RELATÓRIOS DE AULA PRÁTICA:
Extração de DNA
1 INTRODUÇÃO
As células são unidades que armazenam o DNA de cada indivíduo, ou seja, todas as
suas informações gênicas estão contidas nesta estrutura biológica. Para fazer estudos
moleculares desse material genético deve-se realizar a extração de DNA.
Porto (2016) diz que a extração e purificação de DNA permite usá-lo, posteriormente,
para outros fins, como identificação de seres humanos em análise forense, teste de
paternidade, identificação de microrganismos, elucidação de mutações genéticas, doenças
genéticas, criação de perfil genético de uma população, tecnologia do DNA recombinante
para produção de proteínas, vacinas gênicas e terapias gênicas.
Sabe-se que um DNA mal extraído pode trazer alterações no resultado ideal do
procedimento. Portanto, essa aula teve como objetivo realizar e descrever os procedimentos
necessários para realizar a extração de DNA da mucosa bucal.
2 MATERIAIS
2 Béquer
1 bastão (ou pipeta, para misturar)
100ml de água com 5 molar de NaCl (concentração saturada)
Mistura de células da boca
Detergente (rompe a membrana celular)
100 ml de água e 1 gota de azul de metileno (para observar as fases orgânicas)
50 ml de clorofórmio (separar o DNA das proteínas)
3 MÉTODOS
Adicionamos em um béquer 100 ml de água (medidos no próprio béquer), a mistura de
células da boca (que já estavam preparadas com água e 5 molares de sal) e 5 gotas de
detergente;
Misturamos devagar com auxílio de uma pipeta;
No outro béquer adicionamos os mesmos reagentes e adicionamos 1 gota de azul de
metileno e 50ml de clorofórmio;
Misturamos devagar novamente com o auxílio de uma pipeta;
Aguardamos até a formação da nuvem de DNA.
4 DISCUSSÃO
Após aguardar um tempo percebemos a extração de DNA foi eficiente, porém, no
primeiro béquer, percebemos que o DNA ficou aglomerado no fundo do béquer, se tornando
mais denso que o restante da mistura; já no segundo béquer, onde foi adicionado o
clorofórmio, percebemos a formação de uma nuvem transparente que se diferenciava do
restante da solução.
5 CONCLUSÃO
Percebemos com a aula prática foi possível chegar aos resultados e esperados, e que
esses momentos facilitam o entendimento e a compreensão dos alunos sobre os métodos de
extração de DNA. Além disso, a aula serve para preparar os alunos para o mercado de
trabalho e os familiarizar com a vida em laboratório.
REFERÊNCIAS
PORTO, Giugiu. Qual seria a importância de se fazer a extração de DNA? 2016.
Disponível em: <https://www.trabalhosgratuitos.com/Exatas/Quimica/Qual-seria-a-
importância-de-se-faz er-a-1044256.html>. Acesso em: 09 de dezembro de 2019.
RELATÓRIOS DE AULA PRÁTICA:
PCR
1 INTRODUÇÃO
A biologia molecular faz uso de variadas técnicas em seus experimentos, dentre elas
algumas das mais conhecidas são a Miniprep, o PCR, a digestão de DNA plasmidial com
enzima de restrição e a eletroforese em gel de agarose.
A técnica de PCR, amplamente utilizada em laboratórios de pesquisa e clínicos,
consiste em produzir automaticamente milhões de cópias de um único segmento de DNA em
questão de horas. Tal façanha depende da habilidade das enzimas copiadoras de DNA (Taq
polimerases) permanecerem estáveis em alta temperatura. Preparações de DNA plasmidial ou
cromossomal purificadas podem ser submetidas a digestão com enzimas de restrição para
identificação e caracterização do pedaço de DNA objeto do estudo (BASTOS et al, 2007).
A amostra está relacionada a fonte do material que se deseja amplificar, podendo ser
sangue, biopsia de qualquer tecido, cabelo, unha, líquidos corpóreos, entre outros. Os primers
(pelo menos um par) são responsáveis pela identificação do local correto (exemplo gene) do
material a ser amplificado; os dNTP’s (desoxirribonucleotídeos fosfatados) são responsáveis
pela síntese de novas cópias do material a ser amplificado; a Taq polimerase sintetiza as novas
cadeias de DNA ou cDNA; o MgCl2e o tampão da PCR colaboram com a atividade da
polimerase; e o termociclador é responsável pelas alterações das temperaturas que levam a
desnaturação da molécula de DNA ou cDNA, ao anelamento dos primers, e ao
alongamento/extensão das novas cadeias de DNA (SANTOS et al, 2014).
2 MATERIAIS
5 tubos ependorf
Água (diluente)
Solução tampão (mantém o pH)
Cloreto de magnésio (co-fator)
Oligonucleotídeos
Primer (se liga por complementariedade ao fragmento a ser amplificado)
Taq Polimerase
Capela de fluxo laminar
Termociclador
3 MÉTODOS
Deixamos a mistura da extração na capela de fluxo laminar por 20 minutos com a luz
UV;
Após isso, retiramos apenas o DNA extraído e colocamos no fundo de cada tubo
ependorf;
Sendo assim adicionamos no primeiro tubo somente 8µm de água; no segundo tubo
8µm solução tampão com 8µm de água (para diluir); no terceiro tubo 10µm de água e
8µm de cloreto de magnésio; no quarto tubo 8µm de primer reverso com 8µm de água
e 8µm de primer forward com 8µm de água; no quinto tubo 8µm de dNTP e 10µm de
água; no sexto tudo taq polimerase e 8µm de água; no sétimo somente a amostra de
DNA extraída;
Após isso, unimos no primeiro tubo que continha apenas 8µm de água, 4µm de
tampão diluído, 2µm de cloreto de magnésio, 2µm do primer reverso, 2µm do primer
forward, 4µm de dNTP, 2µm de taq polimerase diluída e 2µm de DNA;
Colocamos esse tubo na geladeira e depois disso no termociclador para fazer 35 ciclos.
4 DISCUSSÃO
A criação da PCR é considerada um grande avanço na área de biologia molecular, pois
esta metodologia permite explorar o conhecido sobre o genoma e sua expressão. Esta técnica
consiste em uma reação de amplificação in vitro de regiões específicas de ácidos nucleicos. A
sua realização é considerada simples, entretanto necessita de vários reagentes e do aparelho
termociclador, o qual permite variações na temperatura, caracterizando três etapas
(desnaturação, anelamento e extensão). A revelação dos resultados pode ser feita por
eletroforese ou em tempo real (PCR em tempo real).
5 CONCLUSÃO
Percebemos com a aula prática foi possível chegar aos resultados e esperados, e que
esses momentos facilitam o entendimento e a compreensão dos alunos sobre os métodos de
preparação para PCR. Além disso, a aula serve para preparar os alunos para o mercado de
trabalho e os familiarizar com a vida em laboratório.
REFERÊNCIAS
BASTOS, Gustavo. Relatório de aula prática. Instituto de Ciências Biológicas, Universidade
Federal de Minas Gerais, 2007. Disponível em: <http://www.biodados.icb.ufmg.br/
cromatina/biomol07/Biologia%20molecular/Relat%F3rio%20Miniprep%20e%20PCR.pdf>.
Acesso em: 08 de dezembro de 2019.
SANTOS, E. A. et al. INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA AMBIENTE NA ANÁLISE DO
TERMOCICLADOR. XXIV Congresso Brasileiro de Engenharia Biomédica, p. 1522–1525,
2014. Disponível em: <http://www.unilago.edu.br/revista/edicaoatual/Sumario/2016/dow
nloads/31.pdf>. Acesso em: 08 de dezembro de 2019.
