RECHERCHE DES AGGLUTININES

IRREGULIERES
(RAI)

Dr DIBY CARINE
Dr KOUACOU MOREL
DES BIO-CLINIQUE 1
 Plan
INTRODUCTION
I-PARTICULARITES SUR LES SYSTEMES
ERYTHOCYTAIRES
II-PRINCIPE GÉNÉRALE DES RAI
III-LES TECHNIQUES
IV- DOMAINE D’APPLICATION
CONCLUSION
 INTRODUCTION
• L’introduction d’antigènes érythrocytaires
absents chez un individu peut provoquer chez
celui-ci le développement d’anticorps
irréguliers anti-érythrocytaires appelées
agglutinines irrégulières.
• On dit qu’elles sont irrégulières car elles ne
sont pas systématiquement présentes chez les
sujets dépourvus de l'antigène correspondant.
 INTRODUCTION
• Potentiellement dangereuses
• La recherche de ces antigènes irréguliers (RAI)
permet d'assurer la sécurité transfusionelle ou
le suivi immuno-hématologique des femmes
enceintes.
 I-PARTICULARITES LES SYSTEMES
ERYTHROCYTAIRES
1-Système ABO
• classe le sang en quatre groupes : le groupe A,
le groupe B, le groupe AB et le groupe O. La
distinction est faite selon la présence ou non
de deux antigènes, A et B, à la surface des
globules rouges.
 2-Autres systèmes érythrocytaires

• Allo-Ag reconnus par allo-Ac (produits par

individus dépourvus de l‘Ag);
• Génétiquement déterminés
• Principaux Ag:
– D, C, c, E, E du système Rhésus,
– K, k du système Kell,
– Fya, Fyb du système Duffy,
– M, N, S, s du système MNS,
– Jka, Jkb du système Kidd,
– Lua, Lub du système Lutheran...
 3-Anticorps anti-érythrocytaires
 Anticorps naturels
Ac susceptibles de préexister chez individus hors de toute
stimulation transfusionnelle ou fœto-maternelle.
• Réguliers: Existence constante chez individu dépourvu de
l‘Ag correspondant;
Ex: Ac anti-A, anti-B toujours présents chez individus
respectivement dépourvus de l‘Ag A et/ou de l‘Ag B.

• Irréguliers: Présence inconstante chez individus dépourvus

de l‘Ag correspondant.
Ex: Ac anti-Lewis (retrouve chez certains individus Lewis
négatifs.)
  Anticorps immuns
• Allo-anticorps "irréguliers" et n'apparaissent qu'après
stimulation immunologique transfusionnelle ou
foetomaternelle.
 L‘Ag Rhésus (D): plus fort pouvoir immunogène.
 Suivent par ordre décroissant Ag autres systèmes:
 K du système Kell,
 E et c du système Rhésus,
 Fya du système Duffy,
 Jka du système Kidd,
 S du système MNSs,
• Dans plus de 70 % des cas d'allo-immunisation.
• Les allo-anticorps anti-érythrocytaires actifs à 37 °C (IgG) 
Danger
 II-Principe générale des RAI

• Recherche d’anticorps libres sérum/Plasma

• réalisée par la mise en présence du sérum du
patient avec des hématies-tests de groupe O
d’antigenicité connue dans un certain nombre
de systèmes de groupes sanguins (Rhésus,
Kell, Duffy, MNSs, Kidd,...) autres que le
système ABO.
• Modalités: TCI / TCD
• Deux étapes : le dépistage et l'identification
 II-Principe générale des RAI
Dépistage
• rechercher la présence d'un éventuel anticorps/
gamme d’hématies-tests (minimum trois) de
groupe O
• selon le principe du test indirect à l’antiglobuline
polyspécifique ou anti-IgG)
• technique de gel-filtration ou en tube
• Si dépistage négatif, la RAI est rendue négative, en
revanche le dépistage est positif, une identification
est alors obligatoire.
 II-Principe générale des RAI

Identification
• Réalisée lorsque le dépistage est positif et
s'effectue sur 10 hématies au minimum.
• liste des antigènes portés par ces hématies est
précisée par règlementation internationale
• Panels de références ayant été testés pour des
systèmes de groupes sanguins plus diversifiés/
d'identifier des anticorps plus rares.
 III- LES TECHNIQUES

Test de Coombs indirect

Principe
Mise en évidence de la sensibilisation des
hématies in vitro par des anticorps, en utilisant
des anti-globulines humaines (AGH) polyvalentes.
 III- LES TECHNIQUES
Test de Coombs indirect
Mode opératoire
• Prélever le patient sur tube sans anticoagulant
• Lavages des hématies avec de l’eau physiologique
(plusieurs lavages). Ces hématies peuvent être selon les
cas:
– Des hématies tests de groupe O utilisées pour la recherche
d’un anticorps irrégulier dans la sérum du patient.
– Des hématies à tester pour la recherche d’un Ag faible (D
faible).
– Des hématies des unités à transfusées et nécessitant un test
de compatibilité préalable avec le sérum du malade
 III- LES TECHNIQUES
Test de Coombs indirect
Mode opératoire
• Réalisation d’une suspension de globule rouge à 5 %
• Incubation à 37 °C avec selon les cas (sérum du malade ou avec
l’anti-D pour la recherche du D faible permettant la fixation de
l’anticorps à son antigène spécifique) pendant 45 min à 37°C si la
suspension est faite dans l'eau physiologique ou 15 mn si elle est
faite dans une solution à basse force ionique (BFI)..
• Lavage des hématies.
• Ajout de l’AGH polyvalente.
• Centrifugation à faible vitesse.
• Si présence d’agglutination, Coombs indirect positif. Si absence
d’agglutination Coombs indirect négatif.
 III- LES TECHNIQUES
Test de coombs direct
Principe
• Mise en évidence de la sensibilisation des hématies in vivo par
des anticorps (IgG) ou des fractions du complément (C3d), ceci
en utilisant des anti-globulines humaines (AGH) polyvalentes
(anti-IgG + anti-C3d).
• Si réaction positive, on recommence le test avec les réactifs
monospécifiques (anti-IgG) et (anti-C3d).
 III- LES TECHNIQUES
Test de coombs direct
Mode opératoire
• Prélever le patient sur anticoagulant(EDTA)
• Lavages des hématies à testées déjà sensibilisées
avec de l’eau physiologique (plusieurs lavages).
• GR du patient sont mis en suspension saline à 5 %.
• Adjonction d’antiglobuline humaine polyvalente
(02 gouttes suspension hématies 5% + 02 gouttes
AGH).
• Réaliser une centrifugation à faible vitesse (1000
tr/min) pendant 01 min.
• Si présence d’agglutination, Coombs direct positif.
Si absence d’agglutination, Coombs direct négatif
 3-Technique automatisé

DG gel System Grifols

3 modules : *Centrifugeuse
*Incubateur
* App de lecture
 Matériel-DG gel System Grifols

• Cartes DG Gel
• Pipettes automatiques de 10 μl, 25 μl, 50
μl, 1 ml
• Embouts de pipette jetables
• Tubes en verre
• Solution DG Gel Sol
• Réactif érythrocytaire pour le
dépistage/l’identification d’anticorps
irréguliers (réactifs de la société GRIFOLS)
 Dépistage d’anticorps irréguliers (RAI)

Principe du TCI
Homogénéiser les flacons de réactifs
érythrocytaires papainés et non papainés
(4)
- Distribuer 50μl de réactif érythrocytaire
dans les microtubes correspondants.
- Ajouter 25μl de sérum ou de plasma du
patient
- Incuber pendant 15 minutes à 37°C.
50 μl Hématies tests
+ Lire résultat après
25 μl Sérum Incuber pendant 15 mn à 37° centrifugation
 Interprétation
• Négatif - bande
d’érythrocytes apparaît
au fond de la colonne et
aucune agglutination
n’est visible dans le reste
de la colonne
• Positif + agglutination
visible dans la partie +/-
supérieur de la colonne
 Identification d’Anticorps Irréguliers

• Si le dépistage est positif, faire l’Identification

de l’Anticorps avec un (01) panel de 10
hématies minimum
• Le panel d'identification doit être de groupe O
et doit comporter les antigènes : D, C, c, E, e,
Kell, Cellano, Kpa, Kpb, Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, N, S,
s, P1, Lea, Leb, Lua, Lub.
 TEST DE COOMBS DIRECT / TECHNIQUE
AUTOMATISE

- Préparer une suspension érythrocytaire à 1% dans

DG Gel Sol (10μl de sédiment ou de concentré
érythrocytaire dans 1 ml de DG Gel Sol). S’assurer que
les érythrocytes sont bien remis en suspension avant
emploi.
- Ajouter 50 μl de suspension érythrocytaire à 1% du
patient dans le microtube de cartes gel correspondant
et passer à la centrifugeuse pour cartes DG gel.
- Centrifuger puis lire
 IV-Domaine d’application

• La RAI trouve son application dans la

prévention et le diagnostic des
incompatibilités érythrocytaires en transfusion
sanguine
• Dans le dépistage et la surveillance de l’allo-
immunisation fœtomaternelle en obstétrique.
 IV-Domaine d’application
Le test de Coombs indirect se fait dans les
situations suivantes :
– Test de compatibilité majeur : plasma/sérum du
receveur et hématies du donneur.
– Recherche d’anticorps irréguliers : plasma/sérum
du patient et hématies d’un panel (antigènes
connus).
– Recherche d’un phénotype érythrocytaire.
 IV-Domaine d’application
Le test de Coombs direct est utilisé pour confirmer
l’origine immunologique d’une hémolyse, par
exemple dans les situations suivantes :
– Bilan d’une incompatibilité foeto-maternelle (sang
de foetus ou de nouveau-né, éventuellement sang
de cordon).
– Anémie hémolytique.
– Réaction transfusionnelle (hémolyse
posttransfusionelle).
– AHAI.
 Conclusion
• Le risque d’accidents immuno-hémolytiques
transfusionnels par incompatibilité due aux anticorps
anti-érythrocytaires est fréquent et grave surtout
chez les polytransfusés.
• La RAI reste une analyse biologique essentielle pour
la prévention et le diagnostic des ces accidents et le
diagnostic des incompatibilités fœto-maternelles.
• De ce fait, il est primordiale qu’elle soit accessible
afin de permettre un meilleur suivi des patients à
risque.