Spectrophotométrie
Dr Sanou Arsene
MD, MSc, DES.
PLAN
Chapitre 1 : Introduction à la
Spectrophotométrie
Chapitre 2 : Domaines d’application de la
spm
Chapitre 3 : Classification des techniques de
spm
Chapitre 4 : Instrumentation en spm et
colorimétrie 2
Introduction à la
Spectrophotométrie
DEFINITION
Spectromètre : Appareil mesurant la longueur
d’ondes des faisceaux de rayonnement
lumineux.
Photomètre : Appareil mesurant l’intensité des
faisceaux de rayonnement lumineux (photons).
Spectrophotomètre : Appareil mesurant la
lumière absorbée en fonction de sa longueur 4
DEFINITION (2)
Photométrie : Discipline qui étudie l’intensité des
faisceaux de rayonnement lumineux (photons).
Spectrométrie : Discipline qui étudie la longueur
d’ondes des faisceaux de rayonnement lumineux.
Spectrophotométrie : Discipline qui étudie les
propriétés de réflexion et de transmission du
faisceau de rayonnement lumineux en fonction de sa
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DEFINITION (3)
Spectrophotométrie : C’est donc la combinaison de
deux (2) disciplines ; la spectrométrie et la
photométrie.
Spectroscopie : La spectroscopie est une branche de
la chimie analytique qui traite de l'étude de
l'interaction du rayonnement électromagnétique avec
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LA LUMIERE BLANCHE ET SES COULEURS
La lumière blanche est la résultante de la
composition de plusieurs couleurs. Elle est
composée de différentes longueurs d’ondes et de
différentes intensités de faisceaux lumineux.
Les couleurs sont obtenues a partir de la
décomposition de la lumière blanche. 7
LA LUMIERE BLANCHE ET SES COULEURS
(2)
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LONGUEURS D’ONDES ET COULEURS
Longueur d’onde (nm) Couleurs transmises Couleurs complémentaires
400-435 violet Jaune - vert
435-480 bleu Jaune
480-490 Vert - bleu Orange
490-500 Bleu- vert Rouge
500-560 vert Pourpre
560-580 Jaune - vert Violet
580-595 jaune Bleu
595-610 orange Vert - bleu
610-700 rouge Bleu vert
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SPECTROMETRIE DES UV - VISIBLE
1
0
SCHEMA D’UN SPECTROPHOTOMETRE
4 6 7 8
2 3
1
1
SCHEMA D’UN SPECTROPHOTOMETRE (2)
1 : Source de lumière 7 : Détecteur de
signaux
2 : Réseau en miroir 8 : Analyseur
électronique
3 : Fentes 9 : Afficheur
4 : Faisceau lumineux M : Micro moteur
5 : Cuve de mesure 1
2
PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT
Source de lumière : La source lumineuse 1
(lampe à vapeur de mercure, lampe à arc au
xénon, lampe à filament de tungstène) émet
une intensité de lumière qui est réfléchit par
un réseau en miroir 2.
Cette lumière blanche est décomposée par le
miroir en fonction de la longueur d’onde 1
3
PRINCIPEDEFONCTIONNEMENT (2)
Un système de fente 3 est chargé de
supprimer les faisceaux de lumière parasites
et de ne laissé passer que les faisceaux utiles
4.
Ces faisceaux utiles traversent la cuve à
faces parallèles 5 qui contient la solution à
lire.
1
4
PRINCIPEDEFONCTIONNEMENT (3)
Les spectres utiles sont absorbés par un système
de détection 7 (cellules photoémissives, tubes
photomultiplicateurs d’électrons)
Les spectres absorbés par le système
de détection sont convertis en signaux
électriques et lus par un microprocesseur 8 qui
analyse et affiche l’absorbance ou la 1
5
PRINCIPEDEFONCTIONNEMENT (4)
Un micro moteur M est chargé de la
sélection des longueurs d’ondes.
1
6
Spectromètre
Photomètre
Cuve de mesure Détecteur
Lampe
Domaines
d’application de la
Spectrophotométrie
INTRODUCTION
Les interactions entre la matière et le rayonnement
lumineux (électromagnétique) a été élargie pour inclure
les interactions entre la matière et les autres formes
d'énergie.
Ce type de méthodes analytiques est considéré comme
l'un des outils les plus puissants disponibles pour 1
9
INTRODUCTION (2)
Dans cette méthode, on effectue des mesures de
lumière (ou de particules chargées induites par la
lumière) absorbées, émises, reflétées ou dispersées
par un produit chimique ou un matériau.
Ensuite, ces données mesurées sont corrélées pour
identifier et quantifier les espèces chimiques. La 2
0
INTERET DE LA
SPECTROPHOTOMETRIE
- Ces techniques consomment moins de temps et
sont beaucoup plus rapides ;
- Ils nécessitent une très petite quantité du
composé (aux niveaux du mg et microgramme) ;
- Les informations structurelles reçues du
spectromètre sont beaucoup plus précises et
fiables ;
- Ils sont beaucoup plus sélectifs, sensibles et
extrêmement utiles dans l'analyse de mélanges
2
1
INTERET DE LA SPECTROPHOTOMETRIE
(2)
- L'analyse contrôlée peut être effectuée sur un
ordinateur et par conséquent, un fonctionnement
continu est possible (applications industrielles).
Un large éventail de techniques spectrométriques
différentes peut être appliquée dans pratiquement
tous les domaines de recherche scientifique - des
analyses environnementales, des sciences
2
2
INTERET DE LA SPECTROPHOTOMETRIE
(3)
En d'autres termes, toute application qui traite des
substances chimiques ou des matériaux peut
utiliser la spectrophotométrie.
Les méthodes spectrophotométriques ont fourni les
outils les plus largement utilisés pour l'élucidation
de la structure moléculaire ainsi que la
détermination quantitative et qualitative des
2
3
APPLICATIONS EN CHIMIE ANALYTIQUE
Un chimiste utilise régulièrement des techniques
spectrométrie pour déterminer la structure
moléculaire (par exemple, spectroscopie RMN), poids
moléculaire, formule moléculaire et décomposition à
des composés simples ou à une conversion en une
dérivée (spectroscopie MS) et en présence ou
absence de certains groupes fonctionnels
(spectroscopie IR). 2
4
AUTRES APPLICATIONS
En outre, il est utilisé en méthode d'analyse
quantitative dans divers champs tels que la
physique, la biochimie, le matériau et l'ingénierie
chimique, les applications cliniques et
applications industrielles.
Dans les applications cliniques, il est utilisé pour
examiner le sang ou les tissus pour le diagnostic 2
5
Classification des
techniques de
Spectrophotométrie
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
Les méthodes de spectrophotométrie peuvent être
classées en fonction du type d'analyses
effectuée ou du type de lumière qu'elles
utilisent.
En fonction du type d'analyse (élémentaire ou
moléculaire), il est divisé en deux groupes : la
spectrophotométrie atomique et la
spectrophotométrie moléculaire.
2
7
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
(2)
- La spectrophotométrie atomique : concerne
l'interaction du rayonnement électromagnétique
avec des atomes qui sont généralement dans leur
état d'énergie le plus bas, appelé l'état du sol.
- La spectrophotométrie moléculaire : traite de
l'interaction du rayonnement électromagnétique
avec des molécules. Le processus d'interaction
entraîne une transition entre les niveaux d'énergie
de rotation et de vibration en plus des transitions
2
8
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
(3)
-
La spectrophotométrie moléculaire : Les
spectres des molécules sont beaucoup plus
compliqués que ceux des atomes, car les
molécules subissent des rotations et des
vibrations en plus des transitions électroniques.
La spectrophotométrie moléculaire revêt une
grande importance aujourd'hui en raison du fait
que le nombre de molécules est extrêmement
large par rapport aux atomes libres.
2
9
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
(4)
Les techniques spectrophotométrie sont
également classées en fonction du type de
rayonnement qu'ils utilisent et de la manière
dont ce rayonnement interagit avec la matière.
Ces méthodes incluent ceux d'une onde radio,
de rayons gamma et étudie les changement de
rotation nucléaire et les changements de
configuration nucléaire. Sur cette base, les
3
0
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
- (5)
Les Spectrophotomètres à émission de
rayons gamma: utilisent la lumière sur la plage
de rayons gamma (0,005E1.4 A) de spectre de
rayonnement électromagnétique.
- Les Spectrophotomètres à absorption des
rayons X / Spectrophotomètres d'émission /
fluorescence / diffraction : utilisent la lumière
sur la plage de rayons X (0,100 A).
3
1
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
(6)
- Les Spectrophotomètres d'absorption / flux
d'émission / flux ultraviolette utilisent la
lumière sur la plage ultraviolette (180E400 NM) et
une plage visible (400E780 nm).
- Les Spectrophotomètre d'absorption
infrarouge: utilise la lumière sur la plage
infrarouge (0,78E300 mm).
- 3
2
CLASSIFICATION SPECTROPHOTOMETRIE
(7)
- Les Spectrophotomètre d'absorption à
micro-ondes utilisent la lumière sur la plage
infrarouge de (0,75E375 mm).
- Les Spectrophotomètre de résonance
d'électrons utilisent la lumière de (3 cm).
- Les Spectrophotomètre de résonance
magnétique nucléaire utilisent la lumière sur la
3
3
Instrumentation en
Spectrophotométrie
INTRODUCTION
Chaque composé absorbe, transmet, ou reflète la
lumière sur une certaine plage de longueur d'onde.
La méthode spectrophotométrique est principalement
utilisée pour mesurer la quantité d'une substance
chimique absorbe, transmet ou émet un
rayonnement. Elles est utilisée pour corréler le
rayonnement absorbé ou émis avec la quantité d'un
analyte d'intérêt. 3
5
INTRODUCTION (2)
Par conséquent, la spectrophotométrie est une
méthode spectroanalytique pour la mesure
qualitative et quantitative de la transmission ou de
l'absorption, des propriétés de réflexion et d'émission
d'une espèce chimique ou d'un matériau en fonction
de la longueur d'onde et de l’intensité.
3
6
FIN
