La chromatographie
liquide à haute
performance
• HPLC
HPLC
Plan :
• I. La chromatographie.
1. Définition
2. Les types de la chromatographie
3. Les domaines d’utilisation de la chromatographie
II. La chromatographie d’absorption.
4. Chromatographie sur colonne
• Définition et Principe
5. Chromatographie liquide à haute performance (HPLC)
• Définition
• Appareillage
• Principe et étapes.
• Conclusion
La Chromatographie :
• La chromatographie est une technique physique
de séparation dans laquelle on utilise deux
phases ; phase fixe et phase mobile , et l'affinité
d'une espèce chimique à s'associer d'avantage à
l'une qu'à l'autre.
Les types de la chromatographie:
Chromatographie de partage
Chromatographie d'adsorption
Chromatographie d'affinité
Chromatographie d'exclusion
Chromatographie en échange d'ions
Les produits
pharmaceutiques
Domaines La médecine
légale
d'utilisation de la
chromatographie :
les produits
chimiques
Chromatographie d'adsorption :
• La chromatographie sur colonne :
Dans la chromatographie sur colonne , on cherche à séparer des
petites quantités d'un mélange sur une colonne. La phase mobile est
liquide et la phase fixe est solide.
• La phase stationnaire ; est un gel de silice ou d'alumine/silice
greffée par des chaînes linéaires de C8 et C18.
• La phase mobile ; est un solvant unique ou mélange de plusieurs
solvants.
Principe de la chromatographie sur
colonne :
• Chaque constituant étant plus ou moins facilement absorbé par la phase fixe et
plus ou moins dissout par la phase mobile .
• Les composés à une faible affinité à la phase fixe vont éluer les premiers à une
grande vitesse. Les composés à une forte affinité à la phase fixe seront retenus par
cette derniére , donc élués lentement ou non élués (restent attachés au gel de silice)
• Parfois on doit utiliser des solvants précis pour faire éluer quelques composés.
• La colonne est parfois poreuse suivat un gradient de porosité, donc, les composés à
tester vont migrer selon leurs tailles et leurs charges.
Chromatographie sur colonne
La chromatographie liquide à haute
performance (HPLC) :
1) Définition :
• L'HPLC est une chromatographie sur colonne , mais à
haute pression (haute performance).
• En changeant la pression induite dans la colonne selon
chaque composé testé, on peut maintenir la vitesse
de migration des particules, et réduire le temps nécessaire
pour l'élution des produits.
La chromatographie liquide à haute
performance :
2) Appareillage :
Le reservoir du solvant : contient la phase mobile ( éluants ).
La pompe : sert à injecter la phase mobile dans la colonne.
Injecteur : sert à introduire le mélange à analyser dans la colonne.
Détecteur : suit l'apparition des solutés, la détection se fait par deux
types; détecteur UV-visible ou réfractomètre.
La chromatographie liquide à haute
performance :
3) principe :
• Le principe de l'HPLC est le même que celui de la chromatographie sur
colonne, mais à une haute performance (pression).
La chromatographie liquide à haute performance
4) Etapes :
La colonne est remplie par la le mélange des produits à analyser les constituants de ce mélange vont
phase mobile en utilisant une est injetcés dans la colonne migrer sur la phase solide chacun
pompe par un injecteur. selon sa polarité
Chaque composé élué va être
Chaque produit élué va créer un L'ajout des éluants pour séparer
détecté par un détecteur UV-
pic sur l'écran et création d'un les composés fixés sur la phase
visible ou un refractomètre et
chromatogramme solide par la pompe
calculé.
La chromatographie liquide à haute
performance :
• Réduction du temps d'analyses
• Capacité des pics augmentée
Avantages • Intensité des pics importante
• Colonnes et réactifs couteux
• Durée de vie des colonnes réduite
Inconvenients • Entretien plus fréquent
Merci pour votre
attention !
