Université des sciences et de la technologie Houari-

Boumédiène

Coproparasitol
ogie
Présenté par :
BENCHALAL Amani
SAIDI Asmaa
OUDINI Ibtissam Proposé et encadré par :
ACHOURI Amina Mme manaa
SELLOU Ikram
BOURAS Abd el hak
Année universitaire :2023/2024
 Plans:
01 02 03
les techniques
Intéret de la Déroulement de particuliéres en
coprologie la coprologie coprologie
parasitaire parasitaire parasitaire

04 05 06
les techniques de Technique
cultures en moléculaire en
coprologie coprologie
CONCLUSIO
parasitaire parasitaure NES
 Intéret de
0 la
1 coprologie
parasitaire
“La coprologie parasitaire est une analyse des
selles visant à détecter la présence de parasites
dans le système digestif. Les principaux intérêts
de cette analyse sont les suivants :
1. Diagnostic des infections parasitaires
2. Suivi du traitement
3. Prévention de la transmission
4. Recherche épidémiologique ”.
Déroulement
de la
coprologie
parasitaire:
2_2 Examen microscopique:qui est simple et facile à réaliser,
nécessitant souvent des méthodes de concentration et de coloration afin de
mettre en évidence les éléments parasitaires pour la diagnose des différentes
espèces de parasites susceptible d’infecter l’homme, et reconnaitre . ainsi les
éléments non pathogènes et les faux parasites.

2_2_3 Aprés concentration :

Méthode de Willis:

● Principe:Les méthodes de flottation reposent sur le principe que

la densité du liquide et superieur a celle des parasites ces derniers
plus légers flottent a la surface .
étape 01:
Les selles sont diluées au dixième environ
dans une solution aqueuse de chlorure de
sodium à saturation (25 grammes dans 100
ml environ; densité 1 200), puis filtrées
rapidement.
étape 02:
La suspension obtenue est versée dans un
tube jusqu'à la limite supérieure (léger
bombement du liquide au-dessus du bord).
On place alors délicatement une lamelle qui
doit recouvrir tout le tube sans bulle d'air.
 étape 03:
Un quart d'heure plus tard on retire la lamelle
qui est déposée sur une lame et la lecture de
la concentration est effectuée avant
évaporation de l'eau et cristallisation du sel ce
qui, en pays chaud, peut se produire
rapidement.

interet :dans les enquetes

épidmiologique
Hymenolepis nana Ankylostoma duodenale
 les avantages et les
inconvénients:
la simplicité d'exécution
les la rapidité
avantages
faible prix de revient (eau chlorur sodique)

Elle concentre bien les œufs d'ankylostomidés et

d'hyménolépidés

les inconvénient :La solution de chlorure de sodium pénètre assez

facilement dans les œufs et il ne faut pas dépasser le temps prescrit.
 technique
de Faust et
Ingalls
Objectif de la présentation : "Cette
présentation a pour objectif de
mettre en lumière la technique de
Faust et Ingalls, une méthode de
détection des parasites intestinaux,
en expliquant ses principes et son
importance dans le domaine
médical et de la recherche
parasitologique".
Préparation de la Solution de Glycérine à
0,5% :

- Mélange de glycérine et d'eau distillée dans

un rapport spécifique (généralement 1:1).

- Création d'une solution hypertonique pour

conserver les parasites dans les échantillons
de selles.
Étapes de la Méthode de Faust et Ingalls :
 Avantages de la Technique de Faust et Ingalls:

‘’Coût Abordable’’ ‘’Détection “Pratique en Routine”

Polyvalente’’

“Pas de Besoin de “Résultats Rapidesr” “Historique Éprouvé”

Compétences
Avancées”
incovenients la Technique de Faust et
Ingalls:

Possibilité de
Sensibilité limitée confusion entre
Nécessite une
pour les parasites à certains
expertise avancée
faible charge parasites
Comparaison des Techniques en Coprologie

Technique Avantages Inconvénients

Faust et Ingalls - Coût abordable - Sensibilité limitée pour

les parasites à faible
charge

PCR - Très haute sensibilité - Coût élevé

Willis - Spécifique pour certains - Ne convient que pour les

parasites parasites ciblés
Comparaison Justifiant le Choix de la Technique

Technique Raisons de Choix

Faust et Ingalls - Coût abordable : Convient à notre

budget.
- Détection polyvalente : Couvre un large
spectre de parasites intestinaux.
- Pratique en routine : Facile à utiliser
pour nos besoins de diagnostic
réguliers.|
 Exemple d’utilisation dans le domaine clinique :

Un patient qui a récemment voyagé dans une région où

la schistosomiase est endémique, comme l'Afrique
subsaharienne, se présente à un centre de santé avec
des symptômes tels que de la fièvre, une fatigue
persistante et des douleurs abdominales. Le médecin
suspecte une infection parasitaire et ordonne un examen
des selles du patient. L'examen révèle la présence
d'œufs de Schistosoma mansoni, confirmant ainsi le
diagnostic de la schistosomiase.

Application en Recherche Épidémiologique:

-Suivi des taux d'infection parasitaire dans les populations
- Évaluation de l'efficacité des programmes de lutte contre les parasites.
- Un outil précieux pour la recherche épidémiologique.
 les techniques particulière en coprologie parasitaire:

1/ technique de scotch test

(ruban adhésif transparent 2/ technique de kato-katz
Graham)

3/ technique de baermann
technique de scotch test (ruban avantage inconvénient
adhésif transparent Graham)

● Technique de choix pour mettre ● Technique de prélèvement ● Il est difficile au technicien de

en évidence les oeufs d’oxyures direct très simple laboratoire d’effectuer lui
collés sur les plis de la marge
même le prélèvement au
anale
● Permet de mettre en évidence moment propice(nuit ou petit
● Au réveil avant défécation les oeufs d'oxyures et les matin)
oeufs des taenia saginata
● Décoller le scotch de son ● Cette méthode peuvent être
support infectieuse
● bien déplisser la marge anale,

● Appliquer le coté adhésif sur plis

de la marge anale

● Retirer le scotch,et réappliquer

le coté adhésif sur la lame.sans
faire de bulles d’air
● Renouveler l'opération avec le
second scotch

● Examen microscopique de la
lame

Les oeufs d’Enterobius vermicularis oeufs Taenia saginata

technique de kato-katz avantages inconvénient

● -Utilisation d'une cellophane ● Bons résultats pour les oeufs ● Selles moulées seulement
trempée 24h dans du liquide d’ascaris et de
de Kato (glycérine, eau trichocéphales ● Forme des œufs + /-changée
distillée, solution de vert
Malachite à 3%) ● Simple et efficace et facile ● Mauvais rendement pour les
larves
● -Déposer environ 50 m de
selle sur une lame porte-objet.
• Recouvrir de cellophane

● -Retourner et écraser la
préparation pour l'étaler

● -Laisser sécher pendant 1h

ou chauffer sous une
lampe pendant 10-15 min
pour examiner au microscope.

les oeufs d’ascaris

technique de baermann Avantages Inconvénient

● Basée sur l'hydrotropisme et ● Facile et peu coûteuse. ● Recherche de larve seulement

le thermotropisme des larves
● Bon enrichissement. ● Selle impérativement fraîche
Technique : pour que les larves soient
● Mettre des selles sur de la ● Rechercher les larves vivantes
gaze disposée sur une rhabditoides d'anguillule
passoire ● Analyse quantitative n'est pas
possible
● Poser la passoire dans un
entonnoir (fermé) contenant ● Réalisation longue (6-8h)
de l'eau tiède ou de SSI à
25°C. Laisser reposer 6-8H

● Récupérer le liquide

● Centrifuger

● Réaliser un examen
microscopique sur le culot de
centrifugation
Les larves rhabditoides d'anguillule
 Techniques de culture en coprologie parasitaire :
- Méthode de diagnostic utilisée pour identifier les parasites
responsables des strongles digestifs
-consiste à :
prélever un échantillon de selles

Le placer dans un milieu adapté

-pour :
Obtention des formes identifiables
●1 _ En protozoologie :

Le but :
●-Mettre en evidence des protozoaires rares ou difficiles à détecter lores de l’examen
direct des selles tels que les amibes ou flagellés

le principe :
●-cultiver les parasites protozoaires présents dans les échantillons de selles
humaines ou animales afin de :

Les isolé

Les étudier

Les
identifir
 type de culture:

culture polyxéniques : -culture axéniques:

flore microbienne bactériologiquement pure
indéfinie

-culture monoxéniques:
une seule espèce bien
définie de
microorganismes
Milieux utilisés :
Composition des milieux de culture : .

Support coagulé :Sérum

Elément figuré : Amidon
de cheval ou oeuf de riz , hématies …

Solution saline :
Ringer , eau physiologique , eau peptonée
+ : sérum de cheval ou albumine d’œuf ….
● Milieu Dobell et Laidlaw :

Support coagulé : Sérum Elément figuré : Amidon

de cheval de riz

-Sérum de cheval :
source de nutriments
Solution saline : -Solution de Ringer :
solution isotonique qui
Ringer enrichi en sérum de restaure les équilibres entre
cheval. mileux
-Amidon de riz : favorise la
croissance

Avant utilisation , les 5 ml de la solution de Ringer sont versés Principe : culture se fait à partir de
stérilement dans le tube de sérum coagulé est rechauffé à 37°C Kystes amibiens , en présence d'une
avant l’ensemencement flore bactérienne ( culture polyxéniques )
●Ensemencement :
●
on prélève environ 0.5 g

selles fermes ou pateuses : ance de platine stérile

selles liquides ou mucosités : pipette pasteur stérile

fond du tube

a l’étuve à 37°C
Lecteures :
●les tubes sont examinés tous les joures pendant 3 jours les prélevements sont éffectuées :
●pour les flagellés dans le liquide
●pour les amibes a la surface du sérum coaguléen la raclent légerment

● dans tous les cas la zone la plus riche en protozoaires est celle située immédiatement au-dessus du
sédiment d’amidon de riz
● -la ou les gouttes diposées sur une lame sont traité comme un examen direct avec posibilités de coloration
vitale ou après fixation
● Important : Dans le cas des coccidies :

● Lorsque’on observe des oocyctes de coccidie dans les selles , pour affirmer le diagnostic
de genre et d’espèce il est nécessaire de Faire une coproculture pour provoquer leurs
maturation
●réhydratées légerement Les selles par addition de l’eau distilée + une solution
d’acides chromique à 0.5% pour éviter les fermentations

à températeure du laboratoire

Lecture tous les joures

-D’autres milieux en coprologie parasitaire :

 Milieu LMS : liquide , polyxéniqu
 Milieu Diamond : milieux axénique : « bactériologiquement pure «
 culture des selles en Helminthologie

Interet :
- Diagnostic de l’Anguillulose
- Diagnostic différentiel entre les larves d’Anguillule et Ankylostomes

Ancylostoma duodenale Strongyloides stercoralis

 Methodes de
culture

- Méthode de culture sur gélose

-Méthode de culture sur charbon végétal

-Méthode de Ho-Thi-Sang
+++ précautions
Risque de contamination par les
-Méthode de Harada et Mori larves Strongyloides infectantes
(voie transcutané)
 Méthode de Culture sur gélose

Rajout de 2 g de selles au centre d’une gélose coulée dans une boîte de

pétri et incuber à 25°C

• Avantages :
- Test de choix pour les patients immunodéprimés.
- facile à manipuler.

• Inconvénients :
- plus de temps.
- On ne peut pas l’utiliser avec toutes les catégories de patients
 Méthode de culture sur charbon végétal (Brumpt)

matériel utilisé : Charbon de bois grossiérement réduit en poudre

- la technique consiste a brasser 20 grammes de selles mélangés avec la poudre

de charbon de bois et de l’eau afin d’obtenir une pâte molle bien homogène
-La pate sera disposée au centre de la boîte de Pétri a 25 C° sans toucher les
bords et recouvrir avec le couvercle

Avantages
Inconvénient:
▪ Peu couteux
▪ la sensibilité de la technique est • délai d’obtention des résultats est long
garantie par le charbon ( évite la
fermentation des selles )
La coproculture retrouve: 48 H 2-4 J 7eme J

Ankylostomes Larves rhabditoïdes Larves strongyloides Larves strongyloides

enkystées infestantes

Anguillule Larves strongyloides larves strongyloides larves strongyloides

d’anguillules issues + infestantes
de transformation des Les adultes mâles et d’anguillules nées des
larves rhabditoïdes femelles adultes libres
 Méthode de HARADA MORI :

Méthode qui consiste a détecter des larves de

vers dans les matières fécales en les cultivant sur
du papier filtre.
Incubation: 25 C°

Le but :
-diagnostiquer l'infection par Strongyloides
stercoralis, en favorisant sa croissance
-identifier des larves à partir des échantillons de
selles.

• Inconvénient: quantité de selle testé est

insuffisante

• Avantage: larves propres

 Culture sur buvard en tube à essai
Matériel utilisé
- tubesà essai à large ouverture
- bandes de papier buvard

Technique:
Quelque gramme de selles seront étalés sur les bandes de
papiers buvard , ce dernier sera par la suite Plongé dans
l’eau des tubes qui ne seront pas souillé par les matiéres
fécales , icubation a 25 C°
Les larves vont circuler sur le papier buvard humide et
gagneront le fond du tube
Au moment d’examination des tubes on retire la bande de
papier avec ’une pince
 Avantages:
- technique bien Précise ,facile et simple
Inconvénients:
• -Prend de temps
- quantité de selles a tester est petite
• - traitement unique des selles fraîches
 Culture sur buvard en boîte de Pétri

Matériel utilisé:

-des lames portes –objets enveloppées d'un buvard épais ,

disposées en paquet au centre d'une boîte de Pétri dans
laquelle est versé 10 ml d'eau distillée stérile

Technique:

Etalement de quelques grammes de selles Sur la face libre du paquet de

lames . Les larves auront tendance à gagner l'eau libre du fond de la boîte où
elles sont repérées à la loupe ou dans le culot de centrifugation du liquide
recueilli.
 Méthode de HO-THI-SANG:
Elle ressemble a la méthode de culture sur charbon
sauf que que la pâte est disposée en cône en contact
du couvercle de la boîte de pétri

la lecture :
faire retourner le couvercle et sous la loupe du
microscope on cherche les larves dans les
gouttelettes de condensation
 Techniques Moléculaires

L'application de techniques moléculaires en coprologie

parasitaire), permet une détection plus précise des parasites
intestinaux dans les échantillons de selles. Cela améliore la
sensibilité et la spécificité des diagnostics par rapport aux
méthodes traditionnelles, contribuant ainsi à une meilleure
gestion des infections parasitaires.
 Technique d’extraction d’adn :
♦ L'objectif principal de
l'extraction d'ADN est d'obtenir
un échantillon pur d'ADN à
partir d'un échantillon
biologique, tel que du sang, des
tissus, des cellules ou des
micro-organismes
Les étapes d'extraction d'ADN peuvent varier en fonction de la méthode utilisée, mais
en général, elles comprennent les étapes suivantes :

1. Collecte de l'échantillon : un échantillon fécal ou tissulaire contenant des parasites est collecté et
stocké dans des conditions appropriées pour préserver l'ADN.

2. Rupture des cellules :Cela peut être fait par des méthodes physiques (comme la sonication ou le
broyage) ou chimiques (comme l'utilisation de détergents).

3. Élimination des contaminants : l'ADN extrait peut être contaminé par d'autres substances présentes
dans l'échantillon, telles que des protéines ou des polysaccharides. Des étapes de purification sont
donc nécessaires pour éliminer ces contaminants et obtenir un ADN pur.

4. Précipitation de l'ADN : l'ADN peut être précipité à l'aide d'alcool froid pour le concentrer et le purifier
davantage.

5. Élution de l'ADN : l'ADN précipité est ensuite dissous dans un tampon approprié pour le stockage et
l'analyse ultérieure
Les avantages de l'extraction Les Limites :
d'ADN incluent :
1. Contamination croisée :
peut entraîner des résultats
1. Obtention d'un échantillon
erronés.
pur
2. Dégénérescence de l'ADN
2. Fiabilité des résultats
fiables et précis.
3. Quantité limitée d'ADN
3. Multiples applications
4. Peut être coûteuse et
prendre du temps
4. Conservation de
l'échantillon
5. Sensibilité aux
inhibiteurs .
 PCR (Polymerase Chain Reaction) :
La PCR est une technique utilisée en biologie moléculaire pour amplifier de l'ADN
spécifique. Elle permet de produire de grandes quantités d'ADN à partir d'une petite
quantité initiale.Elle est largement utilisée pour détecter et identifier les parasites
dans les échantillons de selles.
PRINCIPE :
La PCR repose sur le principe de la réplication de l'ADN in vitro, . Elle utilise une
enzyme appelée ADN polymérase, qui synthétise un nouveau brin d'ADN
complémentaire à partir d'un brin matrice d'ADN.
 La PCR se déroule en plusieurs étapes :

→ Préparation Mélange de réaction : les amorces spécifiques, l'ADN extrait, les

nucléotides et la polymérase sont mélangés dans un tube réactionnel.
1. Dénaturation : l'échantillon d'ADN est chauffé à une température élevée
(généralement entre 90°C et 95°C) pour séparer les brins d'ADN en deux
brins simples.
2. Hybridation : la température est abaissée (généralement entre 50°C et 65°C)
pour permettre aux amorces d'ADN spécifiques de se fixer aux séquences
cibles de l'ADN.
3. Élongation : la température est augmentée (généralement entre 72°C et
75°C) pour permettre à l'ADN polymérase de synthétiser un nouveau brin
d'ADN complémentaire à partir des amorces fixées.
→ Ces trois étapes sont répétées plusieurs fois (généralement entre 20 et 40
cycles) pour amplifier l'ADN cible. Chaque cycle double la quantité d'ADN
présente dans l'échantillon.
Avantages :
. Amplification de l'ADN . Sensibilité élevée . Rapidité
. Sélectivité . Automatisation . Faible coût
limites et désavantages :
 → La PCR multiplexe

Est une technique de réaction en chaîne par polymérase (PCR) qui permet d'amplifier
simultanément plusieurs séquences d'ADN cibles dans un seul échantillon.
 Avantages
. Économie de temps et de
ressources
. Économie d'échantillon
. Réduction des erreurs de
manipulation

limites et désavantages :
. Optimisation plus délicate
. Risque de compétition pour les
réactifs
. Sensibilité accrue aux inhibiteurs
Interprétation des résultats
complexe
→ RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain
Reaction) :
Une technique de biologie moléculaire utilisée pour amplifier et analyser
l'ARN (acide ribonucléique).
 Voici les étapes principales de cette technique :
1. Extraction de l'ARN
2. Reverse Transcription (RT) : L'ARN est converti en ADN complémentaire (ADNc) à l'aide
d'une enzyme appelée transcriptase inverse. Cela permet d'obtenir de l'ADN à partir de
l'ARN, car la PCR ultérieure nécessite de l'ADN.
3. PCR : L'ADNc est ensuite amplifié en utilisant une enzyme appelée ADN polymérase.
4. Détection des produits amplifiés : Les produits de PCR sont souvent détectés en
utilisant des agents intercalants ou des sondes spécifiques à l'ADN. Les résultats peuvent
être visualisés sur un gel d'agarose ou par fluorescence en temps réel.
Avantages
. Quantification . Rapidité. . Multiples applications
. Polyvalence Réduction des erreurs Surveillance épidémiologique
Désavantages
. Sensibilité aux contaminants Besoin d'équipement spécialisé
. Nécessité de séquences spécifiques . Difficulté avec les échantillons anciens ou dégradés
→ PCR en point
final
"Conventionell
e ou Classique
":
Technique de Séquençage :

♦ Le but du séquençage de l'ADN est de

déterminer l'ordre exact des bases
nucléotidiques dans une molécule d'ADN.
 → Séquençage Sanger
Le séquençage Sanger est une méthode utilisée pour déterminer l'ordre des nucléotides dans un
échantillon d'ADN. Les étapes de base du séquençage Sanger sont les suivantes :

1. Préparation de l'échantillon d'ADN : L'ADN cible est amplifié par PCR (réaction de polymérase
en chaîne) pour obtenir suffisamment de matériel génétique.

2. Marquage des amorces : Des amorces marquées avec des fluorophores sont utilisées pour
amorcer la synthèse de l'ADN complémentaire.

3. Réaction de séquençage : La réaction de séquençage proprement dite est effectuée avec des
amorces spécifiques, des ADN polymérases et des désoxyribonucléotides (dNTPs) normaux et
des désoxyribonucléotides marqués.

4. Séparation des fragments : Les fragments d'ADN obtenus sont séparés selon leur taille par
électrophorèse sur gel. Les fluorophores permettent de déterminer la taille des fragments générés.

5. Détection et lecture : Les fragments séparés sont détectés à l'aide d'un scanner laser. Les
différentes couleurs des fluorophores indiquent les nucléotides présents dans la séquence.

6. Analyse des données : Les résultats sont analysés pour déterminer l'ordre des nucléotides dans
la séquence d'ADN.
 →La NGS (Next-Generation Sequencing)
Est une technologie de séquençage de l'ADN qui permet de lire et d'analyser de grandes
quantités de séquences d'ADN en parallèle
Les étapes de la technique NGS sont les suivantes :

1. Préparation de l'échantillon : l'ADN ou l'ARN est extrait de l'échantillon

biologique
2. Fragmentation de l'ADN ou de l'ARN : en petits morceaux afin de faciliter le
séquençage.
3. Ligation des adaptateurs : des adaptateurs d'ADN ou d'ARN sont ajoutés aux
extrémités des fragments afin de permettre leur amplification et leur séquençage
ultérieur.
4. Amplification des fragments : les fragments d'ADN ou d'ARN sont amplifiés
par PCR
5. Séquençage : les fragments amplifiés sont séquencés .
6. Assemblage des séquences : les séquences brutes obtenues sont assemblées
pour reconstruire le génome ou le transcriptome d'origine.
7. Analyse des données : une fois les séquences assemblées, elles peuvent être
analysées pour identifier les variations génétiques, les mutations, les gènes
Avantages : Limitations :

. Haute capacité de séquençage . Erreurs de séquençage.

. Temps de traitement
. Rapidité . limitation de base de donnés
. Polyvalence
. Résolution élevée
. Sensibilité : .
. Coût réduit
. Grande quantité de données
 La technique MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser
Desorption/Ionization Time-of-Flight) :

Est une méthode d'analyse spectrométrique

voici ces étapes :
1. Préparation de l'échantillon : L'échantillon est mélangé à une matrice spécifique absorbe
l'énergie du laser
2. Ionisation : Un laser émet un rayon laser pulsé sur l'échantillon. Cela provoque l'ionisation
des molécules dans l'échantillon
3. Accélération des ions : Les ions sont ensuite injectés dans un tube de vol et ions sont
accélérés par un champ électrique vers un détecteur de type "Time-of-Flight" (TOF).
4. Séparation en fonction de la masse :La vitesse à laquelle les ions se déplacent dépend
de leur rapport masse/charge.
5. Temps de vol : les ions les plus légers atteignant le détecteur plus rapidement que les
ions plus lourds.Le temps de vol est mesuré pour chaque ion.
6. Analyse des données : Les temps de vol sont ensuite convertis en spectre de masse, qui
représente la distribution des masses moléculaires dans l'échantillon , Il ne reste donc plus
qu’à comparer le profil obtenu avec ceux inclus dans une banque de profils pour obtenir le
nom de la souche recherchée.
Avantages : limitations et désavantages :
 . Rapidité . Sensibilité à la matrice
 . Sensibilité. . Taille des échantillons
 . Précision . Sensibilité aux impuretés.
 . Polyvalence . . Coût
 . Facilité d'utilisation. . Préparation des échantillons
 . Faible besoin de quantité d'échantillon

PRINCIPE :
fondée sur la détection et l’identification des grosses molécules par mesure de leur
masse (la spectrométrie de masse). Cette technique permet d’obtenir un profil
cartographique – une sorte de code barre – propre à chaque germe analysé
 Conclusion

La coprologie parasitaire, qui étudie les parasites présents dans

les selles, est essentielle pour diagnostiquer et traiter les
infections intestinales. En conclusion, une analyse approfondie
des échantillons fécaux permet d'identifier les parasites,
d'orienter le traitement et de prévenir la propagation des
maladies parasitaires. La vigilance dans la surveillance et la
prévention reste cruciale pour maintenir la santé digestive.
Référrence bibliographique
https://fr.slideshare.net/salahabdessemed1/
parasitologie-fiches-pratiques-52430323?
from_action=save
https://fr.slideshare.net/nanoupharmalile/
coprologie-parasitaire-dr-benlaribi-imane-halima
Merci pour votre
attention