Rebecca Lisboa

Patologia Geral Ex: Lesão do paciente parecia câncer faz

biopsia do tipo incisional para o diagnostico
Aula 02
histopatológico do paciente e é encaminhado
Técnicas Histopatológicas -> Exames para para médico que irá remover a lesão como
identificar doenças um todo (peça cirúrgica). (câncer de boca)

Biópsia é o procedimento para remover o Peça cirúrgica: remoção inteira de um órgão

fragmento do tecido, e o nome da análise ou de um processo neoplásico.
desse tecido é exame histopatológico.
Quando removo um fragmento se tem uma
Nas técnicas histopatológicas estudamos um biópsia, quando removo uma lesão ou órgão
tecido que foi removido de um paciente, inteiro se tem a peça cirúrgica. As duas
animal ou até mesmo de um vegetal. Esse precisam passar por análise histopatológica
tecido vai ser preparado e o estudo desse para confirmar o diagnóstico.
tecido é o que chamados de histologia.
Ex: Digamos que se fez uma biópsia
Histo-> tecido incisional onde foi removido só um fragmento
da lesão e o patologista deu um laudo. O
Logia -> estudo
patologista (dentista) enviou o laudo e
Histologia-> é ciência que estuda as células depois o laudo histopatológico voltou
no contexto de uma estrutura tecidual. E a confirmando o diagnóstico e precisaria fazer
interrelação dessas células com constituintes a remoção da lesão como um toda. A peça
de matriz extracelular, então nem sempre cirúrgica da remoção da lesão inteira pode
quando a gente ver o tecido vai ter apenas revelar novas informações sobre o processo
uma célula as vezes aquela célula produz patológico e inclusive o diagnóstico deve
matriz extracelular como por exemplo o mudar porque quando se faz a biópsia está
tecido conjuntivo. removendo apenas uma parte da lesão
inteira.
Histopatologia-> conjuntos de procedimentos
que envolvem a preparação desses tecidos Exames de Autópsia
que foi removido através da biopsia ou
Causas da morte do paciente já que a causa
procedimentos cirúrgicos para análise
era desconhecida. Remove fragmentos do
posterior em microscópio.
tecido do cadáver para definir a causa da
Para que tenha uma lâmina precisa de um morte.
tecido, para ter uma coleta do tecido é
Quando faz uma coleta de material tem que
preciso coletar e a coleta do tecido é feito
sempre coletar poucas informações além
através de biopsia que tem dois tipos:
daquelas características do processo
 Biópsia Incisionais: remoção de patológico do qual se faz a remoção do
apenas parte do fragmento daquele tecido.
processo patológico. Faz essa biopsia
Diagnostico Patológico
apenas para lesão que não demanda
cirurgia para tratamento ou lesões que na maioria das vezes é necessário que
é suspeito de malignidade (nunca se conheça o sexo do paciente e algumas
remove por inteiro, remove parte para características como cor, idade, naturalidade
o patologista fechar diagnóstico). e hábitos. Se estuda isso na patologia porque
 Biópsia Excisional: removo a lesão alguns processos patológicos eles
como um todo acontecem mais em determinados grupos de
pacientes.
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Ex: Câncer de boca acometido mais em Tipos de fixação: químicos e físicos
pacientes com hábitos de fumar e beber.
Físicos-> temperatura frio ou calor,
Coleta
Ex: Calor -> algumas vezes o tecido pode ser
 Armazena em algum local. O ideal é preservado através da utilização de ondas
que o material sempre seja eletromagnéticas como o micro-ondas que
armazenado/condicionado em frasco gera calor isso vai fazer um tipo de
que tenha a boca mais larga que o coagulação no tecido e vai de certa forma
fundo, quando for colocar o fragmento preservar o tecido
que foi removido, não tenha
Ex: Frio -> o criostato (é utilizado para
dificuldade nenhuma em inserir o
confeccionar cortes de tecidos que foram
fragmento lá dentro sem sujar o frasco
congelados) que é muito utilizado para
e as bordas.
biópsia em centro cirúrgico. Por exemplo se
Ex: frascos maiores(baldes) -> peças tem um paciente que está com lesão que tem
cirúrgicas um acesso muito difícil (pulmão), essa
análise histológica se faz dentro do centro
Ex: frascos menores (coletor de urina) ->
cirúrgico por um patologista. Remove o
dentistas utilizam frascos menores pois os
fragmento, mas não vai ter tempo de passar
fragmentos são pequenos
por todo processamento corte, coloração,
Fixação análise microscopia. Remove o fragmento e
faz a análise em frio com criostato, a peça é
 Serve para estabilizar as biomoléculas
mergulhada em nitrogênio congelando na
através de agentes químicos ou físico
hora, coloca a peça congelada no micrótomo
Formol: agente químico porque é um líquido. para fazer o corte da peça, depois passa no
corante e já analisa no microscópio dizendo
As peças cirúrgicas ou as peças de biópsia
se é benigno ou maligno. Se for maligno, o
podem ser fixadas através do frio ou calor.
paciente ainda anestesiado a lesão é
Objetivo: parar a metabolização daquele removido completamente.
tecido. Preservar a morfologia tanto do tecido
Agentes Químicos
como das células. Evitando o apodrecimento
do tecido e evita que os microrganismos se 1. Aldeído-> formol é o mais utilizado
proliferem naquele local. pelo baixo custo benefício e fixa bem
as estruturas, causando poucas
Ex: a partir do momento que removo aquele
alterações celulares.
tecido da boca de um paciente, o tecido
2. Desnaturantes-> Etanol
começa um processo de autólise que nada
3. Combinações-> Cornoy
mais é do que apodrecer. E o objetivo é que
4. Oxidantes-> Tetróxido de ósmio
a fixação do material é fazer com que esse
5. Mecanismo-> Ácido pícrico
tecido se torne preservado por um período
muito maior de tempo do que simplesmente
se tivesse tirado e tentado levar para o
Como os fixadores químicos funcionam?
processamento.
Estabelece relações cruzadas entre as
Outro fixador é o álcool.
estruturas de uma célula. Funciona como se
Ex: No Nordeste é comum aquelas cachaças fosse uma” teia de aranha”, abraça e
com bicho dentro. O bicho não apodrece fixa/ficam estáveis.
porque tem o álcool presente na cachaça.
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Porque as ligações precisam ser quebradas é sempre que seja 10 vezes maior do que o
na Análise Imuno-histoquímica? volume daquela peça para que a fixação
ocorra de forma mais adequada. Ex: se
Análise imuno-histoquímica onde o objetivo
tivesse uma peça de 10 cm ou de 10 mm
do anticorpo encontre uma proteína
colocaria uma quantidade de 100. Porque
determinada se as ligações dessas proteínas
quando tenho menos formol ele adentra de
estão ocupadas pelo formol por exemplo, o
formas muito mais lenta ou então adentra no
anticorpo não consegue se ligar com aquela
tecido e é esgotado. O tecido absorve todo
proteína por causa do crosslink (ligações
formol que conseguiu e as reações que
cruzadas entre as proteínas, macromoléculas
deveriam acontecer (crosslink) não
e o agente fixador) então é preciso remover
conseguem acontecer em todo tecido, pois a
as ligações para que o anticorpo consiga
quantidade de formol foi muito pouca.
aderir a proteína.
-Concentração: se faz uma diluição errada
Formol
colocando muito mais água, o agente fixador
A mais utilizada é a formalina em uma não vai conseguir fixar bem as estruturas.
concentração de 10 % (formalina 10%).
-Osmolaridade: diluição de uma matéria, de
Ela é comercializada em uma concentração um agente de forma adequada para que ele
de 40%, é necessário fazer a diluição para consiga adentrar no tecido de forma
chegar na concentração de 10% que é adequada.
considerada a ideal para a formalina.
-Espessura da amostra:
Como isso é feito?
-Termo de fixação (24h-48h): por exemplo
Compra a formalina 40%, depois remove 100 quando tenho uma peça cirúrgica de um
mL do formaldeído comercial e dilui as 100 lipoma (podem ser pequeno ou grande)
mL em 900 mL em água destilada, tendo no quando for fazer a fixação dele no frasco,
final a formalina 10%. preciso fazer a secção dele, cortando em
algumas partes para que o agente fixador
Caraterística:
consiga adentrar no tecido e essa fixação
-Baixo custo, fixa bem a proteína e poucos ocorra de forma mais rápida, por isso que
pigmentos após o processamento. dependendo do tamanho do tecido o tempo
de fixação também varia
Fatores que influenciam na fixação:
Independentemente do tipo de fixador
utilizado irá ter algumas alterações

-Temperatura: quando utiliza um agente

Clivagem
fixador em um estado mais frio esse agente
fixador funciona um pouco mais rápido se  É a secção de uma peça, é a forma
utilizasse ele em uma temperatura mais como eu vou cortar a peça. É feita de
quente. acordo como se ver anatomicamente
no exame macroscópio, a olho nu.
-Volume da mistura: se tem uma peça que
mede 10 cm e o volume de formol de apenas As maiores sempre devem ser seccionadas a
10 m:L, o formol não vai conseguir penetrar cada 5mm, é importante que toda vez que se
de forma tão abundante uma vez que o faz a fixação e vai percebendo que o corte
volume das duas peças do fixador e da peça não está ocorrendo de forma limpa é
anatômica é basicamente o mesmo. O ideal necessário que troque as navalhas, o corte
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de peça usa-se navalhas que parece uma aquele tecido que antes era duro,
gilete, porém bem maior. É importante para agora se torna mole, mas sua
fazer a secção que as navalhas estejam estrutura é totalmente preservada.
novas para não esgaçar os tecidos com uma
-Pode utilizar agentes Ácidos e
navalha velha, para que quando o patologista
Quelantes: o principal que se utiliza é
for ver na lâmina o tecido perde sua
EDTA em uma proporção de 10 a 20
morfologia por causa da navalha velha (de
vezes maior que a peça.
norma inadequada).
-Troca diária de solução: Quando o
Três tipos de cortes:
agente calcificado vai ser diluído o ETDA
1. Longitudinal: quando se corta a peça vai trocando o ETDA, porque assim como
no seu maior tamanho formol que as ligações ocorrem até
2. Transversal: corta a peça pelo determinado ponto, o ETDA precisa ser
meio/metade como se fosse um corte trocado para que ele volte a ter o
axial potencial desnaturador que volte a
3. Oblíquo: corta em sentido obliquo conseguir remover os agentes minerais.

-Testa a dureza: agulha, raio X,

elasticidade

Processamento
Desidratação: remoção do líquido(álcool)

Diafanização: banho xilol que auxilia na

penetração da parafina no tecido.
Remoção do álcool após banho de xilol->
termina o processo de desidratação dos
banhos em álcool, a peça depois passa
em banhos por xilol(é uma substancia
química que é utilizada para auxiliar na
1. Corte tradicional penetração da parafina que tem uma
2. Corte Longitudinal maior afinidade com xilol do que com
3. Corte oblíquo álcool)

Infiltração em Parafina: ocorre no estado

líquido da parafina. Parafina é aquecida e
depois o tecido é inserido na parafina em
Desmineralização estado líquido. A parafina fica líquida em
temperatura de 60 C, fica na estufa até
 Processo pelo qual vai fazer todos os derreter e depois faz a inclusão do tecido
materiais removido do paciente que dentro da parafina e depois remove a
possuem calcificação. Se tem um parafina de dentro da estufa para que ela
agente calcificação e precisará fazer volte a seu estado solido. Após esse
uma análise desse tecido, irá precisar processo o tecido está preparado para ir
fazer o processo de descalcificação. O para a próxima etapa de inclusão.
objetivo da descalcificação é remover
o material calcificado e deixar apenas Inclusão
o material orgânico do tecido. Quando
remove o cálcio daquele tecido,
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 coloca o tecido dentro da parafina, o para que a parafina que ainda ficou no
espécime voltado para baixo. tecido derreta o excesso de parafina
da lâmina. Depois de 24h na estufa, a
Ex: Um fragmento de tecido, seccionou
lâmina está pronta para coloração.
com a navalha em duas partes, fiz a
desidratação coloquei as duas partes no Coloração
meio que foi seccionadas e incluídas
 Auxilia na visualização das estruturas,
viradas para baixo.
podendo utilizar diversos tipos de
 O resfriamento da parafina é feito corante, mas o mais utilizado é
quando retiro da estufa a 60 C e fica hematoxilina e eosina (H e E).
em temperatura ambiente sendo  Agentes Basófilos e acidófilos: quando
resfriada, voltando ao seu estado se fala que uma coloração tem mais
sólido. O bloco está pronto para afinidade com ácido ou básico isso
próxima fase do processamento que é está relacionado como que o tecido
a microtomia. vai corar, por isso que tem o núcleo
roxinho e a matriz de colágeno sempre
Microtomia
mais rosa.
 Bloco pronto e coloca ele no  A eosina por exemplo é a que tem a
micrótomo. coloração mais rosada e na
 Coloca o cassete no micrótomo e a hematoxilina é roxinha, isso varia de
espessura dos cortes varia entre 4 a 6 acordo com o ph do tecido, então
micrometros, essa variação de quando se fala que a coloração tem
tamanho vai variar para que eu quero afinidade com um tecido ácido ou
o corte se é pra analise imuno- básico isso está relacionado como o
histoquímica é preciso de cortes mais tecido vai corar, por isso tem o núcleo
fundos pois o objetivo é encontrar roxinho e a matriz de colágeno sempre
proteínas. Nos cortes para a análise H mais rosa.
e E precisam de cortes de 6  Técnicas histoquímica tem diversos
micrometro. Ex: criostato que é tipos de coloração. Objetivo: avaliar a
utilizado em blocos cirúrgicos. coloração que irá definir qual é o tipo
 Pescagem dos cortes: o bloco vai de material que vai ter no tecido, isso
passando e sendo cortado na navalha varia muito. Ex: PAS- peroxido ácido
dando origem a pequenos fragmentos Schiff-> ele cora para glicoproteína.
de tecido, incluindo ainda no bloco de Todas as células que são ricas em
parafina, remove os tecidos na pinça glicoproteínas o PAS vai corar nessa
da rampa que ficam pendurados na coloração meio rosa brilhante.
“tampinha” e leva no banho maria  Técnicas e imuno-histoquímica
(uma panela rasa que aquece a água
na temperatura de 40, 45 C) quando
coloco o fragmento de tecido ainda na
parafina mais uma vez ela derrete
voltando ao seu estado líquido. Pega
uma lâmina e “pesco” o fragmento de
tecido. quando pesco o fragmento ele
prende na lâmina e se fixa. No final,
coloco a lâmina em pé bloco de
madeira e levo para estuda de 60 C,