TP Hémobiologie 4eme année
Pharmacie
TP n : 03
LE GROUPAGE SANGUIN ABO RHESUS
Année Universitaire 2023/2024
Rappel théorique :
•Le système ABO est un groupe sanguin ubiquitaire de nature
glucidique qui se défini par la présence ou l’absence des Ag A et/ou
B à la surface du GR et par la présence ou l’absence d’AC sériques
correspondants aux Ag absents.
•Le terme ABO est une combinaison des trois lettres utilisées pour
définir les trois groupes initialement décrits dans ce système : A, B
et O aux quels s’est ensuite ajouté le groupe AB.
1. Principe :
Repose sur deux épreuves complémentaires :
- L’épreuve globulaire de BETH VINCENT à la recherche des
antigènes A et B sur les hématies à tester grâce à des sérums tests
portant les anticorps correspondants
- L’épreuve plasmatique de SIMONIN ET MICHON à la recherche
des anticorps anti A et anti B dans le plasma à tester grâce à des
hématies tests portant les antigènes correspondants
Ces deux déterminations doivent aboutir à une conclusion
concordante et doivent constituer une règle absolue pr le biologiste
sauf chez le N.N avant 6 mois (AC de la mère et non pas du soi).
2- Indication :
•Toute personne doit avoir une carte de groupage ABO rhésus
•Obligatoire dans les cas suivants :
o Les donneurs de sang
o Les receveurs de sang
o Les femmes enceintes
o Les nouveau-nés de mère de groupe O
3-Méthodes : 5 méthodes :
a. Sur plaque
b. En tube
c. Micro plaque
d. Sur gel (gel test)
e. Sur automate
4-Prélèvement :
-environ 10 ml de sg veineux; soit sur tube sec ;soit sur EDTA de préférence .
-Il n'est pas indispensable d'être à jeun.
-L'identité correcte du patient, ainsi que son âge , doivent impérativement être
notés.
Centrifuger le tube de sang à tester de manière à séparer les hématies du
plasma
5-Matériel et réactif:
une suspension d’hématies à 10
-Sérum-test: Anti-A % en solution saline à 0.9 %:
-Sérum-test :Anti-B -GR-test:A1
-Sérum-test :Anti-AB -GR-test:A2
-GR-test:B
-GR-test :O
-Plaque d’opaline
-tube à hémolyse
-Pipettes Pasteur
-Gazes
-Alcool à 90°
-Eau physiologique
**Détermination des sous groupes de l’antigène A:
L’épreuve globulaire:
a. Bien nettoyer la plaque à GR-Ech
GR-Ech Anti
Anti -A
-A
l’alcool
b. Déposer côte à côte sur la
plaque :
GR-Ech
GR-Ech Anti
Anti –B
–B
2 gouttes de sérum-test anti A
2 gouttes de sérum-test anti B
2 gouttes de sérum-test anti A+B
c. Déposer à côté de chacune de GR-Ech
GR-Ech Anti
Anti -AB
-AB
ces gouttes, une goutte de
suspension d’hématies à tester
L’épreuve sérique:
a. Déposer côte à côte sur la
plaque, 4 fois 2 gouttes de
Sérum-
Sérum-
plasma à tester GR-A1
GR-A1
Ech
Ech
b. A coté de chaque goutte,
déposer respectivement :
1 goutte de suspension d’hématies- Sérum-
Sérum- GR–A2
GR–A2
test de groupe A1 Ech
Ech
1 goutte de suspension d’hématies-
test de groupe A2
Sérum-
Sérum-
1 goutte de suspension d’hématies- gGR-B
gGR-B
Ech
Ech
test de groupe B
1 goutte de suspension d’hématies-
test de groupe O
6-Les témoins:
Sérum-
Sérum- GR-Ech
GR-Ech
Témoin « auto » Ech
Ech
-ce témoin permet le control des agglutinations observées dans
les 02 épreuves.
Sérum-
Sérum- GR-O
GR-O
Témoin « allo » Ech
Ech
-ce témoin permet le control de l’épreuve sérique.
Sérum-AB
Sérum-AB GR-Ech
GR-Ech
Témoin « AB »
-ce témoin controle l’épreuve de BETH-VINCENT.
- A l’aide d’un fond de tube, mélanger soigneusement hématies et
plasmas ou sérums tests en un disque de 3 cm de diamètre environ,
en essuyant le tube entre chaque mélange, avec du coton ou de la
gaze
- Faire chalouper légèrement la plaque à la recherche d’agglutination
ou d’éventuelle hémolyse
-laisser reposer 30 secondes environ
LECTURE DES AGGLUTINATS
Absence d’agglutinats
Pas de formation de réseau agglutinant
Présence d’agglutinats
Formation de réseau agglutinant de complexes immuns
Pouvant être quantifié par un système de croix selon la taille et le nombre d’amas
Témoin auto Témoin réactif
+ ++ +++
R
E
F
- Une concordance entre les 2 épreuves est nécessaires pour
valider le groupage.
Groupage RH standard
1. Principe :
2. Le groupage RH standard correspond à la recherche de
l’antigène RH1 (D) sur les hématies
3. La détermination du groupe RH standard est effectuée sur une
épreuve globulaire uniquement
4. Il n’y a pas d’épreuve plasmatique
5. Le groupe sanguin RH positif se définit par la présence de
l’antigène RH1 sur les hématies
6. Le groupe sanguin RH négatif se définit par l’absence de
l’antigène RH1 sur les hématies
2. Méthodes : Sur plaque
1.Déposer côte à côte sur la plaque 1 goutte de sang
2.Ajouter 2 gouttes de réactif anti RH1
3.Mélanger soigneusement les hématies avec les réactifs en formant
un disque d’environ 3 cm de diamètre, à l’aide d’un tube qui sera
essuyé entre chaque mélange, avec de la gaze
4.Chalouper la plaque à la recherche d’agglutinations
*Témoins : Un témoin AB ou Albumine
LECTURE DES AGGLUTINATS
Un groupage sanguin ABO Rh valide
nécessite 02 prélèvement différents, 02
techniciens différents, 02 épreuves
différentes
