GENUL STAPHYLOCOCCUS

MARIA NICA
 GENUL STAPHYLOCOCCUS
TAXONOMIE
Istoric:
Familia Micrococcaceae (Staphylococcus, Micrococcus, Stomatococcus,
Planococcus): coci Gram pozitivi, catalaza pozitivi.
1925: diferentierea dintre Stafilococcii coag- pozitivi (St. aureus group)
si cei coagulazo- negativi CoNS (testul coagulazei),
2004: 2nd ed. Bergey`s Manual of Systematic Bacteriology:
Familia Staphylococcaceae (Staphylococcus, Jeotgalicoccus,
Macrococcus, Salinicoccus, Nosocomiicoccus).
2013: 45 specii, 21 subspecii,
 Descrierea Familiei Staphylococcaceae

Coci Gram pozitivi: celule sferice (0,5- 1,5 µm diametru),

-dispuse izolat, in diplo, tetrade, gramezi (“ciorchine de strugure”),
-imobili, nesporulati, facultativ anaerobi, catalaza pozitivi, cytochrome
oxidase negativi,
- se multiplica in prezenta a 10% NaCl,
- temperatura de incubare: 18- 40 ºC,
- metabolism respirator si fermentativ,
- perete celular bogat in peptidoglican si acizi teichoici,
- S. aureus: genomul cuprins in cromosom unic, cu 2.8- 2.9 Mpb,
- ADN- elemente mobile: plasmide conjugative responsabile de
multirezistenta la antibiotice
Gen Staphylococcus – reprezentare
microscopica (ciorchine de strugure)
 Genul Staphylococcus
Specii de interes medical major:
* Grup Staphylococcus aureus:
-Specie: Staphylococcus aureus

* Stafilococi coagulaza negativi – SCN

(patogeni oportunisti)
* Grup Staphylococcus epidermidis:
- S. epidermidis sensu stricto,
- S. haemolyticus,
- S. lugdunensis,
* Grup Staphylococcus saprophyticus:
-S. saprophyticus,
* Grup Staphylococcus intermedius:
- S. schleiferi
 Epidemiologie

S. aureus- habitat principal: vestibul nazal (50% din populatie-

colonizare permanenta sau intermitenta),
•portaj persistent: 10- 35% (aceeasi tulpina perioada lunga de timp),
• portaj intermitent: 20- 70% (diferite tulpini),
• non- purtatori: 5- 50%
•Colonizarea nazala joaca rol crucial ca sursa in infectiile invazive
• faringe, tub digestiv, vaginul, plici cutanate, axila, perineul-
colonizare
CoNS – S. epidermidis, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S.
lugdunensis, S. hominis, S. simulans, S. warneri, S. schleiferi etc.-
apartin microbiotei umane
 Cai de transmitere

* Staphylococcus aureus:
-De la pacient la pacient- portajul cutanat al mainilor personalului
medical sau prin obiecte contaminate (MRSA, MSSA),
- mediul inconjurator- rol minor (exceptie: ATI, sectii de arsi),
- Rezervoare: personal medical colonizat, animale de companie,
animale si pasari din crescatorii,
- risc zoonotic pentru populatie,
* CoNS: pasari, animale carnivore, mamifere (cai, vite, caini, porci,
lapte crud)
 Factori de patogenitate
Staphylococcus aureus
1. Proteine care inactiveaza apararea imuna a organismului:
• Proteina A: se leaga de fragmentul Fc al IgG, blocheaza opsonizarea si
fagocitoza,
• Coagulaza: lizeaza fibrina din jurul corpului bacterian, impiedicand
fagocitoza,
• Hemolizine: 4 tipuri (α, β, γ, δ), lizeaza hematiile, neutrofilele,
macrofagele si trombocitele,
• Leucocidina: distruge leucocitele,
• Penicilinaza: rupe structura β- lactam a moleculei de penicilina, inactivand
antibioticul,
• Penicillin Binding Proteins (PBP): proteina numita transpeptidaza,
necesara sintezei peptidoglicanului – inhibata de penicilina.
 Factori de patogenitate
Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus- capaciate de a forma biofilm:
- comunitate multibacteriana (celule bacteriene, slime polizaharidic
extracelular, exoproteine, ADN liber), care are capacitatea de aderare pe
suprafete inerte (catetere venoase, urinare, proteze valvulare cardiace,
articulare, implant dentar etc),
- protejeaza bacteriile impotriva antibioticelor, antisepticelor, actiunii
fagocitelor sistemului imun (impiedica fagocitoza),
- bacteriile din interiorul biofilmului sunt inerte metabolic, deci mai putin
sensibile la actiunea antibioticelor (rezistenta antibacteriana crescuta),
- bacteriemii, colectii purulente secundare, soc septic.
 Factori de patogenitate
Staphylococcus aureus

2. Proteine care lizeaza tesuturile :

• Hialuronidaza (factor de difuzare): distruge proteoglicanii din

compozitia tesutului conjunctiv,
• Stafilochinaza: lizeaza coagulii de fibrina,
• Lipaza: degradeaza grasimile care se acumuleaza pe suprafata cutanata
(faciliteaza colonizarea cu Staphylococcus aureus a glandelor sebacee),
• Proteaza: distruge proteinele tisulare
 Factori de patogenitate
Staphylococcus aureus
3. Exotoxine:
• Exfoliatina: exotoxina difuzibila care produce descuamare
cutanata (sindromul “pielii oparite”),
• Enterotoxine (termostabile): produc Toxiinfectii alimentare,
• Toxina Sindromului de Soc Toxic (TSST-1): toxina pirogena,
produsa de 20% dintre izolatele de St. aureus, numita
“superantigen”, se leaga de macrofage, raspuns masiv al
limfocitelor T, hiperproductie de citokine, soc toxic.
4. Subpopulatie fenotipica – varianta “colonii mici”(SCV)-
adaptata pentru persistenta intracelulara: infectii cronice,
persistente, recaderi (osteomielita, fibroza chistica)
 Quorum Sensing
Staphylococcus aureus
- Bacteriile isi pot coordona activitatile (metabolice, de patogenitate) in grup
(“quorum”), utilizand mici molecule- semnal, difuzibile, numite autoinductori
- comunicarea intercelulara: “quorum sensing” :
- rol in productia si coordonarea exprimarii factorilor de virulenta (toxine,
adezine, enzime, capsula, formarea de biofilm, antibiorezistenta/ intoleranta,
rezistenta la vancomicina),
- Staphylococcus aureus- AGR quorum sensing system (agr locus)-
controleaza exprimarea genelor de virulenta, sinteza proteinelor de suprafata,
formarea de biofilm,
- sinteza unor componente noi ce inhiba “quorum sensing”- potentiala noua
clasa de antibiotice.
 Patogenitate
Staphylococcus epidermidis-
Conditionat patogen/ “patogen accidental”: pacienti spitalizati, imunocompromisi:
• cateter urinar/ sonda Foley, cateter intravenos central, dispozitive prostetice (proteze
articulare, valvulare cardiace, cateter de dializa peritoneala etc.)
•Formare de biofilm
• quorum – sensing system (Agr, AIP systems)
• AIP (S. epidermidis) inhiba Agr system (S. aureus): S. epidermidis asigura colonizarea
cutanata predominanta: rol in pastrarea echilibrului florei comensale, nepatogene.
• S. epidermidis: MRSCN- endemic intraspitalicesc (MDR: Te, AG, Macrolide,
vancomicina): formeaza biofilm pe dispozitive prostetice, rezervor de antibiorezistenta,
• transfer unidirectional al genei mecA: S. epidermidis catre S. aureus (MRSCN-
MRSA)
 Semnificatie clinica
Staphylococcus aureus
1. Forme clinice produse prin eliberarea de exotoxine:
- Toxiinfectia alimentara (TIA/ gastroenterocolita/ enterotoxine),
- Sindromul de Soc Toxic,
- Sindromul de “piele oparita”
2. Infectii cutanate localizate, superficiale, colectii profunde,
3. Forme clinice produse de invazia bacteriana:
- pneumonie, meningita, osteomielita, endocardita acuta bacteriana,
artrita septica, bacteriemie/ sepsis, infectie urinara, infectii de cateter.
* Colonizare, infectie cu MRSA (mediul intraspitalicesc/ comunitate)
 Staphylococcus aureus
Infectii cutanate localizate
 Semnificatie clinica
CoNS
1980:
• CoNS: S. epidermidis, S. haemolyticus, S. lugdunensis, S. saprophyticus:
- Patogenicitate medie- recunoscuti ca patogeni nosocomiali (pacienti
imunocompromisi, dispozitive medicale prostetice, implanturi, catetere)
- bacteriemii/ septicemii nosocomiale- pacienti cu catetere venoase centrale
si periferice,
- S. epidermidis (formare de biofilm)- infectii asociate grefelor vasculare,
protezelor ortopedice, sunturi cerebrovasculare, administrare droguri i.v.,
- S. lugdunensis (patogenitate similara S. aureus)- endocardite, bacteriemii,
- S. saprophyticus: infectii urinare
 Diagnostic de laborator

 Frotiu direct din prelevat (coloratia Gram):

- coci Gram pozitivi sau Gram variabili, izolati, in perechi, lanturi scurte sau in
gramezi, intra si extraleucocitari,
- apreciere semicantitativa a tipurilor de celule (PMN),
- aprecierea semicantitativa a microorganismelor,
- relatia bacteriilor cu celulele inflamatorii,
- variabilitate morfologica sau tinctoriala (conditii de stress metabolic),
* Caractere culturale
- colonii “S”, “G”, “R”,
- Prezenta si tipul hemolizei:
- hemoliza ß,
- hemoliza α (tip “cald- rece”),
- Prezenta si tipul pigmentului:
- carotenoid, portocaliu, galben citrin
- Aspectul coloniilor pe mediul solid hiperclorurat (Chapmann)
 Aspect microscopic –
Frotiu Gram din produs si din cultura
Aspecte culturale – S. aureus/ CoNS
 Schema minimala de diferentiere a
principalelor specii de stafilococi
Caractere S. aureus S. epider- S. sapro-
midis phyticus

Coag.libera + - -
fosfataza + + -
rez la novobiocina - - +

zaharoza/aer + + +
trehaloza/ aerob + - +

Manitol/ aerob + - d
 Schema minimala de diferentiere a
principalelor specii de stafilococi

Caractere S. aureus S. lugdu- S. schleiferi

nensis

Coag. legata + + +
Coag. libera + - -
Manitol anaerob + - -

Termonucleaza + - +
DNA- aza tº- rez
 Staphylococcus aureus
Detectia toxinogenezei
* Enterotoxine:
- latex aglutinare,
- ELISA,
* Leucocidina:
- ELISA
Tiparea pe baza sensibilitatii la bacteriofagi – lizotipia
 Centrul National de Referinta- identificarea clonala a S. aureus,
- identificare curenta in infectii de focar (infectii nosocomiale, TIA),
- setul international de bacteriofagi : grup litic: I, II, III, V
 Sisteme comerciale de diagnostic
 Sisteme de aglutinare indirecta:
(fibrinogen, IgG, Ac specifici de grup),
 API STAPH,
 ID Rapid Staph,
 VITEK 2 Compact,
 Vidas,
 Microscan,
 Malditof (spectrofotometrie de masa)
 Metode moleculare
PCR , PCR multiplex, Real – Time PCR, PFGE, PCR- RFLP
- identificarea tulpinilor de stafilococi,
- detectarea rapida a stafilococilor din prelevat (focare Infectii
nosocomiale, TIA),
- detectarea genelor care codifica factori de patogenitate (enterotoxine,
leucocidina),
- secventierea genei spa (codifica proteina A),
- identificarea genei mecA (MRSA, MRSCN), alte gene de rezistenta,
- tipari in scop epidemiologic (markeri epidemiologici),
 ANTIBIOGRAMA
 Metoda difuzimetrica,
 CMI (E – test, Vitek 2C), EUCAST, CLSI
 Metode moleculare (gene de rezistenta/ mec),
 Asocierea fenotipurilor de rezistenta dobandita
 Screening MRSA, MRSCN (infectii nosocomiale): chromID
MRSA(bioMerieux), BBL CHROMagar MRSA, Brilliance
MRSA agar (OXOID)
 Tratament

MSSA: β- Lactami,
MRSA, MRSCN: glicopeptide (vancomicina), cefalosporine
gen V-a - antiMRSA (ceftobiprol, ceftarolin),
-Rifampicina (efect sinergic cu antibioticele care actioneaza
pe perete bacterian: β- Lactami, vancomicina):
-*patrunde in biofilm,
- *actioneaza pe “colonii mici” cu dezvolatare intracelulara/
SCV