Materiais
Alça de Drigalski
Alça de transferência
Bico de Bunsen
Meio de cultura
Pipeta automática
Placa de Petri
Ponteiras
Tubos de ensaio
Procedimentos
Esterilizar a alça no bico de Bunsen e coletar uma alíquota de inóculo a partir do
meio de cultura.
Destampar e flambar o tubo. Inserir a fração do meio de cultura coletado em 10ml de
solução salina (0,85%). Flambar novamente e fechar, tomando cuidado para não
encostar na bancada.
Em outro tubo, pipetar 1ml da amostra em 9ml de solução salina (0,85%).
Sabendo-se que 9ml dissolvem 10 vezes a quantidade de 1ml, este procedimento é
repetido até que a diluição atinja a marca de 10-6.
Não esquecer que a cada diluição deve-se, antes, agitar a amostra para que os
microorganismos se ressuspendam.
Separar os tubos de ensaio com amostras diluídas a 10-4, 10-5 e 10-6.
Abrir o tubo e passar a ponta pela chama. Pipetar 0,1ml da amostra diluída a 10-4 na
placa de Petri. Flambar a boca do recipiente e fechar. Repetir estes passos em
outras duas placas, previamente marcadas com as respectivas diluições, e espalhar,
em cada uma, por toda a superfície com a alça de Drigalski.
Refazer esta etapa usando as amostras diluídas a 10-5 e 106.
Objetivos
Demonstrar aos alunos as etapas do processo de contagem microbiana.
Determinar o número de microorganismos através do método de diluição seriada.
Introdução
Os microorganismos são seres vivos muito pequenos, impossíveis de serem vistos a
olho nu e que são importantes para a manutenção do equilíbrio ecológico na Terra.
Alguns vivem em seres humanos e em outros animais e são necessários para a
manutenção da saúde desses animais, outros são necessários para a produção de
alimentos e produtos químicos e alguns causam doenças.
Os principais grupos de microorganismos são as bactérias (organismos
relativamente simples e de uma única célula), as arquibactérias (algumas espécies
vivem em condições extremas), os fungos (possuem um núcleo definido e envolto
por uma membrana nuclear), os protozoários (eucarióticos unicelulares e que
apresentam uma variedade de formas), as algas (eucariotos fotossintéticos com
diversas formas e de reprodução assexuada e sexuada) e, diferente dos outros
grupos já mencionados, os vírus (com núcleo circundado por envoltório proteico).
As bactérias dispõem-se em pares, cadeias, grupos ou outros agrupamentos e
reproduzem-se por meio de fissão binária. Processo esse em que uma bactéria
divide-se formando duas novas bactérias idênticas à primeira.
A reprodução das bactérias dá-se em ritmo acelerado. Esse aumento no número de
células, em Microbiologia, é chamado de crescimento microbiano e ocorre devido a
alguns fatores, de natureza física e química.
Entre os fatores físicos estão: a temperatura, pois cada espécie bacteriana cresce a
uma temperatura ótima; o pH, pois a maioria das bactérias cresce melhor em um pH
perto da neutralidade; e a pressão osmótica, pois o cultivo deve ser feito em meio
constituído quase que somente de água, mas atentando-se para as concentrações
para que o meio não fique hipotônico nem hipertônico.
Carbono, nitrogênio, enxofre e fósforo são exemplos de fatores químicos utilizados
no crescimento microbiano. Além destes, há os chamados elementos traços, que
são outros minerais e são essenciais para as funções de certas enzimas.
Para fazer a contagem do número total de células pode ser empregado vários
métodos: contagem de células totais, contagem de viáveis e diluição das
suspensões celulares antes do plaqueamento.
O presente experimento ocupou-se de utilizar o método de contagem de viáveis por
meio de diluições em série. A diluição impede que as colônias fundam-se ou se
sobreponham. A proposta desta técnica é que se obtenha um número apropriado de
colônias, entre 20 e 200.
Resultados
Nas placas com amostras diluídas a 10-6, foram encontrados os seguintes
resultados:
1º: 25
2º: 33
3º: 57
Logo,
➢ 25 + 33 + 57 = 115 / 3 = 38,3
➢ 38,3 * 106 * 10 = 38,3 * 107 = 3,83 * 108 UFC/ml
➢ 0,1ml * 10 = 1ml
Discussões
Os três resultados (25, 33, 57) foram somados e divididos por 3, encontrando,
assim, um total de 38,3.
Como uma colônia de bactérias possui, aproximadamente, 1 milhão de células,
então multiplicou-se pelo inverso da diluição. Ou seja, a diluição foi a 10-6, logo, a
multiplicação é por 106.
Já que na placa, foi colocado 0,1ml de amostra e o resultado tem que ser expresso
em ml, então foi preciso converter a quantidade usada.
Para que o resultado ficasse em notação científica multiplicou-se por 101.
Por fim, dos 3,83 * 108 UFC/ml, entendeu-se que, na placa havia 3,83 vezes 108
Unidades Formadoras de Colônias por mililitro de amostra. E que havia muito mais
que o esperado, pois teve-se um resultado de 38 milhões de bactérias.
Cibelly Ariadne Simplicio de Jesus
Relatório
Crescimento Microbiano
Fortaleza, 2015
Conclusão
Doenças transmitidas por alimentos (DTAs) são todos os casos de ingestão de
alimentos contaminados por microorganismos patogênicos (infecciosos,
toxinogênicos ou infestantes), toxinas, substâncias químicas, entre outros.
Existem mais de 250 tipos de DTA e por esse motivo, as técnicas de contagem
microbiana são tão importantes, tanto para a sociedade quanto para a indústria.
Seus processo rápidos, fáceis e de baixo custo produzem respostas concretas e
confiáveis. E seus vários métodos são adaptáveis a diferentes organismos ou
situações.
Referências
CASE, C. L.; FUNKE, B. R.; TORTORA, G. J. Microbiologia. Porto Alegre: Artmed
Editora. 2012. 939 p.
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. São Paulo:
Pearson Education. 2008. 608 p.
PORTAL DA SAÚDE. Disponível em:
[Link]
as-transmitidas-por-alimentos-dta>. Acesso em: 19 maio 2015.
VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Disponível em:
<[Link]
de-saude/alimentos/91-area-de-atuacao/inspecao-de-produtos-e-servicos-de-saude/
alimentos/415-doenca-transmitida-por-alimento-dta>. Acesso em: 19 maio 2015.
