Exercícios de HPLC – 24/01/2025
Introdução à Cromatografia – Parte 1
PROVA APLICADA EM 2023/2
1 – Foi solicitado a um laboratório a análise de LSD apreendida. O analista responsável pela análise
preparou um conjunto de padrões e promoveu a separação cromatográfica, onde obteve os
resultados apresentados na figura a seguir. Os padrões foram de: 1 – cafeína, 2 – benzocaína (padrão
interno), 3 – LSD, 4 – cocaína e 5 – lidocaína.
Após obter os respectivos tempos de retenção, o analista obteve as seguintes curvas analíticas (sinal
x concentração em mg/mL).
Composto Equação Composto Equação
1 y = 15,92 X + 0,020 4 y = 4,8 X + 0,040
3 y = 13,56 X – 0,023 5 y = 1,5 X – 0,050
Em seguida, o analista solubilizou 6,60 mg da amostra apreendida em 5 mL de solução de PI 1 mg/mL,
tamponada em pH 4,00. Em seguida, 250 µL de solução foram filtrados e diluídos em 1,0 mL e injetados
no HPLC. A separação foi conduzida em uma coluna C18 (apolar ; 20 cm ; 4,5 mm ; 0,35 µm) e uma pré-
coluna ideal. A eluição foi conduzida da seguinte maneira: 0 a 5,5 min. com 60% de tampão pH 4,00 e
40% de ACN e 5,5 a 30 min. com 40% do tampão e 60% de ACN. O fluxo da FM foi de 1 mL min−1 e o
comprimento de onda de detecção de UV foi definido em 254 nm. Os resultados obtidos encontram-
se na figura a seguir.
Baseado nessas informações, identifique e calcule o teor de cada componente presente na amostra
apreendida. (1,2 ptos).
Professor Frank Pereira de Andrade
Universidade Federal de São João Del Rei
Campus Centro Oeste Dona Lindu (CCO/UFSJ)
Exercícios de HPLC – 24/01/2025
Introdução à Cromatografia – Parte 1
2.2 – Avalie as afirmativas abaixo e marque V nas corretas e F nas incorretas. Cada resposta errada
anulará uma reposta correta. (0,04 ptos cada)
a) ( ) Uma molécula de LSD deuterada poderia ser empregada nessa análise como PI.
b) ( ) Se a eluição ocorresse em modo isocrático, mantendo uma FM com ACN 50%, haveria uma
diminuição na retenção relativa entre as espécies 1 e 2 e a espécie 5 teria TR maior que 26,6.
c) ( ) Se a coluna fosse substituída por uma coluna C8, a ordem de eluição seria o contrário da ordem
apresentada nessa análise, mas a sensibilidade não seria afetada.
d) ( ) Se essa análise fosse repetida em outro momento, e o analista obtivesse Tm = 0,1 min. e o LSD
fosse eluído em 1,2 min., o analista deveria desconsiderar essa análise.
e) ( ) A pré-coluna empregada nessa análise teve como objetivo, prevenir a adsorção irreversível
de algum componente presente na amostra ou solventes, que danificariam a coluna.
f) ( ) Se o detector empregado fosse substituído por outro tipo de detector, a ordem de eluição não
seria afetada, enquanto a sensibilidade analítica seria afetada.
g) ( ) Se a FM fosse substituída por etanol, mantendo a mesma forma de eluição, a ordem de eluição
seria a mesma, mas as retenções relativas seriam afetadas.
h) ( ) Se a análise fosse conduzida em condições isocráticas, com 60% de ACN, a benzocaína e o LSD
seriam coeluídos.
DADOS DE POLARIDADE DOS SOLVENTES E FÓRMULAS
Tetracloreto de carbono: 1,6 ; Tolueno: 2,4 ; Etanol: 4,3 ; Dioxano: 4,8 ; Metanol: 5,1 ; ACN: 5,8 ;
Etilenoglicol: 6,9 ; Água: 10,2
𝑻𝑹 −𝑻𝑴 𝑲𝑩 𝑻 𝟐 𝑻𝟐𝒓 𝑳 𝟐[(𝒕𝒓 )𝑩 − (𝒕𝒓 )𝑨 ]
𝒌 = 𝑻𝑴
; ∝= 𝑲𝑨
; 𝑵 = 𝟏𝟔 (𝑾𝒓 ) = 𝟓, 𝟓𝟓 𝑾𝟐𝟏
; 𝑯=𝑵 e 𝑹= 𝑾𝑨 + 𝑾𝑩
𝒃
𝟐
Professor Frank Pereira de Andrade
Universidade Federal de São João Del Rei
Campus Centro Oeste Dona Lindu (CCO/UFSJ)
