PRÁCTICA 4: DISEÑO DE MEDIOS DE CULTIVO

En el procesamiento de alimentos, para mantener una inocuidad frente a la acción de microorganismos bacterianos es necesario someterlos a un estudio donde se pueda determinar la existencia de microorganismos aerobios y facultativos mesófilos, que son aquellos capaces de crecer a temperaturas que van desde 20 a 30 °C. Para ello se ha implementado diferentes métodos, entre los cuales resalta el método basado en el recuento de placas, mediante éste podemos determinar el número de células viables en un alimento y el numero de bacterias patógenas en el mismo, sabiendo que la masa total de las colonias está directamente relacionado con el número de células. Cabe resaltar que ningún método aplicado es 100% efectivo o exacto al realizar la determinación, pero el aplicado es uno de los que más se acerca a este porcentaje. Al completar el análisis se pudo determina claramente el numero casi exacto de UFC en la muestra (jugo de chocolate y leche), las cuales se analizaron en dos diferente diluciones (10 -1 y 10 -2 ) para poder decidir en relación al resultado que tan saludable es el alimento y así garantizar la calidad del mismo, y proteger la salud del consumidor.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO, 2020

Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado, (es decir se le añaden organismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. En 1881 Koch ideo un método para reproducir bacterias en un medio de cultivo sólido hecho con gelatina, e introdujo el método de la placa para asegurar cultivos puros. Sembró en gelatina una mezcla de bacterias, después de fundir el medio por calentamiento, y vertió en este medio inoculado en una placa de cristal esterilizada y fría, para endurecerlo. Allí donde las bacterias quedaban atrapadas al irse solidificando el medio, se multiplicaban formando una masa, llamada colonia, visible a simple vista, dichas colonias debían ser puras, es decir contener un solo tipo de bacteria. Para asegurar el cultivo puro era necesario tomar una muestra de una colonia con un alambre estéril y trasladarlo a un tubo de medio estéril fresco. Este método de cultivos puros es en esencia el que se usa actualmente con la salvedad de que se usa agar en lugar de gelatina; para los cultivos en placa empleamos una cajita de vidrio llamada cápsula o caja de Petri introducida por Petri, uno de los ayudantes de Koch durante 1887. En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante. En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

 Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Este capítulo reúne los componentes esenciales que se han empleado para reportar una investigación formal. Los métodos y elementos que se describen a continuación son:

OBJETIVOS Que el alumno: • Reconozca la importancia y la metodología para la esterilización de materiales en el laboratorio de microbiología. • Prepare dos tipos de medio de cultivo, lo inocule y monitoré el crecimiento. INTRODUCCIÓN El laboratorio de microbiología, al igual que cualquier laboratorio requiere mantenerse constantemente limpio, sin embargo debido a que en este se manejan cultivos microbianos, requiere además que el material e instrumental que este en contacto con los microorganismos se encuentre estéril o se mantenga así hasta su uso por lo que deben de estar protegidos adecuadamente de cualquier posible contaminación, para ser utilizados en muchos de los casos para el mantenimiento o estudio de microorganismos in vitro. El término estéril se aplica en microbiología a cualquier ambiente, material o reactivo que se encuentra libre de cualquier forma de vida, los procesos para poder generar un ambiente estéril conducen, entonces a la eliminación de todo tipo de organismos, lo cual se consigue utilizando agentes químicos en concentraciones adecuadas o aplicando métodos físicos (como el calor o radiaciones), estos últimos son los más utilizados en microbiología debido a que por lo general no dejan residuos y no requieren de un gasto en reactivos. El método esterilizarte físico menos complicado y más barato es el calor húmedo, ya que inhibe irreversiblemente la actividad enzimática de la mayoría de los microorganismos así como otros compuestos proteicos. El equipo más utilizado para la aplicación del calor húmedo es la autoclave y consiste en una cámara doble cerrada herméticamente dentro de la cual el vapor de agua saturado permite la transferencia rápida del calor, los parámetros de operación típicos son 15 libras/pulgada2 de presión a 121º C durante 15 minutos. Este método se recomienda para esterilizar material y reactivos termoestables. Por otro lado la supervivencia y reproducción de los microorganismos depende directamente de los nutrientes y las condiciones ambientales en las que se encuentra. Estos nutrientes deben de ser una fuente de macroelementos como base para la estructura de las biomoléculas que lo constituyen, asimismo de vitaminas y elementos traza necesarios para su metabolismo. En el laboratorio estos nutrientes se proporcionan a los microorganismos en una mezcla comúnmente llamada " medio de cultivo " el cual por su estado físico se clasifica en " medio sólido " " medio semisólido " y " medio líquido ". El medio líquido o " caldo " se utiliza comúnmente para aumentar la biomasa del (los) microorganismo(s) de interés, el medio semisólido y sólido contienen un agente solidificante, el primero se utiliza para estudios de motilidad, de fermentación y/o para promover el crecimiento anaerobio mientras que el cultivo sólido ha sido utilizado para obtener aislamientos puros, observación de morfología colonial, mantenimiento de cultivos, pruebas bioquímicas y/o conteo de colonias.