Les différentes méthodes d’extraction, de préparation et

de fractionnement
LE PRELEVEMENT

Mr.Anis Mouelhi
I-INTRODUCTION :

Tous prélèvement d'un milieu biologique passe par 3

phases :

Phase pré-analytique

Phase analytique

Phase Post-analytique
 -Phase pré-analytique :

Elle inclut la prescription, la préparation du patient, le

prélèvement, le conditionnement et les conditions de
transport des échantillons jusqu’à leur prise en charge au
laboratoire avant l’analyse.
 -Phase analytique :

Cette phase se déroule entièrement au laboratoire et

correspond à l’ensemble des processus mis en place afin
d’obtenir le résultat d’analyse.
 -Phase Post-analytique :

Elle concerne la transmission des résultats aux prescripteurs

dans le respect de la confidentialité, l’élimination des
déchets ,la conservation des échantillons et l’archivage des
données..
II-Phase pré-analytique :


C'est l'ensemble des étapes précédant l'analyse qui
représente un élément clé du conditionnement de la
validité du résultat

Il existe plusieurs intervenants dans cette phases,le
patient,l'infirmier, le technicien du
laboratoire,fournisseur...

Cette Phase est responsable de 68% des erreurs au
laboratoire.

Les conséquence d'une phase pré-analytique non
respectée est également la perte du temps et d'un double
cout d'analyse
 Les Etapes d'une Phase Pré-analytique :

Phase Pré-analytique externe :

-Prescription des analyses :

-Accueil des patients
-Réception des prescriptions
-Encodage des analyses
-Prélèvement
-acheminement au laboratoire
Phase Pré-analytique interne :

-Réception des tubes au laboratoire

-Triage
-centrifugation et conditionnement
1-prescription des analyses :

C'est le point de départ de la phase pré-analytique externe,

généralement elle est faite par un médecin, elle doit etre
précise et lisible.
La prescription doit obligatoirement contenir le nom,
prénom,date de naissance,l'historique des maladies
infectieuse et surtout les actes à réaliser, les Renseignement
cliniques sont très importants, la notion d'urgence est aussi
indiquée
a-Acceuil du patient :

la qualité de l’accueil doit être à la hauteur

b-Préparation du matériel de prélèvement :


Le matériel nécessaire à la réalisation du prélèvement
sera préparé avant le début du prélèvement

Le prélèvement doit être effectué sans interruption (sauf
malaise) et sans laisser le patient seul.
c-Préparation du patient (patient et préleveur) :

Le patient :
-Doit être installé confortablement, en position assise; dans
une pièce adaptée, calme et propre, porte fermée; dans un
fauteuil à accoudoirs, à dossier inclinable, permettant une
position allongée en cas d’incident, accessible des deux
côtés.
-Vérification de l’identité du patient( au moins 2 identifiant
différents)
-vérification du rendez-vous
-Enregistrement : nom, prénom,date de naissance,actes...
Le préleveur :
Doit :
-être habilité à effectuer des prélèvements sanguins
-être formé à la prévention des risques biologiques
-avoir une présentation correcte et une bonne hygiène
-montrer une attitude professionnelle (calme ,rassurante et
réservée) et une bonne gestion du stress
-être organisé, rapide et efficace
-prendre connaissance de la demande d’analyses et pouvoir
expliquer l’acte et le but du soin au patient.
2-Les facteurs responsable de modification
métabolique :

a-le jeun :

le patient doit etre à jeun depuis 12 et en repos.

Si le sujet n'est pas à jeun (post-prandial) on aura une
augmentation de la glycémie de 15%, triglycérides de
50%,transaminases de 20% et la présence des
chilomicrons

En exception et en cas d'urgences, on peut effectuer des
analyses pour des patient non à jeun ou bien dans les cas
des cycles glycémiques et de glycémie post-prandiale
b-heure de prélèvement :


Entre 7 heure et 10 heure du matin
c-Stress :


Modification du dosage des hormones(substance de
nature protéique secrétée par des glandes
Exemple :
-dosage des hormones thyroïdiennes
T3,T4,TSH,prolactine,cortisol...
-Le dosage des hormones nécessite un repos de 15 min.
d-L'exercice physique :


Augmentation du CPK et LDH
e-Tabagisme :


Le tabagisme influence sur le dosage des hormones
comme le cortisol et l’aldostérone

=>Autres paramètres peuvent exercer un interférence sur le

dosage dans un laboratoire comme le cycle
menstruel,grossesse, alcool, contraception orale
3- Réalisation du prélèvement :


Le préleveur doit être professionnel et habile pour
effectuer le prélèvement et doit respecter les règle
d'hygiène ; gants,blouse,désinfection des mains

Le patient doit être en repos (assis ou semi-allongé) et il
faut respecter la confidentialité de l'analyse et du patient.

Il faut préparer le matériel nécessaire( tube,aiguille de
prélèvement, garrot,alcool,coton,sparadrap, portoirs des
tubes...)
La Ponction veineuse :
Il existe différents types de veines pour un prélévement :
-veine du plie du coude
-veine de l'avant bras
-veine du dos de la main
-veine jugulaire externe
NB :
-Il ne faut pas pratiquer un prélèvement sanguin sur une
veine perfusée
-La désinfection est obligatoire
4-Modalité du prélèvement sanguin :

Utilisation du garrot :

De préférence , il faut utiliser un garrot automatique, ne
jamais dépasser une minute, relâcher la pression du
garrot dès le premier tube(car l'utilisation prolongée du
garrot provoque la coagulation et l’hémolyse)

Poser le garrot a 7-10 cm en amont du site de ponction.

Tout ce protocole d'application du garrot a pour objectif
d'éviter les erreurs de la phase pré-analytique éviter la
stase qui augmente le risque d’hémolyse et augmente la
concentration du potassium k+, CPK, LDH...
Au cours du prélèvement sanguin, il faut éviter l'accident a
exposition au sang(AES), aussi il faut signaler tout accident
survenant au cours du prélèvement
5-Les Tubes du Prélevement :


Ce sont des dispositifs médicaux de diagnostic in vitro,
stérile et à usage unique.

Il faut surtout vérifier la date de péremption

Si on pratique le prélèvement sanguin sur un tube sec, on
a donc travailler sur le sérum

Si on pratique le Prélèvement sanguin sur un tube qui
contient un anticoagulant, on va avoir du plasma
6-Les anticoagulants :

Les principaux anticoagulants sont :

-L'héparine:inhibe le facteur X de la coaglation

-EDTA :c'est un chélateur du calcium
-Citrate:pas d'inconvénient
-Fluorure de sodium: inhibiteur des enzymes
glycolytique( conserve le glucose)
 Pour éviter la présence d' agrégation plaquettaire, on doit utiliser
un agrégant plaquettaire comme Le citrate
NB :

L’agrégation plaquettaire est la liaison entre les plaquettes
grâce a une protéine qui s'appelle le fibrinogène

Le fluorure de sodium est un anticoagulant qui est utilisé pour
le dosage du glucose car il inhibe la glycolyse
Remarque :
si le délai entre le prélèvement et le dosage du glucose ne
dépasse pas une heurs on peut utiliser un tube hépariné sans
risque d'avoir une valeur de glycémie diminuée
7- les avantages de l'utilisation du plasma :


Éviter la coagulation

Avoir un volume important 15 à 20% plus que le sérum
8-ordre des Tube pendant le prélevement :

1-Sang pour Hémoculture:pour éviter toute contamination

par d'autre bactérie
2-Tube sec : pour éviter toute contamination par un
anticoagulant (garantir la qualité du sérum)
3-Citrate : car la citrate n'interfère pas avec les analyses
biochimiques et hématologique (NFS)
4-Hepariné
5-EDTA
6-Fluorure de Sodium
Exercice d'application :

Donner l'ordre De remplissage des tubes pour ce

prélèvement sanguin :

Glycémie, Créatinine ,Calcium

NFS, GS

Bilan d’hémostase (TP,TCK)
Correction :

Glycémie, Créatinine,Calcium (2)

NFS, GS (3)

Bilan d’hémostase (TP,TCK) (1)
Exercice 2 :
Donner l'ordre De remplissage des tubes pour ce prélèvement
sanguin :

Glycémie, Créatinine, calcium,Amylase,cholestérol

NFS,GS

bilan d’hémostase

hémoculture

vitesse de sédimentation (VS)

sérologie virale
Correction :
Glycémie, Créatinine, calcium,Amylase,cholesterol (4)
NFS,GS (5)
bilan d’hémostase (3)
hémoculture (1)
vitesse de sédimentation (VS) (6)
sérologie virale(2)
9-volume sanguin à remplir dans les tubes


Le volume nécessaire pour chaque prélèvement et
chaque analyse est indiqué sur le tube par un trait

Il faut donc respecter le ratio: volume anticoagulant-
volume échantillon

Il est interdit de compléter un tube par le contenu d'un
autre, à l'exception on peut compléter le volume d'un
tube avec le contenu d'un tube sec
NB :
Il faut homogénéiser par 10 légères agitation pour garantir
l'action complété de l'anticoagulant y compris le tube sec
par l’activation de la coagulation par le contact de la paroi
interne du tube de prélèvement
10-l'étiquetage des tubes :

étape cruciale,faite par le préleveur lui même au moment du

prélèvement
l'étiquette doit mentionner :
-l’identité du patient(nom, prénom, date de naissance)
-La nature de l’échantillon
-la date et heure du prélèvement
-code a barre
NB :
Il faut éviter l’hémolyse
causes :
-application prolongée du garrot
-aiguille de prélèvement mal positionnée
-Absence de l'agitation du tube
-Transport de l’échantillon( choc, variation de température)
injection du sang de la seringue au tube de prélèvement
conséquence d’hémolyse :
l’hémolyse affecte le dosage des paramètres biochimique
comme le potassium K+, LDH,O2,Lactate et exerce une
influence spectrale sur l’hémoglobine
11-Transport du prélévement :

il faut faire un emballage étanche et résistant, aussi bien il faut

respecter la position verticale des tubes lors du transport
Ne jamais emballer les tubes dans les bons de demandes
d'analyses
l'acheminement des prélèvements doit être fait le plus tôt
possible au laboratoire
par exemple, le sang total non centrifugé(pas de séparation) à
température ambiante, le taux de glucose dans le sang diminue
de 5à7% par heure
le fluorure de sodium garantie la stabilité de la glycémie même
si l'analyse dépasse une heure.
Lorsqu'on dose la glycémie sur sérum ou plasma séparée,la
glycémie reste stable 25h à +25°c et 72h à +4°c.
Il faut protéger le prélèvement contre la lumière pour éviter
les photons qui consomme la bilirubine et l'acide folique.
III-Le gaz du sang (Gazométrie) :

Rappel:Le sang artériel est riche en O2 et le sang veineux est

riche en CO2
Définition :
c'est le dosage de la pression d’oxygène PO2 et la saturation
de l'O2 ainsi que la pression du CO2 et la saturation en CO2
et on dose aussi les ions Na+, Cl-,K+ et le PH sanguin
1-Prélévement:

La gazométrie se fait strictement sur du sang artériel, le

prélèvement nécessite une seringue hépariné (pour éviter la
coagulation)
Il faut éviter la coagulation et l'hémolyse de l'échantillon.
Le transport du prélèvement doit être fait rapidement et à
4°c, le délai entre le prélèvement et l'analyse de l'echantillon
ne doit pas dépasser 30 min car les paramètres à doser sont
très fragiles
Si on dépasse les 30 minutes cela va provoquer une
accélération du métabolisme interne du sang donc :
consommation de l'O2 et production du CO2
IV- Identification des tubes au laboratoire :


c'est un point capital pour confirmer le respect de la
phase pré-analytique

L'identification : donner un numéro unique pour chaque
tube d'une même analyse.

Il existe maintenant des étiquettes à code à barre
V-Problèmes liés à la phase pré-analytique :
1- erreurs liés au processus pré-analytique externe au
laboratoire :
-Prescription : écriture illisible,abréviation,absence d'identité du
patient
-Tube non conforme:par exemple prélèvement de HBA1C sur un
tube sec
-Volume insuffisant : ratio non respecté
-Absence ou mauvaise identification des tubes
-Prélèvement sur veine perfusée
-Retard d'acheminement au laboratoire
-La perte des tubes
2-erreurs liés à la phase pré-analytique d'un service
d'urgences :

-Tubes souillés 31%

-Tubes mal identifié 22%
-Tubes avec un ratio non respecté 17%
-Tube manquante 17%
-Tubes périmés 9%
Les conséquences :
-Réalisation d'actes non demandé par la prescription
-Résultats erronés et non interprétable
-Prélèvement refait : coût, temps et personnel
-Retard de diagnostic et du traitement
3-erreurs liés au processus pré-analytique interne :

-Problème de traçabilité : enregistrement,étiquetage

-Problème analytique
-risque biologique : il faut éviter tous risque lors de
débouchage et rebouchage des tubes