ELECTROFORESIS Y CROMATOGRAFIA

Forma Tamaño  Aplicando un campo eléctrico +-+-+-+-+ +-+++

ELECTROGRAFÍA, 2020

El electrocardiograma es una prueba que registra la actividad eléctrica del corazón, en el cual, cada latido produce una actividad eléctrica y con un electrocardiógrafo podemos ver cómo es esa actividad, si es que hay alteraciones del ritmo cardiaco. Se analiza el ritmo, regularidad de los latidos, tamaño y posición de las aurículas y ventrículos. Puede detectar un infarto que haya tenido un paciente, bloqueo, arritmias o una serie de trastornos que son de utilidad para el manejo del paciente. La actividad eléctrica se explora desde la superficie del cuerpo y se representa en un papel con trazos gráficos. Estos trazos simbolizan los estímulos eléctricos de las aurículas y los ventrículos. El ECG continúa proporcionando una información básica y fundamental que no es posible obtener a través de otra exploración. Además, su realización es rápida, sencilla, segura, no dolorosa y relativamente económica. Esta prueba se utiliza en una gran cantidad de situaciones como exploración complementaria o añadida a otros exámenes médicos y revisiones o chequeos periódicos de salud.

El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría electroforética y familiarizarse con los procedimientos implicados en la electroforesis en gel de agarosa para separar moléculas biológicas. En este caso se utilizarán colorantes que simularan fragmentos de ADN haciendo más vistoso el gel. 2. INTRODUCCION La electroforesis en gel de agarosa es un procedimiento utilizado en varias áreas de la Biotecnología, es un procedimiento analítico utilizado en laboratorios de investigación, biomédicos y forenses. De los existentes tipos de electroforesis, la electroforesis en gel de agarosa es el método más común y más utilizado. Es un método de separación frecuentemente utilizado para analizar fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción, PCR, etc , y es un método analítico conveniente para determinar su tamaño en un rango de 500-30.000 pares de bases. También puede ser utilizado para separar otras biomoléculas como colorantes, ARN y proteínas. Existen algunos tipos de electroforesis en gel de agarosa pero la electroforesis horizontal es el más utilizado para separar moléculas de ADN en agarosa. Otros tipos como la electroforesis vertical se utiliza para separar proteínas y utiliza geles de poliacrilamida. El aparato de electroforesis horizontal es esencialmente una caja con electrodos en cada extremo, estos electrodos son de platino ya que tiene una conductividad eléctrica muy buena, debido a que los electrodos de platino son caros y frágiles se debe tener cuidado cuando se manejan equipos de electroforesis. El medio de separación es un gel de agarosa, la agarosa es un polisacárido derivado del agar. Originario de las algas, la agarosa es altamente purificada para eliminar todas las impurezas. Se extrae de la misma alga que se utiliza para obtener el agar utilizado en microbiología y del utilizado en alimentación. Es una sustancia no tóxica pero no debe ser ingerido. El gel se realiza disolviendo la agarosa en un tampón llevado a ebullición. La solución es luego enfriada aproximadamente a 55ºC y se añade al molde para realizar el gel. Un peine con pocillos es colocado en el gel para que forme los pocillos donde se sembrarán las muestras. Después que el gel ha solidificado, el gel se coloca en la unidad de electroforesis y se sumerge con un tampón adecuado para llevar a cabo la electroforesis. La unidad dispone de un electrodo positivo en un extremo y un electrodo negativo en el otro extremo. Las muestras se preparan con un tampón de carga que contiene glicerol para darles densidad y de esta forma se mantienen en el pocillo sin salirse. Las muestra se siembra en los pocillos con una micropipeta. Una fuente de corriente es conectada al aparato de electroforesis y se genera una corriente eléctrica. Las moléculas cargadas de la muestra entrarán en el gel a través de la pared del pocillo de siembra. Las moléculas con una carga negativa migraran hacia el electrodo

INFORME DE PRÁCTICA, 2023

INFORME: ELECTROFORESIS EN UN GEL DE AGAROSA ELABORADO POR: - PAYE ZEBALLOS FRESIA DEL CARMEN CURSO: BIOTECNOLOGÍA DOCENTE: DR. HEBERT HERNAN SOTO GONZALES CICLO: VII EPIAM - UNAM 2023

RESUMEN La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para la purificación, análisis y caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas cargadas y explota diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un campo eléctrico. La electroforesis se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE). En la electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE), como su propio nombre indica, se utilizan agentes desnaturalizantes de proteínas, como pueden ser: detergentes (p.e. SDS), caótropos (p.e. urea) y agentes reductores (2-mercaptoetanol, DTT). Para la visualización de las proteínas se utilizan diferentes métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE, la separación es función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular de las proteínas. Para ello se compara la movilidad electroforética (Rf) de la proteína de peso molecular desconocido con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido. En esta práctica, en la que se pretende que el alumno comprenda el fundamento teórico de esta técnica y sus aplicaciones, se llevará a cabo la separación de proteínas de hojas de A. thaliana mediante SDS-PAGE.