REPUBLIC OF CAMEROON
REPUBLIQUE DU CAMEROUN
Peace – Work – Fatherland
Paix – Travail – Patrie
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UNIVERSITY OFDSCHANG
UNIVERSITE DE DSCHANG
Scholae Thesaurus Dschangensis Ibi Cordum
Scholae Thesaurus Dschangensis Ibi Cordum
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POST-DOCTORAL SCHOOL
ECOLE DOCTORALE
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INTERPRETATION DES
TESTS D’EMMEL ET
ELCTROPHORESE DE
L’HEMOGLOBINE
PLAN
I. But
II. Indication
III. Conditions de Prélèvement
IV. Principe , Matériels et Méthodes
V. Résultats et Interprétation
VI. Confrontation clinico-biologique
[Link] complémentaires
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Membres du groupe 5
1. AMIRA NDAM SANDRA KHADIJ CM-UDS-22MSP0257
2. GUEMKAM TAGNI Giresse Wilfried CM-UDS-19MSP0
3. FOTSING PANKA GILLIAN LENAIC CM-UDS-19MSP0160
4. FOUEYEM YONTI Mégane Daina CM-UDS-19MSP0
5. KODANGBE BRAY CM-UDS-22MS
6. KOUDOUM PATRICE LANDRY CM-UDS-18MSP0141
7. KOUOGOUE FOBASSO Cunegonde -UDs-22MSP0243
8. NGUEGANG VIRGILE ROCHNELL CM-UDS-18MSP0039
9. SALEH HAMID MOUSSA CM-UDS-22MSP
TESTS D’EMMEL
BUT INDICATION ECHANTILLON
Depister la presence En cas d’anémie
Sang veineux dans un
l'hémoglobine
sévère
drépanocytaire S
tube EDTA
dans les hématies.
Suspicion de
Drépanocytose
PRINCIPE
■ L’hemoglobine S a tendance à precipiter lorsque l’oxygène du milieu
diminue, augmentant ainsi la falciformation des hematies en presence
d’agents reducteurs comme le metabisulfite (test d’Emmel avec
Metabisulfite), ou les bactéries dans les selles (test d’Emmel avec les
selles).
■ Il peut aussi se faire en diminuant la quantité d’oxygène dans le milieu en
scellant la suspension de sang sur une lame recouverte d’une lamelle
avec du vernis a ongle ou paraffine (test d’Emmel sans metabisulfite).
VARIANTES DE TESTS D’EMMELS
Trois (3) possibilités : avec ou sans réactif au métabisulfite ou avec
suspension de selles :
Avec métabisulfite (substance réductrice) : plus rapide, plus
fiable mais nécessitant ce réactif,
Sans métabisulfite, avec du vernis à ongle : plus lente, moins
fiable (faux négatifs) mais moins chère.
Avec une suspension de selles
MATERIELS
Dans tous les cas Avec métabisulfite Sans métabisulfite Avec les selles
Metabisulfite de
lame et Vernis a ongle
Sodium Suspension de
lamelle ou
(S2O5Na2) à 2 % selles
Microscope (2 grammes pour Eau peptonée
1 00 ml) dans Parafine
Eau l’eau.
physiologique
PRÉLÈVEMENT
Soit sang prélevé sur EDTA depuis moins de 2 heures;
Soit sang capillaire du bout du doigt (talon chez le nourrisson)
mais, de préférence, mettre un garrot 4 à 5 minutes à la base du
doigt avant de piquer : ceci diminue la pO2 veineuse et donc
augmente la falciformation.
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PROCEDURE AVEC METABISULFITE
1. Mettre une très petite goutte de sang (environ 5 µl) sur une
lame, juste à côté ou au dessus, mettre une goutte environ 4
fois plus grosse (environ 20 µl) de metabisulfite [2%].
2. Mélanger rapidement mais soigneusement.
3. Aspirer environ la moitié du liquide
4. Couvrir rapidement d’une lamelle sans faire de bulles d’air.
5. Laisser reposer 30 minutes dans une petite chambre humide
Rechercher la falciformation au microscope à l’objectif 40X.
INTERPRETATION AVEC METABISULFITE
Si le résultat est négatif (Absence d’hematies falciformes),
examiner de nouveau 2 h plus tard.
S’il est encore négatif, de préférence luter la lamelle avec du
vernis à ongle, conserver en chambre humide puis examiner 24 h
plus tard.
PROCEDURE SANS METABISULFITE
1. Mettre une très petite goutte de sang (environ 5 µl) sur une lame et mettre une
goutte environ 4 fois plus grosse (environ 20 µl) de sérum physiologique;
2. Mélanger rapidement mais soigneusement.
3. Aspirer environ la moitié du liquide à l'aide d'un papier absorbant
4. Couvrir rapidement d’une lamelle sans faire aucune bulle d’air.
5. Recouvrir les 4 bords de la lamelle de vernis à ongles pour que l’oxygène ne
puisse absolument pas pénétrer.
6. Observer au microscope objectif 40X à 1 heure puis, si on n’a pas vu
d’hématies falciformes, à nouveau à 2h, 6h et 24 heures.
INTERPRETATION SANS METABISULFITE
Dans tous les cas, si vous ne voyez pas d’hématies falciformes d’emblée, observer
plusieurs zones car la falciformation est progressive et n’est pas homogène.
Le test est négatif si les hématies conservent leur forme ronde.
Le test est positif si les hématies prennent progressivement une forme de faucille, de
feuilles de houx, de banane aux extrémités pointues, souvent dentelée.
Le test est positif pour le portage du trait drépanocytaire si quelques hématies sont en
faucille (et qu’il n’y a pas de signes cliniques).
Un sujet sain possède moins de 1 % de cellules falciformes.
PROCEDURE AVEC LES SELLES
Mettre en suspension dans un tube un petit poids de selles
dans environ 5 ml d’eau peptonée ou autre bouillon de
culture ou, même, de sérum physiologique.
Centrifuger à environ 2 000 tours par minute (pour un rotor
de 20-25 cm) pendant 2 à 3 minutes (centrifugation
destinée à éliminer les matières fécales mais sans
sédimenter toutes les bactéries).
Utiliser le surnageant comme si c’était une solution
14 de
OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Figure 1: Hématies falciformes après coloration avec le
metabisulfite
ELECTROPHORES
E MANUELLE DE
L’HEMOGLOBINE
BUT INDICATION
Examen qualitatif qui permet Dépistage systématique d’une
déterminer le phenotype de hémoglobinopathie
l’hémoglobine d’une personne
et de déceler des anomalies anémie, microcytose, polyglobulie,
de forme l’hémoglobine érythroblastose, anomalie morphologique
des globules rouges, lithiase vésiculaire…
Lors des examen prenuptiaux
PRINCIPE
■ Elle sépare les molécules
d’hémoglobine chargés au
travers d’un papier d’acétate
sous l’effet d’un champ
A
B électrique.
■ Les hémoglobines A migrent
plus vite que l’hémoglobine S
vers l’anode.
MATERIELS
■ Bande d’acétate de cellulose,
■ Peigne applicateur,
■ Solution tampon
■ Tube à hémolyse
■ Embouts
■ Micropipette
■ La cuve d’électrophorèse
PROCEDURE
■ Préparation des bandes : Tremper la membrane
de nitrocellulose dans le tampon pendant une
heure
■ Dépôt des échantillons : il se fait en formant un
trait fin linéaire perpendiculaire au plan de
migration électrophorétique sans toucher les
bords de la bande. On applique à l’aide d’un
peigne applicateur le sang control AS et le sang
du patient en notant leurs positions respectives
■ Poser la bande sur la cloison
transversale de sorte que les
extrémités soient en contact avec le
tampon et parallèlement à la
cloison. L’extrémité de la bande sur
lequel le dépôt a lieu doit
correspondre à l’électrode (–) de
couleur noir soit du côté gauche de
la cuve.
■ Mettre le générateur en marche et
le régler à une tension de 200 Volts
pendant 60-90 minutes
AS
AS
AS
ELECTROPHORESE DE
L’HEMOGLOBINE
AUTOMATIQUE
BUT INDICATION
Examen quantitatif qui sert à Suivis pré- et post-transfusionnels des
détecter les anomalies de patients porteurs d’une
forme et de concentration de
l'hémoglobine. hémoglobinopathie
Dépistage systématique d’une
hémoglobinopathie
anémie, microcytose, polyglobulie,
érythroblastose, anomalie morphologique
des globules rouges, lithiase vésiculaire…
PRINCIPE
■ Cette technique est basée
sur une séparation
électrocinétique qui est
caractérisée par l’interface
solide-liquide entre la paroi
du capillaire en silice et
l’électrolyte qui le remplit
MATERIELS
■ Tampon basique ( ph=9,4)
■ Solution hémolysante ( pour dilution et hémolyse des hématies)
■ Solution de lavage
■ Cupule des réactifs
■ Filtres, pour filtration du tampon, de la solution de lavage et de l’eau
distillée ou déminéralisée
■ Etiquettes code-barres pour identification
■
PROCEDURE (1/)
■ Tout d’abord, les tubes primaires contenant les culots globulaires
préparés précédemment sont placés sur le carrousel en positions 1 à
26.
■ Un tube à hémolyse contenant de la solution hémolysante est placé en
position 27.
■ La position 28 est destinée à recevoir le tube contenant le contrôle Hb
A2 Normal, utilisé comme contrôle de migration
■ Après la mise en place du carrousel dans le système Minicap®,
l’automate procède à la lecture des codesbarres des tubes primaires
échantillons et du carrousel.
PROCEDURE (1/)
■ Les échantillons sont ensuite hémolysés et dilués par la solution
hémolysante dans les cupules réactif, , avec rinçage de l’aiguille de
prélèvement entre chaque dilution.
■ Les différentes fractions d’hémoglobine migrent alors dans les capillaires en
milieu basique (pH 9,4), permettant leur séparation et leur détection
directe à la cathode.
■ La migration, qui dure environ 8 minutes, se fait à voltage constant élevé et
à température régulée par effet Peltier.
■ La lecture des différents pics d’hémoglobine est réalisée à 415 nm,
correspondant à la longueur d’onde d’absorption maximale de
l’hémoglobine.
INTERPRETATION DES RESULTATS
