TECHNIQUES D’EXPLORATION
EN IMMUNO-HEMATOLOGIE
PLAN
INTRODUCTION
I- GENERALITES
II- BILAN
III- RESUME
CONCLUSION
OBJECTIFS
1- Citer trois causes de non conformité de prescription
médicale
2- Expliquer les règles de transfusion sanguine
3- Identifier les trois principaux causes d’erreurs de
groupage sanguin
4- Interpréter le résultats de groupage sanguin
INTRODUCTION
La transfusion sanguine = acte thérapeutique de substitution
de produits sanguins dans le but sauver des vies humaines.
Cependant des risques potentiels de complications immédiates
ou tardives existent , d’où la nécessité d’une transfusion
sécurisée
I GENERALITES
I-1 définition
Les techniques d’exploration immuno-
hématologiques sont des examens biologiques
permettant de découvrir les incompatibilités
immunologiques dans les systèmes sanguins entre
un donneur et un receveur, d’éviter la transmission
d’agents pathogènes afin d’assurer une transfusion
sécurisée
I-2 Intérêt
Épidémiologique
TS est un acte de plus en plus effectué
Diagnostique:
Identifier les différents groupes sanguins et leurs
incompatibilités
Thérapeutique
Sauver des vies humaines
I-3 Rappels
Cellules sanguines (GR, GB, Thrombocytes)
Membrane cellulaire porte des déterminants antigéniques
(génétiquement déterminés) forment les systèmes sanguins
Trois systèmes = importants en clinique humaine
Système ABO
Système Rhésus (Rh)
Système HLA (Human Leucocyt Antigen) ou CMH
( Complexe Majeur d’Histocompatibilité)
Système ABO = 4 groupes standards
Groupe A
Groupe B
Groupe AB
Groupe O
Système Rhésus = Dd, Cc, Ee
Fortement impliqué dans les complications en
transfusion
Les antigènes de ces systèmes sont reconnus par des
anticorps (AC)
AC naturels réguliers
-Capables d’agglutiner (4 et 370C)
-Responsables d’accidents transfusionnels
-Classe: IgM
AC immuns irréguliers
-Transitoires
-Classe: IgG,
-Capables d’hémolyser à 370C
-Responsables d’accidents transfusionnels
II- LES TECHNIQUES
II-1 Matériel utilisé
Tubes à hémolyse en verre ou plastique: nécessaire à la
décantation du serum, les dilutions et les réactions
d’agglutination
Lames porte objet propres et dégraissées
Pipettes pasteur
Rhésuscope en verre dépoli ou une plaque d’opaline
chauffée entre 45 -50°C
Bain marie thermostaté à 37°C
II-2 Informations utiles
sur les échantillons
Conditionnement des échantillons : tube primaire (tube
EDTA et tube sec)
Erreurs possibles d’identification des tubes: sinon rejet
(non-conformité)
Température de transport: ambiante (délai court) ou 2 –
8°C (délai long)
Sur la feuille de prescription médicale
Nom et prénom, date de naissance du patient (concordance
avec l’identité sur le tube de prélèvement)
Renseignements cliniques et/ou biologiques
(informations pertinentes pouvant influencer les résultats)
Exemple: ATCD de transfusion, Notion d’hémolyse, contexte
Notion d’urgence à signaler
II-3 Détermination du groupe ABO
Technique automatisée ou technique manuelle
Règle de 2X2 avec une détermination globulaire et une
détermination sérique = groupage sanguin
Technique de Beth Vincent
En tube ou en plaque
Mélanger une goutte de suspension d’hématies à 5% du
patient dans une goutte de sérum test anti A, sérum anti B,
et sérum anti AB pendant 1 à 2 minutes.
lecture
Lecture du Beth Vincent
Anti A Anti B Anti AB Groupe
+ - + A
- + + B
+ + + AB
- - - O
Anti A Anti B Anti AB
Beth Vincent
Témoin
Technique de Simonin
En tube ou en plaque
Ajouter une goutte de sérum du patient dans une goutte
d’hématies tests A, B et mélanger pendant 1 à 2 minutes.
Lecture
Lecture du Simonin
GR A GR B Groupe
- + A
+ - B
- - AB
+ + O
II-4 Détermination du phénotype Rhésus standard
Technique automatisée ou technique manuelle
En tube ou en plaque
Mélanger une goutte de sérum anti D et une goutte de GR à 5%
du patient
Faire un témoin positif et un témoin négatif
Lecture
Agglutination : Rhésus positif (Rh + ou D+)
Pas d’agglutination : Rhésus négatif (Rh- ou d)
Autres antigènes du système Rhésus
En tube ou en plaque
Mélanger une goutte de sérum test anti C, anti c, anti E et
anti e et anti KELL et une goutte de GR à 5% du patient
Lecture
Agglutination: Réaction positive pour l’Ag concerné
Pas d’agglutination: Réaction négative pour l’Ag concerné
Recherche du Du
Du est un antigène dominant vis-à-vis de l’antigène d
Indications de sa recherche
Femme enceinte
Enfant
Jeune fille
II-5 Règles de compatibilité
Globules rouges
A
O AB
Plasma
A
O AB
B
II-6 Recherche d’anticorps irréguliers (RAI)
Rechercher la présence d’un allo-anticorps dangereux
Avant et après transfusion
Validité 3 jours
RAI en trois étapes
Étape 1: dépistage
Sérum du patient en présence de 3 types d’hématies tests
Étape 2: identification de l’anticorps
Sérum du patient en présence de panel d’hématies test
possédant les Ag
Étape 3: titrage de l’anticorps
Dilution croissante du sérum du patient en présence de l’Ag
d’intérêt
Titre = inverse de dilution la plus grande donnant un
résultat positif
Exemple : dilution 1/16 positive
Titre = 16 UI
II-7 Test de COOMBS
Présence d’AC non agglutinant du patient est révélé par
l’antiglobuline
Test de COOMBS direct (TCD)
Détecte les AC fixés sur les GR sensibilisés
Lavage de GR du patients 3 fois
1 goutte des GR lavés + 1 goutte d’antiglobuline
si agglutination présence d’AC fixés sur les GR
Pas d’agglutination Absence d’AC fixés sur les GR
Test de COOMBS Indirect (TDI)
Recherche des AC solubles libres dans le sérum du patient
Première étape = Sensibilisation
Incuber à 37°C des hématies O positif avec le serum du patient
Deuxième étape = révélation
Laver 3 fois les hématies incubées
Même procédure que TCD
si agglutination : présence d’AC libre dans le sérum
Pas d’agglutination: Absence d’AC libre dans le sérum
II-8 Epreuve de Compatibilité au Laboratoire
Principe:
Rechercher la présence d’un allo-anticorps chez le patient
ou le donneur
NB= Obligatoire avant transfusion
Réalisation pratique
Sérum du patient + GR donneur
Sérum donneur + GR patient
Si agglutination : donneur incompatible
Si pas d’agglutination: donneur compatible
II-9 Contrôle prétransfusionnel Ultime (CPU)
Vérifier la compatibilité (résultat du laboratoire)
Au lit du malade (rattraper les erreurs)
Obligatoire avant transfusion
Sang du patient + GR donneur
Si agglutination : donneur incompatible
Si pas d’agglutination: donneur compatible
III-RESUME
Les systèmes sanguins constitués par antigènes et anticorps
Avant toute transfusion
Respecter impérativement les règles de compatibilité
Compatibilité au laboratoire obligatoire
CPU obligatoire
RAI avant et après transfusion
Test de COOMBS
CONCLUSION
Le respect des règles de transfusion et les examens
immuno-hématologiques Permettent de faire une
transfusion sécurisée avec des produits sanguins
compatibles
MERCI
