Université des sciences et de technologies Houari Boumedian
Faculté des sciences biologiques
La cytogénétique moléculaire
Présenté par :
- Feriel Abzar
- Nour El Houda
Allaoua
- Nawel Chaya
SOMMAIRE
Introduction
1) - description de la Cytogénétique moleculaire
2) - Marquage cytogénétique ( hybridation in situ en
fluorescence “ FISH” )
3) - Description du diagnostic pré et post natal
4) - Application diagnostic
Conclusion
Introduction
Les anomalies chromosomiques touchent environ un enfant sur 300, et sont une cause importante de
mortalité et de morbidité dans l'espèce humaine
Pour cela, de nouvelles technologies alliant les techniques de cytogénétique et de génétique moléculaire
permettent d’identifier des anomalies chromosomiques, et analyser les chromosomes d’une personne pour
détecter les parties surnuméraires ou manquantes.
[Link] de la cytogénétique moléculaire:
La cytogénétique moléculaire est un domaine issue de la cytogénétique . Elle a pour
but de développer des techniques complémentaires à celles de la cytogénétique en
utilisant l'appariement spécifiques des bases d’ADN afin d'identifier une partie ou
la totalité d’un ou plusieurs chromosomes.
La cytogénétique moléculaire utilise l'hybridation in situ en fluorescence
« FISH » comme technique complémentaire à la technique du caryotype .
technique de FISH technique de caryotype
( cytogénétique moléculaire) ( cytogénétique)
2. Marquage cytogénétique ( hybridation in
situ en fluorescence « FISH » ) :
• Principe :
Utilisation des sondes moléculaires : oligonucleotide d’ADN ou d’ARN
chimiquement marquée avec un emplacement normal connu dans le génome de
façon à pouvoir d‘être reprée par la suite .
• Types de sondes :
Sondes centromérique : Elles s'hybrident au centre du chromosome ,
utilisées souvent pour dénombrer les chromosomes et identifier l'origine des
chromosomes marqueurs .
Sondes de peinture chromosomique : ensemble de sondes de petites tailles
qui couvrent l'ensemble du chromosome, elles sont utilisées pour
l'interprétation des translocations complexes , mettre en évidence les
échanges de petites tailles, identifier l'origine d’une séquence non identifié.
Sondes à locus définie : utilisées pour détecter des régions spécifiques du
chromosome , on les transfert par des molécules mobiles ( plasmides, cosmides,
YAC’s et BAC’s ) .
Étapes de la technique FISH :
1) Réalisations des sondes : On ajoute à une petite séquence d’ADN isolée la
Dnase qui coupe l’ADN d’une manière aléatoire afin de retirer quelques
nucléotides que vont être marquées par la suite avec des fluochromes ( agents
fluorescents ) et intégrées dans la séquence d’ADN précédente à l‘aide de la
ligase .
2) - Dénaturation : de la sonde et du chromosome cibles par chauffage en addition
de la formamide pour réduire la température de dénaturation de l’ADN double
brin .
3)- Hybridation : Elle se fait à 37°C pendant 16 heures, dont
les sondes d’ADN se fixent aux régions complémentaires de
l’ADN cible .
4) - Observation par microscope fluorescent
3).Diagnostic pré et post natal :
A)- Le diagnostic prénatal :
Le diagnostic prénatal ( DPN ) ou diagnostic anténatal ( DAN ) comprend l'examen
de la femme enceinte , est l'ensemble des pratiques médicales ayant pour but de
détecter in utero chez l'embryon ou le fœtus une affection grave ( anomalie
génétique ou malformation congénitale, par exemple) afin de donner aux futurs
parents le choix d'interrompre ou non la grossesse et de permettre une meilleure
prise en charge médicale de la pathologie si la grossesse est poursuivie .
Le diagnostic prénatal ne consiste pas de la médecine préventive au
sens où, selon la Haute Autorité de la Santé, la prévention consiste
à éviter l'apparition, le développement ou l'aggravation de maladies
ou d'incapacités . Sont classiquement distinguées la prévention
primaire qui agit en amont de la maladie ( ex: vaccination et action
sur les facteurs de risque ) , la prévention secondaire qui agit à un
stade précoce de son évolution ( dépistages ) et la prévention
tertiaire qui agit sur les complications et les risques de récidive.
B)- Le diagnostic postnatal :
Le diagnostic postnatal permet de vérifier et/ou de trouver la cause
d’un trouble d'origine génétique dans le cas d’un adulte ayant un
diagnostic clinique ou suspecté d‘être porteur d’une maladie
génétique ou chromosomique.
Cette information est très importante car il sera possible d'appliquer
un traitement, dans le cas où il existe, de mettre en place les
moyens ou le suivi d'améliorer la qualité de vie de la personne
concernée et/ou de planifier sa future vie personnelle ou
reproductive .
4. Applications diagnostic
•Les remaniements chromosomiques :
•Les anomalies de nombres des chromosomes :
La Trisomie 21 ( Syndrome de Down ) :
.•Les anomalies de structure des chromosomes :
Syndrome de cri du chat
•Applications diagnostiques :
La mise en évidence des remaniements chromosomiques équilibrés :
Les mutations chromosomiques
peuvent être mises en évidence
par des méthodes de coloration
( marquage en bandes ) .
Les techniques de marquage des chromosomes sont apparues dans les années 70 .
Le G- Banding ou technique de marquage des bandes G utilisé un colorant
chimique, le Giemsa ( après traitement des chromosomes) qui engendre des
bandes sombres sur les chromosomes métaphasiques .
Ce colorant à la particularité de se fixer sur les thymines et les adénines, les bandes
ainsi rélevées indiquent les régions riches en AT .
D'autres techniques permettent de visualiser différents types de bandes .
Citons les bandes C ( centromériques ) révélées par l'oxyde de baryum et le Gemsia ,
les bandes R ( reverse ) révélées par l'acridine orange ( fluorescence) ou les bandes A
( chromomycine A3 ) qui se fixent sur les bases G et C .
Conclusion :
Les anomalies chromosomiques et génétiques ne peuvent être corrigées;
toutefois , certaines malformations congénitales peuvent être prévenues ,
par exemple, en prenant de l'acide folie pour éviter des malformations du
tubes neural ou en réalisant un dépistage chez les parents qui risquent
d’être porteurs d’une anomalie génétique.
Les études en cours ont estimé qu’au futur , la thérapie gène somatique qui
est aussi un domaine en plein essor enregistrant de véritables succès,
pourrait aussi jouer un rôle croissant dans la prise en charge des maladies
génétique, en insérant un gène sain dans les chromosomes d’une personne
malade. D’ici là, on se pause à la question, est-ce que possible ?
Les références :
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permet%20de,une%20maladie%20g%C3%A9n%C3%A9tique%20ou%20chromosomique
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