BAB 4 HASIL PENELITIAN Pengukuran aktivitas spesifik katalase jaringan ginjal tikus percobaan pada keadaan hipoksia hipobarik akut berulang ini dilakukan berdasarkan metode Mates et al. (1999) yang dimodifikasi oleh Departemen Biokimia dan Biologi Molekuler FKUI. Modifikasi yang dilakukan berupa pengukuran sendiri absorbansi optimal pada setiap langkah. Metode ini mengamati aktivitas katalase (CAT) yang mengkatalisis dekomposisi H 2 O 2 menjadi H 2 O dan molekul O 2 secara spektrofotometri berdasarkan penurunan serapan pada panjang gelombang 210 nm karena H 2 O 2 memperlihatkan serapan maksimal pada panjang gelombang ini. Pengukuran aktivitas katalase dilakukan pada pH 7 karena suasana yang terlalu asam atau basa dapat menyebabkan hilangnya aktivitas katalase. Ke dalam kuvet spektrofotometri, untuk blanko dimasukkan H 2 O 2 1:4000 (pengenceran optimal) sebanyak 950 µl. Pada blanko kemudian ditambahkan PBS 0.05 M pH 7 (bertindak sebagai buffer) sebanyak 50 µl. Kemudian serapan diukur pada 210 nm. Sedangkan untuk bahan uji, dimasukkan sampel dengan pengenceran optimal sebanyak 50 µl dan H 2 O 2 1:4000 (pengenceran optimal) sebanyak 950 µl. Serapan lalu diukur pada panjang gelombang yang sama. Untuk aktivitas katalase sendiri dilakukan perhitungan mengikuti rumus-rumus yang telah ada. Hasil perhitungan tersebut dinyatakan dalam satuan Unit/ml. Setelah itu, hasil perhitungan akan dibagi dengan konsentrasi protein jaringan dalam satuan mg/ml sehingga didapatkan hasil aktivitas spesifik katalase dalam satuan Unit/mg protein. 4.1. Hasil Optimasi Pengukuran 4.1.1. Penentuan Kinetik Katalase Penentuan ini dilakukan pada tanggal 1 Juni 2009 dengan sampel kontrol. Dari optimasi waktu didapatkan bahwa penguraian terbaik H 2 O 2 oleh sampel dicapai pada menit ke-1 hingga menit ke-2, dengan selisih absorbansi 0.002 Å. Dari penghitungan kecepatan reaksi tiap satuan waktu yang didapat dari perbandingan selisih serapan dengan lama waktu pengukuran sejak menit ke-1 didapatkan kecepatan reaksi terbesar adalah pada menit ke-1 menuju menit ke-2, Aktivitas spesifik.