MÉTODOS DE ESTUDO
DAS CÉLULAS
µ
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TEORIA CELULAR: versão moderna
1) as células são as unidades morfológicas e fisiológicas
de todos os organismos vivos;
2) as propriedades de um dado organismo dependem
daquelas de cada uma de suas células;
3) as células originam-se somente de outras células, das
quais herdam suas características;
4) a menor unidade da vida é a célula.
DIVERSIDADE DAS CÉLULAS
VIRÚS PROCARIONTES
EUCARIONTES
PARASITAS INTRACELULARES OBRIGATÓRIOS
DNA ou RNA
Vírus animais, vírus vegetais e bacteriófagos
Parte central (informação genética), parte periférica (proteínas),
invólucro lipoprotéico
caracterizam-se pela pobreza de
membranas
possuem: -membrana plasmática Bactérias
-parede extracelular (proteção Ex.: Escherichia coli
mecânica)
-citoplasma não
compartimentalizado
(polirribossomos)
-nucleóides
-não existe citoesqueleto
caracterizam-se pela riqueza de membranas
núcleo e citoplasma bem delimitados por membranas (trânsito constante de
moléculas)
formam compartimentos internos que separam os diversos processos
metabólicos
possuem citoesqueleto
Células Animais e Vegetais
Tipos de Microscópios
Microscopia eletrônica
Microscopia de Luz Transmissão
Convencional Alta Voltagem
Contraste de Fase Varredura
Contraste Interferencial
Campo Escuro
Polarização
Fluorescência
Confocal a Laser
Outros tipos de microscópio
Tunelamento Quântico
Força Atômica
Microespectrofotometria
Diferenças de
Sem
índices de
coloração
refração
Cores de
Com coloração interferência
Com coloração Campo
fluorescente escuro
Componentes de um microscópio
Componentes ópticos:
Fonte de luz
Sistema de lentes (condensador,
objetiva, ocular)
Componentes Mecânicos:
Base ou pé
Canhão
Revólver
Platina
Parafusos macro e micrométricos
Charriot
Componentes de
um microscópio
1. Base ou pé
2. Fonte de luz
3. Parafusos de foco
4. Braço ou haste
5. Condensador
6. Platina
7. Charriot
8. Objetivas
9. Revólver
10. Canhão
11. Ocular
Os modelos microscópicos variam na forma e no desenho
PREPARO DAS AMOSTRAS...
Fixação = estabilização das estruturas celulares e intercelulares.
Fixação Química
1)-Fixadores químicos coagulantes: podem desnaturar as
proteínas em graus variáveis conforme sua estrutura molecular.
Ex: etanol.
2)-Fixadores químicos não coagulantes: são os aldeídos reativos,
como formaldeído e glutaraldeído, que formam ligações
covalentes com os grupos de aa livres de proteínas, produzindo
ligações cruzadas com as moléculas de proteínas adjacentes.
PREPARO DAS AMOSTRAS...
Processamento convencional
INCLUSÃO EM HISTORRESINA INCLUSÃO EM PARAFINA
1) Fixação 1) Fixação
2) Desidratação (álcool 70% e 95%) 2) Desidratação (álcool 70%, 80%,
3) Embebição em mistura de resina + 95% e 100%)
álcool 95% 3) Diafanização em álcool 100% +
4) Embebição em resina com xilol
catalizador 4) Passagem em xilol puro
5) Inclusão em resina 5) Dois banhos de parafina (estufa)
6) Polimerização em estufa 6) Inclusão em parafina em moldes
7) Colagem dos blocos em suporte apropriados
SEQUÊNCIA GERAL DE COLETA E PREPARAÇÃO
COLORAÇÃO DAS LÂMINAS
PERMANENTES
Existe pouco conteúdo dentro das
células que impedem a passagem da
luz, assim células fixadas e
seccionadas vistas ao microscópio
óptico são transparentes, com exceção
das células vegetais -cloroplastos!!!
Uma maneira de tornar as células
visíveis é a utilização de corantes!!!
Corantes = grupos cromofóricos
(responsáveis pela cor).
Hematoxilina e Eosina
CORANTE BÁSICO (grupamento cromofórico é CORANTE ÁCIDO (grupamento cromofórico é
catiônico +) afinidade por elementos ácidos aniônico -) afinidade por elementos básicos
dentro das células – moléculas basófilas) dentro das células – moléculas acidófilas)
TECIDO EPITELIAL CORADO POR DIFERENTES CORANTES
TÈCNICAS ESPECIAIS
Microscopia de Fluorescência
TÈCNICAS ESPECIAIS
Aplicações da Microscopia de Fluorescência
TÈCNICAS ESPECIAIS
Aplicações da Microscopia de Contraste de Fase
1. Análise do material
sem coloração prévia
2. Culturas de células
3. Exames parasitológicos
4. Esfregaços e Raspagens
de mucosas
5. Sangue
6. Protozoários de
ambientes aquáticos
EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA
MORFOLOGIA CELULAR
EFEITO DO PLANO DE PLANO DE CORTE NA
MORFOLOGIA TECIDUAL
MICROSCOPIA ELETRÔNICA
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Microscopia de Luz e Microscopia Eletrônica
Questões importantes: Ampliação e Resolução
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MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO
BACTÉRIA E VÍRUS EM MET
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
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Centro de Microscopia
Eletrônica
UNESP - Botucatu
MEV MET
FIM
