Papers by Radovan Borojevic
Zoosystema, 2000
A revision of all the genera of the subclass Calcaronea (Porifera, Calcarea) is given. In additio... more A revision of all the genera of the subclass Calcaronea (Porifera, Calcarea) is given. In addition to the two previously described orders, Leucosoleniida Hartman, 1958 emend. and Lithonida Vacelet, 1981, we recognize a third one: the Baeriida. The order Leucosoleniida includes nine families, one of which is new (the Jenkinidae), and 42 genera of which four are new (Breitfussia, Leucandrilla, Polejaevia and Syconessa). The order Lithonida includes two families and six genera. The order Baeriida includes three families of which two are new (the Baeriidae and the Trichogypsiidae), and eight genera. The Leucosoleniida seem to have evolved from the olynthus grade, a form that is probably present in the early stages of ontogenesis of all Leucosoleniida and subsists at the adult stage in Leucosolenia. The Leucosoleniida comprises a diverse group with several pathways of progressing complexity of form, starting with sponges of a simple sycettid organization and leading to sponges with a complex aquiferous system and skeleton. Increase in size from the sycettid grade of organization may occur by two different processes: 1) the growth and elongation of radial tubes increasing the thickness of the sponge body (seen in the Sycettidae-Grantiidae line and the Heteropiidae), or 2) the growth of the central tube containing the
Bulletin du Muséum national d'histoire naturelle. Section A, Zoologie, biologie et écologie animales, 1990
A revision of the supraspecific classification of the subclass Calcinea (Porifera, class Calcarea)
Bulletin du Muséum national d'histoire naturelle. Section A, Zoologie, biologie et écologie animales, 1986
Une nouvelle voie d'évolution chez les éponges Calcinea : description des genres Burtonulla n. g.... more Une nouvelle voie d'évolution chez les éponges Calcinea : description des genres Burtonulla n. g. et Levinella n. g. par Radovan Borojevic et Nicole Boury-Esnault Résumé. -Le N. O. « Thalassa » a récolté sur les marges continentales du golfe de Gascogne une nouvelle éponge calcaire : Levinella thalassae n. g., n. sp. Dendya proliféra Dendy, 1913, est transférée dans ce nouveau genre Levinella. Dendya proliféra décrite par Burton (1930) dans les col¬ lections de la Siboga est redécrite comme Burtonulla sibogae n. g., n. sp. Les deux nouveaux genres Levinella et Burtonulla sont réunis pour former la famille nouvelle des Levinellidae. Cette famille constitue une nouvelle voie d'évolution des Calcinea.
Cells, Apr 30, 2022
The murine cell line GRX has been introduced as an experimental tool to study aspects of hepatic ... more The murine cell line GRX has been introduced as an experimental tool to study aspects of hepatic stellate cell biology. It was established from livers of C3H/HeN mice that were infected with cercariae of Schistosoma mansoni. Although these cells display a myofibroblast phenotype, they can accumulate intracellular lipids and acquire a fat-storing lipocyte phenotype when treated with retinol, insulin, and indomethacin. We have performed genetic characterization of GRX and established a multi-loci short tandem repeat (STR) signature for this cell line that includes 18 mouse STR markers. Karyotyping further revealed that this cell line has a complex genotype with various chromosomal aberrations. Transmission electron microscopy revealed that GRX cells produce large quantities of viral particles belonging to the gammaretroviral genus of the Retroviridae family as assessed by next generation mRNA sequencing and Western blot analysis. Rolling-circle-enhanced-enzyme-activity detection (REEAD) revealed the absence of retroviral integrase activity in cell culture supernatants, most likely as a result of tetherin-mediated trapping of viral particles at the cell surface. Furthermore, staining against schistosome gut-associated circulating anodic antigens and cercarial O-and GSLglycans showed that the cell line lacks S. mansoni-specific glycostructures. Our findings will now help to fulfill the recommendations for cellular authentications required by many granting agencies and scientific journals when working with GRX cells. Moreover, the definition of a characteristic STR profile will increase the value of GRX cells in research and provides an important benchmark to identify intra-laboratory cell line heterogeneity, discriminate between different mouse cell lines, and to avoid misinterpretation of experimental findings by usage of misidentified or cross-contaminated cells.
A fibrose hepática resulta de injúrias progressivas e inflamação do tecido hepático. As células e... more A fibrose hepática resulta de injúrias progressivas e inflamação do tecido hepático. As células estreladas hepáticas (HSC) são ativadas, proliferam e se transdiferenciam mudando o fenótipo, tornando-se miofibroblastos ativados, perdendo a vitamina A e aumentando a secreção de matriz extracelular. Os tratamentos para fibrose tem utilizado esta célula como alvo de estudo. Existem evidências que a ativação da HSC está associada com a redução da expressão do receptor nuclear, PPAR-γ. Ligantes desse receptor nuclear induzem a expressão de CD36, translocases de ácidos graxos, aumentando a captação destes do meio extracelular, promovendo o armazenamento de lipídeos, característico da HSC quiescente. Estes resultados associam aos ligantes do PPAR-γ um valor terapêutico em potencial. Anteriormente foi observado em nossas pesquisas que a linhagem celular GRX, representativa das HSC, sofre transformação fenotípica, de miofibroblasto (ativado) para lipócito (quiescente) após tratamento com retinol/ pentoxifilina, insulina/indometacina. O objetivo de nosso trabalho é identificar a participação de PPAR-γ e indução na expressão de CD36, após tratamento da linhagem GRX, com os indutores lipocíticos citados. Para tanto utilizamos a técnica de RT-PCR para medir o mRNA de PPAR-γ e CD36. O RNA total das células GRX expressando o fenótipo lipocítico e miofibroblástico foi isolado com reagente TRIzol. O cDNA foi sintetizado apartir de 1µg de RNA total, incubando-se com 200 U de Transcriptase reversa (MMLV). Para a amplificação utilizou-se 2 µM dos respectivos "primers" para PPAR-γ, CD36, β-actina e 0,5 U de Taq DNA polimerase. Os produtos do PCR foram analisados em gel de agarose contendo 0,5 µg/mL de brometo de etídio. Os resultados revelaram que as 221 células tratadas com os indutores lipocíticos apresentaram um aumento na expressão de PPAR-γ e consequentemente CD36. Sugerimos que os indutores lipocíticos desta linhagem são ligantes de PPAR-γ.
A hematopoiese representa uma cascata de eventos de proliferação e diferenciação celular em que s... more A hematopoiese representa uma cascata de eventos de proliferação e diferenciação celular em que se originam todas as células sangüíneas. Em adultos normais, a hematopoiese ocorre na medula óssea e é regulada por citocinas e por uma associação física entre os precursores hematopoiéticos e o estroma. Os gangliosídios são glicoesfingolipídios que contêm pelo menos um resíduo de ácido siálico na sua estrutura e têm sido relacionados ao crescimento e diferenciação de células hematopoiéticas. O objetivo geral deste trabalho foi avaliar a contribuição dos gangliosídios, especialmente do GM3, como fatores solúveis na capacidade mielossuportiva de diferentes estromas. Para tal, os sistemas de cultivo foram enriquecidos com GM3 e/ou GM-CSF. Uma outra abordagem foi a estimulação nos estromas da expressão gênica da enzima GM3 sintase com PMA (forbol 12-miristato, 13-acetato) a fim de avaliar as possíveis modulações que poderiam ocorrer a partir da estimulação da rota de biossíntese dos gangliosídios. Nessa série de experimentos comprovou-se que o GM3 é necessário para a ótima ação do GM-CSF nos diferentes modelos testados. Além disso, o aumento da incorporação de [ 14 C]-galactose em gangliosídios induzida pelo tratamento com PMA, mostrado anteriormente, é devido à estimulação da transcrição da enzima GM3 sintase. A partir desses resultados será testado se a modulação da enzima GM3 sintase e a conseqüente alteração do perfil e conteúdo de gangliosídios podem interferir na capacidade mielossuportiva dos estromas. (PIBIC).
As células estreladas perisinusoidais (HSC) e os miofibroblastos hepáticos (HSCa) são considerado... more As células estreladas perisinusoidais (HSC) e os miofibroblastos hepáticos (HSCa) são considerados pertencentes a mesma linhagem celular. Esta célula pode oscilar entre os fenótipos de "repouso" e "ativado" que estão diretamente envolvidos na homeostasia do tecido conjuntivo hepático. A linhagem celular GRX é representativa do tecido conjuntivo hepático, tem características de miofibroblasto e é fenotípicamente semelhante as HSCa presentes na fibrose hepática. Miofibroblastos têm características intermediárias entre fibroblastos e células de músculo liso, expressando desmina e actina. Recentemente foi demonstrada a presença de desmina, actina e GFAP em HSCa. O propósito deste estudo foi investigar por técnicas de imunocitoquímica a expressão de desmina, vimentina, actina e GFAP em células GRX miofibroblásticas (M-GRX). Culturas de M-GRX semi-confluentes foram fixadas e a detecção imunocitoquímica realizada segundo protocolo para revelação por diaminobenzidina. Foram utilizados anticorpos monoclonais anti-desmina, vimentina e actina (1:10) e policlonal anti-GFAP (1:200). Os resultados encontrados mostraram que as M-GRX co-expressam de forma similar as quatro proteínas. Como a linhagem GRX também pode ser induzida a expressar o fenótipo lipocítico por tratamento com retinol, mimetizando a transformação fenotípica das HSC no fígado normal e fibrótico, estamos iniciando a análise da expressão dessas proteínas no fenótipo lipocítico da GRX (L-GRX). (FAPERGS, CNPq).
2512º Congresso de Pesquisa e Desenvolvimento em Saúde do Mercosul ... REVISTA DO HOSPITAL DE CLÍ... more 2512º Congresso de Pesquisa e Desenvolvimento em Saúde do Mercosul ... REVISTA DO HOSPITAL DE CLÍNICAS DE PORTO ALEGRE E FACULDADE DE MEDICINA DA UNIVERSIDADE DO RIO GRANDE DO SUL ... REVISTA HCPA - Volume 25 (Supl 1) - Setembro 2005 ...
A linhagem celular GRX é representativa do tecido conjuntivo hepático. A transformação fenotípica... more A linhagem celular GRX é representativa do tecido conjuntivo hepático. A transformação fenotípica destas células (miofibroblasto para lipócito), induzida por insulina-indometacina ou retinol, é importante para a manutenção da homeostase hepática. A diferenciação desta linhagem é caracterizada pela síntese e acúmulo de éter-lipídeos, que ocorre nos peroxissomas. Assim procuramos observar a ação do clofibrato (CLF), proliferador peroxissomal, sobre a síntese destes compostos. As células tratadas por 5d com insulina-indometacina foram incubadas com 0,1µCi de [ 14 C]-acetato num período de 8, 24 e 30h com DMEM contendo: somente SFB (5%), CLF (200µM) e DMSO (0,036%). Os lipídeos foram analisados por TLC e a radioatividade contada por cintilação líquida. A síntese de ácidos graxos e monoalquildiglicerídeos foi estimulada em 226% e 35% após 24h de tratamento com DMSO, enquanto que em diglicerídeos a síntese foi afetada em todos os tempos de incubação (8, 24 e 30h), sofrendo um aumento de 232%, 137% e 163% respectivamente. Verificou-se que as células tratadas com CLF, após 24h tiveram um aumento de 71% em triglicerídeos, 41% em monoalquildiglicerídeos e 57% em ácido graxo, sendo que em diglicerídeos houve um aumento de 124% somente após 30h de tratamento. Em relação à síntese de colesterol e éster de colesterol o CLF e o DMSO não exerceram efeito. Constatou-se que o DMSO aumentou a síntese de fosfolipídeos em qualquer um dos tempos analisados. O DMSO, em nosso modelo celular, exerce uma ação própria na síntese de lipídeos neutros e fosfolipídeos em função do tempo de tratamento. Este resultado é importante para a pesquisa em geral, pois inúmeras drogas são solubilizadas em DMSO e utilizadas desta forma nos experimentos in vivo. (FINEP, CNPq, FAPERGS).
A ecto-5'-nucleotidase (CD73) é uma enzima de superfície celular ancorada a glicofosfatidilinosit... more A ecto-5'-nucleotidase (CD73) é uma enzima de superfície celular ancorada a glicofosfatidilinositol (GPI) que possui sítio catalítico voltado para o meio extracelular. Uma de suas principais funções é a geração de adenosina com conseqüente ativação dos receptores P1. Além disto, apresenta funções independentes da atividade enzimática, atuando como uma molécula de adesão. A fibrose hepática é desencadeada por uma resposta celular integrada e dinâmica à injúria crônica no fígado. A ativação de células estreladas hepáticas (HSCs) está diretamente relacionada ao processo fibrogênico. Como modelo in vitro dessas células, têm-se a linhagem celular GRX. Estas células têm uma morfologia miofibroblástica característica das HSCs em estado ativado. Estudos mostraram que a CD73 e a adenosina tem papel importante na fibrose hepática em modelos murinos. Baseado nesse fato, o objetivo deste trabalho foi analisar o papel fisiológico da CD73 nas células GRX, através do seu silenciamento por RNA de interferência (RNAi). Para isto, após a redução da expressão da CD73, analisou-se a hidrólise extracelular de AMP pela quantificação da liberação de fosfato inorgânico, a proliferação celular através da contagem de células, a adesão celular pelo método do cristal violeta, a migração celular pelo ensaio de dano e cicatrização da monocamada celular e a quantificação dos mRNAs por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o silenciamento da CD73 leva a um aumento da expressão do mRNA da fosfatase alcalina tecido inespecífica (TNALP), outra ecto-enzima responsável por degradar AMP. O knockdown da CD73 também ocasiona alterações na adesão e migração celular, mas não altera a atividade de degradação extracelular de AMP nem a proliferação celular. Sugere-se, então, que a expressão da CD73 pode controlar a migração por afetar a adesão celular ao substrato através de um mecanismo independente do metabolismo de nucleotídios. (Fapergs).
As células da linhagem GRX são representativas do tecido conjuntivo hepático, caracterizando-se p... more As células da linhagem GRX são representativas do tecido conjuntivo hepático, caracterizando-se por sua capacidade de sofrer uma transformação fenotípica, passando de miofibroblasto a lipócito. Os glicoesfingolipídios (GSLs) são encontrados nas membranas de células eucarióticas e estão envolvidos nos processos de diferenciação, crescimento, reconhecimento e adesão celular. Este trabalho descreve a expressão e liberação (shedding) de GSLs pelas células GRX através da incorporação de [ 14 C]galactose. As células foram raspadas, os lipídios extraídos com clorofórmio:metanol e analisados por CCD. O meio de cultura foi centrifugado, o sobrenadante foi dialisado, liofilizado e do resíduo foram extraídos os lipídios. As atividades de duas enzimas chaves da biossíntese dos gangliosídios foram deteminadas. Os dois fenótipos das células GRX expressaram e liberaram os gangliosídos em forma de dublets: GM3, GM2, GM1 e GD1a. A relação de incorporação radioativa entre as bandas de maior e menor migração de cada gangliosídio foi maior no fenótipo lipocítico. A atividade da GM2 sintase (série "a") foi superior a da GD3 sintase (série "b"), correspondendo ao perfil predominante da via "a". Portanto, os dois fenótipos expressaram os mesmos GSLs, mas com ceramidas diferentes. Resultado semelhante ocorreu com os GSLs liberados. Estes fatos corroboram com as diferentes propriedades que as membranas dos dois fenótipos possuem e com as suas distintas interações com o meio.
Vigilância Sanitária em Debate, Feb 28, 2018
Para uma regulamentação específica e implementação das novas tecnologias avançadas na clínica méd... more Para uma regulamentação específica e implementação das novas tecnologias avançadas na clínica médica, é preciso refinar o conhecimento sobre as células utilizadas. Um dos maiores desafios está na dificuldade em determinar os mecanismos de funcionamento das células após a terapia. Objetivo: Compreender, usando os métodos de rastreamento celular em pacientes, a distribuição e a função de células usadas em terapias avançadas. Método: Este trabalho foi elaborado pelo levantamento de artigos científicos nas bases de dados internacionais e da legislação vigente sobre a utilização clínica das nanopartículas. Resultados: Constatamos que a nanotecnologia já é uma ferramenta de grande utilidade, pois diversas nanopartículas magnéticas já são aprovadas para uso clínico; elas podem ser incorporadas por células e visualizadas por imagens de ressonância magnética. O presente texto discute as perspectivas sobre uso de nanomedicamentos para rastreamento celular na clínica médica. Conclusões: A utilização das nanopartículas necessita a elaboração e aprovação de leis, guias e normas que orientem a indústria, como outros setores, sobre a caracterização dos nanomateriais e potenciais riscos à saúde humana, animal e ao meio ambiente.
Bioquímica, ICBS, UFRGS). A hematopoiese, o processo de produção células sangüíneas, é modulada p... more Bioquímica, ICBS, UFRGS). A hematopoiese, o processo de produção células sangüíneas, é modulada por hemopoietinas e desenvolve-se em microambientes estabelecidos entre estromas e progenitores hematopoiéticos. Supõe-se que a interação entre os fatores de crescimento e os receptores seja controlada por complexos macromoleculares, constituindo frações de membrana insoluvéis a detergente e ricas em glicoesfingolipídios (GEM). O objetivo deste estudo foi determinar o perfil de glicoesfingolipídios (GSLs) das linhagens FDCP-1, derivada de células precursoras mielóides, e AFT-024, representativa de estroma de fígado fetal murino-o qual suporta a hematopoiese, bem como a distribuição destes GSLs entre as frações de membrana solúvel (FS) e insolúvel (FI) a detergente. Para isso, as células foram cultivadas em condições adequadas e incubadas com 0, 5 (Ci/mL de [14C]-galactose por 12h. Para a determinação do perfil de GSLs os lipídios foram extraídos com C:M, purificados em coluna Sep Pack C18, submetidos a CCD, visualizados por fluorografia e quantificados por desnsitometria. Para analisar a distribuição dos GSLs nas frações FS e FI , as células foram coletadas e tratadas com Triton X-100 1% por 1h a 4ºC e centrifugadas 1h a 100000xg. Os lipídios 167 presentes no sobrenadante (FS) e no pellet (FI) foram extraídos por partição de Folch, purificados em colunas DEAE Sephadex A50 e Sep Pack C18 e analisados como descrito acima. As células FDCP-1 apresentam principalmente os gangliosídios GM1 e GD1a, proporções menores de GD1b, GD3, GM2, e apenas traços de GM3, sendo que todos os gangliosídios se distribuem entre as frações solúvel e insolúvel. As células AFT-024 apresentam grandes proporções de GM3 e GD1a, e quantidades menores de GM1, GM2 e CTH. Da mesma forma, os gangliosídios se distribuem entre FS e FI, mas proporções maiores de GM3 e GD1a são encontradas na fração insolúvel a detergente.
Os esfingolipídios são encontrados em todas as membranas de células eucarióticas. Tem sido descri... more Os esfingolipídios são encontrados em todas as membranas de células eucarióticas. Tem sido descrita a sua participação nos processos de regulação do crescimento, da diferenciação e da transformação celular, e nos mecanismos de contato célula-célula. As células da linhagem GRX são representativas do tecido conjuntivo hepático, caracterizando-se por sua capacidade de sofrer uma transformação fenotípica, passando de miofibroblasto (M-GRX), produtor de matriz extracelular e predominante nas lesões do tecido hepático, a lipócito (L-GRX), armazenador de vitamina A. O fenótipo lipocítico foi obtido pelo tratamento por 5 dias com 5 M de retinol. A análise dos esfingolipídios foi realizada em culturas de L-GRX e de M-GRX incubadas por 24h com [ 14 C] serina ou [ 14 C] galactose. Os lipídios foram extraídos com clorofórmio/metanol. O extrato lipídico foi submetido a metanólise, dessalificação por cromatografia de fase reversa e análise por CCD. Os lipídios radioativos foram detectados por autorradiografia e quantificados por densitometria. Através da marcação com serina podemos analisar a síntese "de novo" da base esfingóide. No fenótipo de miofibroblasto existe um direcionamento desta base para a rota de síntese de glicoesfingolipídios e no lipocítico uma maior síntese de esfingomielina. A porção oligossacarídica foi analisada através da marcação com galactose. A incorporação deste precursor no miofibrobalsto é cerca de 50% maior do que no lipócito. A distribuição da radioatividade foi igual nos dois fenótipos mostrando a presença de GM 3 , GM 2 , GM 1 , GD 3 e GD 1a. Estes resultados mostram que ocorre uma predominância de gangliosídios pertencentes à série A (GM 2 , GM 1 , GD 1a) em relação aos da série B (GD 3) nos dois fenótipos. Além disto, sugerem um possível papel dos esfingolipídios no processo de diferenciação fenotípica na linhagem GRX.
As células da linhagem GRX são representativas do tecido conjuntivo hepático, caracterizando-se p... more As células da linhagem GRX são representativas do tecido conjuntivo hepático, caracterizando-se por sua capacidade de sofrer uma transformação fenotípica, passando de miofibroblasto (M-GRX), produtor de matriz extracelular e predominante nas lesões do tecido hepático, a lipócito (L-GRX), armazenador de vitamina A. O fenótipo lipocítico foi obtido pelo
Uploads
Papers by Radovan Borojevic
Effects of centrifugation on cell composition and viability of aspirated adipose tissue processed for transplantation.
Condé-Green A, Borojevic R, Pitanguy I, et al.
Department of Plastic Surgery, Pontifical Catholic University of Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil. [email protected]
Abstract
BACKGROUND: Centrifugation is one of the preferred methods of fat processing. Although it has been promoted for nearly three decades to separate adipose tissue components before grafting, there remain many controversies regarding the results obtained with centrifuged adipose tissue.
OBJECTIVES: The authors demonstrate the effects of centrifugation on the cellular components of aspirated fat.
METHODS: Fat harvested from the lower abdomen of 10 female patients undergoing liposuction was divided in two equal parts, then processed by decantation or centrifugation and sent to the laboratory. Each processed lipoaspirate was analyzed histologically after hematoxylin and periodic acid-Schiff staining for the presence of intact adipocytes. It was then cultured and analyzed by multicolor flow cytometry for identification of adipose-derived mesenchymal stem cells.
RESULTS: The middle layer of the centrifuged lipoaspirate, which is used by many surgeons, showed a great majority of altered adipocytes and very few mesenchymal stem cells in comparison with the decanted sample, which maintained the integrity of the adipocytes and showed a greater number of mesenchymal stem cells. The pellet observed as a fourth layer at the bottom of the centrifuged lipoaspirate showed the greatest concentration of endothelial cells and mesenchymal stem cells, which play a crucial role in the angiogenic and adipogenic effect of the grafted tissue.
CONCLUSIONS: If centrifuged lipoaspirate is used, the pellet (rich in adipose-derived mesenchymal stem cells) and the middle layer should be employed to increase fat graft survival.
PMID: 20442104 [PubMed - indexed for MEDLINE]