BIOCHIMIE CLINIQUE

POUR : SJHS-L3
PAR : Mme Akanghu Epse Nkwenti
Plan de cours
Module I. Aspects métrologiques et sémiologiques du
laboratoire clinique.
 INTRODUCTION . Concepts : Phases pré-analytiques,
analytiques et post-analytiques du laboratoire clinique.
 MÉTROLOGIE. Valeurs et quantités, observations et
mesures.
 QUALITOLOGIE . Contrôle qualité et matériaux de
contrôle.
 VARIABILITÉ BIOLOGIQUE ET VALEURS DE
RÉFÉRENCE .
 SEMIOLOGIE .
Plan de cours
ModuleII. Évaluation biochimique des voies
métaboliques
 PROTÉINES.
 ENZYMES .
 HYDRATES DE GLUCIDES .
 LIPOPROTÉINES .
 CALCIUM .
 ÉQUILIBRE ACIDE-BASE .
Plan de cours
Module III. Évaluation biochimique de la fonction
des organes et des systèmes
 LA FONCTION HÉPATIQUE.
 FONCTIONS CARDIAQUES ET MUSCULAIRES.
 RÉNALE .
 PROFILE LIPIDIQUE
 PROFIL DIABÉTIQUE
Module 1 : Introduction
 clinique , également connue sous le nom de
pathologie chimique ou biochimie clinique , est l'étude
des événements ou paramètres biochimiques du
corps.

 Il s'agit d'un sujet clinique et diagnostique, qui vise à

proposer, utiliser et améliorer les méthodes de
diagnostic standards , à suivre l'évolution des
maladies et à les traiter par des méthodes
biochimiques.
Module 1 : Introduction
 La biochimie clinique vise à initier l'étudiant à la
compréhension de l'étude in vitro des propriétés
biologiques qui contribuent à la prévention, au
diagnostic, au pronostic et à la surveillance des
maladies et des états pathologiques chez l'homme .

 La biochimie clinique est l'une des parties les plus

importantes du diagnostic de laboratoire
Module 1 : Notions
 Phase pré-analytique : implique chaque activité
effectuée avant le test ou l’analyse appropriée d’ un
échantillon .
 La phase pré-analytique comprend :
- commande de tests par le médecin,
- préparation des patients ,
- identification et enregistrement des patients ,
- d'échantillons , stockage, transport et enregistrement.
Module 1 : Concepts

 Les facteurs affectant la phase pré-analytique

précédant la collecte de matériel biologique peuvent
être divisés en :
1.) Facteurs contrôlables , qui incluent, par exemple,
le respect d'un certain régime quotidien, d'habitudes
alimentaires, etc. et
2.) Facteurs incontrôlables, qui sont des variables
telles que l'âge, le sexe, la race, etc.

 Phase analytique : Le processus d’analyse des

échantillons proprement dit.
Module 1 : Concepts
 Phase post-analytique : Cette phase comprend toutes
les activités effectuées après qu'un échantillon a été
testé, notamment :
- d'essai ,
- enregistrement des résultats ,
- diffuser et archiver les résultats,
- élimination des déchets et des échantillons,
- transmission des résultats ,
- interprétation,
- suivi et retest si nécessaire, etc.
Module 1 : Phase pré-analytique.
Collecte, préparation et conservation des spécimens
 Les échantillons utilisés en biochimie comprennent : le
sang total, le sérum, le plasma, l'urine, le liquide
céphalo-rachidien (LCR) et d'autres liquides biologiques.
 Pour la plupart des tests de biochimie, le sérum est
utilisé, mais le plasma et le sang complet peuvent
également être utilisés.
 Phlébotomie (prélèvement de sang ou prélèvement
sanguin) : fait référence au prélèvement de sang dans
une veine, une artère ou le lit capillaire pour analyse en
laboratoire.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Le matériel de phlébotomie : Pour le prélèvement sanguin, les éléments
suivants sont nécessaires.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Remarque : l'utilisation minimale d'un garrot est conseillée car les
constituants sanguins peuvent être modifiés en raison d'une occlusion
veineuse prolongée.
 L’un des trois échantillons différents peut être utilisé : sang total, sérum
ou plasma.
 Le sérum et le plasma sont préparés à partir de sang total par
centrifugation . Après centrifugation du sang, celui-ci est séparé en trois
couches (voir la figure ci-dessous).
Module 1 : Phase pré-analytique.
Le sang total:
 Les échantillons de sang total doivent être analysés dans un délai limité
car
 Au fil du temps, les cellules se lysent dans le sang total, ce qui modifie la
concentration de certains analytes comme le potassium, le phosphate et la
lactate déshydrogénase.
 Certains processus métaboliques cellulaires se poursuivront, ce qui
modifiera la concentration des analytes comme le glucose et le lactate .

Sérum ou plasma : Revoir la préparation de chacun

Module 1 : Phase pré-analytique.

 Différences entre sérum et plasma :

• Le sérum ne contient pas de facteurs de coagulation (comme la fibrine).
• Le plasma contient tous les facteurs de coagulation.
 Tubes de prélèvement sanguin :
 Il s'agit de tubes spécifiques évacués de l'air appelés tubes vacutainer .
 Il existe deux grands types de tubes de prélèvement sanguin :
1. Tubes de séparation de sérum (SST) : ne contiennent aucun
anticoagulant.
2. Tubes de séparation de plasma (PST) : contiennent un anticoagulant ou
un conservateur.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Anticoagulants sanguins :
 Ce sont des substances qui empêchent la coagulation sanguine, en
éliminant le Ca2+ qui est important dans la coagulation ou en se liant à
la thrombine et en empêchant la conversion du fibrinogène en fibrine .

* EDTA, citrate et oxalate : inhibent la coagulation en se liant au Ca2+ et

en empêchant l'activation de la prothrombine en thrombine.
* Héparine : inhibe la coagulation en se liant à la thrombine, ce qui est
important dans l'activation du fibrinogène en fibrine.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Le choix du bon anticoagulant lors du prélèvement
sanguin est très important.
 Cela dépend du test à effectuer.
 L'anticoagulant ne doit pas interférer avec la
substance à analyser (mesurée ).
 Des résultats faussement positifs ou faussement
négatifs peuvent être produits si le sang collecté dans
le tube contient un anticoagulant incorrect .
 Voici quelques exemples.
Module 1 : Phase pré-analytique.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Critères de rejet des échantillons :
• Spécimen mal étiqueté ou non étiqueté.
• Spécimen mal collecté ou conservé.
• Spécimen soumis sans formulaire de demande dûment rempli.
• Échantillon hémolysé .

 Échantillon d'hémolyse :
• L'hémolyse est la libération d'hémoglobine due à la rupture des globules
rouges. Le plasma ou le sérum de l’échantillon hémolysé apparaît de
couleur rose à rouge.
Module 1 : Phase pré-analytique.

 L'hémolyse doit être évitée car elle interfère avec les résultats de
certaines investigations.
 Habituellement, il est associé à une élévation des taux de K+, Ca2+,
phosphate, AST, LDH et phosphatases acides en raison de la libération
du contenu des globules rouges .
 Selon le degré d'hémolyse, il est classé comme : H+, H++ et H +++.
 H + peut être accepté pour certains tests qui ne sont pas affectés par la
teneur en globules rouges comme le glucose et le lactate.
 H ++ et H+++ ne sont acceptables pour aucun test.
Module 1 : Phase pré-analytique.
Causes de l'hémolyse
 Une hémolyse peut survenir en raison de :
1. Distribuez le sang directement de la seringue à l'aiguille, la pression
appliquée peut provoquer la rupture des globules rouges.
2. Réfrigérer un échantillon de sang non séparé (trop froid, trop chaud aura
également un effet).
3. Mécaniquement, en raison du tremblement de l'échantillon de sang.
Module 1 : Phase pré-analytique.
 Les changements dans la couleur du sérum indiquent l'un des éléments
suivants :
• Hémolysé : le sérum apparaît rose à rouge en raison de la rupture des
globules rouges.
• Ictérique : le sérum apparaît jaune en raison d'un taux élevé de bilirubine
(ictère).
• Lipémique : le sérum semble laiteux ou trouble en raison de sa teneur
élevée en lipides.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 La métrologie est le domaine de connaissance qui traite de la
mesure ; on l'appelle également la science de la mesure.

 La métrologie couvre la définition d'unités de mesure

internationalement acceptées, par exemple le mètre.
.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 La métrologie est essentielle à la recherche scientifique, et la
recherche scientifique constitue la base du développement de la
métrologie elle-même.

 scientifique traite de l'organisation et du développement des

étalons de mesure et de leur maintenance.

 La métrologie inclut la nécessité de démontrer la traçabilité, qui

devient tout aussi importante que la mesure elle-même .
Module 1 : MÉTROLOGIE

 L’objectif principal des mesures chimiques est de déterminer la

quantité de composants d’intérêt et non la composition totale de
l’échantillon.

 De nombreuses mesures chimiques sont traçables à une norme

ou à des méthodes de référence.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 Quelques définitions
1.) Mesure : Ensemble d'opérations ayant pour objectif, de
déterminer la valeur d'une grandeur. Les opérations peuvent être
effectuées automatiquement.
2.) Principe de mesure : Désigne la base scientifique d'une
mesure.
3.) Mesurande : La grandeur mesurable soumise à la mesure. La
spécification d'un mesurande peut nécessiter des déclarations sur
des quantités telles que le temps, la température et la pression.
4 .) Instrument de mesure : C'est un appareil destiné à être
utilisé pour effectuer des mesures, seul ou en conjonction avec un
ou plusieurs appareils supplémentaires.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 Quelques définitions
5.) Système de mesure : Il s'agit d'un ensemble complet d'instruments de
mesure et d'autres équipements assemblés pour effectuer des mesures
spécifiées.
6. ) Etalon de mesure : Un étalon de mesure ou étalon , est une mesure , un
instrument de mesure, un matériau de référence destiné à définir, réaliser,
conserver ou reproduire une unité ou une ou plusieurs valeurs d'une grandeur
pour servir de référence.
7.) Résultat d'une mesure : C'est la valeur attribuée à un mesurande,
obtenue par mesure .
8.) Un matériau de référence certifié (CRM) est un matériau de référence
dont une ou plusieurs de ses valeurs de propriété sont certifiées.
Le terme matériau de référence standard (SRM) est également utilisé dans
certaines régions du monde et est synonyme de CRM.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Traçabilité et étalonnage
 La traçabilité, est la propriété d'un résultat de mesure selon
laquelle le résultat peut être mis en relation avec une
référence ( étalons nationaux ou internationaux ).
 La traçabilité permet d'établir l'exactitude des résultats de
mesure .
 des mesures est un élément essentiel du contrôle qualité,
c'est pourquoi les normes pour les poids et mesures sont
maintenues par un institut national de mesure .
 Une chaîne de traçabilité est une chaîne ininterrompue de
comparaisons avec une norme donnée.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 L'étalon est un objet de comparaison métrologique pour l'étalonnage
d'autres instruments de mesure.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Traçabilité et étalonnage
 Un outil de base pour assurer la traçabilité d’une mesure est
l’étalonnage d’un instrument de mesure, d’un système de
mesure ou d’ un matériau de référence.
 Étalonnage détermine les caractéristiques de performance d’un
instrument, d’un système ou d’un matériau de référence.
 Ceci est généralement réalisé au moyen d'une comparaison
directe avec des étalons de mesure ou des matériaux de
référence certifiés .
 L'étalonnage est simplement la comparaison des performances
de l'instrument ou de l'équipement de mesure à un étalon de
référence de précision connue.
Module 1 : MÉTROLOGIE
 Quatre raisons principales pour faire calibrer un
instrument :

1. Établir et démontrer la traçabilité.

2. S'assurer que les lectures de l'instrument sont
cohérentes avec les autres mesures.
3. Déterminer l'exactitude des lectures de l'instrument.
4. Établir la fiabilité de l'instrument, c'est-à-dire qu'on
peut lui faire confiance .
Module 1 : MÉTROLOGIE
Intervalle d'étalonnage
 Un intervalle d'étalonnage est la période de temps régulière entre les
étalonnages.

 Les responsables des équipements de test doivent ici mettre en balance

les risques et les coûts afin d'atteindre un équilibre optimal entre
sécurité et coûts.

 Même si des intervalles d'étalonnage plus longs signifient des coûts

inférieurs, ils impliquent également un risque énorme de non-conformité
de l'instrument de mesure.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Types d' étalonnage :

 Deux types d'étalonnage incluent l'étalonnage ISO et l'étalonnage

DAkks .

 Étalonnage ISO : sont utilisés dans tous les domaines dans lesquels la
surveillance et l'étalonnage des appareils de test sont requis mais les
étalonnages DAkkS ne le sont pas.

 En principe, les étalonnages ISO peuvent être effectués

indépendamment par toutes les entreprises.
Module 1 : MÉTROLOGIE

Incertitude de mesure :
 C'est l'expression de la dispersion statistique des
valeurs attribuées à une grandeur mesurée .

 Par accord international, cette incertitude a une base

probabiliste et reflète une connaissance incomplète
de la valeur de la quantité.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie
 Unité de mesure : Une unité est une
grandeur mesurable , à laquelle sont comparées
d'autres grandeurs mesurables de même nature
.

 Valeur numérique d'une grandeur

mesurable : La valeur numérique est un
nombre par lequel l'unité de mesure est
multipliée.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie
 Erreur d'un résultat de mesure : C'est le résultat d'une mesure moins
une valeur vraie du mesurande.

 Erreur aléatoire d'un résultat de mesure : Le résultat d'une mesure

moins la moyenne des résultats obtenus après plusieurs mesures. (TV-
Mean).

 Erreur systématique d'un résultat de mesure : Moyenne - TV.

- L' erreur systématique des résultats successifs reste constante ou varie de
manière prévisible .
 L'erreur est la somme de l'erreur aléatoire et de l'erreur systématique
(E=SE+RE)
Module 1 : MÉTROLOGIE

Erreur de mesure
Différences entre erreur aléatoire et erreur systémique.
 L'erreur aléatoire fait qu'une mesure diffère légèrement et de manière
imprévisible de la suivante , tandis que l'erreur systématique a la même
valeur ou proportion pour chaque mesure et est prévisible.

 Les erreurs aléatoires ne peuvent pas être éliminées d’une expérience,

mais la plupart des erreurs systématiques peuvent être réduites .

 aléatoires affectent principalement la précision , tandis que les erreurs

systématiques influencent principalement la précision d'une mesure .
Module 1 : MÉTROLOGIE
Erreur de mesure
aléatoire et causes
 Les principales raisons d’une erreur aléatoire sont :
- limites des instruments,
- environnementaux , et
- légères variations dans la procédure .
 Les exemples comprennent:
- Lorsque vous vous pesez sur une balance, vous vous positionnez à chaque fois
légèrement différemment.
- La mesure de votre taille est affectée par des changements mineurs de
posture .
- Lorsque vous effectuez une lecture de volume dans un flacon, vous pouvez lire
la valeur sous un angle différent à chaque fois.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Erreur de mesure
 Étant donné qu'une erreur aléatoire se produit toujours et
ne peut être prédite , il est important de prendre plusieurs lectures et
d'en faire la moyenne pour avoir une idée de l'ampleur de la variation et
estimer la valeur réelle.
Exemple d'erreur systématique et causes
 Les causes typiques d’erreur systématique comprennent :
- d'observation ,
- étalonnage imparfait des instruments, et
- environnementale .
 Les exemples comprennent:
- Oublier de tarer ou de remettre à zéro une balance produit des mesures
de masse toujours « décalées » du même montant.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Erreur de mesure
NB : Une erreur provoquée par la non mise à zéro d'un instrument avant son
utilisation est appelée erreur d'offset .
- mesurée est différente en utilisant un nouveau ruban à mesurer en tissu par
rapport à un ancien ruban étiré. Les erreurs proportionnelles de ce type sont
appelées erreurs de facteur d'échelle .
- Mesurer la longueur avec une règle métallique donnera un résultat différent à
température froide qu'à température chaude, en raison de la dilatation thermique
du matériau.
 Une fois sa cause identifiée, l’erreur systématique peut être réduite dans une
certaine mesure .

 Bien que les erreurs aléatoires puissent être minimisées en augmentant la taille
de l’échantillon et en faisant la moyenne des données, il est plus difficile de
compenser les erreurs systématiques.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Erreur de mesure
 systématique peut être minimisée par :
- régulièrement les équipements,
- utiliser des contrôles dans des expériences,
- réchauffer les instruments avant de prendre des lectures, et
- comparer les valeurs aux normes .

 La meilleure façon d’éviter les erreurs systématiques est de connaître

les limites des instruments et d’être expérimenté dans leur utilisation
correcte.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie
 Correction : Une valeur ajoutée au résultat non corrigé d'une mesure
pour compenser une erreur systématique .

 Précision de la mesure : La précision est la proximité d' une mesure

et d'une valeur réelle du mesurande .

 Exactitude de la mesure : l'exactitude est la proximité de la valeur

moyenne obtenue à partir d'une large série de résultats de mesures et
d'une valeur vraie.
Module 1 : MÉTROLOGIE

Terminologie
 Précision des mesures : La précision est la proximité des résultats
indépendants des mesures obtenues dans des conditions prescrites .
 Intervalle de référence (plage de référence): limites entre
lesquelles se situent 95 % à 99 % des valeurs de référence .
- L' intervalle de référence est utilisé pour interpréter les résultats de
mesure en définissant les limites d'un résultat « normal », c'est-à-dire
l'intervalle dans lequel est censé se situer le résultat d'un individu sain.

 Valeurs de référence : ce sont les valeurs obtenues auprès d'un

groupe sélectionné d'individus présentant un état de santé défini.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie _
 Distribution des valeurs de référence : est la distribution des résultats de
mesures individuels correspondant à certaines des distributions statistiques.
- Il existe différents types de distributions :
• normal , également appelé gaussien,
• distribution log-normale,
• Distribution Laplace , etc.
- Le type de distribution pertinent est testé à l'aide de méthodes statistiques
appropriées .

 Population de référence : L'ensemble de tous les individus répondant à

certains critères concernant leur état de santé ou d'autres exigences définies
(âge, sexe, race).
Module 1 : MÉTROLOGIE

Terminologie
 Individu de référence : Un individu sélectionné dans l’ensemble de la
population de référence.
 Sélection de la population de référence (groupe
d'échantillonnage de référence) : partie sélectionnée au hasard de
la population de référence à partir de laquelle des valeurs
d'échantillonnage de référence sont obtenues par mesure afin d'estimer
les limites de référence .
 Estimation de vraisemblance : Accord entre l'estimation et la valeur
réelle typique de l'ensemble de la population.
- Cela dépend de nombreux facteurs, le principal étant la taille de
l'échantillon de population de référence. Au moins 120 personnes de
référence sont généralement requises.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie
- L’ estimation de la vraisemblance est en outre affectée par :
• aspects pré-analytiques
• la méthode de mesure et
• la méthode d’évaluation statistique utilisée.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Terminologie
Module 1 : MÉTROLOGIE
Spécificité
 Spécificité analytique
- analytique est définie comme la capacité d'un test à distinguer les
analytes cibles des analytes non cibles, y compris les composants de
l'échantillon.
- Le terme spécificité analytique est fréquemment utilisé pour décrire le
degré de réactivité croisée dans un système de test .

 Spécificité diagnostique
- La spécificité diagnostique d'un test est égale au pourcentage
d'échantillons non infectés qui sont jugés négatifs par le test . Calculé
comme suit :
Spécificité = TN/ (TN+FP)*100
Module 1 : MÉTROLOGIE
Sensibilité
 Sensibilité analytique
- analytique est une mesure de la précision du test, ou de la quantité
minimale détectable dans un système donné .

 Sensibilité diagnostique
- La sensibilité diagnostique d'un test est égale au pourcentage d'
échantillons infectés qui se révèlent infectés par le test . Calculé comme
suit :
Sensibilité = TP/ (TP+FN)*100.
Module 1 : MÉTROLOGIE
Détectabilité
 Il s'agit de la capacité d'une méthode ou d'un équipement à détecter
une erreur dans la performance ou les résultats d'un test .

 Il fait également référence à la détection des facteurs de risque d'un

problème et à la gravité du résultat du problème.
Module 1 : QUALITOLOGIE
 Il s'agit de la branche scientifique traitant de l'étude de la qualité des produits,
des processus et des services.
 La qualitologie est divisée en : contrôle qualité et évaluation de la qualité
.

 Contrôle qualité en laboratoire ( CQ ) est conçu pour détecter, réduire et

corriger les lacunes du processus analytique interne d'un laboratoire.

 Le contrôle qualité est effectué avant la publication des résultats des patients.

 Le CQ améliore la qualité des résultats rapportés par le laboratoire.

 Le contrôle qualité (CQ) a l’un des impacts les plus importants sur les tests en
laboratoire : il garantit à la fois la précision et l’exactitude des résultats des
échantillons de patients.
Module 1 : QUALITOLOGIE
Contrôle qualité
Module 1 : QUALITOLOGIE
Contrôle qualité
 de maintenir des contrôles précis et fréquents des analyses
d'échantillons en laboratoire grâce au contrôle qualité pour garantir que
les analyses des patients sont effectuées correctement et qu'elles
produisent des résultats précis .

 Lorsque le contrôle qualité fonctionne efficacement, il est capable de

détecter et de corriger les défauts dans les processus analytiques d’un
laboratoire avant que des résultats de patients potentiellement
incorrects ne soient publiés.

 Les échantillons de contrôle qualité doivent être identiques et testés de

la même manière que les échantillons de patients.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Contrôle de qualité
 qualité comprend les mesures qui doivent être incluses lors de
chaque test pour vérifier que le test fonctionne correctement .

 Cela inclut de garantir des conditions de température correctes, des

contrôles de kit, etc.

 Ainsi , QC indique si le test était valide et a produit des résultats

acceptables.

 Le CQ n’indique cependant pas que les résultats sont exacts ou qu’ils

ont été correctement rapportés.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Matériaux de contrôle de qualité

Cartes de contrôle qualité
 L'un des outils les plus couramment utilisés pour suivre les
échantillons de contrôle qualité en laboratoire est le tableau de
Levey-Jennings (LJ) .

 Un graphique LJ et les règles de Westgard sont fréquemment

utilisés pour vérifier les tendances, les biais ou les erreurs dans les
contrôles qualité .

 Les règles de Westgard observent la distribution normale attendue

et identifient les écarts types produits .
Module 1 : QUALITOLOGIE
 D'autres types de graphiques QC incluent :
- la carte de contrôle de l'échantillon de pointe
matricielle
- le Cartes Shewhart ,
- Les cartes Q ,
- le carte de contrôle de la somme cumulée
(CUSUM), etc.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Utilisation de cartes de contrôle

 Les cartes de contrôle déterminent si les résultats des tests des
patients sont corrects et doivent être signalés.

 lorsque les valeurs de contrôle se situent dans la distribution

attendue, vous classez l'analyse comme étant « sous contrôle »,
acceptez les résultats et rapportez les résultats des tests du
patient.

 Lorsque les valeurs de contrôle se situent en dehors de la

distribution attendue, vous classez l'analyse comme « hors
contrôle », rejetez les valeurs de test et ne signalez pas les
résultats des tests du patient.
Module 1 : QUALITOLOGIE
Types de contrôle qualité
Contrôle qualité intralaboratoire (interne)
 Les tests QC sont effectués dans un laboratoire pour surveiller et garantir
la fiabilité des résultats des tests produits par le laboratoire.

 Le contrôle qualité interne implique les procédures internes de

surveillance continue des opérations et de vérification quotidienne
systématique des résultats produits afin de décider si ceux-ci sont
suffisamment fiables pour être publiés.

 Des matériaux de contrôle sont utilisés pour surveiller le système de test

et vérifier que des résultats de test de qualité pour les patients ont été
obtenus.
Module 1 : QUALITOLOGIE
 Un contrôle est un échantillon stabilisé avec une plage prédéterminée
de valeurs de résultat qui simule un échantillon de patient .

 Les échantillons de contrôle sont testés de la même manière que les

échantillons de patients.

 Si les résultats du test d'un échantillon témoin ne se situent pas dans les
plages acceptables, nous supposons qu'il y a eu un problème dans :
- la procédure d'essai,
- équipement , ou
- les échantillons eux-mêmes.
Module 1 : QUALITOLOGIE
 Il existe de nombreux critères pour rejeter un test basé sur les mesures
des échantillons de contrôle .

 Les résultats des patients ne sont pas communiqués tant que la cause
du problème n'a pas été trouvée, que le problème n'a pas été résolu et
que les contrôles n'ont pas été testés à nouveau pour vérifier que tout
fonctionne normalement.

 La première chose essentielle dans la mise en place du contrôle qualité

interne (CIQ) d'une procédure de test dans le laboratoire clinique est de
sélectionner la procédure CIQ appropriée à mettre en œuvre.
Module 1 : QUALITOLOGIE
 Choisir la bonne mesure de CIQ comprend :
- choisir les critères statistiques ou les règles de contrôle, et
- Choisir le nombre de mesures de contrôle, en fonction de la qualité
requise pour l'essai et des performances observées de la méthode.

 Ensuite, la bonne procédure IQC doit être correctement mise en œuvre.

Module 1 : QUALITOLOGIE
Contrôle qualité externe
 externe (également appelé tests d'aptitude ou PT ) évalue les résultats
des tests d'un laboratoire en les comparant à ceux de laboratoires
similaires.

 spécialement préparés sont obtenus par plusieurs laboratoires participant

au programme d’essais d’aptitude.

 Ces « inconnues » sont ensuite testées par les laboratoires participants et

les résultats sont renvoyés au programme d'essais d'aptitude.

 Pour le contrôle qualité externe, le laboratoire doit utiliser ses méthodes

d’essais de routine.
Module 1 : QUALITOLOGIE
 Le CQ externe implique l'aide de référence d'autres laboratoires et la
participation à des programmes nationaux et/ou internationaux
d'échange d'échantillons et de données interlaboratoires.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Avantages du CQE
 La participation à un programme d’assurance qualité externe (AQE)
reconnu présente de nombreux avantages, notamment :
- Obtenir des informations sur les performances relatives de différentes
méthodes
- Acquisition de connaissances sur sa propre capacité à effectuer des
tests et à rapporter les résultats avec précision,
- gagner la confiance des cliniciens et des patients
Module 1 : QUALITOLOGIE

Avantages du CQE
 EQC également :
- fournit une alerte précoce pour les erreurs systématiques,
- Il indique les axes d'amélioration,
- apporte une preuve de qualité,
- identifie les domaines de formation,
- détecte les défauts des équipements,
- identifie les problèmes de réactifs et
- examine la formation du personnel.
Module 1 : QUALITOLOGIE
Assurance qualité dans les laboratoires médicaux
 L'assurance qualité fait référence à l'établissement et au maintien d'un
certain niveau de qualité dans un produit ou un service.

 Par conséquent , l’assurance qualité dans un laboratoire médical consiste

à s’assurer que le laboratoire fonctionne correctement, en toute sécurité
et efficacement, sans aucune erreur.

 De nombreux processus se déroulent depuis l’arrivée de l’échantillon au

laboratoire jusqu’à l’enregistrement des résultats, période pendant
laquelle des erreurs peuvent survenir.
 Par conséquent , le processus continu de surveillance du système de
laboratoire, tant en interne qu’en externe, est essentiel.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Assurance qualité dans les laboratoires médicaux

 L'assurance qualité est le processus dynamique et continu de surveillance d'un
système pour la fiabilité et la reproductibilité des résultats.

 L'AQ permet des mesures correctives lorsque les critères établis ne sont pas
remplis.

 L'assurance qualité est le processus complet qui garantit que les résultats
finaux rapportés par un laboratoire sont aussi précis que possible.

 Cela implique l'inspection des spécimens, l'examen des mesures

transcriptionnelles, l'utilisation des tests les plus fiables et la vérification des
rapports finaux.
Module 1 : QUALITOLOGIE

 Les différents domaines d'assurance qualité dans chacune

des trois phases (phases pré-analytique, analytique et post-
analytique) d'un laboratoire médical comprennent :

 Pré-analytique :
- Toutes les informations et la documentation du patient sont
correctes,
- sur les patients restent confidentielles,
- appropriées sont suivies lors du prélèvement de l'échantillon
(par exemple, le professionnel de la santé porte des gants )
Module 1 : QUALITOLOGIE

 Analytique:
- Les procédures opérationnelles standard (SOP) sont maintenues
pendant le test de l'échantillon (par exemple, la température
appropriée est maintenue, l'échantillon n'est pas contaminé),
- la confidentialité des patients est préservée

 Post-analytique :
- Les échantillons sont analysés à l'aide du matériel approprié,
- l'équipement est régulièrement calibré, et
- des patients est préservée.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Évaluation de la qualité
 de la qualité est un moyen de déterminer la qualité des
résultats.

 Il s'agit généralement d'une évaluation externe des

performances d'un laboratoire à l'aide de panels de
compétences.

 de la qualité est entreprise pour évaluer l'efficacité d'un

programme d'assurance qualité.
Module 1 : QUALITOLOGIE

Limites de l’ EEQ
 L'EQA est un excellent outil pour comparer avec un groupe de pairs et
maintenir une stratégie de contrôle qualité efficace. Cependant, il a ses
limites :
- EQA /PT ne peut pas fournir à lui seul une évaluation complète ; il est
important d’effectuer également régulièrement des contrôles par des
tiers.
- de l'EEQ peuvent également être affectés par des variables non liées
aux échantillons de patients, notamment la sélection de la méthode.
LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

 Les résultats des tests varient selon les

individus au fil du temps en raison de :

- variation pré-analytique ,
- analytique et
- biologique .
LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

 La variation pré-analytique .
- Les échantillons eux-mêmes peuvent varier chez un
individu (veineux et artériels ).

- Application de la stase veineuse pour différentes

durées .

- Technique de manipulation des échantillons.

LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

 Imprécision analytique . L’analyse elle-même

présentait des variations inhérentes. (retest des
contrôles).

 « Variation biologique » . Les patients ont des

points de réglage homéostatiques différents.
LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

 La différence entre les individus est appelée « variation biologique

entre sujets ».

 Même chez un même individu, les résultats varient d'une période ou

d'une condition à l'autre (« variation intra-sujet »).

 Pour la plupart des analytes, la variation intra-sujet est bien inférieure à

la variation inter-sujet.
LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

Résumé
 La variation biologique fait référence aux différences (variation) dans les
résultats des tests de laboratoire clinique, dans les caractéristiques des
organismes ou dans toute autre différence.

 Il s'agit de la variabilité naturelle d'un paramètre de laboratoire due aux

différences physiologiques entre les sujets et au sein d'un même sujet
au fil du temps.

 Les différences se produisent à la fois chez un même individu à des

périodes différentes ( variation intra-individuelle ) et d'un individu à
l'autre ( variation inter-individuelle ).
LA NOTION DE VARIABILITÉ BIOLOGIQUE

 La variation des traits (le phénotype) des organismes peut être attribuée
à deux effets :
- l'effet génétique, et
- l’effet environnemental.

Caractéristiques de la variation biologique

 Ce qui caractérise la variation biologique par opposition aux autres
formes de variation (non biologique) et à leurs sources, c'est que la
variation biologique peut changer si les conditions
environnementales dans lesquelles un organisme et sa communauté
sont intégrés changent .
Comparaisons longitudinales et transversales

Comparaisons .
 Il existe deux types de comparaisons :
- Comparaisons longitudinales (en utilisant des valeurs de référence
individuelles ) et
- transversales (diagnostic utilisant des valeurs de référence de
population ).

 comparaison longitudinale , compare les résultats aux valeurs de

référence individuelles .

 C’est -à-dire faire référence à des valeurs particulières à l’individu,

compte tenu de son âge, de son sexe, de son état de santé, de son
alimentation, de son environnement, etc.
Comparaisons longitudinales et
transversales

 Ces plages de référence individuelles pourraient avoir été établies à

partir des résultats d'un individu particulier ou d'un groupe d'individus
présentant des caractéristiques similaires et dans les mêmes conditions
que l'individu dont les résultats doivent être comparés.
Comparaisons longitudinales et
transversales
 La comparaison transversale compare les résultats aux valeurs de
référence de la population.

 Il s’agit de valeurs de référence applicables à l’ensemble de la

population, quels que soient l’environnement, l’alimentation particulière,
les conditions de santé, etc.

 De telles valeurs sont établies après échantillonnage d'une population

de catégories mixtes d'individus.
SÉMIOLOGIE MÉDICALE

 En médecine, les signes sont des manifestations objectives de la

maladie, par opposition à la nature subjective des symptômes.

 médicale comprend l'étude des symptômes, des signes somatiques et

des signes de laboratoire, l'anamnèse et l'examen physique (examen
diagnostique au chevet ou diagnostic physique).

 La sémiotique est la branche de la science médicale relative à

l'interprétation des signes.
Capacité discriminante

 La capacité des différentes variables cliniques et biologiques qui

différencient ou discriminent au mieux les groupes.
Valeur de coupure

 Pour les tests de diagnostic ou de dépistage qui donnent des résultats

continus, les valeurs seuils sont les points de division , où les
résultats des tests sont divisés en différentes catégories ;

 généralement positif (indiquant qu'une personne souffre de la maladie

qui l'intéresse), ou

 négatif (indiquant que quelqu’un n’a pas la condition d’intérêt).

Valeur de coupure

Exemple:
 Par exemple, le seuil pour une personne ayant de la fièvre (mesurée sur
l'échelle Celsius) est de 37,0 (la température moyenne du corps
humain),

 un seuil en dessous duquel le traitement n'est pas recommandé pour les

adultes est de 38,9, et

 le seuil en dessous duquel une fièvre n'est généralement pas

dangereuse est de 39,4.
Prévalence

 La prévalence est la proportion d'une population qui présente une

caractéristique spécifique (généralement une maladie) au cours d'une
période donnée.
Comment la prévalence est-elle estimée ?
 Pour estimer la prévalence, les chercheurs sélectionnent au hasard un
échantillon (groupe plus petit) de la population entière qu’ils souhaitent
décrire.

 L’utilisation de méthodes de sélection aléatoire augmente les chances

que les caractéristiques de l’échantillon soient représentatives
(similaires) aux caractéristiques de la population.
Prévalence

 Pour un échantillon représentatif, la prévalence est le nombre de

personnes dans l'échantillon présentant la caractéristique d'intérêt,
divisé par le nombre total de personnes dans l'échantillon .

# de personnes dans l'échantillon avec caractéristique

 Prévalence = ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
Nombre total de personnes dans l'échantillon
 Valeur prédictive

 Expression de la probabilité qu'un résultat de test donné soit en

corrélation avec la présence ou l'absence d'une maladie.

 Une valeur prédictive positive est le ratio de patients atteints de la

maladie dont le test est positif par rapport à l'ensemble de la population
de ceux dont le résultat du test est positif ;

 une valeur prédictive négative est le ratio de patients sans maladie dont
le test est négatif par rapport à l'ensemble de la population de ceux
dont le résultat du test est négatif.
Valeur prédictive

 La valeur prédictive positive est la probabilité que les sujets dont le

test de dépistage est positif soient réellement atteints de la maladie.
 La valeur prédictive négative est la probabilité que les sujets dont le
test de dépistage est négatif ne soient réellement pas atteints de la
maladie.

Exemples :

 1 115 sujets ont été dépistés positifs par un test, mais seuls 132 d'entre
eux étaient réellement atteints de la maladie, selon le diagnostic de
référence. Par conséquent, si le test de dépistage d'un sujet était positif,
la probabilité de maladie était de 132/1 115 = 11,8 %.
Valeur prédictive

 Tableau - Illustration de la valeur prédicative positive d'un test

de dépistage hypothétique
 La valeur prédictive positive se concentre sur les sujets ayant
un test de dépistage positif afin de demander la probabilité de
maladie pour ces sujets.
Malade Pas malade Total

Test positif 132 983 1 115

Test négatif 45 63 650 63 695

Total de la 177 64 633 64 810

colonne
Valeur prédictive

 Ici, la valeur prédictive positive est de 132/1 115 = 0,118, soit 11,8 %.

 Interprétation : Parmi ceux ayant eu un test de dépistage positif, la

probabilité de maladie était de 11,8 %.

 Les valeurs prédictives négatives sont de 63 650/63 950 = 0,999, soit

99,9 %.

 Interprétation : Parmi ceux qui ont eu un test de dépistage négatif, la

probabilité d'être indemne de la maladie était de 99,9 %.
Rapport de vraisemblance

 En médecine factuelle, les rapports de vraisemblance sont utilisés pour

évaluer la valeur de la réalisation d’un test de diagnostic.

 Ils utilisent la sensibilité et la spécificité du test pour déterminer si un

résultat de test modifie utilement la probabilité qu'une condition (telle
qu'un état pathologique) existe.
Rapport de vraisemblance

Calcul

 Il existe deux versions du rapport de vraisemblance, une pour les

résultats de test positifs et une pour les résultats de test négatifs.
Respectivement, ils sont connus sous le nom de rapport de
vraisemblance positif (LR+, rapport de vraisemblance positif, rapport de
vraisemblance pour les résultats positifs) et rapport de vraisemblance
négatif (LR–, rapport de vraisemblance négatif, rapport de
vraisemblance pour les résultats négatifs).
Rapport de vraisemblance

Le rapport de vraisemblance positif est calculé comme suit :

 LR+ = Sensibilité/ (1- spécificité )

Le rapport de vraisemblance négatif est calculé comme suit :

 LR- = (1-Sensibilité)/ spécificité

ROC

 Le terme ROC signifie Receiver Operating Characteristic.

 ROC sont fréquemment utilisées pour montrer le lien entre la sensibilité

clinique et la spécificité pour chaque seuil possible pour un test ou une
combinaison de tests .

 De plus, l’aire sous la courbe ROC donne une idée de l’intérêt de

l’utilisation du ou des tests en question.
ROC

 Les courbes ROC sont utilisées en biochimie clinique pour choisir le seuil
le plus approprié pour un test.

 Le meilleur seuil a le taux de vrais positifs le plus élevé ainsi que le taux
de faux positifs le plus bas.
ROC

 Comme l'aire sous une courbe ROC est une mesure de l'utilité d'un test
en général, où une plus grande aire signifie un test plus utile, les aires
sous les courbes ROC sont utilisées pour comparer l'utilité des tests.
Module II : Évaluation
biochimique des voies
métaboliques
PROTÉINES
Classification des protéines plasmatiques
 Ce sont des protéines présentes dans le plasma/sérum sanguin.

 On les appelle également protéines sanguines ou protéines sériques.

 plasmatiques sont constituées de protéines simples et conjuguées.

 La concentration moyenne de protéines plasmatiques est de 7,4 g% et

elle varie entre 6,5 g% et 8,4 g% dans des conditions normales de
santé.
PROTÉINES

Classification des protéines plasmatiques

 Ils remplissent de nombreuses fonctions différentes, notamment :
- Transport de lipides , d'hormones, de vitamines et de minéraux dans l'activité et le
fonctionnement du système immunitaire.
- Agir comme enzymes, composants du complément, inhibiteurs de protéase ou
précurseurs de kinines.
Attention :
- Contrairement à la croyance populaire , l'hémoglobine n'est pas une protéine
sanguine, car elle est transportée dans les globules rouges plutôt que dans le sérum
sanguin .
- Toutes les protéines sanguines sont synthétisées dans le foie, à l'exception des
gammaglobulines ( anticorps produits par les plasmocytes ).
 Les protéines sont produites par le RE brut des hépatocytes et exportées dans le
sang via le complexe de Golgi.
PROTÉINES

Classification des protéines plasmatiques

 Le tableau ci-dessous présente les différentes classes de protéines.
Protéine Niveau normal % Fonction
sanguine
Albumines 3,5-5,0 g/dl 55% Créer et maintenir
une pression
osmotique ;
transporter des
molécules
insolubles
Globulines 2,0-2,5 g/dl 38% participer au
système
immunitaire
Fibrinogène 0,2-0,45 g/dl 7% Coagulation
sanguine
Protéines 1% Régulation de
régulatrices l'expression des
gènes
Facteurs de 1% Conversion du
coagulation fibrinogène en
fibrine
PROTÉINES

Classification des protéines plasmatiques

 Les trois fractions principales des protéines plasmatiques sont appelées
albumine, globuline et fibrinogène.
 A une résolution plus fine par électrophorèse, ces fractions sont séparées
comme suit :
- Albumine – 55,2 %
- α1- Globuline – 5,3 % ( α1- Antitrypsine, TBG, Transcortine , etc. )
- α2- Globuline – 8,6 % ( Haptoglobuline , céruloplasmine , α2- macroglobuline,
etc. )
- β- Globuline – 13,4 % ( β1- transferrine, β- lipoprotéine, etc. )
- ¥- Globuline – 11,0% (Anticorps, etc. )
- Fibrinogène – 6,5 %
PROTÉINES

Classification des protéines plasmatiques

 Albumine sérique
- Représente 55 % des protéines sanguines
- Je contribue largement au maintien de la pression oncotique du plasma
et
- Aide , en tant que transporteur, au transport des lipides et des
hormones stéroïdes.

 Globulines
- Constituent 38 % des protéines sanguines et
- de transport , hormones et lipides contribuant à la fonction immunitaire.
PROTÉINES

Classification des protéines plasmatiques

 Fibrinogène
- Contient 7% des protéines sanguines
- la conversion du fibrinogène en fibrine insoluble est essentielle à la
coagulation sanguine.

 Le reste des protéines plasmatiques (1 %) sont des protéines

régulatrices , telles que des enzymes, des proenzymes et des
hormones.

 La séparation des protéines sériques par électrophorèse est un outil de

diagnostic précieux ainsi qu’un moyen de suivre les progrès cliniques.
PROTÉINES

Exemples de protéines sanguines spécifiques :

 Préalbumine ( transthyrétine )
 Alpha 1 antitrypsine (neutralise la trypsine qui s'est échappée du
système digestif)
 Glycoprotéine acide alpha-1
 Alpha-1-fœtoprotéine
 alpha2-macroglobuline
 Gammaglobulines
 Macroglobuline bêta-2
PROTÉINES

Exemples de protéines sanguines spécifiques :

 Haptoglobine
 CCéruloplasmine
 compléter composant 3
 complémentaire 4
 C- réactif protéine (CRP)
 Lipoprotéines (chylomicrons, VLDL, LDL, HDL)
 Transferrine
 Prothrombine
PROTÉINES

 Protéines plasmatiques et proportions .

PROTÉINES

Concentration en protéines sériques

 La concentration sérique de protéines est fréquemment diminuée en cas
d'insuffisance cardiaque sévère.
 Dans une enquête menée auprès de chiens souffrant d'ICC ( insuffisance
cardiaque chronique ) et de fibrillation auriculaire, environ un quart présentait
de faibles concentrations de protéines sériques .

 concomitants (par exemple, maladie du foie, maladie rénale, maladie gastro-

intestinale) peuvent également influencer la concentration de protéines
sériques .

 Les mécanismes responsables de la diminution de la concentration en

protéines sériques dans l'ICC sont indéterminés.
PROTÉINES

Concentration en protéines sériques

 Les explications possibles incluent la perte lymphatique de protéines par :
- Un intestin congestionné ,
- Diminution de la synthèse hépatique,
- Cachexie cardiaque (perte des muscles cardiaques), et
- améliorée causée par une augmentation de la pression capillaire et une
hypoxie.

 Une protéinurie dramatique a été observée chez des chiens infectés par
le ver du cœur et présentant une amylose rénale concomitante.
PROTÉINES

Concentration en protéines sériques

 Il existe un certain nombre de conséquences cliniques de l'hypoprotéinémie
en ICC.
- effectif diminue davantage en cas d'hypoalbuminémie modérée à sévère .

- Comme démontré dans des études expérimentales sur des chiens souffrant
d'hypertension auriculaire gauche, l'œdème est plus susceptible de se
produire à des pressions veineuses plus faibles en cas d' hypoalbuminémie .

- marquée de protéines dans l’intestin peut indiquer un besoin d’un soutien

nutritionnel supplémentaire.
- Hypoalbuminémie prédispose également à l’alcalose métabolique.
PROTÉINES

 une hypoalbuminémie sévère et peuvent favoriser une diurèse

importante (formation accrue d'urine par le rein).
IDENTIFICATION DES PROTÉINES
 Il existe deux méthodes couramment utilisées pour identifier les
protéines :
- Edman Dégradation et
- Spectrométrie de masse .
 d'Edman est une méthode de séquençage des acides aminés dans un
peptide.
 La spectrométrie de masse des protéines est une méthode importante
pour la détermination précise de la masse et la caractérisation des
protéines.
 L'identification peut être effectuée via :
- de masse peptidique .
• Le principal avantage de cette méthode est qu’elle ne dépend pas du
séquençage des protéines pour l’identification des protéines.
• La limitation de cette méthode est qu’elle nécessite que la base de
données contienne la protéine déjà caractérisée sur un autre organisme.
IDENTIFICATION DES PROTÉINES

- Séquençage peptidique de novo, qui est effectué sans connaissance

préalable de la séquence d’acides aminés.
 En tant qu’une des bases matérielles de la vie, les protéines jouent un
rôle essentiel dans :
- catalyser les réactions de divers organismes in vivo,
- réguler le métabolisme,
- résister à l'invasion étrangère et
- contrôler l’information génétique.
IDENTIFICATION DES PROTÉINES
 D'autres méthodes d'identification des protéines comprennent :
- UV pour l'estimation des protéines
- Coomassie coloration bleue pour la détermination des protéines
dans la bière
- Chromatographie liquide haute pression
- Méthode d'électrophorèse
Détection des protéines
Méthodes de détection des protéines.
 La taille considérablement réduite des macromolécules protéiques rend
l’identification et la quantification d’échantillons protéiques inconnus
particulièrement difficiles.
 Plusieurs méthodes fiables de quantification des protéines ont été
développées pour simplifier le processus. Il s’agit de méthodes de
détection de protéines, qui comprennent :
- Christian Warburg
- Test Lowry et
- Test de Bradford

NB : Toutes ces méthodes s'appuient sur les propriétés

d'absorbance des macromolécules.
Détection des protéines

 Méthode de test Bradford

- Utilise un colorant pour se lier aux protéines.
- Coomassie Brilliant Blue G-250 est le plus souvent utilisé.
- Lorsqu’il est exempt de protéines, le colorant est rouge
mais une fois lié aux protéines, il devient bleu.
- Contrairement aux méthodes Lowry et Warburg-Christian,
les tests Bradford ne reposent pas sur la teneur en
tryptophane et en tyrosine des protéines, ce qui permet à
la méthode d'être hypothétiquement plus précise.
Détection des protéines

 de Lowry :
- Utilise le réactif Folin qui est plus précis pour la quantification.

- Folin le réactif est stable uniquement dans des conditions acides

et la méthode est susceptible de fausser les résultats en fonction
de la quantité de tryptophane et de tyrosine présentes dans la
protéine examinée.

- Le réactif Folin se lie au tryptophane et à la tyrosine, ce qui

signifie que la concentration des deux acides aminés affecte la
sensibilité de la méthode.
Détection des protéines

 Méthode Warburg-Christian :
- Filtre les protéines dans leurs plages d’absorbance naturelles.
- La plupart des protéines absorbent très bien la lumière à 280
nanomètres en raison de la présence de tryptophane et de tyrosine,
mais la méthode est sensible aux quantités variables d'acides aminés
sur lesquelles elle repose.
Détection des protéines

Méthodes non spécifiques qui détectent uniquement les protéines

totales
 Absorbance : Lecture à 280 ou 215 nm.
 Test de protéines de Bradford
 Tests dérivés du test Biuret
 Dosage de l'acide bicinchoninique ( dosage BCA)
 Test de protéine Lowry
 Fluorescamine
 Amido noir
 Or colloïdal
 Détection d'azote
Détection des protéines

Méthodes spécifiques permettant de détecter la quantité d'une

seule protéine
 Méthodes de spectrométrie
 Chromatographie liquide haute performance ( HPLC)
 Méthodes dépendantes des anticorps
 ELISA
 Immunoprécipitation des protéines
 Immunoélectrophorèse
 Immunocoloration des protéines par Western blot
Quantification des protéines

 La quantification des protéines est nécessaire pour

comprendre la teneur totale en protéines d’un
échantillon ou d’un produit formulé.

 précise des protéines est importante, car de

nombreux autres tests critiques nécessitent des
résultats précis sur la teneur totale en protéines afin
de générer des données.

 minutieuse de la méthode de quantification des

protéines est nécessaire pour garantir des données
précises.
Quantification des protéines

 Les analyses colorimétriques, par exemple, dépendent

de l'utilisation d'un étalon de référence externe et les
différentes propriétés d'absorbance entre le produit et
l'étalon de référence peuvent conduire à des
inexactitudes .

 L'analyse quantitative des acides aminés peut

également être utilisée pour déterminer la teneur en
protéines, mais il est essentiel de comprendre
comment différentes protéines s'hydrolysent dans des
conditions similaires et la stabilité des acides aminés
pendant l'hydrolyse.
Quantification des protéines

 La mesure de la concentration en protéines dans un échantillon aqueux

est un test important dans les laboratoires de recherche et
développement en biochimie pour des applications allant des études
enzymatiques à la fourniture de données pour la libération de lots
biopharmaceutiques .

 Les tests spectrophotométriques de quantification des protéines sont

des méthodes qui utilisent la spectroscopie UV et visible pour
déterminer rapidement la concentration de protéines par rapport à un
standard.
Quantification des protéines

 Un large éventail de méthodes différentes ont été développées pour

quantifier à la fois des mélanges complexes de protéines et un seul type
de protéine.

 totales comprennent les méthodes traditionnelles telles que :

- La mesure de l'absorbance UV à 280 nm,
- Bicinchoninique acide (BCA ),
- Tests de Bradford et
- Essais Lowry ou nouveaux
Quantification des protéines
 Les méthodes de quantification des protéines individuelles
comprennent :
- immuno -enzymatique (ELISA),
- par Western blot, et plus récemment,
- de masse , entre autres
Quantification des protéines

 Le test BCA présente de nombreux avantages.

- Comparé à d’autres méthodes, le test BCA est l’un des plus
sensibles (il peut détecter des protéines à des concentrations aussi
faibles que 5 ug /mL).
- Il présente moins de variabilité que d'autres (comme le test de
Bradford) et
- Il peut être utilisé pour mesurer une large gamme de
concentrations de protéines.
- De plus , sa sensibilité peut être augmentée en effectuant le test
en présence de rayonnement plasmonique . des nanocapteurs
comme dans le test SPR-BCA (Surface Plasmon Resonance – BCA)
proposé par Liu et al.
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES

 L'électrophorèse des protéines sériques (SPEP ou SPE)

est un test de laboratoire qui examine des protéines
spécifiques dans le sang appelées globulines.
 Les indications les plus courantes d’un test
d’électrophorèse des protéines sériques sont :
- Pour diagnostiquer ou surveiller le myélome multiple,
- Une gammapathie monoclonale de signification
incertaine (MGUS), ou
- pour étudier plus en détail une différence entre une
faible teneur en albumine et une protéine totale
relativement élevée.
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES
 Des douleurs osseuses inexpliquées, une anémie, une protéinurie, une
maladie rénale chronique et une hypercalcémie sont également des
signes de myélome multiple et des indications d'EPS.
 Le sang doit d’abord être collecté, généralement dans un flacon ou une
seringue hermétique .

 L'électrophorèse est une technique de laboratoire dans laquelle :

 Le sérum sanguin est appliqué sur une membrane d'acétate imbibée
d'un tampon liquide sur une matrice de gel d'agarose tamponnée , ou
dans un liquide dans un tube capillaire, et
 Exposé à un courant électrique pour séparer les composants protéiques
sériques en cinq fractions principales par taille et charge électrique :
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES
- albumine sérique,
- alpha-1 globulines,
- alpha-2 globulines,
- bêta 1 et 2 globulines, et
- gammaglobulines .
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES

 Fractions de protéines sériques

 normale des protéines sériques avec légende des différentes

zones : Par Steven Fruitsmaak.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.
Albumine
 L'absence d'albumine, appelée analbuminémie , est rare.
 une diminution du taux d’albumine est courante dans de nombreuses
maladies, notamment :
- Maladie du foie ,
- la malnutrition ,
- malabsorption ,
- avec perte de protéines et
- entéropathie .
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES
Albumine – interzone alpha-1
 Même la coloration dans cette zone est due à la lipoprotéine alpha-1
(lipoprotéine de haute densité – HDL).
 Une diminution se produit en cas d'inflammation sévère, d'hépatite
aiguë et de cirrhose.
 Une augmentation apparaît chez les alcooliques sévères et chez les
femmes pendant la grossesse et à la puberté.
 Les niveaux élevés d'AFP pouvant survenir dans le carcinome
hépatocellulaire peuvent entraîner une bande nette entre l'albumine et
la zone alpha-1.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES
Zone alpha-1
 L' alpha 1 antitrypsine (AAT) constitue la majeure partie de la bande alpha-1.
 Elle est diminuée dans le syndrome néphrotique et son absence pourrait
indiquer un éventuel déficit en alpha 1-antitrypsine.
 En tant que réactif positif en phase aiguë, l’AAT est augmentée en cas
d’inflammation aiguë.
Zone intermédiaire Alpha-1 – Alpha-2
 Deux bandes faibles peuvent être observées représentant l’alpha 1-
antichymotrypsine et la protéine de liaison à la vitamine D.
 Ces bandes fusionnent et s'intensifient au début de l'inflammation en raison
d'une augmentation de l'alpha 1-antichymotrypsine, une protéine de phase
aiguë.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES
Zone alpha-2
 Cette zone est constituée principalement d'alpha-2
macroglobuline (AMG ou A2M) et d'haptoglobine.
 Les taux d'anémie hémolytique sont généralement faibles .
 L'haptoglobine est augmentée dans le cadre de la réponse
en phase aiguë, ce qui entraîne une élévation typique de la
zone alpha-2 au cours de l'inflammation.
 Une zone alpha-2 normale et une zone alpha-1 élevée sont
un schéma typique des métastases hépatiques et de la
cirrhose.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES
 L'AMG est nettement augmentée (au moins 10 fois) en association avec
une perte de protéines glomérulaires , comme dans le syndrome
néphrotique .
 L'AMG est légèrement élevée au début de la néphropathie diabétique.

Alpha-2 - interzone bêta

 Il existe de faibles niveaux d’inflammation et des niveaux élevés
pendant la grossesse.
 La bêta-lipoprotéine forme une bande crénelée irrégulière dans cette
zone.
 élevés sont observés dans l'hypercholestérolémie de type II,
l'hypertriglycéridémie et le syndrome néphrotique.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES
Zone bêta
 La transferrine et la bêta-lipoprotéine (LDL) constituent la bêta-1.
 L'augmentation de la protéine bêta-1 due à l'augmentation du niveau de
transferrine libre est typique de l'anémie ferriprive, de la grossesse et de
l' œstrogénothérapie .
 Une augmentation de la protéine bêta-1 due à une élévation du LDL se
produit dans l'hypercholestérolémie.
 Une diminution de la protéine bêta-1 se produit en cas d'inflammation
aiguë ou chronique .
 Bêta-2 comprend C3 ( complément protéine 3). Il est élevé dans la
réponse en phase aiguë. La dépression de C3 survient dans les maladies
auto-immunes
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.
Interzone bêta-gamma
 La protéine C-réactive se trouve entre les zones bêta et gamma,
produisant une fusion bêta/gamma.

 Les IgA ont la plus grande mobilité anodale et migrent généralement

dans la région située entre les zones bêta et gamma, provoquant
également une fusion bêta/gamma chez les patients atteints de
cirrhose, d'infection respiratoire, de maladie de peau ou de polyarthrite
rhumatoïde (augmentation des IgA) .

 Le fibrinogène provenant des échantillons de plasma sera observé dans

la région bêta-gamma.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.
Zone gamma
 Une zone gamma normale doit apparaître comme un « blush » lisse, ou
frottis, sans asymétrie ni pics nets.

 Les gammaglobulines peuvent être élevées (hypergammaglobulinémie),

diminuées (hypogammaglobulinémie) ou présenter un ou plusieurs pics
anormaux.

 L'hypogammaglobulinémie est facilement identifiable comme un «

affaissement » ou une diminution de la zone gamma. C'est normal chez
les nourrissons. On le retrouve chez les patients atteints
d'agammaglobulinémie liée à l'X.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.
Zone gamma
 en IgA survient chez 1 : 500 de la population, comme le suggère une
pâleur dans la zone gamma.

 Une hypogammaglobulinémie peut être observée dans le contexte d'une

MGUS ou d'un myélome multiple .

 La gammapathie polyclonale est indiquée par une élévation « en forme

de gonflement » de la zone gamma, ce qui indique généralement une
affection non néoplasique (bien qu'elle ne soit pas exclusive aux
affections non néoplasiques ).
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.
Zone gamma
 Les causes les plus fréquentes d'hypergammaglobulinémie polyclonale
détectées par électrophorèse sont les infections graves, les maladies
hépatiques chroniques, la polyarthrite rhumatoïde, le lupus érythémateux
disséminé et d'autres maladies du tissu conjonctif .

 Un pic étroit suggère une gammapathie monoclonale, également connue

sous le nom de bande restreinte, ou « pic M ».

 La cause la plus fréquente d'une bande restreinte est une MGUS

(gammapathie monoclonale de signification incertaine), qui, bien qu'elle soit
un précurseur nécessaire, n'évolue que rarement vers un myélome multiple.
IDENTIFICATION DES PROFILS
ÉLECTROPHORÉTIQUES.

 La macroglobulinémie de Waldenström (IgM), la gammapathie

monoclonale de signification indéterminée (MGUS), l'amylose, la
leucémie plasmocytaire et les plasmocytomes solitaires produisent
également un pic M .

 oligoclonale est indiquée par un ou plusieurs clones discrets.

HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hyperprotéinémie

 Un taux élevé de protéines sanguines (hyperprotéinémie) correspond à

une augmentation de la concentration de protéines dans le sang.

 hyperprotéine sanguine n’est pas une maladie ou un état spécifique en

soi, mais elle peut être le signe d’une maladie.

 Un taux élevé de protéines sanguines provoque rarement des signes ou

des symptômes à lui seul. Mais parfois, il est découvert lors d’analyses
sanguines effectuées dans le cadre d’une évaluation d’un autre
problème ou symptôme.
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Causes de l'hyperprotéinémie
 Les causes possibles d’un taux élevé de protéines sanguines
comprennent :
 Amylose ( accumulation de protéines anormales dans vos organes)
 Déshydratation
 Hépatite B
 Hépatite C
 VIH/SIDA
 Gammapathie monoclonale de signification indéterminée (MGUS)
 Myélome multiple
NB : Un régime hyperprotéiné n'entraîne pas d'hyperprotéine sanguine.
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hyperprotéinémie
 hyperprotéine sanguine n’est pas une maladie ou un état spécifique en soi. Il s'agit
généralement d'un résultat de laboratoire découvert lors de l'évaluation d'une affection
ou d'un symptôme particulier.

 Par exemple, même si l’on trouve un taux élevé de protéines dans le sang chez les
personnes déshydratées, le véritable problème est que le plasma sanguin est en réalité
plus concentré .

 Certaines protéines dans le sang peuvent être élevées lorsque votre corps combat une
infection ou une autre inflammation.

 Les personnes atteintes de certaines maladies de la moelle osseuse, telles que le

myélome multiple, peuvent présenter des taux de protéines sanguines élevés avant de
présenter d'autres symptômes.
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hyperprotéinémie
 L'hémoconcentration (diminution du volume d'eau plasmatique)
entraîne une hyperprotéinémie relative.

 L'hyperprotéinémie peut être observée en cas de déshydratation due à

un apport hydrique insuffisant ou à une perte d'eau excessive (par
exemple, vomissements sévères, diarrhée, maladie d'Addison et acidose
diabétique) ou à une production accrue de protéines.

 accrue de protéines polyclonales est observée dans les processus

réactifs et inflammatoires.
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hyperprotéinémie
Interprétation
 Une légère hyperprotéinémie peut être provoquée par une
augmentation de la concentration de protéines spécifiques normalement
présentes à des concentrations relativement faibles.
 par exemple , augmentation des réactifs de la phase aiguë et des
immunoglobulines polyclonales produit en :
- inflammatoires ,
- à un stade avancé , et
- infections .
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hyperprotéinémie
 modérée à marquée peut également être due à un myélome multiple et
à d'autres paraprotéinémies malignes, bien que des taux normaux de
protéines totales n'excluent pas ces troubles.
 Une électrophorèse des protéines sériques doit être réalisée pour
évaluer la cause de l'augmentation des protéines totales sériques .
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hypoprotéinémie

 Une condition dans laquelle le taux de protéines sériques totales est

inférieur à la plage normale.
 Il s’agit d’une maladie caractérisée par un taux anormalement bas de
protéines dans le sang.
 Il existe plusieurs causes qui entraînent toutes un œdème une fois que
les taux de protéines sériques tombent en dessous d'un certain seuil.
 L'hypoprotéinémie peut être causée par :
- malabsorption des protéines dans le tractus gastro-intestinal,
- ŒDÈME , ou
- PROTÉINURIE .
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Hypoprotéinémie
 L'hypoprotéinémie peut être due à une diminution de la production (par
exemple, une hypogammaglobulinémie) ou à une augmentation de la perte de
protéines (par exemple, un syndrome néphritique, une entéropathie avec
perte de protéines ).

 Une électrophorèse des protéines sériques doit être réalisée pour évaluer la
cause de la diminution des protéines sériques totales.

 Si un schéma néphrotique est identifié, une électrophorèse des protéines

urinaires doit également être réalisée .

 L'hémodilution entraîne une hypoprotéinémie relative.

HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Causes de l'hypoprotéinémie
 L'hypoprotéinémie nutritionnelle est due à une limitation sévère de
l'apport en protéines dans l'alimentation. Un exemple
d’hypoprotéinémie nutritionnelle est le Kwashiorkor, un type de
malnutrition protéino-énergétique affectant les jeunes enfants.
 Malabsorption
 Les maladies du foie peuvent également provoquer une
hypoprotéinémie en diminuant la synthèse de protéines plasmatiques
comme l'albumine.
 Les maladies rénales comme le syndrome néphrotique peuvent
également entraîner une hypoprotéinémie car les protéines
plasmatiques sont perdues dans l'urine.
HYPERPROTÉINÉMIE ET HYPOPROTÉINÉMIE

Causes de l'hypoprotéinémie
 Sepsis (infection du corps entier) – les macrophages activés dans le foie
et la rate sécrètent du TNF-alpha dans la circulation sanguine,
entraînant une hypoprotéinémie .

NB : - La diminution des protéines sériques réduit la pression osmotique du

sang, entraînant une perte de liquide du compartiment intravasculaire, ou
des vaisseaux sanguins, vers les tissus interstitiels, entraînant un œdème.

- L'hypoprotéinémie est souvent confirmée par des tests d'albumine

sérique et de protéines totales.
TROUBLES QUANTITATIFS DES IMMUNOGLOBULINES

 En pratique, comme il existe plusieurs méthodes pour déterminer les taux

sériques d’immunoglobulines, il est essentiel que le laboratoire fournisse des
plages de référence normales ajustées en fonction de l’âge lors de l’évaluation des
résultats des taux d’immunoglobulines.

 Les enfants atteignent pour la première fois les niveaux adultes d’IgM vers l’âge
de 2 ans, d’IgG vers l’âge de 6 ans et d’IgA pendant la puberté.

 L'hypogammaglobulinémie est définie comme un taux d'IgG inférieur à 2 écarts

types par rapport à la normale, et l'agammaglobulinémie est généralement définie
comme un taux d'IgG inférieur à 100 mg/ dL .

 De faibles niveaux d'IgA, d'IgG et d'IgM sont caractéristiques de la plupart des

formes de SCID (syndrome d'immunodéficience combinée sévère).
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Hyperimmunoglobulinémie polyclonale et monoclonale.

Hypergammaglobulinémie

 L'hypergammaglobulinémie résulte d'une surproduction

d'immunoglobulines par les plasmocytes, comprenant le plus souvent
une augmentation du nombre de plasmocytes dans la moelle osseuse.

 L' augmentation des plasmocytes et l'augmentation associée des

immunoglobulines peuvent être polyclonales ou monoclonales.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Hypergammaglobulinémie polyclonale

 Dans l'hypergammaglobulinémie polyclonale, le nombre de plasmocytes

non néoplasiques augmente en réponse à un stimulus antigénique tel
que :
- infection ,
- inflammation ou
- un néoplasme.
 c'est à dire . L'hypergammaglobulinémie polyclonale accompagne
d'autres états pathologiques.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Troubles produisant une gammapathie polyclonale

 La gammapathie polyclonale reflète généralement l'un des cinq troubles
majeurs, notamment :
- du foie ,
- troubles du tissu conjonctif ,
- infections ,
- hématologiques , et
- solides .
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Hypergammaglobulinémie monoclonale
 Les augmentations monoclonales ne dépendent pas d'un stimulus
(comme une maladie ou une infection), mais reflètent plutôt une
augmentation néoplasique d'un seul clone de plasmocytes, c'est-à-dire
que l' hyperimmunoglobulinémie monoclonale reflète un trouble
plasmocytaire ou lymphoprolifératif .

 Les troubles hypergammaglobulinémiques sont reconnus cliniquement

lorsqu'un médecin prescrit une électrophorèse des protéines sériques
lors d'un examen médical général ou lors de la recherche d'un trouble
spécifique.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

 La distinction entre les troubles polyclonaux et monoclonaux est faite

par l'inspection du profil électrophorétique des protéines sériques.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

 L’ aspect électrophorétique des protéines sériques en présence d’une

gammaglobulinémie monoclonale est présenté comme suit.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

 La détection d'une ou plusieurs bandes monoclonales dans un contexte

polyclonal n'est pas inhabituelle et la littérature suggère que les petites
bandes disparaissent fréquemment et ne deviennent pas cliniquement
pertinentes.

 Aucune donnée n’est disponible suggérant que la gammapathie

polyclonale soit à l’origine du développement de la gammapathie
monoclonale.

 Cependant, si un trouble de prolifération plasmatique clonale est

suspecté, une immunofixation ou une immunoélectrophorèse doit être
réalisée.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Hypogammaglobulinémie

 Il s’agit d’une situation dans laquelle la quantité de protéines

(globulines) dans le corps est réduite en dessous de la normale.
 Cela pourrait être dû à :
- Malnutrition , _
- Malabsorption , et
- Tout état pathologique dans lequel de grandes quantités de protéines
sont perdues, comme une protéinurie néphrotique, des brûlures graves
ou une entéropathie avec perte de protéines.
TROUBLES QUANTITATIFS DES
IMMUNOGLOBULINES

Hypogammaglobulinémie
 Les causes de l’hypogammaglobulinémie peuvent être divisées
en :
I. primaires liées aux déficiences génétiques et
II. causes secondaires liées à :
- Les tumeurs malignes ou leur traitement,
- Infections ,
- Les médicaments , et
- de perte de protéines qui épuisent les anticorps.
PARAPROTÉINES

 Les paraprotéines sont des chaînes lourdes monoclonales, des chaînes

légères ou des immunoglobulines intactes présentes dans le sang ou
l'urine.

 Généralement produit par un clone de plasmocytes ou de cellules B.

 D'autres termes pour une telle protéine sont protéine M, composant
M, pointe M, protéine de pointe ou protéine du myélome.

 Cette prolifération de la protéine du myélome a plusieurs effets

délétères sur l’organisme, notamment :
- Fonction immunitaire altérée ,
- anormalement élevée (« épaisseur » du sang), et
- aux reins .
PARAPROTÉINES

 Ces protéines sont associées à un spectre de troubles rénaux provoqués

soit par des effets directs sur les cellules rénales, soit par des dépôts
dans diverses cellules rénales.

 Au cours de la dernière décennie, un nombre croissant de troubles

rénaux associés aux paraprotéines ont été identifiés, dans lesquels le
bilan clonal de la paraprotéine impliquée peut ne pas répondre aux
critères d'un cancer.

 Ces troubles sont désormais classés comme gammapathie monoclonale

d'importance rénale (MGRS).
PARAPROTÉINES

 La détection de paraprotéines dans l’urine ou le sang est le plus souvent

associée à :
I. Gammapathie monoclonale bénigne de signification indéterminée
(MGUS), où ils restent « silencieux », ou
II. Myélome multiple.
 Un excès de sang est appelé paraprotéinémie.
 Les paraprotéines forment une bande étroite, ou « pic » dans
l’électrophorèse des protéines, car elles sont toutes exactement la
même protéine.
 Contrairement aux anticorps immunoglobulines normaux, les
paraprotéines ne peuvent pas combattre l’infection.
PARAPROTÉINES

Interprétation
 de paraprotéines sériques supérieurs à 30 g/l permettent de diagnostiquer un
myélome latent , appelé dyscrasie plasmocytaire .

 élevé de paraprotéines (au-dessus de 30 g/l) associé à des lésions des organes

cibles (augmentation du calcium, insuffisance rénale, anémie ou lésions
osseuses) ou à d'autres biomarqueurs de malignité permet de diagnostiquer un
myélome multiple.

 La détection de paraprotéines dans le sérum à un taux inférieur à 30 g/l est

classée comme MGUS, dans les cas où les plasmocytes clonaux constituent
moins de 10 % sur la biopsie de la moelle osseuse et où il n'y a pas d'altération
d'un organe ou d'un tissu lié au myélome.
PARAPROTÉINES

 La mesure des chaînes légères libres dans le sérum permet de détecter

les chaînes légères libres dans le sang.
 Les chaînes légères libres monoclonales présentes dans le sérum ou
l'urine sont appelées protéines de Bence Jones.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Définition et présentation
 Une enzyme est une substance produite par un organisme vivant qui
agit comme un catalyseur pour provoquer une réaction biochimique
spécifique .

 Il régule la vitesse à laquelle les réactions chimiques se déroulent sans

être modifié au cours du processus.

 Les enzymes sont libérées par la mort des cellules de chaque organe de
l'organisme.

 Chez l'individu sain, la concentration plasmatique de ces enzymes est

faible, mais non nulle , en raison du renouvellement physiologique des
cellules de chaque tissu.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Quantification des enzymes

 Dans plusieurs maladies aiguës et chroniques (notamment l'inflammation,
l'infarctus et le cancer), la concentration de certaines de ces enzymes peut
augmenter considérablement, fournissant ainsi des indices diagnostiques
importants .

 Les enzymes sont généralement assez faciles à quantifier, grâce à leur activité
spécifique : un substrat chromogène (c'est-à-dire un substrat physiologique ou
artificiel dont la transformation par l'enzyme provoque une modification de ses
propriétés spectroscopiques) est ajouté au plasma du patient, et la vitesse de
sa conversion au produit est suivi par spectroscopie d'absorbance.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Quantification des enzymes

 Le taux de transformation du substrat est corrélé à la concentration en
enzyme par l' équation de Michaelis et Menten :
v = [E] kcat [S] / (KM + [S])
où:
 [S] est la concentration du substrat et

 kcat et KM sont les paramètres cinétiques caractéristiques de l'enzyme.

 Étant donné que les valeurs précises de kcat et KM peuvent varier en raison
des conditions expérimentales, le laboratoire standardise son propre procédé
en utilisant des échantillons commerciaux purifiés de chaque enzyme.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Quantification des enzymes

 Lorsqu'elle est mesurée avec des méthodes fonctionnelles, la
concentration en enzyme est exprimée en unités standardisées par ml
(U/mL).

 La valeur efficace de l'unité standardisée varie selon les différentes

enzymes (puisque chacune nécessite ses propres conditions
expérimentales), mais le concept est toujours le même.

 UN L'unité est la quantité d'enzyme qui transforme une mMole (ou

microMole ou autre quantité) de substrat en une minute (ou une
seconde).
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Quantification des enzymes

 D'autres méthodes pour quantifier la concentration des enzymes dans le
plasma sanguin sont :
- par électrophorèse , et
- par immuno -essais

 Ceux-ci peuvent être coûteux car ils nécessitent que le laboratoire

achète des anticorps spécifiques pour chaque enzyme d' intérêt clinique.

 Dans certains cas, l'enzyme d'intérêt peut avoir des propriétés

spectroscopiques spéciales (par exemple le cytochrome c contient un
groupe hème ), permettant une mesure directe au moyen d'une
spectroscopie d'absorbance ou de fluorescence .
ENZYMES DANS LE PLASMA
SANGUIN.
Utilité diagnostique ou pertinence de la mesure des enzymes
plasmatiques.
 La mesure des enzymes plasmatiques est très pertinente en chimie
clinique car la concentration des enzymes dans le plasma révèle l'état
de santé de presque tous les organes du corps, y compris :
- coeur ,
- foie ,
- rein ,
- cerveau etc
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Utilité diagnostique ou pertinence de la mesure des enzymes

plasmatiques.
 Les enzymes catalysent diverses réactions biochimiques dans l’organisme et,
conjointement avec les transporteurs et les récepteurs, contrôlent
pratiquement tous les processus physiologiques.
 Il est très utile de mesurer l’activité enzymatique ex et in vivo.
 spatiales et temporelles ou les changements dans l’activité enzymatique
peuvent être liés à divers processus naturels et pathologiques.
 Ils peuvent être classés globalement comme suit :
- Soit des méthodes basées sur des substrats artificiels dans le but de créer
des images de tissus malades
- ou des méthodes basées sur des substrats naturels dans le but de
comprendre les processus naturels.
ENZYMES DANS LE PLASMA
SANGUIN.
ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT
1.) Lactate déshydrogénase (LDH)
 I est un tétramère composé de deux types de sous-unités, appelées H et M.
 L' enzyme catalyse la réduction réversible du pyruvate en lactate qui se
produit lors de la glycolyse anaérobie.
 c'est à dire . lorsque la glycolyse dépasse la capacité de la mitochondrie à
oxyder l'acétyl-CoA dérivé de la décarboxylation du pyruvate, en raison
d'une disponibilité insuffisante en oxygène ; la condition la plus typique est
un effort musculaire intense :

 CH3-CO-COOH + NADH + H+ <==> CH3-CHOH-COOH + NAD+

ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

 La lactate déshydrogénase est présente dans de nombreux tissus
métaboliquement actifs, par exemple le cœur, les muscles squelettiques, les
reins, et est augmentée dans des conditions cliniques entraînant la mort de ces
tissus (par exemple infarctus du myocarde, infarctus rénal, syndrome
d'écrasement avec lésions musculaires multiples).

 La caractérisation des variants d'isoenzymes est cliniquement pertinente : les

deux types de chaînes polypeptidiques peuvent former des tétramères purs ou
mixtes de formules H4 (appelés LDH1), H3M (LDH2), H2M2 (LDH3), HM3 (LDH4),
M4 (LDH5).

 Dans les lésions cardiaques et rénales, les tétramères contenant principalement

des sous-unités de type H prédominent, alors que l'inverse est vrai dans le cas de
lésions du foie ou du muscle squelettique.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

2). Créatine ( phospho )kinase (CK ou CPK)
 C'est une enzyme dimère ; Il existe deux isoformes appelées M (pour
muscle) et B (pour cerveau).
 CK catalyse l'échange réversible de groupes phosphate entre l'ATP et la
créatine .
 la phosphocréatine agit comme un réservoir de groupes phosphates à
haute énergie, particulièrement utiles pour maintenir la contraction
musculaire lors d'un effort musculaire intense anaérobie.
 La concentration de CK dans le sérum des adultes en bonne santé est <
30 U/mL et est significativement augmentée en cas d'infarctus du
myocarde et de troubles aigus des muscles ou du système nerveux
central (par exemple traumatismes, infarctus cérébral, etc.).
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

3.) Amylase

 Il est produit par les glandes salivaires et par le pancréas.

 Sa fonction est l'hydrolyse de l'amidon et du glycogène d'origine alimentaire .


 Sa concentration sérique peut être fortement augmentée au cours d'une
pancréatite aiguë, mais cette constatation est inconstante.

 deux isoenzymes de l'amylase, appelées S (présentes principalement dans les

glandes salivaires et les poumons) et P (dans le pancréas).
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

4.) Protéases pancréatiques :
 La trypsine , la chymotrypsine, l'élastase et d'autres enzymes sont
sécrétées dans l'intestin et jouent le rôle physiologique de digestion des
protéines alimentaires.
 Ils sont libérés dans le sang lors d'épisodes de pancréatite aiguë ou
chronique.
 libres n'atteignent généralement pas des niveaux très élevés dans le
plasma sous leur forme active car elles sont neutralisées par les
serpines .
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

5.) Phosphatase alcaline
 Produit par plusieurs organes, notamment le placenta, le foie, les
cellules osseuses, les reins et les intestins .
 L' activité de l'enzyme est peu spécifique car elle hydrolyse les esters
phosphoriques de plusieurs alcools (dont les protéines phosphorylées).
 L' enzyme est libérée dans le sang par toutes les maladies entraînant la
mort des cellules de ces organes.
 Cancer de ces organes est une cause importante d'augmentation de la
phosphatase alcaline sérique, en raison du fait que les cellules
cancéreuses sont sujettes à un renouvellement rapide et que beaucoup
d'entre elles meurent en raison d'une mauvaise oxygénation du tissu
cancéreux.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

6.) Phosphatase acide
 Produit par plusieurs tissus, notamment par la prostate et est
significativement augmenté dans les cas avancés de cancer de la
prostate , surtout si des métastases sont présentes.

 D'autres affections entraînant une augmentation de la concentration de

phosphatase acide sont l'hyperplasie prostatique, le myélome multiple
et l'anémie hémolytique.

 La fonction physiologique et les substrats de cette enzyme sont très

similaires à ceux de la phosphatase alcaline, dont elle diffère car elle est
plus active à pH acide.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

8.) Aminotransférases (transaminases)
 Une caractéristique des cellules hépatiques.
 Ils catalysent l'échange réversible de groupes aminés entre les alpha -
cétoacides et alpha- aminoacides :
 par exemple . la réaction catalysée par l'ALT est la conversion réversible
de l'alpha - kétoglutarique acide et alanine en acide glutamique et acide
pyruvique, comme suit :

COOH-CH2-CH2-CO-COOH + CH3-CHNH2-COOH <==> COOH-CH2-CH2-

CHNH2-COOH + CH3-CO-COOH
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

8 .) Aminotransférases (transaminases)
 les plus importantes sont :
- Alanine Aminotransférase (ALT; également appelée Glutamate-Pyruvate
Transaminase, GPT ou sGPT ) et
- Aspartate Aminotransférase (AST ; également appelée Glutamate-
Oxaloacétate Transaminase, GOT ou sGOT ).
 Les autres tissus contenant ces enzymes sont le cœur, les muscles
squelettiques et le système nerveux central.
 Les transaminases sont élevées dans plusieurs affections aiguës telles
que les infarctus du myocarde ou cérébral ; cependant, ils atteignent
leurs niveaux les plus élevés et permettent de diagnostiquer les
maladies du foie.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

ENZYMES DIAGNOSTIQUES D'INTÉRÊT

9.) Gamma- glutamyl transpeptidase
 Aussi appelé gamma- glutamyl transférase , gammaGT .
 C'est une enzyme qui transfère un résidu d'acide glutamique d'un
donneur (généralement du glutathion) à un accepteur (un acide aminé
libre ou un xénobiotique).
 Il est impliqué dans plusieurs réactions de détoxification du foie, des
reins, du cerveau, du cœur et d’autres tissus.
 D' un point de vue clinique, une gammaGT sérique élevée est
généralement une indication d'une maladie du foie.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Principes d'investigation clinique :

 Le dépistage typique des enzymes sériques consiste à mesurer l'activité de
six enzymes qui, prises ensemble, fournissent un tableau clinique important
et indiquent la direction d'une enquête plus approfondie.

 ALT , AST, LDH, CPK, phosphatase alcaline (ALP), éventuellement

phosphatase acide (ACP) et γ- glutamyl transpeptidase (γ-GT).

 Le schéma d'augmentation de la concentration de (toutes ou partie) de ces

enzymes fournit des informations sur d'éventuelles maladies du foie, du
cœur, du tissu hématopoïétique, des os, des muscles squelettiques et de la
prostate et peut faire suspecter des maladies inflammatoires ou ischémiques
aiguës (par exemple, hépatite virale). , infarctus du myocarde) ou un cancer.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mécanisme d'action enzymatique

 Ils réagissent avec le substrat pour former un complexe intermédiaire –
un « état de transition » – qui nécessite moins d’énergie pour que la
réaction se déroule .

 Le composé intermédiaire instable se décompose rapidement pour

former des produits de réaction .
 l' enzyme inchangée est libre de réagir avec d'autres molécules de
substrat .

 Seule une certaine région de l’enzyme, appelée site actif, se lie au

substrat. Le site actif est un sillon ou une poche formée par le motif de
repliement de la protéine.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mécanisme d'action enzymatique

 Cette structure tridimensionnelle, ainsi que les propriétés chimiques et
électriques des acides aminés et des cofacteurs du site actif, permettent
uniquement à un substrat particulier de se lier au site, déterminant ainsi
la spécificité de l'enzyme.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesure de la concentration catalytique et de la concentration

massique des enzymes
 Les concentrations d’enzymes sont souvent indiquées en termes d’«
unités » plutôt qu’en concentrations molaires ou massiques.

 Nous connaissons rarement la masse exacte de l'enzyme dans un

échantillon, car il est généralement préparé par isolement de l'enzyme à
partir de micro-organismes ou de tissus animaux ou végétaux, et
contient souvent une grande quantité de protéines non catalytiques,
dont la quantité peut varier. d’un échantillon à l’autre.

 Il faut donc adopter une approche différente et la concentration en

enzyme est indiquée en unités d'activité spécifique.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesure de la concentration catalytique et de la concentration

massique des enzymes
 Une « unité » est définie comme la quantité d'enzyme ( par exemple ,
un microgramme) qui donne une certaine quantité d'activité catalytique
dans des conditions spécifiées .

 L' activité est donnée par la quantité de produit formé ou de substrat

consommé dans le mélange réactionnel, dans les conditions spécifiées
(température, pH, type de tampon, concentrations de substrat et
d'enzyme, etc. ).

 Les méthodes de mesures qualitatives et quantitatives de l'activité

enzymatique ex vivo et in vivo se répartissent en deux grandes
catégories.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesure de la concentration catalytique et de la concentration massique

des enzymes
 L’ objectif principal peut être biochimique ou neurochimique, comme
comprendre les différences dans une voie métabolique dans deux régions du
cerveau. Ou

 Il peut s'agir de révéler, généralement par imagerie, des différences qualitatives

qui existent parce que le niveau d'activité d'une enzyme particulière est associé
à une pathologie spécifique dans une région anatomique particulière telle
qu'une tumeur.

 Dans ce cas, l'objectif est « morphologique » puisque l'activité de l'enzyme

définit la taille et la morphologie de la région malade. Ce dernier type de mesure
dépend de l'utilisation de substrats synthétiques.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesurer le taux de réaction contrôlée enzymatique.

 Les enzymes opèrent dans tous les organismes biologiques, tant au
niveau intracellulaire qu'extracellulaire .

 Vous savez que les enzymes sont des catalyseurs biologiques, ce qui
signifie qu’elles augmentent la vitesse des réactions chimiques sans
subir de changement permanent.

 Les enzymes sont constituées de longues chaînes d’acides aminés,

repliées avec précision dans une forme tridimensionnelle (ou structure
tertiaire) avec un site actif qui leur permet de fonctionner comme un
catalyseur.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesurer le taux de réaction contrôlée enzymatique.

 Toute modification de cette structure tridimensionnelle peut modifier la
forme du site actif et entraîner la dénaturation de l’enzyme.

 Cette structure est représentée dans les modèles d'action enzymatique

à serrure et à clé et à ajustement induit, le modèle d'ajustement induit
incluant les changements qui peuvent survenir dans la forme de
l'enzyme pour permettre la catalyse.

 Compte tenu de la gamme de réactions contrôlées par les enzymes, il

n’existe pas de méthode unique pour mesurer les vitesses de réaction,
car les produits des réactions varient considérablement.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Mesurer le taux de réaction contrôlée enzymatique.

 Par exemple, la catalase est une enzyme intracellulaire courante qui
accélère la décomposition du peroxyde d’hydrogène (un sous-produit du
métabolisme) en eau et en oxygène.

 Dans cette réaction, l’oxygène gazeux produit peut être collecté et

utilisé comme moyen de mesurer la vitesse de réaction.

 Alternativement , l'enzyme extracellulaire trypsine décompose la

caséine présente dans le lait, changeant sa couleur du blanc au clair.

 La vitesse de réaction peut donc être mesurée avec un colorimètre, qui

indiquera l'absorption de la lumière à travers le produit.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Facteurs affectant l'activité enzymatique

 L'activité enzymatique est affectée par divers facteurs, notamment la
concentration du substrat et la présence de molécules
inhibitrices .
 La vitesse d'une réaction enzymatique augmente avec l'augmentation
de la concentration en substrat, atteignant une vitesse maximale
lorsque tous les sites actifs des molécules enzymatiques sont engagés.
 Ainsi , la vitesse de réaction enzymatique est déterminée par la vitesse
à laquelle les sites actifs convertissent le substrat en produit .
 Un autre facteur affectant l'activité enzymatique est le contrôle
allostérique , qui peut impliquer une stimulation de l'action
enzymatique ainsi qu'une inhibition.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Facteurs affectant l'activité enzymatique

 L'inhibition de l'activité enzymatique se produit de différentes manières.
 compétitive se produit lorsque des molécules similaires aux molécules
du substrat se lient au site actif et empêchent la liaison du substrat lui-
même.
 L'inhibition non compétitive se produit lorsqu'un inhibiteur se lie à
l'enzyme à un emplacement autre que le site actif .

 La stimulation et l'inhibition allostériques permettent la production

d'énergie et de matériaux par la cellule lorsqu'ils sont nécessaires et
inhibent la production lorsque l'approvisionnement est adéquat.
ENZYMES DANS LE PLASMA SANGUIN.

Facteurs affectant l'activité enzymatique

 des enzymes sont également influencées par le contrôle génétique et
la distribution dans une cellule .
 Certaines enzymes ne sont pas produites par certaines cellules et
d’autres ne se forment qu’en cas de besoin.
 Les enzymes ne se trouvent pas toujours uniformément dans une
cellule ; ils sont souvent compartimentés dans le noyau, sur la
membrane cellulaire ou dans des structures subcellulaires.
 Les taux de synthèse et d'activité des enzymes sont en outre influencés
par les hormones , les neurosécrétions et d'autres produits
chimiques qui affectent l'environnement interne de la cellule.
MODULE III. ÉVALUATION BIOCHIMIQUE DE LA
FONCTION DES ORGANES ET SYSTÈMES

I.) TESTS DE LA FONCTION HÉPATIQUE

 Le foie est un organe important du corps humain. De nombreuses
fonctions vitales se produisent dans le foie, telles que la synthèse des
protéines, le stockage du glycogène, le métabolisme des médicaments
et le processus de détoxification .

 De nombreuses maladies peuvent affecter le foie et ses fonctions. Par

exemple:
* Hépatite due à des virus (hépatite A, B, C, D, G) ou à d'autres causes
* Cirrhose
* Jaunisse
* Foie gras
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
A.) Mesure des enzymes hépatiques
 Les tests de la fonction hépatique peuvent être classés comme suit :
un. Tests pour évaluer la fonction d'excrétion du foie.
b. Tests pour évaluer la fonction synthétique du foie.
c. Tests pour évaluer l’intégrité des cellules hépatiques.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
1. ALT (alanine aminotransférase) ou GPT (Glutamate Pyruvate
Transaminase) :
 L'ALT est le marqueur le plus sensible des lésions des cellules hépatiques ;
puisqu'il n'est synthétisé que par les cellules hépatiques.
 D'autres enzymes hépatiques peuvent également être synthétisées par
d'autres organes. On le trouve principalement dans le foie.
 élevé d’ALT est dû à :
• hépatiques dus à une inflammation, une infection virale ou la mort
cellulaire.
• Lorsque les cellules hépatiques sont endommagées, l’enzyme ALT
s’échappe dans la circulation sanguine, entraînant une augmentation de
son taux dans le sérum .
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
• Certains médicaments peuvent également élever l’ALT
sérique, car certains médicaments provoquent des
lésions hépatiques entraînant une augmentation du
taux d’ALT.
• Les médicaments susceptibles d'augmenter les taux
d'ALT comprennent l'acétaminophène, l'ampicilline , la
codéine, le dicumarol, l'indométacine, le méthotrexate,
les contraceptifs oraux, les tétracyclines et le
vérapamil.
• antérieures peuvent provoquer des taux élevés.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
2. AST (Aspartate aminotransférase) ou GOT (Glutamate
Oxaloacetate Transaminase) :
 Est synthétisé par : les cellules hépatiques, le muscle cardiaque et les
muscles squelettiques.
 Cette enzyme reflète également les dommages de la cellule hépatique
mais est moins sensible que l'ALT, puisqu'elle est synthétisée par
d'autres organes. Le rapport ALT/AST est utile pour évaluer l’étiologie
des anomalies des enzymes hépatiques.
 AST sérique élevée en raison de :
 musculaires , infarctus du myocarde (crise cardiaque) et maladie
hépatique chronique. Pour confirmer qu'un taux élevé d'AST est dû à
une lésion cardiaque ou musculaire, une autre enzyme (créatinine
kinase CK), spécifique du cœur, est également testée. Le jeûne est
préférable mais n’est pas obligatoire pour ce test.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
3. ALP (phosphatase alcaline) :
 On le trouve en grande quantité dans le foie, les voies biliaires, le placenta et les os.
 Des taux sériques élevés d’ALP peuvent être dus à :
* Dommages aux voies biliaires, inflammation, cirrhose ou obstruction dues à des
calculs.
*Hépatite alcoolique.
 Élévation physiologique normale :
* Pendant la grossesse
*Pendant la croissance de l'enfant
 Pour évaluer l'étiologie de l'élévation de l'ALP, les taux de GGT et de bilirubine sont
également mesurés.
 Le jeûne est préférable mais n’est pas obligatoire pour ce test.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
4. GGT (Gamma Glutamique Transpeptidase ) :
 Produit par le foie, les reins et le pancréas.
 Son niveau est élevé dans les toxines et l'hépatite alcoolique. Il est
utilisé pour confirmer l’étiologie hépatique de l’élévation de la PAL.
 Le GGT n’est pas un test utile pour distinguer les différentes causes de
lésions hépatiques.
 de huit heures est recommandé car la GGT diminue après avoir mangé.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
B.) Mesure de la bilirubine.
 La bilirubine est produite à partir de la dégradation de l'hème (80 % de
l'hème provient de l'hémoglobine des globules rouges, 20 % d'autres
hémoprotéines telles que le cytochrome et la myoglobine).
 La bilirubine est transférée au foie pour subir un autre processus
métabolique appelé conjugaison afin de la rendre plus soluble dans
l'eau.
 Ensuite, la bilirubine conjuguée est excrétée dans la bile pour faciliter la
digestion des aliments et la quantité en excès est excrétée dans l'urine
et les selles.
 élevés de bilirubine dans le sang et l'urine indiquent certaines maladies.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
 Structure : La bilirubine est constituée de quatre pyrrols à chaîne
ouverte , contrairement à l'hème qui est constitué de quatre pyrrols en
anneau appelés ( porphyrine ).
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
 Comme d’autres pigments, la bilirubine change de conformation
lorsqu’elle est exposée à la lumière.
 Ceci est utilisé dans la photothérapie des nouveau-nés atteints de
jaunisse.
 La version éclairée de la bilirubine est plus soluble que la version non
éclairée.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Production de bilirubine :
 Après environ 120 jours de circulation, les globules rouges sont absorbés
et dégradés par le système réticuloendothélial (RE), notamment au
niveau du foie, de la rate et de la moelle osseuse.
 Cela libère de l'hémoglobine qui se décompose en hème et en partie
protéique (globine).
 Les parties de globine sont transformées en acides aminés.
 Le fer est retiré de la molécule d’hème et recyclé ou utilisé par le corps,
et l’ anneau porphyrine est ouvert pour former la bilirubine.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
 Le corps produit habituellement environ 300 mg de bilirubine par jour
comme produit de dégradation de l'hème .

 Environ 80 % proviennent des globules rouges, le reste provenant des

précurseurs des globules rouges détruits dans la moelle osseuse («
érythropoïèse inefficace ») et d'autres protéines hèmes telles que la
myoglobine et les cytochromes.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Métabolisme de la bilirubine :
 La bilirubine est insoluble dans l'eau et est transportée dans le plasma
liée à l'albumine (en tant que support) et n'est donc pas filtrée au
niveau du glomérule, sauf en cas de protéinurie glomérulaire.
 Lorsqu'elle atteint le foie, la bilirubine est captée par un mécanisme de
transport spécifique.
 Dans le foie, la bilirubine est conjuguée à l'acide glucuronique pour
produire des diglucuronides de bilirubine , qui sont solubles dans l'eau et
facilement transportés vers la bile.
 D'autres processus métaboliques se produisent dans l'intestin et les
reins, comme indiqué ci-dessous.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Métabolisme de la bilirubine :
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Types de bilirubine dans le sérum :
 Bilirubine directe : est une bilirubine conjuguée ou soluble dans l'eau.
En solution aqueuse, elle réagit rapidement avec le réactif et est dite
(réaction directe).
 Bilirubine indirecte : bilirubine non conjuguée ou insoluble dans l’eau,
car elle est moins soluble dans l’eau. Il réagit plus lentement avec le
réactif, la réaction est donc effectuée en présence de méthanol.
 Bilirubine totale : dans ce cas, la bilirubine conjuguée et non
conjuguée est mesurée. Le testament non conjugué est calculé en
soustrayant le direct du total et ce qu'on appelle l'indirect.
 Connaître le niveau de chaque type de bilirubine a une importance
diagnostique.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Mesures de la bilirubine plasmatique :
 La concentration sérique de bilirubine dépend du taux d'élimination de
la bilirubine suite à la destruction de l'hémoglobine.
 Un test de bilirubine mesure la quantité de bilirubine dans un échantillon
de sang.
 totale et directe peuvent être mesurés à partir du sang, mais la
bilirubine indirecte est calculée à partir de la bilirubine totale et directe .

 Jaunisse : terme médical décrivant l'augmentation de la bilirubine dans

le sang, entraînant une couleur jaune de la peau et de la sclère.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Types de jaunisse :
 Selon la cause de la jaunisse, elle est classée en trois types principaux :
1. Ictère préhépatique ( ictère hémolytique ).
2. Ictère hépatique ( ictère hépato -cellulaire).
3. Ictère post-hépatique ou obstructif (type le plus courant)
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Les différences entre les trois types sont expliquées dans le
tableau ci-dessous.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Ictère physiologique du nouveau-né (Ictère néonatal) :
 Des taux élevés de bilirubine sont fréquents chez les nouveau-nés (âgés
de 1 à 3 jours).
 Cela se produit parce qu'après la naissance, le nouveau-né décompose
l'excès globules rouges avec lesquels ils sont nés et parce que le foie du
nouveau-né n'est pas complètement mature, il est incapable de traiter
l’excès de bilirubine.
 Cela conduit à des niveaux élevés de bilirubine dans le sang et d'autres
tissus corporels.
 Cette situation se résout généralement en quelques jours.
 Habituellement, le nouveau-né est traité par photothérapie qui
décompose la bilirubine (ID D) et la convertit en forme photoisomère qui
est plus soluble.
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
 très élevée constitue un danger et est toxique. Cela peut provoquer des
lésions cérébrales et affecter les muscles, les yeux et même entraîner la
mort .
Pratique en laboratoire .
Principe:
 La bilirubine en présence d'un sel de diazonium de l'acide sulfanilique
forme un composé azoïque de couleur rouge dans les solutions
alcalines. La bilirubine totale et directe dans le sérum est déterminée
selon la méthode de Jendrassik et Grof en la couplant avec du sérum
diazoté. acide sulfanilique après addition de caféine, benzoate de
sodium .
I.) TESTS DE LA FONCTION
HÉPATIQUE
Valeurs normales :
 Bilirubine totale jusqu'à 1,1 mg/dl (18,8 μmol/l)
 Bilirubine directe jusqu'à 0,25 mg/dl (4,3 μmol/l )

Interprétation des résultats :

 Lorsque les tests de la fonction hépatique sont anormaux, des taux de
bilirubine sérique supérieurs à 17 µmol/L suggèrent une maladie
hépatique sous-jacente.
 Hyperbilirubinémie observée dans l’hépatite virale aiguë est
directement proportionnelle au degré de lésion histologique des
hépatocytes et à l’évolution plus longue de la maladie.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Le rein est un organe important du corps. Il a de nombreuses fonctions vitales
telles que :
* Filtration du sang (fonction majeure).
* Élimination des produits du métabolisme tels que la créatinine, l'acide urique et
l'urée.
* Régulation du bilan hydrique, Na+, K+, Cl -, Ca2+ et PO4-3.
* Maintien du volume sanguin, de la pression et du pH (acidité/alcalinité).
 Les tests de la fonction rénale aident à déterminer si les reins accomplissent
correctement leurs tâches.
 rénale sont un certain nombre de tests de laboratoire clinique qui mesurent les
niveaux de substances normalement régulées par les reins. Cela peut aider à
déterminer la cause et l’étendue du dysfonctionnement rénal.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Ces tests sont effectués sur des échantillons d’urine ainsi que sur des
échantillons de sang.
 rénales surviennent par étapes qui peuvent être rapidement détectées.
 De nombreux facteurs peuvent affecter la fonction rénale et entraîner
des lésions rénales.
 Le diabète et l'hypertension artérielle sont les causes les plus fréquentes
de lésions rénales .
Fonction de filtration rénale :
 L'unité fonctionnelle de filtration du rein est le néphron. Chaque rein
contient des millions de
 Néphrons. Le néphron est constitué de deux parties principales :
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
1. Le Glomérulaire :
 Responsable de la filtration.
 Il est défini comme une masse de capillaires à haute pression qui filtrent
le sang.
 La filtration s'effectue à travers la membrane tricouche glomulus qui
dépend du poids moléculaire et de la charge des composés à filtrer.
 sanguines et les protéines sont volumineuses et ne peuvent pas
traverser cette membrane.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
2. Système de tubules :
 Responsable de la réabsorption des matériaux importants.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Un dysfonctionnement rénal survient lorsqu’un grand nombre de ces
néphrons perdent leur fonction. En conséquence, le processus de
filtration est moins efficace et certains composés de poids moléculaire
élevé, comme les protéines, apparaissent dans l'urine .
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Test d'urée ou d'azote uréique sanguin (BUN) :
 L'urée est un déchet du métabolisme des protéines, elle est synthétisée
dans le foie via l'urée. cycle, à partir de l'ammoniac qui est produit à partir
d'acides aminés par désamination. Il est ensuite transporté par le sang
vers les reins pour être excrété dans les urines.
 Le taux d'urée dans le sang est un indicateur sensible mais non spécifique
des troubles rénaux. dysfonctionnement, car :
* Son niveau est affecté par les protéines alimentaires.
* D'autres causes non rénales telles que l'insuffisance cardiaque et la tension
artérielle peuvent en augmenter le niveau.
* Son taux est élevé dans les derniers stades de l'insuffisance rénale après
une perte de 50 % de la fonction rénale.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Une urée sanguine élevée peut indiquer :
* Insuffisance rénale due à une obstruction ou à un cancer.
* Blocage des voies urinaires (par un calcul rénal ou une tumeur).
* Faible flux sanguin vers les reins causé par une déshydratation ou une
insuffisance cardiaque.
Régime hyperprotéiné .
 Un faible taux d'urée dans le sang peut être dû à :
* Régime très pauvre en protéines comme dans la malnutrition.
* Des lésions hépatiques graves inhibent le cycle de l'urée, diminuent la
formation d'urée et augmentent l'ammoniac libre conduisant à une virgule
hépatique.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Principe:
 L'urée réagit avec la diacétyl-monoxime en milieu acide chaud et dans
le présence de thiosemicarbazide et d'ions ferriques pour former une
couleur rose composé .
 Valeurs normales :
- Naissance-un an : 4-16 mg/dl
- 1-40 ans : 7-12 mg/dl
-Une légère augmentation progressive se produit sur 40 ans
- Plage de panique : BUN>100 mg/dl
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
3.) Acide urique :
 C'est le produit final du métabolisme des purines et est excrété dans
l'urine.
 La purine présente dans le corps provient de la nourriture et des cellules
dégradées du corps.
 élevé d’acide urique dans le sang est l’un des marqueurs d’un
dysfonctionnement rénal.
 Un taux élevé d’acide urique dans le sang se produit dans :
* La goutte (est une maladie caractérisée par un taux élevé d'acide urique
qui se dépose sous forme de cristaux dans les articulations, provoquant
l'arthrite).
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
* Insuffisance rénale (due à une diminution de l'excrétion dans l'urine).
* Leucémie (augmentation du renouvellement des cellules).
* Alcoolisme
*Toxémie de grossesse.
* Diabète sucré.
* Famine.
* Médicaments comme les diurétiques.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Un faible taux d'acide urique dans le sang se produit dans :
* Maladies du foie (cirrhose).
* Maladie rénale qui diminue la réabsorption tubulaire rénale.
* Certains médicaments.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
3- Créatinine et clairance de la créatinine
 La créatinine est un sous-produit du métabolisme énergétique
musculaire (dégradation de la créatine ).
 C'est un déchet filtré du sang par les reins puis excrété dans l'urine.
 La production de créatinine dépend de la masse musculaire d'un
individu, qui est généralement constante.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Créatinine sérique :
 En cas d'insuffisance rénale, le taux de créatinine est élevé dans le sang
et diminué dans l'urine car le rein est incapable d'excréter la créatinine
dans l'urine.
 élevée est une indication plus sensible d'une insuffisance rénale que le
BUN car :
* Son niveau n'est affecté que par la masse musculaire qui est
généralement constante.
* Le taux de créatinine est très peu affecté par la fonction hépatique.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Le ratio BUN/Créatinine :
 Les ratios BUN-créatinine augmentent avec la maladie rénale.
 D'autres facteurs tels que la fonction hépatique, la masse musculaire et les protéines
alimentaires peuvent affecter ce ratio. Rapport BUN/créatinine 10 : 1–20 : 1
 Un rapport BUN/créatinine élevé se produit dans :
* Insuffisance rénale soudaine (aiguë).
* Blocage des voies urinaires (par un calcul rénal).
 Un rapport BUN/créatinine très élevé peut être provoqué par un saignement dans le
tube digestif ou les voies respiratoires.
 Un faible rapport BUN/créatinine peut être causé par :
* Régime pauvre en protéines,
* Blessure musculaire grave.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Débit de filtration glomérulaire (DFG) :
 Le DFG est une évaluation utile de la fonction glomérulaire du rein.
 Il mesure le taux de filtration du sang à travers le glomérulaire.
 Elle est définie comme la vitesse à laquelle le sang est filtré à travers le
glomérule et transféré vers l'espace de Bowman.
 Elle est déterminée en mesurant la clairance de la créatinine.
 de la créatinine est l'élimination de la créatinine du corps par les reins.
 Plus précisément, il s’agit du volume de plasma sanguin éliminé de la
créatinine par unité de temps.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
Importance clinique
 de la créatinine est une mesure utile pour estimer le débit de filtration
glomérulaire (DFG) du rein. Elle est généralement exprimée en ml/min.
* Plage normale : homme : 120 ml/min, femme : 100 ml/min.
* Si le DFG est inférieur à 60 ml/min pendant trois mois, le patient souffre
d'une maladie rénale chronique.
* Si le DFG est inférieur à 10 ml/min. ce stade est appelé insuffisance
rénale terminale ou insuffisance rénale terminale (IRT). Le stade final
signifie que les reins ne peuvent pas filtrer les produits chimiques et les
minéraux du sang. À ce stade, le patient a besoin d’une dialyse ou d’une
transplantation rénale.
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL
 Remarque : La créatinine sérique ne convient pas à la détection d'un
stade précoce d'une maladie rénale, car une créatinine sérique élevée
n'est observée qu'avec des dommages marqués dans la fonction des
néphrons.
 Par conséquent , la clairance de la créatinine est meilleure pour détecter
un stade précoce d’une maladie rénale.
Taux de clairance de la créatinine estimé ( eCcr ) :
 La clairance de la créatinine peut être calculée de deux manières.
La première façon :
 Cette méthode ne nécessite pas de créatinine urinaire. Cela dépend
uniquement de la créatinine sérique et de certains paramètres tels que :
le sexe, l'âge et le poids (kg).
II.) TESTS DE LA FONCTION REINE
OU RENEL

La deuxième façon :
 Cela nécessite une collecte d’urine de 24 heures.
TESTS DE PROFIL LIPIDIQUE

 Il s'agit d'un groupe de tests utilisés ensemble pour déterminer le risque

de maladie cardiovasculaire ou de maladie coronarienne. Ces tests
comprennent :
* Cholestérol total (TC)
* Lipoprotéines de basse densité (LDL)
* Lipoprotéines de haute densité (HDL)
 Les triglycérides et le cholestérol sont transportés en interne par les
lipoprotéines présentes dans le sang.
 Il existe différents types de lipoprotéines dans le sang. Ils diffèrent les
uns des autres par leur teneur en protéines et en cholestérol. Par
exemple; Le LDL a une teneur élevée en cholestérol et le HDL a la plus
faible teneur en cholestérol.
TESTS DE PROFIL LIPIDIQUE

CHOLESTÉROL :
 Le cholestérol est le stéroïde le plus répandu.
 Le cholestérol en lui-même n’est pas mauvais, mais il est nécessaire en quantité
spécifique.
 C'est un précurseur important des esters de cholestérol, des acides biliaires et des
hormones stéroïdes.
 Il est obtenu à partir de sources alimentaires telles que la viande, les œufs et les
produits laitiers.
 Une petite quantité de cholestérol corporel circule dans le sang sous forme de
particules complexes appelées lipoprotéines ; LDL et HDL .
 Les tests de profil lipidique comprennent les tests TC, HDL, LDL et TG.
NB : Retrouvez des informations complémentaires dans vos copies word et
présentations.
TESTS DE PROFIL DIABÉTIQUE

Mesure de la glycémie
Diabète sucré :
 Il s'agit d'une maladie chronique associée à une hyperglycémie (augmentation du
taux de glucose dans le sang) et à une glucourée (présence de glucose dans les
urines) dues à un déficit en insuline.
 Elle se caractérise par plusieurs changements dans le métabolisme,
principalement dans le métabolisme des glucides, des protéines et des graisses.
 Il est classé en quatre classes cliniques :
 Diabète sucré de type I (TIDM)
 Diabète de type 2 sucré (TIIDM)
 Gestationnel diabète sucré (DG)
 Autres types spécifiques dus à d'autres causes, par exemple les drogues.
TESTS DE PROFIL DIABÉTIQUE

Tests de profil diabétique :

 Il s'agit d'un groupe de tests utilisés pour diagnostiquer et surveiller le
diabète ou estimer ses complications. Ces tests sont classés comme
suit :
TESTS DE PROFIL DIABÉTIQUE

Peptide C :
Contexte du peptide c :
 L' insuline est produite par les cellules bêta du pancréas sous forme de pro -
insuline, constituée de chaînes A et B inactives maintenues ensemble par une
chaîne peptidique C.
 La pro-insuline est convertie en insuline active en clivant la chaîne du peptide C,
puis l'insuline active est sécrétée dans la circulation sanguine.
 Le peptide C est également sécrété sous forme de peptide inactif (il n’a aucune
fonction biologique).
 Ainsi, pour chaque molécule d’insuline dans le sang, il existe une molécule de
peptide C.
 L'insuline a une demi-vie courte (ne reste pas longtemps dans le sang),
contrairement au peptide c qui a une demi-vie longue.
TESTS DE PROFIL DIABÉTIQUE

 Par conséquent, la mesure du peptide c est utilisée comme test indirect

pour estimer le niveau d’insuline produite par le pancréas.
TESTS DE PROFIL DIABÉTIQUE

Avantages de mesurer le peptide C par rapport à l'insuline : Le peptide C est

considéré comme un meilleur indicateur du taux d'insuline dans le sang que l'insuline
elle-même. Il est utilisé pour estimer l’activité et la capacité des cellules bêta
pancréatiques temps.
Le peptide C est également utilisé pour différencier le diabète de type 1 du
diabète de type 2.
 Peptide C dans le diabète de type 1. De faibles niveaux d'insuline et de peptide C
sont observés dans le TIDM en raison du diabète de type I ( TIDM). Le peptide C
est une mesure utile chez les patients nouvellement diagnostiqués avec TIDM,
pour évaluer la fonction résiduelle des cellules bêta.
 Peptide C dans le diabète de type 2 : un niveau normal ou élevé de peptide C sera
détecté dans le TIIDM. Le test du peptide C est utile dans le diabète de type 2 pour
surveiller l’état de production d’insuline par les cellules bêta et pour déterminer si
une injection d’insuline est nécessaire pour le patient.
TESTS DE LA FONCTION CARDIAQUE ET
MUSCULAIRE.

Introduction aux fonctions du myocarde

 Un infarctus du myocarde (IM) : également connu sous le nom de
crise cardiaque, se produit lorsque le flux sanguin diminue ou s'arrête
dans une partie du cœur, causant des lésions au muscle cardiaque. Le
symptôme le plus courant est une douleur ou un inconfort thoracique
qui peut se propager à l’épaule, au bras, au dos, au cou ou à la
mâchoire.
 Complications : Insuffisance cardiaque, rythme cardiaque irrégulier, ...
 Autres noms : Infarctus aigu du myocarde (IAM), ...
 Facteurs de risque : Hypertension artérielle, tabagisme, di...
 Causes : Généralement une maladie coronarienne
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MUSCULAIRE.

Introduction aux fonctions du myocarde

 L'angine est une douleur ou un inconfort thoracique provoqué lorsque
votre muscle cardiaque ne reçoit pas suffisamment de sang riche en
oxygène.
 Cela peut ressembler à une pression ou à une compression dans votre
poitrine.
 L’ inconfort peut également survenir au niveau des épaules, des bras,
du cou, de la mâchoire ou du dos.
 angineuse peut même ressembler à une indigestion. Mais l’angine de
poitrine n’est pas une maladie.
 Symptômes : Douleur thoracique ; Douleur
 La principale différence entre l'angine de poitrine et une crise cardiaque
est que l'angine de poitrine est le résultat d'un rétrécissement (plutôt
que d'un blocage) des artères coronaires. C’est pourquoi, contrairement
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MUSCULAIRE.

 Les principaux marqueurs de l’infarctus du myocarde comprennent :

- Myoglobine
- Troponine
- CK
 La créatine kinase (CK), anciennement connue sous le nom de créatine
phosphokinase, est une enzyme intracellulaire présente en plus grande
quantité dans les muscles squelettiques, le myocarde et le cerveau ; de
plus petites quantités sont présentes dans d'autres tissus viscéraux .

 La perturbation des membranes cellulaires due à l'hypoxie ou à d'autres

blessures libère la CK du cytosol cellulaire dans la circulation
systémique.
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MUSCULAIRE.

 La myoglobine est une petite protéine présente dans le cœur et les

muscles squelettiques qui lie l'oxygène.
 Il emprisonne l'oxygène dans les cellules musculaires, permettant aux
cellules de produire l'énergie nécessaire à la contraction des muscles.
 Lorsque le cœur ou un muscle squelettique est blessé, la myoglobine est
libérée dans le sang .
 Des niveaux élevés peuvent être mesurés quelques heures après une
blessure.
 Si des quantités importantes de myoglobine sont libérées dans la
circulation sanguine, ce qui peut survenir après un traumatisme grave
ou des blessures musculaires, l'excès de myoglobine peut endommager
les reins et éventuellement entraîner une insuffisance rénale.
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MUSCULAIRE.

 Les troponines cardiaques , en particulier, sont devenues les

marqueurs cardiaques de choix pour les patients atteints de SCA.

 En effet , la troponine cardiaque est au cœur de la définition de

l'infarctus aigu du myocarde (IM) dans les lignes directrices
consensuelles de la Société européenne de cardiologie (ESC) et de
l'American College of Cardiology (ACC ).

 Ces lignes directrices recommandent que les biomarqueurs cardiaques

soient mesurés dès la présentation chez les patients suspectés d'IM, et
que le seul biomarqueur dont l'utilisation est recommandée pour le
diagnostic d'IM aigu à ce stade soit la troponine cardiaque en raison de
sa sensibilité et de sa précision supérieures.
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MUSCULAIRE.

Peptides natriurétiques dans le diagnostic de l'insuffisance

cardiaque.
 Les peptides natriurétiques constituent une famille d’hormones
apparentées qui jouent un rôle crucial dans l’homéostasie
cardiovasculaire.
 Ils sont récemment apparus comme des marqueurs cliniques
potentiellement importants de l’insuffisance cardiaque.
 récentes suggèrent un rôle important pour ces marqueurs dans
l'établissement du diagnostic d'insuffisance cardiaque chez les patients
présentant une dyspnée inexpliquée, tant en soins actifs qu'en milieu
ambulatoire.
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Myopathies
 Les myopathies sont des troubles neuromusculaires dont le principal
symptôme est une faiblesse musculaire due à un dysfonctionnement
des fibres musculaires.
 D'autres symptômes de la myopathie peuvent inclure des crampes
musculaires, des raideurs et des spasmes.
 Les myopathies peuvent être héréditaires (comme les dystrophies
musculaires) ou acquises (comme les crampes musculaires courantes).
 Les symptômes courants de la myopathie sont une faiblesse musculaire,
une altération du fonctionnement des activités de la vie quotidienne et,
rarement, des douleurs et sensibilités musculaires.
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Dystrophie musculaire
 La dystrophie musculaire est un groupe de maladies qui entraînent une
faiblesse progressive et une perte de masse musculaire. Dans la
dystrophie musculaire, des gènes anormaux (mutations) interfèrent
avec la production de protéines nécessaires à la formation de muscles
sains .

Rhabdomyolyse
 La rhabdomyolyse est la dégradation des muscles squelettiques
endommagés. La dégradation musculaire provoque la libération de
myoglobine dans la circulation sanguine. La myoglobine est la protéine
qui stocke l'oxygène dans vos muscles. Si vous avez trop de myoglobine
dans votre sang, cela peut provoquer des lésions rénales.
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Polymyosite
 La polymyosite est une maladie inflammatoire rare qui provoque une
faiblesse musculaire affectant les deux côtés du corps.
 Avoir cette condition peut rendre difficile la montée des escaliers, la
position assise, le levage d’objets ou la montée des mains au-dessus de
la tête.
 Symptômes : Faiblesse musculaire