Présentation cytologie : le
sysmex
Rappel : l’hémogramme
Hémogramme ou numération et formule sanguine : est l’analyse quantitative et qualitative des
éléments figuré du sang : hématies, leucocytes et thrombocytes.
Prélèvement sur tube EDTA
Obtention des paramètres : Globules Blanc, Globules Rouge, Hémoglobine, Hématocrite,
Réticulocytes, PNN, PNE, PNB, lymphocytes, monocytes et indices : VGM, TCMH, CCMH, IDR par
les XN de Sysmex. Plusieurs principes : colorimétrie, impédance, cytométrie en flux (marquage au
fluo).
Rappel : calcul des indices :
VGM : volume globulaire moyen : Hématocrite/ Globules Rouges : c’est le volume moyen d'un érythrocyte. Il
sert à voir s’il y a une anémie macrocytaire, microcytaire ou normocytaire.
CCMH : concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine : Hémoglobine/Hématocrite : sert à voir s’il y
a une hypochromie sur les GR.
TCMH : teneur corpusculaire moyenne en hémoglobine : Hémoglobine / Globules rouges : donne la masse
moyenne d'hémoglobine dans un globule rouge
IDR :l'indice de distribution des globules rouges : mesure la variabilité de taille des globules rouges. Au
laboratoire c’est le critère principal sur lequel on se base pour faire une lame pour la morphologie des
GR.
Présentation Sysmex : les différents
canaux
• Les globules rouges
• Les plaquettes
• Les globules blancs
Sysmex : les globules rouges
Deux canaux pour compter les GR :
Canal GR-impédance/PLT-i : numération Globules rouges
en impédance.
Canal HGB : dosage HGB
Canal RET :
• Numération des réticulocytes
• Indice de régénération des RET (IRF) et teneur en
hémoglobine des RET (RET-He)
Sysmex : les globules rouges
1) Canal XN-CBC pour GR-i/PLT-i, HGB
1-1)Dosage de l’hémoglobine :
– Dilution échantillon par le Cellpack , et lyse des GB et hématies par le SLS.
– Les ions Fe 2+ sont libérés et le SLS va venir se fixer dessus = formation d’un complexe
Fe 3+ coloré
– Le complexe est lu par spectrométrie : absorbance à 555 nm dans cuve unique
Sysmex : les globules rouges
1)Canal XN-CBC pour GR-i/PLT-i, HGB
1-2)Numération Globules rouges impédance :
– Séparation par la taille de la cellule par impulsion électrique : il distingue les Plaquettes et les
Globules rouges par leurs tailles :
• Plaquettes : entre 2 et 40 fL
• Globules Rouges : entre 40 et 250 fL
– Mesure de l’hématocrite (Volume total GR/ volume total échantillon), et après calcul des
constantes érythrocytaire (VGM, TCMH, CCMH) Nombre
Volume
Sysmex : les globules rouges
2) Canal RET
Numération des réticulocytes :
– Sphérisation des globules rouges par le cellpack DFL
(permet l’entrée du fluorochrome). Rappel : les réticulocytes sont déjà sphérisés.
– Le fluorocell RET va marqué les acides nucléiques.
– Mesure par cytométrie en flux dans le bloc FCM
Volume
Fluorescence
Sysmex : les globules rouges
2) Canal RET
Particularité :
• Cuve réactionnelle chauffée à 41°C (utile pour CCMH légèrement élevée)
• Détermination des fragments
• Méthode alternative en cas de : lactescence du plasma ou agglutinines froides (calcul avec le
RBC Calculator)
Paramètres mesurés :
– Indice de régénération des RET : IRF (HFR + MFR) Quantitatif
– Teneur en hémoglobine des RET : RET-He Qualitatif
Sysmex : les plaquettes
Deux canaux pour compter les Plaquettes :
Canal GR-i/PLT-i : numération GR-i et PLT-i
Canal PLT-F: Numération des PLT-F et fraction de plaquettes
immatures (IPF)
Sysmex : les plaquettes
1)Canal XN-CBC pour GR-i/PLT-i
Numération GR/PLT impédance :
– Volume fixe mesuré : 9,3 µL
– Séparation par la taille de la cellule par impulsion électrique : il distingue les Plaquettes et les
Globules rouges par leurs tailles :
• Plaquettes : entre 2 et 40 fL
• Globules Rouges : entre 40 et 250 fL
Obtention du VMP sur le graphe : Volume Plaquettaire Moyen : renseigne si présence d’aggrégats plaquettaire
ou de macro-plaquettes.
Nombre
Volume
Sysmex : les plaquettes
2)Numération des plaquettes fluo :Canal PLT-F
Principe :
- lyse partielle de la membrane des plaquettes par Cellpack DFL
- marquage spécifique des acides nucléiques par le fluorocell PLT
- - Mesure par cytométrie en flux dans le bloc FCM
Fait en systématique par automate quand :
- PQ < 20 G/L
- Problème de VMP
Rajouter si : sur lame, présence de fragments et/ou
macro plaquettes : repasser la numération en PQ
fluo.
Sysmex : les plaquettes
L’IPF (indice de plaquettes fluorescentes)
renseigne sur l’origine de la thrombopénie : Volume
• Périphérique : IPF > 3 ou 4 % Production de
plaquettes mais destruction ou consommation
• Centrale : IPF bas Pas de production de
plaquettes
Fluorescence
Sysmex : les globules blancs
Deux canaux pour compter les globules blancs :
Canal WNR : Numération des leucocytes et
Erythroblastes (si formule non demandé)
Canal WDF : Formule leucocytaire
Sysmex : les globules blancs
1) Canal WNR pour numération des leucocytes et erythroblastes
Principe :
- lyse des globules rouges, des plaquettes, et perforation des
globules blancs par le lysercell WNR (pour permettre au
fluorochrome de rentrer). Seuls les basophiles restent intacts
(membrane plus épaisse, mais le fluorochrome rentre quand
même).
- Le fluorochrome : fluorocell WNR va venir se fixer sur
l’ADN/ARN des GB et des érythroblastes.
- Mesure par cytométrie en flux dans le bloc FCM
Sysmex : les globules blancs
1) Canal WNR pour numération leucocytes et Erythroblastes
Volume
Fluorescence
Sysmex : les globules blancs
2) Canal WDF : pour formule leucocytaires
Principe :
- Le lysercell WDF lyse des globules rouges et perforent les globules blancs.
- Le fluorocell WDF se fixe sur l’ADN/ARN des globules blancs
- Mesure par cytométrie en flux dans le bloc FCM : différenciation en fonction de la fluorescence et de
la structure des cellules.
Sysmex : les globules blancs
2) Canal WDF : pour formule leucocytaire
Fluorescence
Taille
Neutro = [GB (WNR)] - [(Lympho#)+(Mono#)+(Baso-N#)+(Eosino#)+(IG#)]
Structure
Sysmex : les globules blancs
2) Canal WDF : pour formule leucocytaire
Ly atypique ? Blasts/Abn Lympho ? Présence IG
Cellules à fluorescence élevée au dessus du
Eléments au dessus des lymphocytes
nuage des lymphocytes (cellules réactionnelles
type plasmocytes ou lymphocytes et/ou des monocytes. Nuage au dessus des neutrophiles de
réactionnels) Lymphocytes (cellules tumorales) fluorescence élevée (méta et myélocytes)
