6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Dimensions spatio-temporelles des études
écotoxicologiques

Modèles
prédictifs

Laboratoire Milieu naturel

Études in
Tests de Chaînes situ
mésocosmes
toxicité trophiques
mono- ou expérimentales Portions
plurispécifique (bioaccumulati d’écosystèm
s (bioessais) on) es
microcosmes (enclosures)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
Egalement appelés biotests ou tests de toxicité en laboratoire, issus démarche de
la toxicologie

Consistent à:
- exposer un modèle vivant (cellules, organismes ou population d’espèce) à:
- une substance (ex. : un pesticide)
- un mélange de substances (ex. : plusieurs pesticides, hydrocarbures..)
- un échantillon environnemental (ex. : eau de rivière, sol, air, effluent
industriel, etc. qui contient un mélange de polluants)

- dans un milieu ( = une boite de Petri, une microplaque, un pot,..)

- en conditions contrôlées (température, taux d’oxygène, salinité, nourriture,
lumière, …)
- pendant une durée déterminée

observer un ou plusieurs effet(s) sur le modèle vivant étudié:

mortalité, croissance, reproduction, les dommages à l’ADN …
on parle de « critère(s) d’évaluation »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
• Le modèle biologique est exposé à différentes concentrations de la
substance / mélange de substances / échantillon environnemental

• Un témoin négatif (control sans substance toxique) est nécessaire pour

établir les valeurs de référence et valider les résultats du bioessai

• Plusieurs réplicats de chacune des concentrations testées sont requis pour

garantir la fiabilité des résultats
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Normes internationales

Daphnia magna (Cladocera, Crustacea)

Inter
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Utilisation d'une bactérie Salmonella typhimurium (7 souches), génétiquement modifiée

qui a perdu sa capacité à produire un acide aminé, l'histidine :

• Histidine: essentiel au développement de la

bactérie -> ne peut se développer que si le
milieu de culture en contient

• En contact avec un produit chimique qui

provoque des mutations génétiques, la
bactérie va réacquérir sa capacité à produire de
l'histidine et sera donc capable de se
développer sur un milieu de culture sans acide
aminé

• Au contraire, si le produit chimique testé n'a pas

de pouvoir mutagène, aucune bactérie ne
pourra se développer sans apport extérieur
d'histidine

Le nombre de colonies de bactéries parvenant à croître sur un milieu de culture

sans histidine est indicateur du pouvoir mutagène d'un composé chimique
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Recherche & Développement

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
Selon la durée d’exposition on distingue:

• les bioessais de toxicité aigüe:

exposition à une forte dose ou à une substance très toxique
pendant un temps court

• les bioessais de toxicité chronique:

exposition à une faible dose pendant un temps long

A noter que cette notion de temps court ou long est relative à la durée de vie du
modèle biologique

-> dans le cas d’un bioessai de toxicité chronique, le temps d’exposition

correspond en moyenne à 10 % de la vie de l’organisme et doit intégrer plusieurs
stades de son cycle de vie
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Eisenia fetida
Daphnia magna
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
Selon la durée d’exposition on distingue:

• les bioessais de toxicité aigüe:

exposition à une forte dose ou à une substance très toxique
pendant un temps court

• les bioessais de toxicité chronique:

exposition à une faible dose pendant un temps long

A noter que cette notion de temps court ou long est relative à la durée de vie du
modèle biologique

-> dans le cas d’un bioessai de toxicité chronique, le temps d’exposition

correspond en moyenne à 10 % de la vie de l’organisme et doit intégrer plusieurs
stades de son cycle de vie

Mobilisation de la communauté scientifique pour une augmentation du temps

d’exposition des organismes vivants – se rapprocher du réel dans les écosystèmes
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

polluant

Études
génotoxicité
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Test YES « Yeast Estrogen Screen »

Permet de détecter les polluants présentant des mécanismes d’actions

perturbatrices hormonales: perturbateurs endocriniens

Ce test fait appel à des cellules de levure génétiquement modifiées dans

lesquelles le gène du récepteur humain des œstrogènes a été couplé à un
gène rapporteur

Si une substance a effet œstrogénique se lie au récepteur

une réaction colorée se déclenche
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références

Les résultats des bioessais permettent d’établir des valeurs de référence qui
caractérisent le niveau d’écotoxicité d’une substance ou d’un échantillon

 concentration sans effets observés CSEO (en anglais : NOEC) :

concentration en substance/échantillon testé(e) la plus élevée pour laquelle
aucun effet significativement différent du témoin n’a été observé

 concentration minimale avec effets observés CMEO (en anglais : LOEC) :

correspond à la concentration la plus faible pour laquelle un effet
significativement différent du témoin a été observé

 concentration efficace CE50 (en anglais : EC50) :

concentration en substance/échantillon qui engendre un effet différent de 50 %

par rapport au témoin

ex: une croissance racinaire 50 % moins élevée que pour la plante témoin

 concentration létale médiane (CL50) (en anglais LD50): qui provoque 50% de
mortalité pendant
dans la population d'organismes
un temps donné, étudiée
par administration unique
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références

1- Utilisées dans la réglementation

pour évaluer le danger et le risque
environnemental liés à une substance
chimique

2- Elles permettent de calculer des

valeurs seuils « à ne pas dépasser »
dans le milieu naturel:

 PNEC (concentration sans risque

pour l’environnement)
 NQE (Norme de Qualité
Environnementale)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La « concentration sans risque pour l’environnement »
= Predicted No Effect Concentration (PNEC)

 Principe que la « sensibilité d’un écosystème » dépend des espèces les plus
sensibles aux polluants
-> utilisation de la CSEO la plus faible
concentration en substance la plus élevée pour laquelle aucun effet
significativement différent du témoin n’a été observé

-> utilisation de la CL50 la plus faible

qui provoque 50% de mortalité dans la population

 On applique un facteur de sécurité à la CSEO ou à la CL50 retenue :

- ce facteur, défini dans les directives européennes permet d’abaisser le risque
environnemental
- il tient également compte du nombre et de la qualité des données disponibles
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La « concentration sans risque pour l’environnement »
= Predicted No Effect Concentration (PNEC)

CSEO

Facteur de sécurité

PNEC = 0,22 mg/L / 1000 = 0,00022 mg/L = 0,22 µg/L

En théorie, une concentration de 0,22 µg/L de la substance n’est pas

néfaste pour l’environnement
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La « concentration sans risque pour l’environnement »
= Predicted No Effect Concentration (PNEC)

Choix préférentiel

Facteur de sécurité

PNEC = 0,08 mg/L / 10 = 0,008 mg/L = 8 µg/L

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La « concentration sans risque pour l’environnement »
= Predicted No Effect Concentration (PNEC)

 Le type de bioessai aigu/chronique influence significativement les valeurs

de PNEC

 Bioessais chroniques plus réalistes. On favorise donc les résultats des

bioessais de toxicité chronique

Cependant

 La valeur du facteur de sécurité est très arbitraire (groupes d’experts)

 La PNEC est définie « par substance » : or, dans les milieux naturels, ce sont
des mélanges de molécules qui sont présentes et celles-ci peuvent interagir
entre elles (effets additifs, synergiques ou antagonistes)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La Norme de Qualité Environnementale (NQE )

= valeurs seuils que la concentration mesurée dans le milieu

ne doit pas dépasser

Stratégie de lutte contre la pollution chimique des milieux aquatiques, définie

entre autre dans le cadre de la Directive Européenne Cadre sur l’eau (DCE)

La NQE a deux composantes :

• une composante sanitaire qui permet de protéger la santé humaine de la

toxicité des substances sur l’eau brute destinée à la consommation humaine ou
d’un empoisonnement secondaire par consommation d’organismes
éventuellement contaminés

• une composante environnementale qui permet de protéger les organismes du

milieu aquatique d’un effet toxique direct ou par empoisonnement secondaire
(ingestion de proies contaminées)
 6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Etablissement de valeurs de références
La Norme de Qualité Environnementale (NQE )

= valeurs seuils que la concentration mesurée dans le milieu aquatique

ne doit pas dépasser

Stratégie de lutte contre la pollution chimique des milieux aquatiques, définie

dans le cadre de la Directive Européenne Cadre sur l’eau (DCE)

La NQE a deux composantes :

• une composante environnementale
• une composante sanitaire

NQE = la valeur minimale des différentes valeurs de PNEC (concentration sans

risque pour l’environnement) observées pour chacun des compartiments étudiés:
eau, sédiments, biocénoses et santé humaine

NQE-MA (moyenne annuelle) NQE: officiellement votées par le Parlement Européen

NQE-CMA (conc. maximum admissible) NQE-provisoires: évaluations écotoxicologiques
approfondies par les états membres
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Les
avantages
• Les protocoles normalisés (pour une partie des tests) et les conditions
d’exposition contrôlées permettent de comparer la toxicité de plusieurs
substances/échantillons, même si les tests n’ont pas été réalisés au même
moment ou par le même laboratoire

• En cas d’exposition à un échantillon environnemental, les bioessais renseignent

sur la fraction biodisponible et active du ou des contaminant(s)

• Les bioessais in vitro permettent de décrire les mécanismes toxicologiques en

jeu

• Les valeurs de référence (CE50, CSEO, etc.) permettent d’établir des

valeurs seuils utilisées dans la réglementation, telles que la PNEC/NQE
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les bioessais

Les limites

• Faible réalisme environnemental en raison :

-de l’utilisation d’organismes d’élevage
-de l’exposition en conditions contrôlées de laboratoire qui sont très différentes des
conditions de terrain / du milieu naturel

• En cas d’exposition à un échantillon environnemental, ils ne permettent pas à eux seuls

d’identifier la ou les molécules(s) responsable(s) des effets observés

• Les bioessais de laboratoire ne prennent pas en compte les effets indirects tels que les
interactions entre espèces ou les effets trophiques
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet d’une ou plusieurs substance(s) sur plusieurs espèces

Exemple d’hypothèse initiale: les substances testées ont un effet

négatif directe sur les producteurs primaires (phytoplancton et les
macrophytes), 1er niveaux des réseaux trophiques
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Ex: herbicides et cultures de microalgues
(inhibition de la croissance cellulaire) Concentration
de l’herbicide

témoin
-

-> herbicides = substances qui ont pour vocation

d’induire une mortalité d’espèces végétales

On observe bien ici un effet directe délétère de

l’herbicide sur la culture de micro-algues
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

-> herbicides = substances qui ont pour vocation

d’induire une mortalité d’espèces végétales

On observe bien ici un effet directe délétère de

l’herbicide sur la culture de micro-algues

Attention, les substances peuvent également avoir des effets

indirectes sur les communautés
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substances sur une chaîne trophique
simple: producteurs primaires + des consommateurs
= lessiva de
sol agricole

=herbivores
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substances sur une chaîne trophique
simple: producteurs primaires + des consommateurs
= lessiva de
sol agricole

3 sp de macrophytes:

Myriophyllum spicatum Elodea nuttallii Potamogeton perfoliatus

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substances sur une chaîne trophique
simple
= lessiva de
sol agricole

Innocula de phytoplancton et de périphyton

phytoplancton Périphyton (bactéries, protozoaires, métazoaires

algues, détritus …sur la surface d’objets)
 6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substances sur une chaîne trophique
simple
= lessiva de
sol agricole

Une espèce de mollusque herbivore (« grazer »)

= le consommateur

Lymnaea stagnalis
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance sur une chaîne trophique
simple
= lessiva de
sol agricole

Lessiva de sol agricole: mixture de substances: herbicide, insecticide,

fongicide, métal, azote
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance(s) sur une chaîne trophique simple
sur biomasse, reproduction (taille œufs/juvéniles), taux de
consommation

Sans herbirvore
Une injection
de lessiva de
sol
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance(s) sur une chaîne trophique simple
sur biomasse, reproduction (taille œufs/juvénils), taux de
consommation

Seul l’effet de la température de la

température est testé (pas
d’injection de lessiva de sol)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance(s) sur une chaîne trophique simple
sur biomasse, reproduction (taille œufs/juvéniles), taux de
consommation

Analyse
statistique des
résultats

Modélisation
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substances sur une chaîne trophique simple
Modèle SEM (Structural Equation
Modelling)

Relations positives et significatives entre les variables

Relations négatives et significatives entre les variables

Non-significatif (p = 0,05)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance(s) sur une chaîne trophique simple
Modèle SEM (Structural Equation
Modelling)

Hypothèse initiale: substances ont un effet négatif directe sur les

producteurs primaires (phytoplancton et les macrophyes), les 1er
maillons des chaînes alimentaires -> pas le cas
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
Effet de plusieurs substance(s) sur une chaîne trophique simple
Modèle SEM (Structural Equation
Modelling)

Action des substances: en réalité -> effets fonctionnels indirects

 le lessiva agricole va stimuler le développement du périphyton (Cu et
nitrates) qui devient plus compétitif (biomasse) que le phytoplancton et
les macrophytes
 les substances chimiques ont un effet toxique directe sur le mollusque,
consommateur primaire, avec diminution de sa biomasse de son activité
d’herbivorie sur les macrophytes (va consommer préférentiellement le
périphyton à la place des macrophytes) -> modification des voies de
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

Effets directes : Oui/non –

si oui, à quelles doses ?

Incorporation des maillons

des chaînes trophiques
permet de mettre en
évidence les effets
indirects fonctionnels
(compétition, pression de
prédation etc…)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes – augmentation de la
complexité
 Création de relations trophiques – réseau trophique
simplifié

Dispositif de microcosme 100 L utilisé dans divers programmes

(évaluation de l’écocompatibilité de MIOM et programme Novosol®)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

 Création de relations trophiques – réseau trophique

 simplifié
Inclusion du compartiment sédimentaire

Pour l’étude de mixture de substances hydrosolubles et peu hydrosolubles

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

 Création de relations trophiques – réseau trophique

 Inclusion
simplifié du compartiment sédimentaire

 Possibilité de faire varier les conditions physico-

chimiques du milieu

Et également la conductivité, température, granulométrie des

sédiments,….
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

 Création de relations trophiques – réseau trophique

simplifié
 Possibilité de faire varier les conditions physico-
chimiques du milieu environnementales
 Permet de modéliser les traits d’histoires de vie
(THV) individuels (croissance, reproduction,…)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les microcosmes

 Création de relations trophiques – réseau trophique

simplifié
 Possibilité de faire varier les conditions physico-
chimiques du milieu environnementales
 Permet de modéliser les traits d’histoires de vie
(THV) individuels (croissance, reproduction,…)

Ex: taux de croissance d’une espèce d’algue dans différentes conditions de concentration en Cadmium et en présence d’espèces herbivores
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Définition : systèmes artificiels placés dans des conditions très proches des
conditions environnementales naturelles et possédant suffisamment de
complexité et de stabilité pour être autosuffisants

Systèmes expérimentaux délimités, plus ou moins clos, fixes ou mobiles qui

constituent des échelles intermédiaires entre le microcosme de laboratoire et la
complexité de l’écosystème
1 - plateformes expérimentales, généralement à l’air libre, permettent d’exposer des
organismes vivants appartenant à différents niveaux trophiques à des contaminants,
dans des conditions environnementales naturelles proches
Milieu terrestre
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Définition : systèmes artificiels placés dans des conditions très proches des
conditions environnementales naturelles et possédant suffisamment de
complexité et de stabilité pour être autosuffisants

Milieu marin:

Milieu côtier
Débarcadaires
Milieu hauturier
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Définition : systèmes artificiels placés dans des conditions très proches des
conditions environnementales naturelles et possédant suffisamment de
complexité et de stabilité pour être autosuffisants

Systèmes expérimentaux délimités, plus ou moins clos, fixes ou mobiles qui

constituent des échelles intermédiaires entre le microcosme de laboratoire et la
complexité de l’écosystème

2 - « modèles réduits » de plan d’eau ou encore de parcelles agricoles….

Un petit étang = mésocosme

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Définition : systèmes artificiels placés dans des conditions très proches des
conditions environnementales naturelles et possédant suffisamment de
complexité et de stabilité pour être autosuffisants

compromis entre le contrôle et la reproductibilité des expériences de

laboratoire et la représentativité des études de terrain

De plus en plus utilisés dans le cadre de la constitution de dossiers

réglementaires en vue de l’obtention de l’autorisation de mise sur le
marché de substances chimiques

en revanche encore sous-exploités par les gestionnaires en charge de la

surveillance des milieux naturel
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

https://www.youtube.com/watch?v=IW6cP667oxM

Institut national de l'environnement industriel et des risques

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Détermination de la
concentration en polluants
affectant 10% des espèces
présentes

NOEC = concentration en substance/échantillon testé(e) la

plus élevée pour laquelle aucun effet significativement
différent du témoin n’a été observé
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les mésocosmes

Les Les limites

avantages
Réalisme plus important que pour les bioessais Mais mésocosme = écosystème
de laboratoire « artificiel »

Possibilité de suivre simultanément le devenir Difficilement standardisable car la

et les effets des polluants + interactions entre reproductibilité des conditions
contaminants (effets additifs, synergiques ou expérimentales est moindre que pour les
antagonistes) bioessais de laboratoire

Mise en évidence d’effets directs et indirects Contraintes physiques: importance des

au niveau des compartilents trophiques processus de sédimentation et effets des
parois
En cas d’exposition à un échantillon
environnemental, ils renseignent sur la fraction Coût important des installations et de
biodisponible et active du ou des contaminant(s) la maintenance
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »

consiste à prélever des organismes sentinelles autochtones, sur lesquels

sont réalisées des mesures de la concentration d’une ou plusieurs
substances et des mesures de biomarqueurs écotoxicologiques
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »
Ex: concentrations
• PBDE-47: 2,2'4,4'-Tetrabromodiphenyl Ether: retardateur de flamme règlementé
• HCDD: Hexabromocyclododécane: retardateur de flamme non règlementé
dans les tissus d’huitre et de moules échantillonnées dans les eaux littorales
(=naturellement présentent dans le milieu)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »
Ex: concentrations
• PBDE-47: 2,2'4,4'-Tetrabromodiphenyl Ether: retardateur de flamme règlementé
• HCDD: Hexabromocyclododécane: retardateur de flamme non règlementé
dans les tissus d’huitre et de moules échantillonnées dans les eaux littorales
(=naturellement présentent dans le milieu)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ

Autre exemple : Encagement d’organismes (caging)

Deux étapes :

1. Encagement dans le milieu d’étude, d’organismes de passé biologique

connu, pendant une durée donnée

2. Mesure de la bioaccumulation en polluants et de biomarqueurs

écotoxicologiques sur les organismes encagés
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ
Encagement d’escargots
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance passive »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ
Encagement d’escargots

-> la réponse des organismes vivants peut être différente

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: les échantillonneurs « passifs »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: les échantillonneurs « passifs »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: les échantillonneurs « passifs »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: les échantillonneurs « passifs »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance active »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ

Biocapteurs
Outils permettant de mesurer et de transformer un phénomène
biologique/biochimique en signal physique (ex. : optique, électrique)
pour suivre in situ et en continu la présence de polluants

biosenseurs à partir d’algues, d’anticorps et de bactéries etc…qui réagissent en

émettant de la fluorescence ou des signaux de conductivité …
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance active »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ

Biocapteurs
Outils permettant de mesurer et de transformer un phénomène
biologique/biochimique en signal physique (ex. : optique, électrique)
pour suivre in situ ((dans les milieux naturels) et en continu la présence de polluants
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance active »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance active »

regroupe l’ensemble des expérimentations basées sur la manipulation

d’organismes dans le milieu naturel in situ

Biocapteurs
Outils permettant de mesurer et de transformer un phénomène
biologique/biochimique en signal physique (ex. : optique, électrique)
pour suivre in situ ((dans les milieux naturels) et en continu la présence de polluants

Approche encore en phase de développement

dans les laboratoires de recherche
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES
Les approches de terrain: la « biosurveillance active »

Biocapteurs

https://www.youtube.com/watch?v=9J6cbdZFsk0
 Le programme MAP-IO

 ~ 50 % de l’absorption de CO2 par les

océans se produit dans l’océan Austral
(Gruber et al., 2019)

 Secteur clef du suivi du rétablissement

de la couche d’ozone stratosphérique et
la compréhension du CC

 Manque crucial de données dans cette

région en comparaison avec celles
réalisées en Atlantique Nord ou dans le
fCO2 océanique 2010-2019 (base SOCAT) Pacifique Nord et Equatorial
 Le programme MAP-IO

Répétitivité des routes :

 Observation régulière de la région

 Suivi de la variabilité inter-annuelle

 Tendances climatiques (si long terme)

OP
4 rotations, ~ 120 jours / an
Le programme MAP-IO
 Le programme MAP-IO, depuis 2021
vise à pallier le manque d'observation dans cette région

19 instruments pour l’observation de l’atmosphère et de l’océan de surface

à bord du Marion Dufresne II

Investissement en instruments : 680 k€

 Le programme MAP-IO

Production primaire océanique: le phytoplancton par cytométrie en autonomie

Le programme MAP-IO
Le programme MAP-IO
 Le programme MAP-IO

Prochaine étape: couplage à des biocapteurs en continu

Objectif: acquérir des mesures de contamination des

milieux côtiers et hauturiers en continu, à haute fréquence
et sur plusieurs années sur les trajets du navire
 MAPIO, vers un observatoire perenne ?
Insertion dans les

 Infrastructures de Recherche: grands Consortium structurés à l’échelle européenne

MAP-IO structuré pour être inséré dans les Infrastructures de

Recherche ACTRIS et ICOS
 Instrumentation
 Acquisition et traitement des données
 Transfert vers les pôles de données
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Sources de polluants
Ecocinétique
Phénomènes de transferts

Milieu aquatique et
terrestre

Toxicocinétique
Individu

Indicateurs de
Population toxicité
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Toxicocinétique = devenir des micropolluants dans les

organismes vivants

Étapes clés:
Absorption

Distribution
tissulaire
Excrétion - Métabolisme

Accumulation /
Stockage
La résultante de ces étapes va déterminer la bioaccumulation d’une
molécule
-> Importance des propriétés physico-chimiques
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Bioaccumulation: importance du caractère lipophile des

molécules

organisme

environnemen
t

Substances lipophiles
lipophilie = affinité d'une substance pour les solvants apolaires comme les lipides (corps
gras). Une substance lipophile (ou hydrophobe) est soluble dans un corps gras. Par contre,
les substances lipophiles sont insolubles dans les solvants polaires comme l'eau

• Faciles à absorber par l’organisme

• Difficiles à excréter
• Peu métabolisables
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Bioaccumulation: ex du DDT

X 10

X 10 000
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Hickey, 1968 - Peakall, 1970 - Ratcliffe, 1970

Le DDT était en partie responsable du déclin sévère des

populations européennes et nord-américaines d'espèces
d’oiseaux piscivores, à travers un amincissement de la coquille
des œufs:

Consommation de proies contaminées

Amincissement de la coquille des
œufs / casse
Diminution du succès
reproducteur
Effet délétère sur les
populations

85
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Bioaccumulation: ex du DDT

Bioconcentratio
n
Accumulation du polluant à
partir du milieu ambiant
Concentration dans ou l’Homme
FC
Concentration dans l’eau
l’organisme
=

X 10
Biomagnificatio
nAccumulation du polluant
dans un prédateur à partir de
sa proie
Fm Concentration dans le
prédateur
Concentration dans la proie
=
X 10

Bioaccumulation = X 10 000
bioconcentration
+ biomagnification
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Bioaccumulation: ex du mercure
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Bioaccumulation: ex du mercure

Importante variabilité entre groupes

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres Indices
Biomarqueur Bioindicateu
physico- biocénotiqu
s rs
chimiques es
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres
physico-
chimiques
• Concentrations
des substances
chimiques,
métaux…
• O2 – Demande
Biologique en
Oxygène
• …
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres
Biomarqueur
physico-
s
chimiques

Concentrations
O2 - DBO

Définition:

Changement observable et mesurable au niveau

moléculaire, biochimique, cellulaire,
physiologique ou comportemental qui révèle une
exposition présente ou passée d’un individu à au
moins une substance chimique à caractère
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres
Biomarqueur
physico-
s
chimiques

Concentrations
O2 - DBO Marqueurs
biochimiques,
cytologiques et
physiologiques

Niveau individu
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Exemple de biomarqueur
écotoxicologique: « AChE »

Acétylcholine (ACh): messager chimique qui

transmet des signaux entre les nerfs et les muscles
Acétylcholine estérase (AChE): enzyme qui
décompose le neurotransmetteur
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

Acétylcholine (ACh): messager chimique qui

transmet des signaux entre les nerfs et les muscles
Acétylcholine estérase (AChE): enzyme qui
décompose le neurotransmetteur

insecticides
(organophosphorés
, carbamates),
herbicides =
inhibiteurs de
l’enzyme AChE

Flux nerveux
continu
Troubles
neurologiques
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

Le glyphosate = herbicide

• Le glyphosate agit en bloquant la chaîne de synthèse des

précurseurs d’acides aminés essentiels pour le fonctionnement
de la plante, notamment pour la photosynthèse.

• Cet herbicide à la propriété d’être total (il agit sur un mécanisme

que tous les végétaux possèdent pour fonctionner) et
systémique (il peut se déplacer dans la totalité du système de la
plante, des tissus, jusqu’aux racines).
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

Le glyphosate = herbicide

• Produit uniquement par Monsanto dans un premier temps, sous

le nom commercial de Roundup, il est depuis 2000 tombé dans
le domaine public. Il est désormais fabriqué et commercialisé par
un grand nombre de sociétés

• En matière d'usages non agricoles, l'utilisation du glyphosate par

les collectivités dans les espaces ouverts au public est interdite
en France depuis le 1er janvier 2017
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « AChE »

Tilapia du Nil
 6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

Comportement de nage

Perte d’équilibre

Fonctions respiratoires

Pigmentations
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

Histologie – accumulation de cellules sanguines

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Biomarqueur
écotoxicologique « ACHE »

umol/min/mg prtoein
Activité enzymatique

Diminution de l’activité
enzymatique dans le foie
(liver) = inhibition de
l’enzyme par le glyphosate

Activité enzymatique = biomarqueur écotoxicologique d’exposition au glyphosate

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

La vitellogénine:

• Le vitellus constitue les réserves énergétiques utilisées par les embryons durant
le développement embryonnaire. Il est produit par l'organisme maternel et
s'accumule dans l'ovocyte au cours de l'ovogenèse

• Chez les vertébrés, ce sont les œstrogènes qui déclenchent dans le foie la
production de vitellus sous forme d'une lipoprotéine : la vitellogénine
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

La vitellogénine – biomarqueur d’exposition aux perturbateurs endocriniens

Perturbateur endocrinien = molécule ou agent chimique ayant des propriétés

hormono-mimétiques et décrit comme cause d'anomalies physiologiques,
notamment reproductives
Les plus problématiques:
•Le Bisphénol A (BPA) – plastiques alimentaires
•Les phtalates – PVC adhésifs, tuyaux, rideaux de douche, cosmétiques, jouets …
•Les parabènes - conservateur (antimicrobien et antifongique)
essentiellement utilisé dans les cosmétiques, gels douches..
•Les alkylphénols - les produits de nettoyage, les cosmétiques
•L'hydroxyanisol butylé (BHA) et le butylhydroxytoluène (BHT) - additif alimentaire,
produits d'hygiène
•Les ignifuges bromés (PBDE) - retardateur de flamme (meubles, electroniques..)
•Le plomb, mercure, cadmium…
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

La vitellogénine – biomarqueur de perturbateurs endocriniens

Perturbateur endocrinien = molécule ou agent chimique ayant des propriétés

hormono-mimétiques et décrit comme cause d'anomalies physiologiques,
notamment reproductives

STEP
Goujon Gobio gobio
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

La vitellogénine – biomarqueur de perturbateurs endocriniens

Perturbateur endocrinien = molécule ou agent chimique ayant des propriétés

hormono-mimétiques et décrit comme cause d'anomalies physiologiques,
notamment reproductives
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

Coupe histologique d’une gonade mâle de goujon (Gobio gobio) échantillonné

en aval de la zone d’étude et présentant un phénomène d’intersexualité
sévère. M indique le tissu testiculaire (mâle) et F indique le tissu ovocytaire
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur

écotoxicologique: la
vitellogénine

Vitellogénine = biomarqueur
écotoxicologique de la feminisation
des mâles

Imposex= masculinisation des

organes de reproduction femelles ou
féminisation des organes mâles

Coupe histologique d’une gonade de goujon (Gobio gobio) échantillonné en aval

de la zone d’étude et présentant un phénomène d’intersexualité sévère.
M indique le tissu testiculaire (mâle) et F indique le tissu ovocytaire (femelle)
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Autre exemple de biomarqueur Imposex= masculinisation des

écotoxicologique: la organes de reproduction femelles ou
vitellogénine féminisation des organes mâles

Vitellogénine = biomarqueur
feminisation des mâles

STEP
Modification du sex ratio -> effet sur la reproduction de la populati
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres
Biomarqueur Bioindicateu
physico-
s rs
chimiques

Concentrations
O2 - DBO Marqueurs
biochimiques,
cytologiques et Espèces
physiologiques indicatrices
Présence/absence
ou abondance
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale
Enjeux de
développement
Paramètres recherche en milieu
Biomarqueur Bioindicateu marin, et encore plus
physico-
s rs en milieu tropical
chimiques

Concentrations
O2 - DBO Marqueurs
biochimiques,
cytologiques et Espèces
physiologiques indicatrices
Présence/absence
ou abondance
Ex: des lichens bioindicateurs de la pollution atmosphérique en
dioxyde de soufre (SO2) provenant essentiellement de l’activité
humaine (pluie acides)

Xanthoria parietina ,acidophile et tolérante au soufre, ne disparait

6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres Indices
Biomarqueur Bioindicateu
physico- biocénotiqu
s rs
chimiques es
Concentrations
O2 - DBO Marqueurs
biochimiques,
cytologiques et Espèces
physiologiques indicatrices
Présence/absence
ou abondance
Indices de
diversité
fonctionnelle et
de richesse
spécifique
6 – APPROCHES METHODOLOGIQUES

Types de paramètres mesurables en évaluation

environnementale

Paramètres Indices
Biomarqueur Bioindicateu
physico- biocénotiqu
s rs
chimiques es
Concentrations
O2 - DBO Marqueurs
biochimiques,
cytologiques et
physiologiques

Indices de
diversité
fonctionnelle et
de richesse
spécifique