Analyse
chromatographique
Les différentes chromatographies
UHPLC CPG-HEAD
HPLC UPLC SPACE
Chromatograp Chromatogra Chromatogra Chromatogra
hie en phase phie en phie en phie en
liquide à phase liquide phase liquide phase
haute à ultra haute à ultra gazeuse
performance performance performance
Limite de Limite de Limite de pression
pression 400 Bar pression 600 Bar 1200 Bar
Chromatographie
en phase liquide à
haute performance
(HPLC)
Principe
La Chromatographie Liquide Haute Pression (ou Haute Performance) permet de
séparer, d’identifier et de quantifier un ou plusieurs composés qui peuvent être
dissous dans un liquide à des concentrations aussi faibles que l'état de traces
(quelques ppm).
Principe de HPLC
Système informatique
Colonne
(phase stationnaire)
Injecteur
SOLVANT Pompe détecteur déchet
(phase mobile)
Réservoir du Solvant
Le plus souvent il y a quatre réservoirs pour pouvoir
réaliser des gradients d’élution. Ce sont généralement
des bouteilles en verre dans lequel plonge un tube
Une phase mobile, ou solvant organique (ou
mélange de solvants) ou éluant, est introduite au
sommet de la colonne et entraine les constituants
(ou solutés) du mélange.
Pompe
C'est la partie qui sert à stocker l'éluant et à l'injecter sous
pression dans la colonne, les solvants sont homogénéisés
et mixés grâce à un mixeur
Elle délivre en continu la phase mobile. Elle est définit
par la pression qu’elle permet d’atteindre dans la
colonne (jusqu’à 400 bars), son débit et la stabilité du
flux.
contient le dégazeur
injecteur
l y a plusieurs types d'injecteurs :
o Boucle d'injection : permet la répétabilité du volume
d'injection, constituer d’une seringue lié à une aiguille par
un tube
o Injecteur seringue
Après chaque injection il y a un rinçage de l’injecteur par
un liquide de rinçage dans la position D
colonne
Une colonne est remplie avec une phase stationnaire
La colonne met dans un four
Il y’ a une stabilité de température
on a deux types de chromatographies selon le type de colonne:
• Colonne de silice
Chromatographie • La phase stationnaire est polaire
normale
• Colonne de silice griffé à une
Chromatographie chaine de carbone ( C8, C18…)
inversé • La phase stationnaire est apolaire
détecteur
Il plusieurs types de détecteur: exemple (Une lampe d’iode ( UV-
visible))
Un fuseaux lumineux va bombarder le cuve et donner une absorbance
selon une longueur d’onde spécifique au molécule d’interet
Les analytes qui ont le moins d’affinité avec la phase stationnaire ou
une plus grande quantité d'interactions avec la phase mobile quitte la
colonne plus rapidement. L’ensemble des pics enregistrés par un
système informatique est appelé chromatogramme.
Chromatographie
en phase
gazeuse- Head
space
Même principe que le HPLC sauf que la phase mobile est un gaz inerte
généralement l’azote ou le hélium
Il faut volatiliser les échantillons qui sont non volatiles
Le Head-space est un échantillonneur qui aspire le gaz de tête de tube
La biosécurité de
laboratoire
Des armoires
spécifiques
pour les
produit
toxiques
Des
Les protecteurs
Des moyens de de personnel
aspirateurs
d’air couplés à sécurité (gants,
des filtres chimique masques,
des
lunette…)
Des armoires
spécifiques
pour les
produits
inflammables
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