République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche

Scientifique
Ecole Supérieure d’Agronomie – Mostaganem
Département 2ème Cycle

Cours de CIV
4ème année Production Végétale et Protection des végétaux

Présenté par :
Dr. KOUADRIA R.

2024 - 2025
 Chapitre I: Introduction à la culture in vitro
Introduction Biotechnologies Végétales

• Sont des techniques ou` le matériel végétal constitue la matière première,

• Elles permettent l’amélioration et la production des plantes en masse,

Parmi les méthodes de BV, on peut citer les méthodes basées sur la culture in vitro CIV;
permettant de:
1. Augmenter la production végétale,
2. Améliorer la production végétale tout en l’adaptant à divers environnements,
3. Développer une meilleure résistance aux maladies,
4. Création de nouvelles variétés ou espèces,
 Introduction

- Les biotechnologies peuvent être utilisées dans divers domaines:

Biotechnologies Vertes: utilisées en Agronomie.

Biotechnologies Rouges: appliquées en Médecine.

Biotechnologies Bleues: appliquées dans la Mer.

Biotechnologies Blanches: appliquées dans le domaines d’Industrie.

Biotechnologies Jaunes: concernent l’environnement.

Introduction
Culture in vitro

- Sont des cultures

Explants Milieu Conditions

de plantes Synthétique Stériles

Espace
Environnement
Réduit
contrôlé

La CIV est une multiplication végétative asexuée

artificielle.
 Introduction
Propriété des cellules utilisées en CIV

Totipotence

La Totipotence est l’aptitude d’une cellule végétale à exprimer la totalité de ses potentialités
pour donner un organisme entier (une plante entière) en passant par une étape de
dédifférenciation lorsqu’elle est placée dans des conditions appropriées.

Ces cellules possèdent la capacité de régénérer un individu complet génétiquement

identique à la plante mère.
 Introduction
Propriété des cellules utilisées en CIV

Dédifférenciation

La dédifférenciation est la perte des caractéristiques acquises lors de la différenciation ou au

cours du développement (retourner à l’état méristématique).

- C’est un processus cellulaire par lequel les cellules se développent en sens inverse, d’un
stade partiellement ou terminalement différencié vers un stade moins différencié.
- En général, il se traduit par un changement de forme, de profil d’expression génétique, de
profil d’expression protéique et de fonction.
 Introduction
Historique
1902. Découverte de la totipotence des cellules végétale par Haberland: un tissu végétal
est capable de régénérer une plante. Cette propriété qui s’exprime dans la multiplication
végétative naturelle est connue et utilisée depuis longtemps, avec le bouturage par
exemple.
1905. Premières technique de CIV, il s’agit de la technique de multiplication végétative
développée par Morel et Martin sur la pomme de terre.

1930. D’couverte de l’auxine : une hormone végétale.

1950. Découverte de l’existence d’autres hormones de croissance végétale qui contrôlent

la formation des racines (rhizogénèse) et le développement des parties aériennes des
plantes.
- Ces hormones doivent être fournies aux cellules en culture.

De plus, les chercheurs ont déterminé que la CIV nécessite une certaine hygiène, c’est
l’asepsie ou la stérilisation.
 Introduction
Description d’un laboratoire de CIV
Un laboratoire de CIV doit contenir l’équipement et les produits
nécessaire pour la réalisation de toutes les étapes d’une CIV

1 Une salle de préparation des milieux de culture

2 Une salle de transfert

3 Une chambre de culture

 Introduction
Description d’un laboratoire de CIV

1 Salle de préparation des milieux de culture

- Elle contient:
Verrerie – récipients de culture : bocaux ou tubes en verre avec couvercles (afin d’isoler
les cultures de l’environnement extérieur) – produits chimiques – balance – pH mètre –
étuve – autoclave – plaque chauffante – agitateurs - …etc.
 Introduction
Description d’un laboratoire de CIV
2 Salle de transfert

- Elle contient:
Matériel de repiquage : hotte à flux laminaire – loupe binoculaire – pinces et scalpels
 Introduction
Description d’un laboratoire de CIV
2 Salle de transfert

- Hotte à flux laminaire : C’est un appareil qui permet d’effectuer des manipulations en
conditions d’asepsie maximale. Il existe deux types :

1- Hotte à flux laminaire horizontal : L’air est orienté horizontalement vers le

manipulateur. L’air est aspiré par une turbine (un ventilateur) puis il passe par un filtre
avant d’arriver sur la surface de travail. Après passage par filtre, l’air est considéré
comme stérile (Absence de bactéries – levures – spores et poussières). Ce flux d’air
laminaire empêche la contamination des cultures.

2- Hotte à flux laminaire vertical : elle a le même principe que la hotte horizontale,
l’air est orienté verticalement vers le manipulateur.

- Entretien de la hotte : la hotte nécessite une maintenance particulière : changement

annuel du filtre et aspiration de la turbine.
- Avant de manipuler, il faut allumer la hotte une demi-heure ; cela permet d’éliminer la
poussière du filtre et d’éviter les contaminations.
 Horizontal

Vertical
Vertical Horizontal
 Introduction
Description d’un laboratoire de CIV

3 Chambre de culture

équipées d’étagères en bois surmontées de tubes de néon. (Contrôle de : la température –

la photopériode – l’hygrométrie – les conditions d’asepsie).
 Introduction
Conditions d’asepsie
1. Stérilisation de la verrerie et des instruments :
- Effectuée par utilisation de l’autoclave ou de l’étuve.
- La stérilisation des instruments par éthanol puis passage par la flamme est aussi
possible.

2. Stérilisation des milieux de culture :

- Stérilisation des milieux de culture à la vapeur d’eau par autoclavage à 120°C pendant
20min. Pour une stérilisation efficace, il est conseillé de manipuler les milieux de culture
en petite quantités dans plusieurs récipients.
- Les vitamines et les phytohormones sont des substances dites : thermolabiles, elles sont
détruites à des températures élevées ; elle nécessite une stérilisation par filtration en
utilisant des filtres millipores de 22 μm. Après filtration, elles sont ensuite ajoutées au
milieu passé par autoclave.
- On peut ajouter des antibiotiques au milieu de culture pour empêcher toute croissance
bactérienne.
- Comme on peut ajouter des antifongiques pour éviter l’apparition des champignons.
(Les antibiotiques et les antifongiques sont stérilisés par filtration en utilisant un filtre
millipores).
 Introduction
Conditions d’asepsie
3. Stérilisation des explants :
- Pour faciliter leur stérilisation, les explants sont désinfectés avant le découpage par :
a) Ethanol pendant 1min.
b) Hypochlorite de sodium (NaOCl) pendant 10min
c) Trois lavages avec de l’eau distillée stérile.
- Après stérilisation, les explants peuvent être découpés en petits morceaux.

Explants :
a. Définition : est une petite partie ou fragment du plante-mère.
b. Critère de choix de l’explant :
1. L’âge (stade de développement) de la plante-mère : Les plantes jeunes fournissent
les explants les plus réactifs.
2. L’époque de prélèvement : La quantité des phytohormones est plus élevée en
printemps.
3. La localisation de l’explant sur la plante mère : - Explants indifférenciés
(Bourgeons). – Explants constitués de tissus différenciés (Fragments de tige - de
racines - …etc.).
4. La taille de l’explant et sa nourriture : Les explants de petite taille seront
facilement orientés par les substances contenues dans le milieu de culture.
 Introduction
Milieux de culture
Introduction : La réussite de la culture in vitro des tissus végétaux dépend de la
composition chimique des milieux de culture. Le choix de la composition du milieu de
culture est en fonction de plusieurs paramètres, notamment la nature des tissus cultivés
(bourgeon, embryon, méristème,…etc.) et la phase de culture (initiation, multiplication,
élongation ou rhizogenèse).
- Pour obtenir de meilleurs résultats, il faut ajouter aux milieux de cultures de petites
quantités d’acides aminés, des vitamines et des régulateurs de croissance.

Différents types de milieux de culture :

- Différents types de milieux de culture peuvent être utilisés pour la réalisation d’une
culture in vitro. La composition de ces milieux est la même, la différence entre les
différents types de milieux de culture réside dans la concentration des éléments
nutritifs.
- Les milieux milieux de culture portent le nom de leurs auteurs. En effet, on
distingue les milieux de cultures suivants : Heller – Knop – Gamborg – White –
Monnier – Gauthert – Murashige et Skoog (MS).
- Le milieu de culture Murashige et Skoog ou MS est le plus utilisé.
 Introduction
Milieux de culture
Milieux de culture Murashige et Skoog :
- C’est le premier milieu de culture mis au point en 1962.
- Le milieu Murashige et Skoog est le plus largement utilisé car sa composition convient
à un très grand nombre de plantes. C’est un milieu très riche en sels minéraux.

Composition d’un milieu de culture :

a. Les éléments minéraux :

1. Macroéléments : six éléments à des concentrations élevées : azote (N) – Calcium (Ca)
– Potassium (K) – Soufre (S) – Magnésium (Mg) – Phosphore (P).
2. Microéléments (oligoéléments) : Pour une activité métabolique appropriée ; les
plantes ont besoin d’oligoéléments. On trouve principalement : Fer (Fe) – Cuivre (Cu) –
Zinc (Zn) – Manganèse (Mn) – Bore (B) – Cobalt (Co) – Chlore (Cl) –Nickel (Ni) –
Molybdène (Mo).
- Certains oligoéléments sont liés à l’activité des régulateurs de croissance.
Exemple : Zn-Auxine : le Zinc est lié à la synthèse du tryptophane, précurseur de l’AIA.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

b. Les éléments organiques :

1. Les sucres : l’assimilation chlorophyllienne est nulle ou insuffisante chez les tissus
végétaux placés en culture in vitro, afin d’assurer le développement de l’explant et lui
fournir une source de carbone, il faut ajouter des sucres au milieu de culture. Le
saccharose est le sucre employé universellement (avec une concentration de 20 à 45g/l).
- On peut ajouter aussi : le glucose, le maltose, le raffinose, le fructose, le galactose, le
mannose et le lactose (par ordre d’importance).
2. Les vitamines : elles sont nécessaires en petites quantités pour produire une série de
réactions catalytiques dans le métabolisme. Les vitamines les plus utilisées sont :
Thiamine (Vitamine B1 : la seule vitamine essentielle à la croissance des cellules
végétales) – Acide nicotinique – Pyridoxine (Vitamine B6) – Vitamine E (aide à la
formation des cals provenant des embryons et elle contribue à la viabilité des cellules
dans les cultures en suspension)…etc.
3. Les acides aminés : procurent aux tissus végétaux une source immédiate d’azote à
assimilation plus rapide qu’avec l’azote inorganique fourni par le milieu.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

4. Les régulateurs de croissance : trois groupes de phytohormones sont utilisés en

culture des tissus végétaux : Auxines – Cytokinines – Gibbérellines.
c. L’eau : pour la préparation des différentes solutions, il faut utiliser de l’eau distillée –
bi distillée ou déminéralisée.
d. L’agent solidifiant : c’est l’agar qu’on utilise fréquemment comme support gélosé
pour la préparation des milieux de cultures solides ou semi solides.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

4. Les régulateurs de croissance :

4.1. Définition :
- Appelées aussi « phytohormones » ou « hormones végétales », ce sont des substances
organiques produites les plantes, pour réguler leur croissance et communiquer entre elles.
Ces substances peuvent agir sur la croissance et le développement des tissus végétaux à
des très faibles doses.
- Les phytohormones présentent les propriétés suivantes :
1. Endogène (c'est-à-dire non fournie par l'environnement)
2. Oligodynamique (c'est-à-dire agir à faible dose, de l'ordre de la micromole)
3. Vectrice d'une information (apportée à une cellule cible sélectivement sensible à son
action et dont elle influence le fonctionnement).
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

4. Les régulateurs de croissance :

4.2. Principaux groupes de phytohormones en culture in vitro des plantes :
- Les trois principaux groupes de régulateurs de croissance à usage fréquent en culture in
vitro des plantes sont : les auxines, les cytokinines et les gibbérellines.
a. Auxines :
- La synthèse des auxines s'effectue dans les apex méristématiques des tiges, et dans les
jeunes feuilles des bourgeons terminaux.
- Elles stimulent : 1- L’élongation cellulaire. 2- La rhizogenèse (formation des racines).
Exemples : - AIA : Acide Indole -3- Acetique.
- ANA: Acide Naphtalène Acetique.
- AIB: Acide Indole Butyrique.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

4. Les régulateurs de croissance :

4.2. Principaux groupes de phytohormones en culture in vitro des plantes :
b. Cytokinines :
- Synthétisées au niveau des racines, puis elles migrent vers la plante via la sève brute.
- Elles favorisent : 1- La division cellulaire. 2- La croissance des bourgeons axillaires. 3-
Les cytokinines activent la prolifération cellulaire plus que l’auxine et permettent la
culture des tissus qui ne répondant pas à l’auxine.
Exemples : - Kinétine.
- Zéatine.
- Lait de coco.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :

4. Les régulateurs de croissance :

4.2. Principaux groupes de phytohormones en culture in vitro des plantes :
c. Gibbérellines :
- Produites au niveau des méristèmes, des bourgeons terminaux caulinaire et racinaire,
des jeunes feuilles et au niveau des embryons.
- Elles contribuent à : 1- La levée de dormance des graines et des bourgeons. 2- La
fructification.
Exemple : - Ga3 : acide gibbérellique-3 est le plus utilisé en culture in vitro.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :
4. Les régulateurs de croissance :
4.3. Rôles des auxines et des cytokinines dans l’organogenèse in vitro :
- L’organogenèse in vitro est contrôlée par la balance hormonale des auxines et des
cytokinines. En effet, le rapport auxines/cytokinines détermine le devenu des tissus en
culture.
1. Fortes concentrations d’auxines associées + faibles concentrations des cytokinines :
favorisent la formation de racines sur cal ainsi que l'enracinement des tiges feuillées :
Rhizogenèse.
2. Fortes concentrations de cytokinines + faibles concentrations d’auxines : favorisent
développement des bourgeons axillaires ou adventifs et donc la multiplication des
plantes : Caulogenèse.
3. Concentrations d’Auxines et de Cytokinines équilibrées : prolifération anarchique
(cal) de cellules qui ne peuvent s'organiser en tissus et organes distincts :
Callogenèse.
 Introduction
Milieux de culture
Composition d’un milieu de culture :
4. Les régulateurs de croissance :
4.3. Rôles des auxines et des cytokinines dans l’organogenèse in vitro :
• La Rhizogenèse et la Caulogenèse présentent une organogenèse directe : formation
d’organes directement sur la surface des explants cultivés.
• La Callogenèse est une organogenèse indirecte : formation d’organes végétaux à
partir des tissus de cal provenant d’explants cultivés.
Cal : amas de cellules indifférenciées et totipotentes obtenues par culture in vitro par
réaction naturelle d’une plante suite à une blessure ou une infection.
 Introduction
Milieux de culture
Chapitre II: Techniques de CIV par cellules
somatiques
Introduction
- Les différentes techniques de culture in vitro végétales utilisent la propriété de totipotence
des cellules végétales mise en évidence en 1902 par Haberland : Toute cellule végétale, quel
que soit sa spécialisation possède l’information génétique nécessaire pour reconstituer toutes
les parties d’un végétal.

- L’induction des cultures in vitro peut être réalisée à partir de presque toutes les parties de la
plante.
- Différentes techniques de culture in vitro végétales sont utilisées au laboratoire pour
produire et multiplier des plantes identiques à la plantes mère.
- Dans ce chapitre on va étudier les techniques qui utilisent les cellules somatiques, dont
on peut distinguer : la culture de méristèmes, l'embryogenèse somatique, et la culture de
protoplastes.
Facteurs d’incubation des CIV
- Les CIV sont incubées dans des chambres climatisées qui permettent de stabiliser les
facteurs suivants:

1. Lumière (Intensité/Photopériode): indispensable à certains processus morphogénétiques.

2. Température: réglée à 20-25°C. La T° de la chambre des cultures peut être inférieure à

celle des flacons de culture par 2-4°C à cause de l’éclairage.

3. Humidité relative (Hygrométrie): elle doit être supérieure à 80%.

4. Asepsie (stérilisation): il faut manipuler dans des conditions d’asepsie rigoureuses:

matériel passé à l’alcool ou flambé, désinfection des plantes avec l’eau de javel puis rinçage à
l’eau distillée avant l’extraction de l’explant,
Facteurs de régénération et de croissance
Facteurs Internes
- Les facteurs internes sont liés à la plantes.

1. Effet de l’explant

a. L’âge physiologique de l’organe : les explants les plus jeunes (embryons immatures,
méristèmes, jeunes feuilles) sont les plus idéales pour la réalisation d’une culture in vitro, car
c’est l’état juvénile qui semble offrir le plus des possibilités de régénération.
b. L’époque de prélèvement : on peut distinguer un stade de vie active et un stade de vie
ralentie de la plante, ce qui conduit les explants à développer des réponses différentes en
culture in vitro. Cette modification peut être exprimée par des modifications de l’équilibre
internes des régulateurs de croissance lors des différentes saisons.
c. La taille de l’explant : le prélèvement dépend de la nature de l’explant :
- Tissu végétal de nature organisée : le prélèvement devrait engendrer l’organe en sa totalité
(un nœud, un apex ou un bourgeon entier).
- Tissu végétal différencié : des fragments de 5-10mm suffiront (éléments de feuilles, de tiges,
de racines).
Facteurs de régénération et de croissance
Facteurs Internes
- Liés à la plantes.

2. Effet de génotype

la plupart des plantes montrent une régénération génotypique spécifique liée à l’espèce ; à
l’intérieur d’une même espèce, un génotype donne des bourgeons tandis qu’un autre ne peut
fournir que des embryons.
Facteurs de régénération et de croissance
Facteurs Externes
- Liés à la composition du milieu de culture.

1. Effet du milieu de culture : la composition du milieu de culture doit être adaptée aux
besoins nutritifs de la plante étudiée, afin de laisser s’exprimer pleinement son potentiel
génétique.
- Dans 70% des cultures, le milieu de culture MS est utilisé comme milieu de base pour tous
types de culture in vitro.

2. Effet des régulateurs de croissance : l’organogenèse in vitro est fortement influencée par
les régulateurs de croissance surtout les auxines et les cytokinines.
- En effet, le rapport hormonal auxines/cytokinines conditionne, en grande partie, le type de
néoformation obtenu. Cependant, l’influence de ce rapport n’est pas une règle générale pour
toutes les plantes ; dans certains cas il suffit de modifier la concentration de l’un des
régulateurs de croissance pour parvenir à une réponse morphogénétique.
 Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
,
La culture in vitro est un mode de multiplication végétative artificielle des plantes. En effet,
les techniques de culture in vitro, permettent d'exploiter la diversité des plantes, de faciliter les
croisements interspécifiques, de diminuer la durée de création des variétés et d'obtenir des
plantes saines.
- Parmi ces techniques, on distingue :

1. Culture du méristème : le méristème peut être cultivé in vitro. Cette méthode peut être
utilisée pour l’élimination des virus et pour la propagation clonale

2. Culture d'organes : elle fait référence à la culture in vitro et au maintien de la totalité ou

d'une partie d'un organe.

3. Culture de cellules uniques : C’est une méthode de culture de cellules uniques isolées de
manière aseptique sur un milieu nutritif dans des conditions contrôlées.

4. Culture en suspension : C’est un type de culture dans laquelle des cellules uniques ou de
petits agrégats de cellules se multiplient en suspension dans un milieu liquide agité. Les
cultures en suspension sont utilisées pour l'induction d'embryons et de pousses somatiques, la
production de métabolites secondaires, la mutagenèse in vitro, la sélection de mutants et les
études de transformation génétique.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
5. Culture d'embryons : elle peut être définie comme l'isolement aseptique de l'embryon (à
différents stades de développement) à partir de la majeure partie du tissu maternel d'une graine
ou d'une capsule mature et le mettre en culture in vitro dans des conditions physiques
aseptiques et contrôlées sur un milieu nutritif semi-solide ou liquide.
6. Culture de protoplastes : il s'agit de la culture de protoplastes isolés qui sont des cellules
végétales sans paroi entourées d'une membrane plasmique potentiellement capables de
régénérer la paroi cellulaire, de diviser les cellules, de croître et de régénérer les plantes sur un
milieu approprié dans des conditions aseptiques.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
1. Culture des méristèmes
Introduction
- Les méristèmes sont des cellules indifférenciées, ils sont donc embryonnaires. Ils
conservent la capacité de se diviser lorsqu’ils sont mis en culture, leur capacité de
prolifération et leur potentialité d’organogénèse permettent la formation d’une plante
entière identique génétiquement à la plante mère.
- Les méristèmes assurent la production de tous les autres tissus des plantes ; ils forment de
nouvelles cellules suite à leur forte activité de division.
- La culture des méristèmes a été utilisée pour l’assainissement des plantes telles que: Tabac
- Pomme de terre – Vigne – tomate et autres, …etc.
- Donc, il est indispensable de recourir à la culture des méristèmes pour produire des
plantes saines et indemnes de virus en particulier.
- Les méristèmes sont présents dans les bourgeons à l’extrémité des tiges et des racines, et
qui peuvent se multiplier pour donner naissance à tous les tissus des plantes.
- La culture des méristèmes doit être effectuée par l’utilisation des méristèmes de petite
taille.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
1. Culture des méristèmes
Pourquoi les méristèmes sont de structures indemnes de virus?
- Les méristèmes sont des structures indemnes de virus. Cette propriété a été exploitée par
LIMASSET et CORNUET (1949) qui ont constaté l'absence de virus au niveau des
méristèmes de plantes infectées. Nous remarquons à travers ces différentes observations,
une concentration croissante de virus des parties les plus jeunes vers les parties adultes.
Ceci permet donc de supposer que les limites de la multiplication des virus se situerait au
niveau de la zone sous méristématique, le méristème lui même étant indemne.
- Les raisons de cette répartition est le fait que les méristèmes dans la grande majorité des
cas, soient indemnes de virus, sont encore inexpliqués. Mais on pense généralement que
les cellules en voie de division active posséderaient une certaine immunité et aussi qu'une
compétition s'établirait entre les cellules méristématiques et les virus pour l'utilisation des
métabolites, compétition qui tournerait à l'avantage des cellules méristérnatiques.
- Les études réalisées sur la thérrnothérapie semblent confirmer cette deuxième hypothèse
car une augmentation de la température favoriserait la multiplication des cellules
mérisrématiques tout en diminuant la vitesse de multiplication des virus.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
1. Culture des méristèmes
Principe de la technique
- Elle passe par les étapes suivantes:
1. Désinfecter le méristème par des produits moins agressifs: eau de javel dilué. Le
méristème est protégé par des feuilles et des ébauches foliaires, ce qui facilité sa
désinfection.
2. Après désinfection, la 2ème étape consiste à prélever un méristème de petite taille
0,2mm-0,5mm. C’est une phase délicate, il faut faire attention à ne pas endommager
l’explant. Pour cela, il faut sectionner (couper) les ébauches foliaires et les feuilles sous
une loupe binoculaire à l’aide d’un scalpel.
3. Le méristème isolé est repiqué immédiatement dans le tube renfermant le milieu de
culture nutritif.
- Toute ces opérations doivent être réalisées dans un minimum de temps pour éviter le
dessèchement du méristème et pour réduire le maximum des risques d’infection.
- Après quelques jours, le méristème reprend son activité pour donner naissance à une
plante qui sera multipliée.
- Cette technique peut être associée à la thermothérapie pour favoriser l’élimination des
virus.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
1. Culture des méristèmes
Objectifs de la technique

- On s’orient vers la culture des méristèmes dans les cas suivants:

1. Pour les espèces végétales à propagation végétative dont la probabilité de transmettre
l’infection de la plante mère virosée à la descendance est très grande.
2. Pour les espèces végétales multipliées par semi où le pourcentage de transmission des
virus par semence est élevé.

Avantages de la technique
- La micropropagation par méristème se réalise le plus souvent pour:
• L’étude de fonctionnement de méristème.
• La reconstitution de clones sains à partir des plantes mère contaminées.
• La propagation végétative avec un coefficient de multiplication élevé et plantes
homogènes.
• Le rajeunissement des espèces végétales et l’obtention des plants plus vigoureux.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
1. Culture des méristèmes
Inconvénients de la technique

- Les plantes obtenues sont indemnes de virus, mais ne sont pas devenues résistantes aux
virus: probabilité de contamination des plantes.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
2. Thermothérapie
Principe

- Cette technique permet d’éliminer ou de réduire de façon importante la quantité des virus.
- Elle consiste à maintenir les plantes à des T°C élevées de 30-50°C, pendant une durée
suffisante pour éliminer les virus.
- Elle peut être effectuée par:
1. Trempage des explants dans de l’eau chaude.
2. Désinfection avec vapeur aérée.
3. Placer les explants dans une enceinte fermée d’où le contrôle de la T°, la lumière et
l’humidité.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
2. Thermothérapie
Avantage

- Obtention des plantes saines.

Inconvénient

- Cette technique prend de temps.

- Elle peut engendrer des taux de mortalité élevés aux niveau des plantes qui ne peuvent
supporter de telles températures.
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
3. Embryogénèse somatique
Introduction
- L’embryogénèse somatique est une forme de multiplication végétative qui permet
d’obtenir une multitude de plantules identiques génétiquement à la plante mère donneuse
d’explants.
- C’est l’obtention d’embryons à partir des cellules somatiques, c’est-à-dire non-sexuelles.
- Dans ce cas, une cellule diploïde se dédifférencie de sorte que mise dans un milieu de
culture adéquat, elle se développe en un embryon qui donne, par la suite, une plante
entière.
- Elle peut être directe (le processus commence à partir de l’explant mis en culture) ou
indirecte (le processus commence après le passage par l’intermédiaire du cal).
Différentes techniques de CIV par cellules somatiques
3. Embryogénèse somatique
Introduction