CDU: 351.773.137.127 AL 03.

01-302

Norma Técnica LEITE. DETERMINAÇÃO DO CONTEÚDO DE GORDURA INEN 12

Equatoriana
1973-06

1. OBJETO

1.1Esta norma tiene por objeto establecer los métodos para determinar el contenido de
gordura do leite.

2. ALCANCE

2.1 Esta norma se aplica a os seguintes tipos de leite:

a) Leite fresco.
b) Leite homogeneizado (pasteurizado ou esterilizado).
c) Leite desnatado ou semidesnatado.

2.2 Nesta norma são descritos o método de Gerber e o método de Röse-Gottlieb.

3. TERMINOLOGIA

3.1Contenido de grasa de la leche.Es la cantidad, expresada en porcentaje de masa, de

substâncias, principalmente gorduras, extraídas do leite por meio de procedimentos
normalizados.

3.2 Outros termos relacionados com esta norma estão definidos na norma INEN 3.

4. DISPOSICIONES GENERALES

4.1Para determinar el contenido de grasa en los productos considerados por esta norma,
poderá ser utilizado qualquer um dos dois métodos descritos nesta norma. Em casos de
discrepância ou litígio deverá usar o método de Röse-Gottlieb.

4.2 As pipetas aforadas e os butirômetros, usados para aplicar o método de Gerber,

deverão estar devidamente padronizados e inspecionados

(Continua)

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NTE INEN 12 1973-06

5. METODO DE GERBER

5.1 Resumen

5.1.1 Separar, mediante acidificação e centrifugação, a matéria gorda contida no

produto analisado, e determinar o teor de gordura mediante leitura direta em um
butirômetro padronizado.

5.2 Instrumental

5.2.1Pipeta aforada de10 cm3, de segurança, para ácido sulfúrico,

5.2.2 Pipeta aforada de 1 cm3para álcool amílico.

5.2.3 Pipeta aforada de 10,94 cm3,para medir a amostra.

5.2.4 Butirômetros Gerber, para leite e para leite desnatado, (ver A.1),

5.2.5 Centrífuga, com velocidade de 1100 ± 100 r/min.

5.2.6 Banho de água, com regulador de temperatura, ajustado a 65°± 2° C.

5.2.7 Banho Maria.

5.3 Reativos

5.3.1 Ácido sulfúrico, concentrado para análise, com densidade 1,815 ± 0,003 g/cm3a 20°C.

5.3.2 Álcool amílico, composto principalmente de 3-metil-butanol e 2-metil-butanol e

prácticamente exento de alcoholes amílicos secundarios o terciarios y furfural; deberá
tener una densidad de 0,811 ± 0,002 g/cm3a 20°C.

5.3.3 Água destilada.

5.4 Preparação da amostra

5.4.1Llevar la muestra a una temperatura de aproximadamente 20°C, y rnezclarla mediante agitación

suave até que esteja homogênea, cuidando para que não haja separação de gordura por efeito da
agitação

5.4.2 Se grumos de creme forem formados e não se dispersarem, aquecer a amostra em banho
Maria até 35°- 40°C, misturando cuidadosamente e incorporando qualquer partícula de
creme aderida ao recipiente, e resfriar rapidamente até 18°-20°C. Se ficarem partículas
manchas ou grumos de gordura aderidos às paredes do recipiente, a determinação não dará
resultados exatos.

5.5 Procedimento

5.5.1Para la determinación del contenido de grasa en la leche fresca u homogeneizada

(pasteurizada ou esterilizada) deve-se usar o butirômetro Gerber para leite, enquanto que para
a leite desnatada deve ser usado o butirômetro Gerber para leite desnatada.

5.5.2Verter 10 cm3, exatamente medidos, de ácido sulfúrico no butirômetro

respectivo, cuidando de não umedecer com ácido o pescoço do butirômetro.

(Continua)

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NTE INEN 12 1973-06

5.5.3Invertir lentamente, tres o cuatro veces, la botella que contiene la muestra

preparada, e pipetear 10,94 cm3de leche, de tal manera que el borde inferior del menisco
coincida com a linha de calibração da pipeta após limpar com papel absorvente a
parte exterior de sua ponta de descarga. Em seguida, segurando a pipeta com sua ponta colada ao
borda inferior do pescoço do butirômetro, despeje cuidadosamente o leite no mesmo
até que o menisco pare, deixar passar 3 segundos e esfregar a ponta da pipeta
contra a base do pescoço do butirômetro.

5.5.4 Verter 1cm3exatamente medido, de álcool amílico no butirômetro,

cuidando de não umedecer com o álcool o pescoço do butirômetro, O álcool amílico deve
adicionar-se sempre depois do leite.

5.5.5Tapar herméticamente el cuello del butirómetro y agitar en una vitrina de

proteção, investindo lentamente no butirômetro duas ou três vezes durante a operação,
até que apareçam partículas brancas.

5.5.6 Imediatamente após a agitação, centrfugue o butirômetro com sua tampa

colocada para fora. Se não houver um número suficiente de butrimômetros para preencher
completamente a centrífuga, colocá-los simetricamente, equilibrando-os com um que
contenga igual volume de água em caso de ser necessário. Uma vez que a centrífuga alcança
a velocidade necessária, continuar a centrifugação durante um tempo não menor que 4 min nem
maior de 5 min, a tal velocidade.

5.5.7 Retirar o butirômetro da centrífuga e colocá-lo, com a tampa voltada para baixo, no banho de água a
65°±2°C durante um tempo não menor que 4 min nem maior que 10 min, mantendo a coluna de
gordura completamente submersa na água.

5.5.8 Em seguida, dependendo do tipo de leite analisado, proceder de acordo com 5.5.9, 5.5.10 ou
5.5.11.

5.5.9 Leite fresco. Antes de proceder à leitura, colocar o nível de separação entre o ácido e a
coluna de gordura sobre a marca de uma graduação principal da escala; isso é conseguido
presionando o aflojando adecuadamente la tapa del butirómetro. Leer las medidas correspondientes a
a parte inferior do menisco de gordura e ao nível de separação entre o ácido e a coluna de gordura; a
a diferença entre as duas leituras dá o conteúdo de gordura do leite. Ao realizar as leituras, deve
manter a balança na posição vertical e o ponto de leitura ao mesmo nível dos olhos. A leitura
do menisco deve aproximar-se de 0,05%, (ver 5.5.12).

5.5.10 Leite homogeneizado (pasteurizado ou esterilizado). Realizar uma primeira leitura de acordo
con o indicado em 5.5.9. Depois, ajustar a tampa se necessário e, imediatamente. Repetir por
segunda vez a centrifugação, o aquecimento a 65°±2°C e a leitura. Se a segunda leitura difere
da primeira, repetir pela terceira vez a centrifugação, o aquecimento a 65° ± 2°C e a leitura; a
medida válida corresponde a la segunda o tercera lectura, según el caso, (ver5.5.12).

5.5.11 Leite desnatado. Repetir pela segunda vez a centrifugação e o aquecimento a 65°±2°C, e
realizar a leitura de acordo com o indicado em 5.5.9, (ver 5.5.12).

5.5.12Instrucciones adicionales.Si existe formación de una capa esponjosa o no definida en la base

da coluna de gordura, deve-se repetir o ensaio tendo cuidado de adicionar o volume correto de
álcool amílico e de dissolver completamente qualquer partícula branca do leite, Se a coluna de
a gordura apresenta uma coloração muito escura que dificulta a leitura, ou há carbonização na
interfase, debe repetirse el ensayo luego de verificar la densidad del ácido sulfúrico, El butirómetro
deve ser lavado perfeitamente ao final da operação (ver A.1).

(Continua)

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6. MÉTODO DE RÖSE – GOTTLIEB

6.1 Resumen

6.1.1Extraer con éter dietílico y éter de petróleo la grasa contenida en una solución etanólica
amoniacal de leite; evaporar os solventes e pesar o resíduo.

6.2 Instrumental

6.2.1 Balança analítica. Sensível a 0,1 mg.

6.2.2 Centrífuga, provida com motor trifásico (ver nota 1), apropriada para colocar os tubos de
extracción y capaz de mantener una velocidad de 550 ± 50 r/min. El uso de la centrífuga es opcional
(ver6.5.6).

6.2.3 Estufa, com ventilação e regulador de temperatura, ajustada a 102° ± 2°C, ou estufa a vácuo,
ajustada a uma temperatura de 70° a 75°C e pressão menor de 66 kPa, (50 mm Hg).

6.2.4 Matrices Erlenmeyer, de 150 a 250 cm3de capacidade.

6.2.5 Tubos ou matraces de extração. Podem ser utilizados tubos de Rohring ou matraces de Mojonnier, com
tampões herméticos de vidro fosco, neopreno ou outro material que não seja afetado pelos
solventes usados.

6.2.6 Material para facilitar a ebulição, isento de gordura, não poroso. Podem ser usadas pérolas de vidro ou
de outro material adequado.

6.2.7Desecador,con cloruro de calcio anhidro u otro deshidratante adecuado.

6.2.8 Banho-Maria.

6.3 Reativos

6.3.1Solución al 25 % de amoníaco,con densidad aproximada de 0,91 g/cm3a 20°C.

6.3.2 Álcool Etílico. Solução a 94-97 % (V/V).

6.3.3 Éter dietílico, isento de peróxido (ver A.2).

6.3.4 Éter de petróleo, com qualquer intervalo de destilação compreendido entre 30° e 60°C.

6.4 Preparação da amostra

6.4.1 Levar a amostra a uma temperatura de aproximadamente 20°C e misturá-la por agitação.
suave até que esteja homogênea, cuidando para que não haja separação de gordura por efeitos do
agitação.

6.4.2 Se formarem grumos de creme e estes não se dispersarem, aqueça a amostra em banho-maria até
35°-40°C, mezclando cuidadosamente e incorporando c ualquier partícula de crema adherida al
recipiente, e resfriá-la rapidamente até 18°-20°C. Se restarem partículas brancas ou grumos de gordura
aderidos às paredes do recipiente, a determinação não dará resultados exatos.

__________________________
NOTA 1. El motor trifásico evita la formación de chispas que pueden producir explosión con los solventes.

(Continua)

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6.5 Procedimiento

6.5.1 A determinação deve ser realizada em duplicata sobre a mesma amostra preparada, (ver 6.5.13).

6.5.2 Secar um frasco Erlenmeyer (que pode conter, se desejado, o material para facilitar a
ebulição) no fogão durante 30 a 60 min. Deixar esfriar no dessecador e pesá-lo com
aproximación a 0,1 mg.

6.5.3 Inverter lentamente, três ou quatro vezes, a garrafa que contém a amostra preparada e,
imediatamente, transferir para o frasco ou tubo de extração e pesar com aproximação a 0,1 mg, de 10 a
11 g de amostra.

6.5.4 Adicionar à porção de ensaio 1,5 cm3de solução a 25% de amônio e misturar
completamente. Adicionar 10 cm3de álcool etílico e agitar o conteúdo do frasco ou tubo de
extração, mantendo-o aberto.
3
de éter dietílico e, após fechar o frasco ou tubo de extração com a tampa
6.5.5 Adicionar 25 cm
umedecido, misture o conteúdo agitando-o energicamente e invertendo-o repetidamente durante 1
minuto; si es necesario enfriar en corriente de agua. Quitar cuidadosamente el tapón y agregar 25 cm3
de éter de petróleo, empleando parte de Colocar nuevamente el tapón y mezclar el contenido
agitando-o e invertendo-o repetidamente durante 30 segundos. Não deve ser agitado energicamente se não
se usa centrífuga.

6.5.6 Deixar em repouso o frasco ou tubo de extração até que a camada superior etérea chegue a
se separar totalmente da camada aquosa ficando completamente límpida. Pode ser acelerado o
separação mediante o uso de uma centrífuga adequada.

6.5.7 Remover cuidadosamente a tampa e enxaguar com alguns mililitros de éter de petróleo o
interior do pescoço do balão ou tubo de extração. Transferir o mais completamente possível, mediante
decantación o con ayuda de un sifón (vernota 2), la capa superior etérea al matraz Erlenmeyer tarado
(ver6.5.2), tomando cuidado para não arrastar nenhuma porção de camada aquosa. A seguir,
enxaguar a rolha do frasco ou tubo de extração e o sifão com uma pequena porção de éter de
petróleo, incorporando esta porción ao conteúdo do matraz Erlenmeyer.

6.5.8Repetir la extracción dos veces más (vernota 3) siguiendo el procedimiento indicado en6.5.5a
6.5.7, mas usando sempre 15 cm3de éter dietílico e 15 cm3de éter de petróleo e omitindo o
enjuage final na última extração.

6.5.9 Evaporar os solventes contidos no frasco Erlenmeyer e secar o

residuo en la estufa durante una hora, colocando el matraz en posición horizontal.

6.5.10 Deixar esfriar o frasco Erlenmeyer no dessecador, pesá-lo com aproximação de 0,1 mg. Repetir
o aquecimento por períodos, de 30 a 60 min, resfriando e pesando até que não haja diminuição em
a massa.

6.5.11Agregar 15 a 25 cm3de éter de petróleo para verificar se o material extraído é completamente

solúvel. Aqueça suavemente e agite até que toda a gordura tenha se dissolvido. Se o material extraído
é completamente solúvel no éter de petróleo, a massa de gordura é a diferença entre a massa final
del matraz con el extracto y la masa original del matraz vacío (ver6.5.2).

________________________

NOTA 2. Cuando la transferencia se realiza por decantación, puede ser necesario añadir un poco de agua
destilada para elevar o nível de separação entre as duas camadas e, assim, facilitar a decantação.

NOTA 3. Para leche descremada en máquina, es suficiente repetir la extracción una sola vez

(Continua)

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6.5.12 Se o material extraído não for completamente solúvel no éter de petróleo, ou em caso de dúvida e
sempre em caso de discrepância ou litígio (ver4.1), extrair a gordura do frasco através de lavagens
sucessivos com éter de petróleo morno, deixando que o material insolúvel assente antes de cada
decantación. Enjuagar la parte exterior del cuello del matraz tres veces. Calentar el matraz con el
material insolúvel durante uma hora no forno, colocando-o em posição horizontal. Resfriá-lo em
dessecador e, procedendo de acordo com o indicado em 6.5.10, pesá-lo com aproximação a 0,1 mg.
A massa de gordura, neste caso, é a diferença entre a massa do balão com o extrato total e a
masa del matraz con el material insoluble.

6.5.13 Deve ser realizado apenas um ensaio em branco com 10 cm3de água destilada, usando o mesmo
instrumental, os mesmos reagentes nas mesmas quantidades e o mesmo procedimento, de igual
forma que para a amostra. Se a matéria extraída exceder 0,5 rng, os reagentes deverão ser purificados.
o deve ser descartado e o ensaio deve ser repetido.

6.6 Cálculos

6.6.1 O conteúdo de gordura no leite é calculado pela seguinte equação:

(m −m ) − (m −m )
G= 1 2 3 4 x100
m
Sendo:

G = contenido de grasa, en porcentaje de masa.

m = massa da amostra analisada, em g.
m1= massa do Erlenmeyer com o extrato, em g.
m2massa do Erlenmeyer vazio, ou do Erlenmeyer com o material insolúvel, em g.
m3massa do Erlenmeyer com o extrato resultante na determinação em branco, em g
m4massa do Erlenmeyer vazio utilizado na determinação em branco, ou do
Erlenmeyer com material insolúvel, em g.

6.7 Erros de método

6.7.1 A diferença entre os resultados de uma determinação realizada em duplicata não deve
exceder de 0,03 %, caso contrário deve-se repetir a determinação.

6.8 Informe de resultados

6.8.1 Como resultado final deve ser reportada a média aritmética dos dois resultados da
determinação.

6.8.2 No relatório dos resultados deve ser indicado o método utilizado e o resultado obtido. Deve
mencionar também, qualquer condição não especificada nesta norma, ou considerada como
opcional, assim como qualquer circunstância que possa ter influenciado o resultado, e deve
incluir a identificação da amostra.

(Continua)

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NTE INEN 12 1973-06

ANEXO A

A.1 LIMPIEZA DE LOS BUTIROMETROS

A.1.1 É conveniente limpar os butirômetros enquanto estão quentes para maior

facilidade de limpeza.

A.1.2 Retire os tampões e, após verter o ácido em uma cápsula, lave os butirômetros enchendo-os.
parcialmente con una solución a 40°-50°Cde carbona to de socio o fosfato trisódico al 2% (o con algún
detergente adequado) e agitando-os energicamente para conseguir a limpeza da ampola
graduada. Repetir a operação três ou quatro vezes.

A.1.3 Enjuagar imediatamente com água quente, duas ou três vezes, com agitação enérgica e,
finalmente, aclararlos con agua fría y colocarlos, con el cuello hacia abajo, en una gradilla para que
goteem e se sequem.

A.1.4Inmediatamente antes de usar los butirómetros es indispensable verificar que se encuentren

completamente secos.

A.2 DETERMINAÇÃO DE PERÓXIDOS NO ÉTER DIETÍLICO

A.2.1 Para determinar a presença de peróxidos no éter dietílico, adicionar a 10 cm3de éter,
contenidos em uma pequena proveta equipada com tampão de vidro polido e previamente lavada com
éter, 1 cm3de solução de iodeto de potássio a 10%, recém-preparada. Agitar bem e deixar em repouso
durante um minuto. Não deve aparecer coloração amarela em nenhuma das camadas.

A.2.2 O éter dietílico pode ser mantido isento de peróxidos ao adicionar tiras de zinco formadas por
uma lâmina que previamente foi imersa em uma solução, diluída e acidificada, de sulfato de
cobre durante 1 minuto e depois lave em água. Devem ser usados aproximadamente 80 cm2de lâmina
de zinco para cada litro de éter, e deve-se cortar a lâmina em tiras de um comprimento suficiente para atingir
desde o fundo até, pelo menos, metade do recipiente.

(Continues)

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NTE INEN 12 1973-06

APÊNDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

INEN 3 Leite e produtos lácteos. Definições.

Z.2 NORMAS PUBLICADAS SOBRE O TEMA

INEN 3 Leite e produtos lácteos. Definições.

INEN 4 Leite e produtos lácteos. Amostragem.
INEN 9 Leite fresco. Requisitos.
INEN 10 Leite pasteurizado. Requisitos.
INEN 11 Leite. Determinação da densidade relativa.
INEN 12 Leite. Determinação do teor de gordura.
INEN 13 Leite. Determinação da acidez titulável.
INEN 14 Leite. Determinação de sólidos totais e cinzas.
INEN 15 Leche. Determinación del punto de congelación.
INEN 16 Leite. Determinação de proteínas.
INEN 17 Leite e produtos lácteos. Exame microbiológico. Disposições gerais.
INEN 18 Leite. Ensaio de redutases.
INEN 19 Leite pasteurizado. Ensaio de fosfatase.
INEN 20 Leche. Determinación de bacterias activas.
INEN 21 Leche pasteurizada. Contaje de bacterias coliformes.
INEN 91 Leite. Determinação do índice refratométrico.

Z.3 BASES DE ESTUDO

Recomendação ISO R 1211. Leite. Determinação do teor de gordura. Método de referência Internacional
Organização para a Padronização, Suíça, 1970.

Proposta de Norma Centroamericana ICAITI 34 046 h2.Leite e produtos lácteos. Métodos de

ensaio e análise. Determinação da matéria gorda pelo método de Röse-Gottlieb. Instituto
Centroamericano de Pesquisa e Tecnologia Industrial, Guatemala, 1969.

Norma Britânica BS 696. Método Gerber para a determinação de gordura no leite e produtos lácteos. Britânico
Instituição de Normas, Londres, 1969.

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 INFORMAÇÃO COMPLEMENTAR

Documento: TITULO: LECHE DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE Código:

NTE INEN 12 GORDURA AL 03.01-302

ORIGINAL: REVISÃO:
Fecha de iniciación del estudio: Data de aprovação anterior pelo Conselho Diretor
Oficialização com o Caráter de
por Acordo Nº de
publicado no Registro Oficial nº de

Fecha de iniciación del estudio:

Fechas de consulta pública: de 1972-10-13 a 1972-11-15

Subcomité Técnico: CT 7:2* Leite e produtos lácteos

Fecha de iniciación: Fecha de aprobación: 1971-06-21
Integrantes del Subcomité Técnico: CT 7:2

NOMBRES: INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Sr. Manuel Tobar Zaldumbide HERTOB, PROMISA, O ANJO

Dr. Alberto Proaño MINISTÉRIO DA PRODUÇÃO
Ing. Nicolás Guillén MINISTÉRIO DA PRODUÇÃO
Dr. Germán Fierro e PASTEURIZADORA QUITO, ILESA, SUPER DE
Dr. Sergio Coellar GUAYAQUIL E INDÚSTRIA LEITEIRA
CARCHI
Eng. Carlos Molina CÂMARA DE AGRICULTURA DA 1ª Zona
Ing. Jaime Flores González CÂMARA DE AGRICULTURA DA 1ª Zona
Sr. Luis González PRODUTOS LÁCTEOS GONZALEZ
Dr. Hernan Avila Orejuela PRODUTOS LÁCTEOS GONZÁLEZ
Dr. Nelson Valle P. INSTITUTO NACIONAL DE NUTRIÇÃO
Dr. Gustavo Guerra INSTITUTO NACIONAL DE NUTRIÇÃO
Dr. Jorge Donoso DIREÇÃO DE HIGIENE MUNICIPAL
Sr. Carlos Pazmiño Gallo INDÚSTRIA LÁCTEA CAP
Ing. Federico Schaerer FAO
Eng. Ejvind Christensen FAO
Sr. José E. Muñoz COLEGIO DE QUÍMICOS DE PICHINCHA
Sr. Pablo Lozada INSTITUTO DE COMÉRCIO EXTERIOR E
Ing. José Arellano INTEGRACIÓN.
Dra. Leonor Orozco CENTRO DE DESENVOLVIMENTO CENDES
INEN

Outros trâmites:♦4Esta norma sin ningún cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBRIGATÓRIA a VOLUNTÁRIA, segundo a Resolução do Conselho Deliberativo de 1998-01-08 e oficializada
mediante Acordo Ministerial nº 235 de 1998-04-05, publicado no Registro Oficial nº 321 de 1998-20-05
O Conselho Deliberativo do INEN aprovou este projeto de norma na sessão de 15-08-1973

Oficializada como: Obrigatória Por Acordo Ministerial nº 830 de 25 de outubro de 1973

Registro Oficial No. 437 de 21 de novembro de 1973
__________________________
*Atualmente (AL 03.01).
Instituto Equatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 e Av. 6 de Dezembro
Caixa 17-01-3999 - Telfs: (593 2) 2 501885 a 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815
Dirección General: E-Mail: [email protected]
Área Técnica de Normalización: E-Mail: [email protected]
Área Técnica de Certificación: E-Mail:[email protected]
Área Técnica de Verificación: E-Mail:[email protected]
Área Técnica de Servicios Tecnológicos: E-Mail: [email protected]
Regional Guayas: E-Mail:[email protected]
Regional Azuay: E-Mail: [email protected]
Chimborazo Regional: E-Mail:[email protected]
URL:www.inen.gov.ec