MARINE
Une technique d'analyse est une méthode ou un ensemble de
méthodes systématiques utilisées pour examiner,
comprendre et interpréter des données, des phénomènes ou
des situations. Elle permet de décomposer un problème
complexe en éléments plus simples afin d'en tirer des
conclusions, de résoudre des problèmes ou de prendre des
décisions éclairées. Parmi ces techniques, on trouve la
chromatographie qui sert à séparé les composants d'un
mélange complexe.
La définition de la chromatographie :
La chromatographie: est une technique analytique utilisée
pour identifier ou quantifier les composants d'un mélange
complexe, en fonction de leurs propriétés physico-chimiques,
comme leur taille, leur poids moléculaire. Elle repose sur la
distribution des composants entre deux phases:
Phase stationnaire: un matériau fixe qui retient les
substances
, ou bien est une phase fixe soit sur la surface intérieure
d'une colonne soit sur une surface plane. 1)- principe :
Le principe repose sur l'équilibre de concentration des
composés présents entre deux phases en contact: la phase
stationnaire (emprisonné dans la colonne) et la phase mobile
qui se déplace. La séparation est basée sur l'entraînement
différentiel des constituants présents dans la colonne. Plus
une espèce chimique est soluble dans l 'eluant et moins elle
est adsorbée par la phase fixe, plus elle est rapidement
entraînée par l'eluant et plus elle migre haut.Phase mobile:
un fluide (liquide ou gaz) qui transporte les substances à
travers la phase stationnaire. La phase mobile ne doit pas
interagir avec la phase stationnaire, mais uniquement avec
les analytes.
2)- application: La chromatographie peut être analytique
(visant à l'identification des substances présentes) ou
préparative (visant à la séparation des constituants d'un
mélange). La chromatographie analytique est largement
utilisée à l'échelle du laboratoire, en chimie organique.La
chromatographie préparative est rarement utilisée sur de
X : Substance à analyser
A et B Especes chimiques purs,
de référence
■■ Couvercle
Front de I eluant
IMM
Support fae : Phase stationnaire
i Papier ou Plaque de silice)
Cuve chromatographtque
becher
Ligne de depot
tluant : Phase mobile (Solvant)
Chromatographie sur couche mince CCM a chtoukapbysique
2))-classification des méthodes chromatografiques:
Il existe plusieurs variantes de techniques
chromatografiques, classée de plusieurs manières
différentes:
- selon la nature physique des phases (mobile et
stationnaire).
- selon le principe des interactions entre soluté et phase
stationnaire.
- selon le mode d'immobilisation de la phase stationnaire
et les modalités de migration de la phase mobile.
_ Classification selon la nature physique des phases:
exemple d'une chromatographie sur couche mince ( CCM );
est une technique simple et polyvalente utilisée pour
séparer, identifier et parfois quantifier des composants d'un
mélange. Cette technique est largement appliquée dans
plusieurs domaines grâce à sa facilité d'utilisation et à son
faible coût . 3)- la révélation:
Mode opératoire
L'exemple ci-dessous montre les différentes étapes de la
procédure pour la préparation, l'élution et la révélation de
plaques de CCM pendant le suivi de l'avancement d'une
réaction chimique. On considère que la phase stationnaire
est un gel de silice standard comportant un indicateur
fluorescent.
Chaque trait est à écrire au crayon à papier, car les encres
des plumes ou des stylos sont solubles dans la plupart des
éluants, donc fausseraient la chromatographie.
On trace un trait horizontal (la ligne de base) à environ 1 cm
du bas de la plaque de CCM. Les marques D, B et M
représentent respectivement le produit de Départ, le brut
réactionnel et le point Mixte (un mélange de D et B). Le point
mixte permet de mieux visualiser les taches lorsqu'elles sont
très proches ou lorsque l'étape d'élution est imparfaite.
On dépose, à l'aide d'un capillaire ou d'une microseringue,
une petite quantité d'une solution du produit de départ sur
les marques D et M et une petite quantité du brut
réactionnel sur les marques B et M. Dans cet exemple, le
produit de départ est incolore (cercle en pointillé) alors que
le brut réactionnel est légèrement coloré.
On prépare à côté, un éluant qui recouvrira le fond de la
cuve sur environ 5 mm de hauteur, et on laisse saturer la
cuve. (C'est-à-dire : laisser la cuve fermée et laisser les
vapeurs de l'éluant 'remplir' le volume de la cuve, environ
5-10 min).
On place la plaque de CCM dans la cuve contenant l'éluant.
Le solvant monte le long de la plaque par capillarité.
Lorsqu'il arrive presque en haut de la plaque, on sort celle-ci
de la cuve, on marque la ligne de front (là où l'éluant s'est
arrêté de migrer) et on laisse l'éluant s'évaporer. Ici, on ne
voit que les taches 3 et 5 puisque les autres sont
incolores. On observe que la tache 5 n'a que très
légèrement migré au-dessus de la ligne de base.
Pour visualiser les différentes taches, on commence par
placer la plaque sous une lampe UV à 254 nm. La plaque
apparaît en vert fluorescent et les produits qui absorbent les
UV apparaissent sous forme de taches sombres. On utilise
cette méthode de détection en priorité car elle
n'endommage pas la plaque. Dans cet exemple, on voit que
le brut réactionnel contient encore du produit de départ
(tache 4) mais la taille de la tache indique qu'il y en a moins
qu'en début de réaction. On observe la formation d'au moins
trois nouveaux produits (1,2 et 5) : 1 et 2 sont moins
polaires que le produit de départ, et 5 est plus polaire. Il
semble que le produit 5 est majoritaire dans le brut
réactionnel (le produit 2 est beaucoup moins visible) mais
tous les produits ne révèlent pas avec la même intensité aux
On plonge la plaque dans une solution acide de vanilline (il
UV.
existe de nombreux autres révélateurs) et l'on chauffe la
plaque jusqu'à ce que des taches colorées apparaissent. Ici
on observe un autre produit (3) qui n'était pas visible aux
UV. La tache 1 est à peine visible ; elle l'était beaucoup plus
sous lampe UV. La surprise vient de la tache 2 : elle n'était
que faiblement visible en UV mais elle révèle très
intensément avec la vanilline. Il est fort possible que ce soit
le produit majoritaire de la réaction et non le produit 5
comme le laissait supposer la détection UV.
- deux types de méthodes peuvent être utilisés:
-la révélation au UV:
Si la plaque comporte un révélateur UV, soumise à des
rayons UV devien fluorescente: une espèce incolore
absorbant les rayons UV donne alors une tâche sombre
sur un fond clair.
Principe: certains composés absorbent la lumière UV. Une
plaque de CCM contenant un indicateur fluorescent (comme
le sulfate de zinc ou le dioxyde de silicium imprégné) brille
sous une lampe UV.
-la révélation chimique:
- principe : des réactifs chimiques sont vaporisés ou
appliqués sur la plaque pour provoquer une réaction colorée
avec les composés.
• Une espèce chimique peut être caractérisée par son
rapport frontal qui définit par la relation suivante :
Rf= h/H
h: est la hauteur atteinte par la tâche correspondant à la
l'espèce.
H: est la hauteur atteinte par le front du solvant.
3))- les critères de choix du type de la chromatographie :
1)- les étapes pour choisir le bon type de chromatographie :
A)-a)selon la nature des composés à séparer (polarité des
molécules): ☆composés polaires
☆ composés non polaires b) charge des molécules :
☆ molécules chargées (ions)
☆ molécules neutres
c) poids moléculaire :
☆ grandes molécules
☆ petites molécules
B) l'état de l'échantillon :
☆ échantillons liquides
☆ échantillons volatils
☆ échantillons solides
C) but de l'expérience :
☆ analyse qualitative
☆ analyse quantitative
☆ purification
D) temps et coût :
☆ temps limité
☆ budget restreint
4))- le rôle de la chromatographie :
☆ séparation : isoler les composants d’un mélange en
fonction de leurs propriétés physico-chimiques.
☆ identification : reconnaître et caractériser les substances
présentes dans un mélange.
☆ quantification : déterminer la concentration ou la
quantité de chaque composant.
☆ étude des propriétés chimiques : la chromatographie
peut également fournir des informations sur les propriétés
chimiques des substances, comme leur polarité, leur taille,
leur charge, ou leur capacité à interagir avec d’autres
molécules.
Conclusion :
La chromatographie est une méthode puissante et
polyvalente de séparation et d'analyse des composés dans un
mélange. Elle offre une grande précision, sensibilité et
sélectivité, ce qui en fait une technique indispensable dans
de nombreux domaines scientifiques et industriels. Grâce à
ses différentes variantes et applications, la chromatographie
permet de résoudre une grande variété de problèmes
analytiques et répondre à des besoins spécifiques en matière
de purification et de caractérisation des composés.
