MÉTODO Coletar a urina, medir o volume e conservá-la entre 2-8 ºC.
Colorimétrico-Vermelho de pirogalol. Nessas condições, o analito é estável 8 dias.
Amostras de líquor são estáveis 4 dias entre 2-8 ºC.
FINALIDADE Não usar amostras de líquor com presença de sangue.
Reagentes para determinação quantitativa das proteínas na urina e líquor.
Somente para uso diagnóstico in vitro. Nota
Recomendamos que a coleta, preparação, armazenamento e descarte das amostras
FUNDAMENTO biológicas sejam realizadas seguindo as recomendações das Boas Práticas de
Em meio ácido, as proteínas reagem com o vermelho de pirogalol e o molibdato Laboratórios Clínicos.
formando um complexo colorido cuja absorbância medida em 600 nm é diretamente Enfatizamos que os erros provenientes da amostra podem ser muito maiores do que
proporcional à concentração de proteínas na amostra analisada. os erros ocorridos duante o procedimento analítico.
SIGNIFICADO CLÍNICO INTERFERÊNCIAS
A determinação de proteínas na urina é um bom indicador para avaliação de A hematúria produz resultados falsamente elevados.
enfermidades renais, uma vez que os glomérulos funcionam como ultrafiltros das A presença de detergentes na vidraria pode alterar significativamente os resultados.
proteínas plasmáticas. A intensidade em que cada proteína é normalmente filtrada
através da membrana glomerular está relacionada com a sua massa, carga e PROCEDIMENTO DO TESTE
concentração plasmática. A. Condições de Reação
Em condições normais pode ocorrer uma pequena excreção de proteínas na urina ● Leitura: Comprimento de onda 600 nm (580 a 620 nm)
com os valores podendo chegar a 15 mg/dL ou 140 mg/24 horas. ● Medida: Acertar zero de absorbância com o tubo Branco
Valores aumentados na urina (Proteinúria): Enfermidades renais tais como ● Tipo de reação: Ponto final
síndrome nefrótica, glomérulonefrite, insuficiência renal, tumores renais malignos e na
secreção anormal de proteínas no trato urinário. B. Técnica de Análise
Na nefropatia diabética franca ocorre proteinúria intensa com valores de 3 a 4 g/24 Atenção: Centrifugar as amostras para obtenção de melhores resultados.
horas.
Nas hemorragias e nos estados febris, os valores de proteinúria podem também estar 1. Identificar os tubos de ensaio e pipetar:
elevados.
Indivíduos sadios também podem apresentar valores alterados de proteínúria após Tubos Branco Teste Padrão
exercícios físicos vigorosos e na desidratação.
Água deionizada 50 μL
Valores aumentados no líquor: Pressão intracraniana elevada: traumatismos
cranianos, tumores cerebrais, hemorragias intracranianas e nas infecções bacterianas Amostra 50 μL
ou virais (meningite, encefalite e poliomielite). Padrão (1) 50 μL
QUALIFICAÇÕES DO PRODUTO Reagente de Cor (2) 1000 μL 1000 μL 1000 μL
● Metodologia colorimétrica de ponto final, simples, rápida e facilmente adaptável em 2. Homogeneizar e incubar os tubos durante 5 minutos a 37 ºC.
analisadores automáticos e semi-automáticos. 3. Ler a absorbância do Padrão (Ap) e do Teste (At) zerando o aparelho com o Branco
● Utiliza um reagente de vermelho de pirogalol que apresenta a mesma sensibilidade em 600 nm (580 a 620 nm).
para a albumina e gama globulinas. A cor é estável durante 30 minutos.
● O produto emprega reagentes líquidos, prontos para uso.
● A metodologia permite obter resultados exatos e precisos se for executada Cálculos
conforme descrito na Instrução de Uso. Ver Linearidade.
CP = Concentração do Padrão
IDENTIFICAÇÃO DOS REAGENTES AP = Absorbância do Padrão
Conservar entre 2-8 ºC. CT = Concentração do Teste
1. Padrão - Contém albumina bovina 50 mg/dL. O Padrão é rastreável ao Standard AT = Absorbância do Teste
Reference Material SRM 927 do National Institute of Standards and Technology - CP = 50 mg/dL
NIST.
2. Reagente de Cor - Contém Tampão pH 2,3, vermelho de pirogalol 60 mmol/L, Exemplo
molibdato sódico 40 mmol/L, succinato 50 mmol/L e lauril sulfato de sódio 1 g/L. Se AP = 0,412
Se AT= 0,466
ESTABILIDADE CP = 50 mg/dL
Os reagentes são estáveis até o vencimento da data de validade impressa no rótulo FC = CP ÷ AP = 50 ÷ 0,412 = 121
do produto e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem CT = FC x AT = 121 x 0,466 = 56,4 mg/dL= 56 mg/dL
vedados e se for evitada a contaminação durante o uso.
Proteinúria em mg/24 horas
Sinais de Deterioração dos Reagentes Se volume urinário de 24 horas = 1300 mL
1. Presença de partículas e turbidez indicam deterioração dos reagentes.
2. A absorbância do Reagente de Cor medida contra a água em 600 nm deverá ser mg/dL x Volume urinário 24h em mL
mg/24 horas =
inferior a 0,290. 100
MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS 56 x 1300
mg/24 horas = = 728 mg/24h
● Espectrofotômetro (leitura em 600 ± 20 nm); 100
● Tubos e pipetas;
● Banho-maria ou termostatizador; Proteinúria = 728 mg/24 h
● Cronômetro.
Dosagem no Líquor
PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS Dosar as proteínas do líquor empregando o mesmo procedimento da urina.
● Aplicar os cuidados habituais de segurança na manipulação dos reagentes e
amostra biológica. Exemplo
● Recomendamos o uso das Boas Práticas de Laboratórios Clínicos para a execução Se AP = 0,412
do teste. Se AT = 0,225
● De acordo com as instruções de biossegurança, todas as amostras devem ser CP = 50 mg/dL
manuseadas como materiais potencialmente infectantes. FC = CP ÷ AP = 50 ÷ 0,412 = 121
● Aconselhamos não pipetar diretamente do frasco do Reagente de Cor (2) para evitar CT= FC x AT = 121 x 0,225 = 27 mg/dL
contaminação. Proteínas no líquor = 27 mg/dL
● Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resoluções normativas
locais, estaduais e federais de preservação do meio ambiente. Atenção
● Esta técnica de dosagem é adequada para fotômetros cujo volume mínimo de
AMOSTRA solução para a leitura é igual ou menor do que 1000 µL.
URINA e LÍQUOR. ● O analista sempre deve fazer uma verificação da necessidade de ajuste do volume
Amostra de urina de 24 horas é a mais empregada, mas pode também dosar em para o fotômetro empregado no seu laboratório.
amostra de uma micção.
● Os volumes de amostra e de reagente podem ser modificados proporcionalmente,
APRESENTAÇÃO
sem alterar o desempenho do teste e os cálculos.
● Em caso de redução dos volumes é necessário observar o volume mínimo de leitura REF. Reagentes Volume
fotométrica.
Padrão 1 x 5 mL
● Volumes da amostra menores do que 10 µL são críticos em aplicações manuais e
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devem ser usados com cautela porque aumentam a imprecisão da medição. Reagente de Cor 1 x 50 mL
Padrão 1 x 5 mL
VALORES DE REFERÊNCIA
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Urina - Crianças e adultos Reagente de Cor 2 x 50 mL
Urina de 24 horas: Até 150 mg/24 horas
Amostra aleatória: Até 15 mg/dL
TERMOS E CONDIÇÕES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO
Líquor Lei nº 8.078 de 11-9-90 - Código de Defesa do Consumidor
Adultos: 15 a 45 mg/dL A Gold Analisa garante a substituição, sem ônus para o consumidor, de todos os
produtos que comprovadamente apresentarem problemas técnicos, desde que o
Crianças e adolescentes usuário utilize equipamentos e materiais em boas condições técnicas, siga
Até 30 dias: 0 a 153 mg/dL rigorosamente o procedimento técnico e as recomendações estabelecidas nas
De 31 a 90 dias: 15 a 93 mg/dL Instruções de Uso.
Até 2 anos: 15 a 48 mg/dL Nº do lote e data de validade: Vide Rótulos do Produto
Acima de 2 anos: 15 a 45 mg/dL Gold Analisa Diagnóstica Ltda - CNPJ: 03.142.794/0001-16
AF MS Nº 800222-3 - Reg. MS - Nº 80022230078
Estes valores devem ser usados como uma orientação. É recomendado que cada Farm. Resp. José Gilmar Pereira Berto - CRF-MG 13421
laboratório estabeleça seus próprios valores de referência. Av. Nossa Senhora de Fátima, 2363 - Carlos Prates - Fone: (31) 3272-1888
Belo Horizonte MG Brasil CEP: 30710-020
AUTOMAÇÃO Home page: [Link]
Este kit pode ser utilizado na maioria dos analisadores automáticos. E-mail: goldanalisa@[Link]
O consumidor poderá solicitar mais informações através do Setor de Apoio ao Cliente Setor de Apoio ao Cliente (SAC): 0800 703 1888
(SAC) ou acessando o site [Link]
Analisa é marca registrada da Gold Analisa Diagnóstica Ltda
CONTROLE DA QUALIDADE
O laboratório clínico deve manter um Programa de Garantia da Qualidade para
SIMBOLOGIA
assegurar que todos os procedimentos laboratoriais sejam realizados de acordo com
as Boas Práticas de Laboratórios Clínicos.
Para controle e verificação do desempenho do kit podem ser utilizadas amostras
controle com valores estabelecidos pelos fabricantes.
É importante que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores médios e os Número do catálogo Limite de temperatura
respectivos limites de variação.
CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO8
Número do lote Quantidade de testes
Linearidade
A reação é linear até 100 mg/dL. Para valores maiores diluir a amostra com NaCI 150
mmol/L (0,85%) e repetir a determinação. Multiplicar o resultado obtido pelo fator de Produto para Consultar as
diluição. diagnóstico in vitro instruções de uso
Repetitividade
A imprecisão intra-ensaio foi calculada com 20 determinações sucessivas de Data limite de
Fabricado por
proteinúria, utilizando duas amostras de urina com concentrações diferentes. utilização
As médias dos coeficientes de variação obtidas foram de 3,0 e 2,1%.
Reprodutibilidade
A imprecisão inter-ensaio foi calculada com 20 determinações de proteinúria em dias Revisão: 02/18
diferentes, utilizando duas amostras de urina com concentrações diferentes.
As médias dos coeficientes de variação obtidas foram de 3,2 e 3,0%.
OBSERVAÇÕES
1. A observação minuciosa da limpeza e secagem da vidraria, da estabilidade dos
reagentes, da pipetagem, da temperatura e do tempo de reação é de extrema
importância para se obter resultados precisos e exatos.
2. Na limpeza da vidraria pode-se empregar um detergente neutro ou uma solução
ácida. A última lavagem deve ser feita com água destilada ou deionizada.
3. A água utilizada nos laboratórios clínicos deve ser purificada utilizando-se métodos
adequados para as finalidades de uso. Colunas deionizadoras saturadas liberam
diversos íons, aminas e agentes oxidantes que deterioram os reativos.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Koogan SA; 1998.
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Philadelphia: Lea & Febiger 1988:145-166.
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6. Watanabe N et al. Clin Chem 1986; 32:1551-1544
7. Weichselbaun TE. Am J Clin Path 1946;10:49.
8. GOLD ANALISA: Informe Técnico do Produto.
