bacterianos. La fagotipia es un
Estas infecciones ocurren generalmente por el método rápido de tipificación de S enteritidis y ha
consumo de huevos o productos avícolas conta- sido ampliamente usado en estudios epidemioló-
minados3-5. En Sudamérica, los primeros hallazgos gicos18-20.
en que describieron infecciones por este microor- Estudios de fagotipia realizados en Chile, han
ganismo ocurrieron a mediados de la década de demostrado que los fagotipos 1 y 4 de S enteritidis
1990-99, originando brotes epidémicos en Argenti- han sido los responsables de la mayoría de las
na, Brasil y Chile6,7. En Chile, S enteritidis emergió infecciones ocurridas en la reciente epidemia. El
con características epidémicas en 1994, afectando fagotipo 1 fue frecuentemente aislado en el norte
a un gran número de personas, con tasas que de Chile (94%); en cambio, el fagotipo 4 en el
aumentaron en 3.000 por ciento con respecto a centro y sur del país (92%)9. También, en un
años anteriores2. Durante el período epidémico, estudio orientado a detectar presencia de S enteri-
1994-1996, 90% de las notificaciones de casos con tidis en productos avícolas en Santiago, se aisló
infecciones por este microorganismo provinieron mayoritariamente el fagotipo 4 (59,4%), concor-
de Arica y Antofagasta7 y gran parte de estas dando con su alto aislamiento en muestras clíni-
infecciones alimentarias fueron atribuidas al con- cas, y además, se encontró el fagotipo 7 (25%), el
sumo de huevos. Posteriormente, S enteritidis se cual no ha sido frecuentemente aislado en infec-
ha diseminado por todas las regiones de Chile, ciones humanas21. Estos trabajos, señalan también
constituyéndose en un patógeno humano endémi- la importancia de identificar correctamente los
co y, por consiguiente, en un importante proble- tipos de S enteritidis que están circulando en el
ma de salud pública8. país, con el fin de aplicar las medidas de control
Diversos autores han tratado de explicar las en forma oportuna.
razones de la emergencia de las infecciones por S El sistema Phene-Plate (PhP) es un nuevo
enteritidis en Chile, sugiriendo que los aislamien- método de tipificación fenotípica de serotipos de
tos de S enteritidis en nuestro país fueron introdu- Salmonella y otras bacterias entéricas, desarrolla-
cidos en los planteles avícolas, por la importación do en 1985, por Kühn22 en Suecia. Es una técnica
de aves reproductoras de otros países8,9. computarizada y fácil de realizar. El sistema se
En los estudios epidemiológicos de S enteriti- basa en el análisis numérico de la cinética de 48
dis se han utilizado diversos marcadores para reacciones bioquímicas del crecimiento bacteria-
discriminar acerca de los tipos o clones circu- no, en un medio líquido en una microplaca de
lantes, durante los brotes epidémicos. Algunos titulación. Por cada cepa se produce un set
investigadores sostienen que los métodos genéti- característico de reacciones que se registran, los
co-moleculares son altamente efectivos, confir- cuales pueden ser usados para establecer un nivel
mando su enorme potencial para el diagnóstico de identidad entre las cepas bacterianas ensaya-
de estos agentes infecciosos; como es el caso de la das, usando un programa de computación. Para
electroforesis de campo pulsado (PFGE)10,11, la cada serotipo de Salmonella se ha elegido una
reacción en cadena de la polimerasa (PCR)12,13, batería de sustratos específicos con óptima dis-
amplificación randómica de ADN polimórfico criminación. El sistema ha sido previamente
(RAPD PCR)14 y la ribotipificación15-17. Todas evaluado por su poder discriminatorio, reproduci-
estas técnicas presentan diferencias en el grado de bilidad23 y estabilidad de los marcadores bioquí-
discriminación de las cepas y los resultados han micos24. También ha sido usado exitosamente en
sido un poco variables; además, la poca accesibili- estudios epidemiológicos de diferentes serotipos
dad a los laboratorios de hospitales por su de Salmonella24-26.
elevado costo y manejo de las técnicas, hacen En base a estos antecedentes, los objetivos de
difícil su uso rutinario. Sin embargo, en forma este trabajo fueron: investigar la utilidad del
paralela se han estado utilizando algunos marca- sistema Ph-Plate para determinar los fenotipos
dores fenotípicos bastante reproducibles para to- bioquímicos de cepas de S enteritidis y, junto con

838
 FENOTIPOS BIOQUÍMICOS Y FAGOTIPOS DE CEPAS DE SALMONELLA ENTERITIDIS - J Silva et al

la fagotipia, estudiar la variación de los fenotipos los protocolos estandarizados, previamente descri-
detectados en las cepas de S enteritidis aisladas de tos por Ward y col18, en el Instituto de Salud
productos avícolas y de casos clínicos, durante Pública de Chile. Los fagotipos fueron abreviados
1997-2000 en Antofagasta. FT.

Fenotipos bioquímicos de las cepas. El sistema

MATERIAL Y MÉTODO Phene-Plate (PhP-S48) se usó para determinar los
fenotipos bioquímicos (FTs) de las 33 cepas de S
Cepas bacterianas. Un total de 33 cepas de S enteritidis y para validar los ensayos, se incluyó la
enteritidis fueron incluidas en este estudio. Dieciséis cepa ATCC 17036. El sistema PhP-S48 (Phene
fueron aisladas de muestras avícolas, 13 de huevos y PlateTM System AB, Estocolmo, Suecia) consiste en
3 de carne de pollo. De las cuales, 10 fueron microplacas que contienen 2 sets paralelos de 48
obtenidas del Instituto de Salud Pública de Chile, substratos desecados, especialmente elegidos para
que habían sido enviadas por el Laboratorio de los fenotipos bioquímicos de cepas de Salmonella
Bromatología del Servicio de Salud de Antofagasta y de diferentes serotipos. Para cada serotipo un set
fueron aisladas en 1997-1998. Además, las 6 cepas de pruebas con óptimo grado de discriminación ha
restantes fueron aisladas en huevos en nuestro sido seleccionado y anexado a un programa de
laboratorio (1999-2000). También, 17 cepas fueron computación (PhPWIN), que permite realizar los
obtenidas de muestras clínicas de pacientes cálculos requeridos. Los sustratos utilizados para la
ambulatorios atendidos por síndrome de diarrea tipificación de las cepas de S enteritidis, se mues-
aguda en Consultorios de Atención Primaria de tran en la Tabla 1.
Antofagasta, entre 1999-2000. S enteritidis ATCC Una colonia de la cepa a ensayar fue sembrada
17036 se incluyó como cepa control. en tubo con 10 ml de proteosa peptona (Difco)
0,1%, conteniendo azul de bromotimol 0,01% y se
Fagotipificación de las cepas. Las 33 cepas de S inocularon alícuotas de 150 µl a los pocillos de las
enteritidis fueron fagotipificadas de acuerdo con microplacas pre-preparadas, conteniendo los

Tabla 1. Set de reactivos usados para determinar fenotipos bioquímicos

de Salmonella enteritidis por el Sistema Ph-Plate

Test Reactivo Test Reactivo Test Reactivo

1 Acido Manoico 17 Adonitol 33 Arbutina

-d-lactona
2 L-Arabinosa 18 Inositol 34 B-Metil glucósido
3 D-Xilosa 19 D-arabitol 35 5-Ketogluconato
4 Galactosa 20 Glicerol 36 Gluconato
5 Maltosa 21 Maltitol 37 Melobionato
6 Celobiosa 22 Sorbitol 38 Galactolactona
7 Trehalosa 23 Dulcitol 39 Salicina
8 Palatinosa 24 pH 7,4 Control 40 pH 5,5 Control
9 Sucrosa 25 Sorbosa 41 Citrato
10 Lactosa 26 Deoxiglucosa 42 Fumarato
11 Melibiosa 27 Deoxiribosa 43 Malinato
12 Lactulosa 28 Ramnosa 44 Malonato
13 Gentobiosa 29 D-Fucosa 45 Piruvato
14 Melezitosa 30 L-Fucosa 46 L-Tartarato
15 Rafinosa 31 Tagatosa 47 Urea
16 Inopina 32 Amigdalina 48 Ornitina

839
 Rev Méd Chile 2003; 131: 837-845

substratos (3,75 g/l) en cada pocillo. Los inóculos fueron asignados al mismo fenotipo bioquímico28.
se dispusieron con micropipetas múltiples y para Los fenotipos bioquímicos que se encontraron en
conseguir una apropiada rehidratación de los más de una cepa fueron llamados fenotipos
substratos, las placas inoculadas fueron manteni- comunes (C), y aquellos que presentaron sola-
das refrigeradas a 4°C toda la noche y, posterior- mente un aislamiento fueron llamados fenotipos
mente, incubadas a 37°C. Después de la sólos (S).
incubación, las placas fueron leídas en un lector La recolección de los datos, incluyendo las
de microplacas con un espectrofotómetro (iEMS, lecturas ópticas, fueron realizadas con el software
Labsystems, Finland) a 620 nm, la absorbancia de Programa PhPWIN (PhP-Plate Systems AB).
cada reacción fue medida a las 7, 24 y 48 h de
incubación.
Los valores de absorbancia, transferidos a un RESULTADOS
computador personal, fueron multiplicados por
10, así los resultados producidos estuvieron en un El sistema Ph-Plate de tipificación permitió diferen-
rango de 0 a 30 por cada reacción; valores bajos ciar 12 fenotipos bioquímicos (FB) (Tabla 2). De
indicaban reacciones ácidas (amarillo) y valores ellos, 4 fueron FB comunes (C) y 8 FB solos (S) y la
altos reacciones alcalinas (azul profundo). Des- cepa ATCC 17036 presentó en este caso un FB solo
pués de la lectura final, el valor promedio de las 3 (S). Los FBs C1 y C3 contenían 16 y 5 cepas
lecturas fue calculado proveyendo 12 números respectivamente, lo que corresponde a 63,6% del
diferentes que varían 0-30 por cada cepa, constitu- total de las cepas ensayadas. El sistema Ph-Plate
yendo el fingerprinting bioquímico para cada permitió establecer que 11 cepas de origen avícola
cepa. Similitudes entre las cepas ensayadas fueron y 5 clínicas, pertenecían al FB C1. Además en el FB
calculadas como coeficientes de correlación (r) de C1, se encontró que 5 cepas avícolas y 5 clínicas
acuerdo con trabajos previos23 y fueron reunidas fueron aisladas en el año 1999, las restantes cepas
de acuerdo al método de grupo par no pesados ambientales fueron aisladas en 1997 (3 cepas) y
con promedios aritméticos (UPGMA)27 en un 1998 (3 cepas). En cambio, las 5 cepas del FB C3
dendrograma. Las cepas que mostraron coeficien- fueron aisladas de muestras clínicas, aisladas en los
tes de correlación más altos que el nivel de años 1999 (2 cepas) y 2000 (3 cepas). El FB C2
identidad usado por el sistema PhP-S48 (0,980) incluye 2 cepas clínicas, aisladas en 1999 y 2000; y

Tabla 2. Fenotipos bioquímicos (FB) de cepas de Salmonella enteritidis aisladas

de muestras avícolas y clínicas en Antofagasta. Chile. 1997-2000

Fenotipos Número Origen y año aislamiento de cepas

(FB) de cepas Avícola Clínico

C-1 16 1997 (3)-1998 (3)-1999 (5) 1999 (5)

C-2 2 - 1999 (1) - 2000 (1)
C-3 5 - 1999 (2) - 2000 (3)
C-4 2 1998 (1) 1999 (1)
S-1 1 - 2000 (1)
S-2 1 1999 (1) -
S-3 1 1997 (1) -
S-5 1 1998 (1) -
S-6 1 - 2000 (1)
S-7 1 - 2000 (1)
S-8 1 - 1999 (1)
S-9 1 1998 (1) -
Total 33 16 17

840
 FENOTIPOS BIOQUÍMICOS Y FAGOTIPOS DE CEPAS DE SALMONELLA ENTERITIDIS - J Silva et al

Tabla 3. Fagotipos (FT) de cepas de Salmonella enteritidis aisladas de

muestras avícolas y clínicas en Antofagasta. 1997-2000

Fagotipos N de Origen y año aislamiento de cepas

(FT) cepas Avícola Clínico

1 14 1997 (1) -1999 (6) 1999 (2)- 2000 (5)

3 1 1998 (1) -
4 1 - 1999 (1)
7 1 1997 (1) -
21 13 1997 (2) - 1998 (5) 1999 (5) - 2000 (1)
NT 3 - 1999 (2) - 2000 (1)
Total 33 16 17

C4 presentó 1 cepa ambiental (1998) y 1 cepa Computacional PhPWIN estableció las similitudes
clínica (1999). Las 8 cepas pertenecientes a los FBs entre las cepas ensayadas que presentaron un
(S) fueron todas aisladas de muestras avícolas (4) y mayor coeficiente de correlación (0,980). Sus resul-
clínicas (4), en los años 1997 a 2000. Estos tados fueron registrados en un dendrograma, que
resultados fueron validados con la cepa ATTC permitió la comparación de los dos sistemas de
17036 de S enteritidis. tipificación (Figura 1). Al combinar los fenotipos
Los estudios de fagotipia de las 33 cepas de S bioquímicos con los fagotipos (FB:FT), pertene-
enteritidis permitió caracterizar 6 fagotipos, inclu- cientes a una misma cepa de S enteritidis, se
yendo aquellos designados como no tipificables pudieron encontrar 6 fenotipos comunes (con más
(NT), los cuales se presentan en la Tabla 3. Los de una cepa) y 13 solos (FB:FT). Entre los tipos
dos FTs dominantes fueron: FT1 con 14 cepas de S comunes, dos mayores fenotipos fueron identifica-
enteritidis y FT21 con 13 cepas, lo que incluye el dos. La combinación del fenotipo bioquímico y
81,8% de las cepas ensayadas. Hubo 3 cepas que fagotipo C1:1 presentó el mayor número de aisla-
no pudieron ser asignadas a ningún fagotipo mientos (8 cepas), de las cuales 5 correspondieron
reconocido y fueron consideradas como no tipifi- a cepas avícolas aisladas de huevos en 1999 y 3 a
cables (NT). De las cepas del FT1, 7 de ellas cepas clínicas aisladas en 1997 (1) y 1999 (2).
fueron aisladas de muestras avícolas, 1997 (1 También, la combinación de ambos fenotipos más
cepa) y 1999 (6), y además, 7 de muestras clínicas frecuente fue C1:21 con 5 aislamientos, encontrán-
1999 (2) y 2000 (5). Las cepas encontradas en el dose 1 cepa aislada en huevo en 1997, dos cepas
FT21, 7 fueron de muestras avícolas, 1997 (2 de huevos en 1998, una de carne de pollo en 1998
cepas) y 1998 (5), y además, seis de muestras y una de muestra clínica en 1999. En los otros
clínicas, 1999 (5 cepas) y 2000 (1 cepa). Los fenotipos comunes encontrados (FB:FT), los aisla-
aislamientos de las cepas clínicas y avícolas del mientos correspondieron a 2 cepas en cada caso y
FT21 ocurrieron en distintos años, como para presentaron variaciones en los años.
establecer una relación entre ellas. En este trabajo,
no se incluyeron cepas clínicas aisladas en el
período 1997-1998, como así también, cepas aví- DISCUSIÓN
colas pertenecientes al FT21 en 1999-2000. Las
cepas del FT4 y NT fueron aisladas de muestras En los últimos 20 años, las infecciones por
clínicas, en los años 1999 y 2000; y las de los FT3 diferentes serotipos de Salmonella han aumenta-
y FT7 pertenecieron a muestras avícolas 1998 y do notablemente en todo el mundo, especialmen-
1997, en cada caso. te infecciones gastrointestinales causadas por S
El sistema Ph-Plate permitió reconocer diferen- enteritidis 1. En diversos reportes, se ha señalado
tes fenotipos y además, mediante el Programa la necesidad de contar con buenos marcadores

841
 Rev Méd Chile 2003; 131: 837-845

Coeficiente de Correlación ID

Origen Año FB FT

H 1999 C1 1
H 1999 C1 1
H 1999 C1 1
C 1999 C1 NT
C 1999 C1 1
H 1999 C1 1
C 1999 C1 1
H 1999 C1 1
C 1999 C1 NT
H 1998 C1 21
P 1997 C1 7
H 1998 C1 21
H 1997 C1 21
H 1997 C1 1
P 1998 C1 21
C 1999 C1 21
C 1999 C4 21
H 1998 C4 21
H 1999 S1 1
H 1997 S2 21
ATCC S3 4
P 1998 S4 21
C 2000 S5 21
C 2000 S6 1
C 2000 C3 NT
C 2000 C3 1
C 2000 C3 1
C 1999 C3 21
C 1999 C3 21
C 2000 S7 21
C 1999 S8 4
C 2000 C2 1
C 1999 C2 21
H 1998 S9 3
control neg

Figura 1. Dendrograma presentando las variaciones entre fenotipos bioquímicos (FBs) y fagotipos (FTs) de 33
cepas de Salmonella enteritidis aisladas en Antofagasta, entre 1997 y 2000. El nivel de identidad (ID) señala
que el nivel de identidad elegido (r=0,980) para cada cepa asignada al mismo FB. NT, cepas no tipificables.
H = huevos; P = carne de pollo y C = clínicas.

epidemiológicos, ya que la serotipificación por sí existe escasa información sobre los datos obteni-
sola no es efectiva como marcador. Diversas dos. Katouli y cols26 realizaron un estudio para
técnicas han sido empleadas para este fin, entre determinar la variación de fenotipos bioquímicos
ellas sobresalen la fagotipificación18 que conjunta- y fagotipos de cepas de S enteritidis, utilizando el
mente con análisis del perfil plasmidial29,30 y los sistema Ph-Plate Systems y la fagotipia. Los resul-
patrones de resistencia (antibiotipo)31 han sido tados descritos demostraron que este método
usadas extensamente para tipificar cepas de S presenta excelentes ventajas para tipificar cepas
enteritidis. También, marcadores bioquímicos han de S enteritidis. Ya que en un total de 86 cepas
sido usados para tipificar los diferentes serotipos clínicas ensayadas, 56 cepas fueron reconocidas
de Salmonella, pero en el caso de S enteritidis en dos FB dominantes y correspondieron casi al

842
 FENOTIPOS BIOQUÍMICOS Y FAGOTIPOS DE CEPAS DE SALMONELLA ENTERITIDIS - J Silva et al

65% del total de los aislamientos. Al combinar el granjas avícolas, pero desgraciadamente estas
fenotipo bioquímico (FB) con el fagotipo (FT) aves al parecer venían contaminadas con el FT21.
detectaron 10 fenotipos comunes (FB:FT) en las El FT21 ha sido frecuentemente aislado en la
cepas de S enteritidis y en uno de los fenotipos República Checa, Austria e Inglaterra32. Este ha-
dominantes, 9 aislados fueron identificados por el llazgo puede significar que tenemos un nuevo
mismo FB y FT. Al igual que en nuestro trabajo, se fagotipo emergente en el norte de Chile, FT21. En
incluyó como control la cepa de S enteritidis nuestro estudio, el FT21 fue detectado en los años
(ATCC 17036) que presentó las características que se analizaron muestras de huevos y pollos
bioquímicas correspondientes al mismo serotipo. (1997 y 1998) y en muestras clínicas (1999 y 2000).
En este trabajo, también se utilizó el sistema Esta intermitencia en los hallazgos de este fagoti-
Ph-Plate que permitió la identificación de fenoti- po, se debe a que en un principio se planeó el
pos bioquímicos de cepas S enteritidis aisladas de estudio con cepas avícolas y clínicas aisladas en
muestras clínicas y avícolas de Antofagasta. Los 1999-2000. Pero, en los estudios de muestras
resultados obtenidos fueron altamente satisfacto- avícolas se aislaron solamente 6 cepas de S
rios. De un total de 33 cepas de S enteritidis enteritidis en huevos expendidos en Antofagasta
ensayadas, se logró identificar 12 FB con este (1999-2000) (resultados no publicados). Debido a
método. Dos tipos FB dominantes fueron encon- su escaso número, se solicitaron cepas avícolas al
trados, encontrándose 22 cepas (63,6% del total Servicio de Salud de Antofagasta, pero solamente
de las cepas) y en 13 de ellas, hubo correspon- se habían aislado 10 cepas de productos avícolas
dencia con los fagotipos mayormente aislados. en 1997-1998 y se incluyeron en el estudio. Por
La fagotipia de las cepas de S enteritidis reveló ello, no se puede establecer la relación entre en
la presencia de dos tipos dominantes de fagotipos, ellos y la vía de transmisión. Sin embargo, a pesar
el FT1 (14 cepas) y FT21 (13 cepas). En estudio de que el tamaño de muestra es pequeño es
realizado con cepas chilenas, colectadas entre 1975 posible que pudieran haber estado presentes en
y 1996 por el Instituto de Salud Pública de Chile, se muestras avícolas y clínicas en el mismo período,
encontró que el FT1 era frecuentemente aislado en al examinar un mayor número de muestras. Sólo
el norte y el FT4 en el centro y sur del país9. Estos podemos señalar que la presencia del FT21 en
resultados concuerdan en parte con nuestro estu- productos avícolas y muestras clínicas, sugiere
dio, ya que el fagotipo 1 aparece como el más una vía de transmisión al ser humano por el
común FT y se aisla con gran frecuencia en consumo de estos productos avícolas contamina-
infecciones humanas por consumo de productos dos con este fagotipo.
avícolas contaminados, desde 1997 al 2000. Tam- Al comparar la relación FB:FT, se encontraron
bién, ha sido reconocido como el FT prevalente en que los fenotipos más comunes fueron C1:1 y
infecciones ocurridas en el norte de Chile9, en la C1:21, con 8 y 5 aislamientos, respectivamente. Las
epidemia del 94-96. Todos estos trabajos señalan la cepas dominantes fueron aisladas de huevos (7),
existencia del FT1, como un fagotipo persistente en carnes de pollo (1) y clínicas (5), sugiriendo una
el norte de Chile. El FT1 es frecuentemente aislado estrecha relación y un origen clonal común. Esto
en Europa9 y es posible que haya sido introducido concuerda con lo descrito por otros autores3-20, en
a estas regiones del país en aves reproductoras el sentido, que la vía de la transmisión de S
provenientes de dicho continente. enteritidis a los humanos en la zona norte de Chile,
Sin embargo, desde 1997 otro fagotipo aparece puede ser a través del consumo de productos
en nuestro escenario y es el FT21 (13 aislados), el avícolas contaminados con los mismos tipos de S
cual había sido descrito en Santiago solamente en enteritidis. También, la combinación de los fenoti-
1 caso en una muestra de productos avícolas21. En pos bioquímicos y fagotipos indicaron que sola-
nuestro estudio, se aislaron 7 cepas de productos mente 8/14 del FT1 estaba presente en un mismo
avícolas y 6 de muestras clínicas, pero ambos en FB (C1). Las 6 cepas restantes pertenecían a otros
diferentes períodos. La frecuencia de aislamiento FB (C2 y C3). El encontrar 8 cepas pertenecientes a
del FT21, puede deberse a la importación de un mismo fenotipo bacteriano que ha sido discrimi-
nuevas aves reproductoras de otros lugares para nado por ambos métodos fenotípicos (sistema Ph-
disminuir la presencia de S enteritidis en las Plate y fagotipia), nuevamente refuerzan la idea de

843
 Rev Méd Chile 2003; 131: 837-845

la vía de transmisión de un mismo clon, es a través identificación de los fenotipos de S enteritidis, lo

del consumo de productos avícolas contaminados. cual ha sido reconocido en trabajos anteriores26.
Al examinar la variación a través de los años Finalmente, estos resultados muestran la pre-
de aislamiento de los fenotipos de S enteritidis, el sencia de dos mayores fenotipos (FB:FT) entre las
sistema Ph-P-S48 con sus fenotipos bioquímicos cepas de S enteritidis aisladas entre 1997-2000 en
permite explicar en mejor forma la diseminación Antofagasta. El fenotipo C1:1, el cual fue el más
de las cepas de S enteritidis en Antofagasta. En el común entre las cepas aisladas durante 1997-1999,
año 1999, el FB C1 fue aislado de 5 muestras de indicando una persistencia de este particular
productos avícolas y 5 de clínicas. Las demás fenotipo a través del tiempo en Antofagasta. Otro
cepas del FB C1 fueron aisladas en los productos fenotipo, representado por un nuevo tipo clonal
avícolas, en años anteriores, en los cuales no se emergente y diseminado (C1:21), que contiene
recolectaron cepas de origen clínico y es posible, cepas aisladas en 1997-1999. También, se conclu-
que también estuvieran presentes. En relación a ye que la determinación de fenotipos bioquímicos
los años, muestra una clara persistencia en su por el método Ph-Plate, es fácil de realizar y
aislamiento durante todos los años. En cambio, la constituye una nueva herramienta de tipificación
fagotipia de las cepas de S enteritidis, mostró que bacteriana que se debe incorporar en estudios
el FT1 en los productos avícolas fue aislado en el epidemiológicos de cepas de S enteritidis y de
año 1997 (1 aislado) y 1999 (6 aislados), y en las otras bacterias entéricas en nuestro país. Además,
muestras clínicas en 1999 (2 aislados) y 2000 (5 no sólo es una buena técnica que puede detectar
aislados), mostrando variaciones en los aislamien- cepas idénticas, sino que también, permite esta-
tos durante los años de estudio. También, el FT1 blecer la relación entre ellas. Esta información
presentó diversos fenotipos bioquímicos detecta- puede ser utilizada para trazar el origen de las
dos por el sistema de PhP-S48, lo que indica que cepas patógenas en estudios epidemiológicos.
este método es mucho más discrimatorio en la

REFERENCIAS 6. IRINO K, FERNNANDES SA, TAVECCHI AT, NEVES BC,

DÍAZ AM. Progression of Salmonella enteritidis
1. RODRÍGUE DC, CAMERON DN, PHUR ND, BRENNER FW, paghe type 4 strains in Sao Paulo State. Rev Inst
ST LOUIS ME, WACHSMUTH KI, TAUXE RV. Compari- Med Trop Sao Paulo 1996; 38: 193-6.
son of plasmid profiles, phage types and antimi- 7. FICA A, FERNÁNDEZ, A, PRAT P, FIGUEROA O, GAMBOA
crobial resistance patterns of Salmonella R, TSUNEKAWA I, HEITMAN I. Salmonella enteritidis,
enteritidis isolates in United States. J Clin un patógeno emergente en Chile. Rev Méd Chile
Microbiol 1992; 30: 854-7. 1997; 125: 544-51.
2. SILVA J. Salmonella enteritidis un patógeno 8. FICA A, ALEXANDRE M, PRAT S, FERNÁNDEZ A, FERNÁN-
emergente de origen aviario. Rev Cs Salud 2000; DEZ O, HEITTMANN G. Cambios epidemiológicos de
4: 25-36. las salmonelosis en Chile. Desde Salmonella
3. CENTERS FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION. Out- typhi a Salmonella enteritidis. Rev Chil Infect
breaks of Salmonella serotype enteritidis infec- 2001; 18: 85-93.
tion associated with eating raw or undercooked 9. PRAT S, FERNÁNDEZ A, FICA A, FERNÁNDEZ J, ALEXANDRE
shell eggs-United State, 1996-1998. Morb Mortal M, HEITMANN G. Tipificación fágica de aislados de
Wkly Rep 2000; 49: 73-9. Salmonella enteritidis de muestras clínicas,
4. HENZLER DJ, EBEL E, SANDERS J, KRADEL D, MASON J. alimentarias y avícolas en Chile. Rev Panam
Salmonella enteritidis in eggs from commercial Salud Pública 2001; 9: 7-12.
chicken layer flock implicated in human out- 10. SUZUKI Y, ISHIHARA M, MATSUMOTO M, ARAKAWA S,
breaks. Avian Dis 1994; 38: 37-43. SAITO M, ISHIKAWA ET AL. Molecular epidemiology
5. MISHU B, GRIFFIN PM, TAUXE R, CAMERON D, of Salmonella enteritidis. An outbreak and
HUTHCHESON RH, ACHAFFNER W. Salmonella enteriti- sporadic cases studied by means of pulsed-
dis gastroenteritis transmitted by intact chicken field gel electrophoresis. J Infection 1995; 31:
eggs. Ann Intern Med 1991; 115: 190-4. 211-7.

844
 FENOTIPOS BIOQUÍMICOS Y FAGOTIPOS DE CEPAS DE SALMONELLA ENTERITIDIS - J Silva et al

11. POWELL NG, THRELFALL EJ, CHART H, ROWE B. 24. KATOULI M, WOLLIN R, KÜHN I, FARHOUDI-MOGHADDAM
Subdivision of Salmonella enteritidis PT4 by AA, MÖLLBY R. The use of biochemical fingerprint-
pulsed-field gel electrophoresis: potential for epi- ing, phage typing and antimicrobial susceptibility
demiological surveillance. FEMS Microbiol Lett testing in detection of epidemic strains of Salmo-
1994; 119: 193-8. nella of serotype Typhimurium in Iran. J Med
12. FADL AA, NGUYEN AV, KHAN MI. Analysis of Salmo- Microbiol 1992; 37: 252-7.
nella enteritidis isolated arbitrarily primer PCR. J 25. KATOULI M, KÜHN I, BRAUNER A, FARHOUDI-
Clin Microbiol 1995; 33: 987-9. MOGHADDAM AA, MÖLLBY R. Application of bio-
13. LÓPEZ-MOLINA N, LACONCHA I, REMENTERIA A, AUDICANA chemical fingerprinting to the investigation of
A, PERALES I, GARAIZAR J. Typing of Salmonella clonal group of Salmonella of serotype Havana. J
enteritidis of different phage types of PCR finger- Med Microbiol 1992; 36: 382-8.
printing. J Appl Microbiol 1998; 84: 877-82. 26. KATOULI M, SEUFFER RH, WOLLIN R, KÜHN I, MÖLLBY R.
14. SOTO SM, GUERRA B, GONZÁLEZ-HEVIA MA, MENDOZA Variations in biochemical phenotypes and phage
MC. Potential of three way randomly amplified types of Salmonella enteritidis in Germany 1980-
polymorphic DNA analysis as a typing method 92. Epidemiol Infect 1993; 111: 199-207.
for twelve Salmonella serotypes. Appl Environ 27. SNEATH PHA, SOKAL RR. Nuneral Taxonomy. WH:
Microbiol 1999; 65: 4830-6. Freemam, San Francisco, California 1973.
15. ESTEBAN E, SNIPES K, HIRD D, KASTEN RY, KINDE H. 28. KÜHN L, ALLESTAM G, STENSTRÖM TA, MÖLLBY R.
Use of ribotyping for characterization of Salmo- Biochemical fingerprinting of water coliform bac-
nella serotypes. J Clin Microbiol 1993; 31: 233-7. teria, a new method for measuring the pheno-
16. OLSEN JE, SKOV MN, THRELFALL EJ, BROWN DJ. Clonal typic diversity and for comparing different
lines of Salmonella enteritidis documented by bacterial populations. Appl Environ Microbiol
IS200-, ribo-, pulsed-field gel electrophoresis and 1991; 57: 3171-7.
RFLP typing. J Med Microbiol 1994; 40: 15-22. 29. STUBBS AD, HICKMAN BRENNER FW, CAMERON DN,
17. THONG KL, NGEOW Y, ALTWEGG M, NAVARATMAN PY, FARMER JJ. Differentiation of Salmonella enteritidis
PANG T. Molecular analysis of Salmonella enteriti- phage type-8 strain, evaluation of 3 additional
dis by pulsed-field gel electrophoresis and phage typing systems, plasmid profiles, antibiotic
ribotyping. J Clin Microbiol 1995; 33: 1070-4. susceptibility patterns and biotyping. J Clin
18. WARD L, DESA RJH, ROWE B. A phage-typing Microbiol 1994; 32: 199-201.
scheme for Salmonella enteritidis. Epidemiol In- 30. WACHSMUTH IK, KIEHLBAUCH JA, BOPP CA, CAMERON
fect 1987; 99: 291-4. DN, STROCKBINE NA, WELLS JG ET AL. The use of
19. HICKMAN-BRENNER FW, STUBBS AD, FARMER JJ 3 . RD
plasmid profiles and nucleic acid probes in epide-
Phage typing of Salmonella enteritidis in the miologic investigations of foodborne, diarrheal
United States. J Clin Microbiol 1991; 29: 2817-23. diseases. Int J Food Microbiol 1991; 12: 77-89.
20. EVANS MR, LANE W, RIBEIRO CD. Salmonella enteriti- 31. LING JM, KOO IC, KAM KM, CHENG AF. Antimicrobial
dis PT6: another egg associated salmonellosis? susceptibilities and molecular epidemiology of
Emerging Infect Dis 1998; 4: 667-9. Salmonella enterica serotype enteritidis strains
21. ALEXANDRE M, POZO C, GONZÁLEZ V, MARTÍNEZ MC, PRAT isolated in Hong Kong from 1986 to 1996. J Clin
S, FERNÁNDEZ A, FICA A, FERNÁNDEZ O, HEITMANN G. Microbiol 1998; 36: 1693-9.
Tipificación fágica de aislados de Salmonella enter- 32. RYCHLIK I, SVESTKOVA A, KARPISKOVA R. Subdivision of
itidis de muestras clínicas, alimentarias y avícolas en Salmonella enterica serovar enteritidis phage
Chile. Rev Méd Chile 2000; 128: 1075-83. types PT14b y PT21 by plasmid profiling. Vet
22. KÜHN I. Biochemical fingerprinting of Escherichia Microbiol 2000; 74: 217-25.
coli: a simple method for epidemiological investi-
gations. J Microbiol Med 1985; 3: 159-70. Agradecimientos
23. KÜHN I, BURMAN LG, ERIKSSON L, MÖLLBY R. Subtyping Nuestros agradecimientos al Servicio de Salud de
of Klebsiella by biochemical fingerprinting: a simple Antofagasta y al Laboratorio «Sarita Núñez» de la
system for epidemiological investigations. J Corporación Municipal de Antofagasta por facilitarnos
Microbiol Methods 1990; 11: 177-85. las cepas de S enteritidis incluidas en este estudio.

845