Facultad de Ciencias Veterinarias

La proteína testicular CRISP2 (Cysteine-Rich Secretory Protein 2) se encuentra presente en el acrosoma y la cola de los espermatozoides de mamíferos y participa en el proceso de fertilización. El estudio de animales knockout (KO) para el gen crisp2 mostró que cuando los machos KO eran puestos en apareo con hembras superovuladas, el porcentaje de ovocitos fertilizados recuperados del oviducto al día siguiente del apareo (%F) era significativamente menor que el de los machos control (heterocigotas, HT). En base a ello, el objetivo del presente trabajo fue analizar más profundamente el fenotipo reproductivo de estos animales. Para ello, machos KO o HT fueron colocados en apareo durante una noche con hembras en estro natural (en vez de superovuladas), analizándose el%F. Bajo estas condiciones, el%F de los machos KO y HT no fueron significativamente diferentes. Sin embargo, al emplear hembras tanto superovuladas como en estro, el%F de los machos KO disminuyó en forma significativa en función del número de ovocitos ovulados, sin observarse diferencias para los HT. Ensayos de fertilización in vitro utilizando ovocitos con cumulus oophurus (CO), sin CO y con zona pellucida (ZP) y sin CO ni ZP, mostraron, en todos los casos, porcentajes de fertilización significativamente menores para los espermatozoides KO que HT. Asimismo, los espermatozoides KO mostraron una menor capacidad de penetrar el CO sin evidenciar diferencias en su capacidad de unirse a la ZP respecto a los controles. Finalmente, el análisis de la motilidad por CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) reveló que los espermatozoides KO presentaban alteraciones en varios parámetros cinéticos (VAP, VSL, VCL y ALH) asociados a hiperactividad, motilidad vigorosa necesaria para penetrar las envolturas del ovocito. En conjunto, los resultados obtenidos tanto in vivo como in vitro indican que CRISP2 participaría en el proceso de fertilización a través de su capacidad de regular la hiperactividad de los espermatozoides.

La utilización de semen enfriado en inseminación artificial (IA) porcina sigue siendo una limitante, ya que la respuesta frente a temperaturas menores a 16 °C es aleatoria entre cerdos, y aún entre eyaculados del mismo cerdo. El objetivo del presente trabajo fue  jerarquizar la capacidad para la conservación de dosis refrigeradas durante 4 días de tres diluyentes comerciales (de larga o media duración) de semen porcino (Androstar Plus®, MRA® y MIII®), analizando: viabilidad, funcionalidad de membrana, integridad acrosomal y
movilidad en 11 eyaculados procedentes de 3 verracos. No existieron diferencias (p>0,05) entre diluyentes por lo que sería similar su capacidad de conservación durante un período de 4 días.

El potencial fecundante del semen depende tanto de la movilidad espermática como de la integridad y funcionamiento de sus membranas. El objetivo de este trabajo fue determinar mediante una triple tinción fluorocrómica (Hoechst 33342, Ioduro de Propidio, Pisum Sativum-Isotiocianato de Fluoresceína) la calidad de las membranas espermáticas en semen porcino fresco y refrigerado a 17ºC. Se analizaron 14 muestras de semen fresco y de semen refrigerado provenientes de cuatro verracos terminales híbridos cruza
Austral. Se incubó el semen diluido con Pisum Sativum-Isotiocianato de Fluoresceína (0,01%), Ioduro de Propidio (0,05%) y Hoechst (0,1%). Los resultados se analizaron mediante estadística descriptiva. El porcentaje de células con acrosoma intacto fue inferior en el semen
refrigerado tanto para espermatozoides con membrana plasmática
intacta (Fresco: 59,6%; Refrigerado: 49,92%) como lesionada
(Fresco: 16,74%; Refrigerado: 10,17%). Se pudo evidenciar que
durante el proceso de refrigeración la membrana más afectada es la acrosomal.

La utilización de la inseminación artificial en la especie porcina se ha incrementado enormemente en los últimos años. Cuando se utiliza semen congelado se obtienen bajos porcentajes de concepción en comparación con los obtenidos con semen fresco o refrigerado. El objetivo de este trabajo fue comparar el efecto de diferentes diluyentes comerciales para semen refrigerado en el proceso de congelado y descongelado. Se utilizaron tres diluyentes de larga duración (Mr-A®, Androstar® y Porci-Star®) y uno de mediana duración (M III®). Se evaluaron: movilidad, integridad y funcionalidad de membrana
plasmática e integridad acrosómica, en cuatro etapas diferentes del proceso. No se encontraron diferencias significativas en los parámetros de calidad evaluados por lo que los diferentes prediluyentes no afectarían el proceso de congelado.

La vitrificación de tejido ovárico permite conservar gran cantidad de ovocitos contenidos en folículos preantrales (FPA). El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto de distintas combinaciones de crioprotectores en la preservación de la estructura histológica de FPA porcinos durante la exposición (toxicidad) y en el proceso de vitrificación. Se analizó la respuesta frente a etilenglicol, dimetilsulfóxido (DMSO), y etilenglicol + DMSO, en presencia de sacarosa (0,25M); y la respuesta a etilenglicol asociado a concentraciones crecientes de sacarosa (0M; 0,25M; 0,75M y 1,0M). Los FPA primordiales
tratados con etilenglicol presentaron menor cantidad de alteraciones morfológicas que los expuestos a DMSO y a la combinación de etilenglicol + DMSO (Control: 87%; etilenglicol: 52%; DMSO: 17% y etilenglicol + DMSO: 26%; Friedman, p<0,05). En los FPA primarios el etilenglicol resultó menos tóxico (Control: 70%; etilenglicol: 34%), mientras que la respuesta a la vitrificación del grupo etilenglicol + DMSO fue superior (20%). La vitrificación en presencia de concentraciones crecientes de sacarosa disminuyó significativamente el porcentaje de folículos primordiales normales (Control:64%; 0M: 48%; 0,25M: 42%; 0,75M: 12%; 1M: 9%). Para todos los tratamientos, los folículos primarios presentaron más daños. En conclusión, el medio de elección para la vitrificación resultó ser TCM 199-Hepes con 30% etilenglicol y 0 o 0,25M de sacarosa.

La inseminación artificial bovina ha sido la técnica de reproducción asistida de mayor difusión por las ventajas que presenta en el mejoramiento genético, la prevención y
control de enfermedades de transmisión sexual, la posibilidad de emplear toros con facilidad de parto y la optimización del manejo reproductivo del rodeo. La Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) suma beneficios tales como evitar la detección de celo, acortar el período de anestro post-parto y concentrar los partos en un período breve. El éxito de la IATF depende de múltiples factores entre los que se encuentra la calidad seminal. Ningún examen de semen in vitro presenta una correlación alta con la fertilidad, por lo cual debe desarrollarse un protocolo de control de calidad que estudie el mayor número posible de características de los espermatozoides. La selección de mejores muestras para IATF permitiría evitar la repetición en las inseminaciones o el repaso con monta natural. El objetivo del presente trabajo es encontrar indicadores seminales, a través de los análisis de rutina y del núcleo espermático, que estén asociados con tasas de preñez elevadas para IATF y permitan predecir el comportamiento de las dosis a campo. Se tomarán muestras aleatorias de cada partida de las dosis seminales congeladas ad hoc y se realizará el control de calidad espermático de rutina y el control nuclear. Se evaluarán: parámetros de motilidad espermática obtenidos por análisis computarizado (CASA),
morfología, viabilidad, integridad acrosómica y funcionalidad de la membrana espermática. La evaluación del núcleo espermático incluirá: morfología nuclear, maduración de la cromatina, decondensación y fragmentación nuclear. Esta última, se realizará a través de una prueba desarrollada en nuestro laboratorio (FCV-UBA). Los responsables del CIAVT seleccionarán los establecimientos donde se realizarán los
protocolos de IATF, así como los profesionales responsables de implementarlos, quienes recolectarán los resultados de preñez a campo. Sobre la base de estos resultados preliminares de nuestro grupo de trabajo y la experiencia de campo de los responsables del CIAVT, se espera encontrar asociación entre algunos de los parámetros seminales analizados y los porcentajes de preñez obtenidos por la técnica de IATF. Este proyecto intenta encontrar la existencia deindicadores de clasificación de fertilidad y de pérdidas embrionarias tempranas, lo que permitiría realizar una selección de los individuos más aptos para ser empleados como donantes para IATF. De esta forma, se podrían comercializar muestras de semen especialmente seleccionadas, con el valor agregado que
esto conlleva.

de batido flagelar está relacionada tanto con la velocidad del espermatozoide como con la potencia generada por el flagelo. Los sistemas CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) permiten evaluarla en forma objetiva mediante la frecuencia de corte de la línea de trayectoria (BCF; Hz), que indica el número de veces por segundo que la cabeza espermática cruza la trayectoria media de desplazamiento. La BCF es considerada también una medida objetiva del vigor espermático (Katz & Bloom, 1981). Oliveira et al.

High levels of fluoride in freshwater ecosystems are harmful for humans and animals, particularly, aquatic biota. In this paper, the concentrations of fluoride in arsenic-rich lotic ecosystems of the Pampa Plain, Argentina, were recorded. The relationship of fluoride with the concentration of arsenic was explored. Our results show that fluoride in these freshwater ecosystems ranged from 0.15 to 1.65 mg L -1 . Concentrations of fluoride were highly and significantly (r = 0.71; p = 0.001) correlated with arsenic.