CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
OBJETIVOS
O presente experimento teve
como objetivo realizar a
caracterizao de uma
amostra de aminocidos
desconhecidos, atravs do uso
das tcnicas de cromatografia
e eletroforese;
Como objetivo secundrios, o
experimento buscou explorar a
teoria envolvida nas tcnicas
de eletroforese e
cromatografia, assim como as
propriedades de aminocidos
e protenas.
INTRODUO
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
INTRODUO
A cromatografia uma tcnica que utiliza
a diferena de interao entre a fase
mvel e a estacionria para separar os
componentes de uma mistura;
Para a cromatografia em papel, a fase
mvel costuma ser um solvente, ou uma
mistura de solventes, que devido ao
fenmeno de capilaridade se
movimentam de forma ascendente
atravs do papel, arrastando consigo as
substncias solubilizadas;
No experimento em questo, o solvente
utilizado foi uma mistura de butanol,
cido actico e gua ([Link]). A gua
adsorvida na celulose cumpre o papel de
fase estacionria, retendo com maior
afinidade aquelas molculas mais polares.
Figura 1: Monmero de celulose
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
INTRODUO
O quanto cada substncia ir ascender pela fase estacionria
determinado pelo seu fator de reteno (Rf), determinado por:
d = distncia entre o centro da mancha e o ponto de aplicao da amostra;
D = distncia percorrida pela fase mvel.
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INTRODUO
Exemplo:
RF1 = 1,4/7,7 = 0,182
RF2 = 6,0/7,7 = 0,779
RF3 = 4,1/7,7 = 0,532
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INTRODUO
A eletroforese uma tcnica
que utiliza a capacidade
migratria dos ons em um
campo eltrico para separar
uma mistura de diferentes
substncias;
Ao passar uma corrente
contnua entre dois
eletrodos, os nions se
movem em direo ao
eletrodo positivo e os
ctions se movem em direo
ao eletrodo negativo.
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INTRODUO
O experimento em questo fez uso da
eletroforese de papel em alta
voltagem;
Nesta tcnica, a amostra aplicada na
forma de uma pequena mancha sobre
uma folha de papel previamente
umedecida com a soluo tampo
adequada;
As extremidades da folha de papel so
ligadas em eletrodos, atravs dos quais
aplicada uma diferena de potencial;
Uma vez que os aminocidos presentes
na amostra possuem diferentes pontos
isoeltricos (pI), os mesmos possuem
cargas diferentes entre s, percorrendo
diferentes distncias sobre o papel.
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INTRODUO
Os fatores que influenciam a
separao das cargas so:
A fora do campo eltrico
empregado;
A viscosidade do meio;
pH do meio;
Valor da carga lquida da
molcula;
Tamanho e massa da molcula;
Conformao da protena.
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INTRODUO
Enfim, a mobilidade
eletrofortica () dada por:
v = velocidade
E = potencial eltrico
Z = carga lquida
f = coeficiente de atrito
MATERIAIS E
MTODOS
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
MATERIAIS E MTODOS
ELETROFORESE
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
MATERIAIS E MTODOS
ELETROFORESE
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
MATERIAIS E MTODOS
CROMATOGRAFIA
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
MATERIAIS E MTODOS
CROMATOGRAFIA
RESULTADOS E
DISCUSSO
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 5
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 5
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 6
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 6
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 10
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese pH 10
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Cromatografia
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Cromatografia
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
RESULTADOS E DISCUSSO
Eletroforese
Por eletroforese, tanto pH 5, 6 ou 10, observamos que a nossa amostra pode
ter todas os aminocidos testados, exceto a Glutamina por comparao a olho
nu.
Cromatografia
Por cromatografia, podemos determinar quais so os aminocidos presentes
verificando a olho nu ou comparando o Rf de cada mancha, o que mais
recomendado.
Nossa amostra tem 3 manchas com os Rfs:0,093, 0,15, 0,613.
Por comparaes, vimos que os aminocidos que podem estar presentes so a
lisina , com o Rf 0,06 , a arginina, com o Rf 0,13, a histidina com Rf 0,113 e a
leucina, com Rf 0,633.
REAO DE PRECIPITAO COM CIDO FOSFOTUNGUSTICO
REAO PARA AMINOCIDOS BSICOS
REAO DE SAKAGUCHI
REAO PARA AMINOCIDOS CONTENDO GRUPO GUANIDINO
Ovoalbumina 2%
Histidina 1%
Arginina 2%
Glicina 1%
Amostra
Lisina 1%
Ovoalbumina 2%
Glicina 1%
Histidina 1%
Lisina 1%
Tirosina 1%
gua destilada
REAO DE PAULY
Amostra
REAO PARA AMINOCIDOS CONTENDO GRUPO FENOL E IMIDAZOL
CONCLUSES
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
CONCLUSES
A presena de Leucina foi confirmada atravs da eletroforese e na
cromatografia.
Atravs das tcnicas de eletroforese e cromatografia no foi
possvel determinar com certeza todos os aminocidos presentes.
A soma dos resultados obtidos na cromatografia, eletroforese e
dos testes colorimtricos permitem afirmar que a amostra
analisada composta por Leucina, Lisina e Arginina.
CROMATOGRAFIA E ELETROFORESE
BIBLIOGRAFIA
DANTAS, .A. Eletroforese. Disponvel em <[Link]
AdrianaDantas2/eletroforese?from_action=save> Acesso em 07/09/2017.
LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princpios de Bioqumica. 6.
ed. So Paulo: Sarvier, 2000. 839p
OZKAN, O; CIFTCI, G. Individual variation in the protein profile of the
venom of Mesobuthus gibbosus (Brull, 1832, Scorpiones: Buthidae) from
Turkey. J. Venom. Anim. Toxins incl. Trop. Dis, Botucatu , v. 16,n. 3,p.
505-508, 2010 . Available from <[Link]
script=sci_arttext&pid=S1678-91992010000300017&lng=en&nrm=iso>.
access on 08 Sept. 2017. [Link]
S1678-91992010000300017.
