Auteur : Bruno Flamand, IUT de Dijon
Cours
d'Hmato-cytologie
DUT ABB
4- automatisation de l'Hmogramme
CYTOLOGIE HEMATOLOGIQUE
LHEMOGRAMME englobe:
-les numrations des lments figurs
-le dosage de lHmoglobine
-la mesure de lHmatocrite
-le calculs des constantes rythrocytaires et
plaquettaires
-ltablissement de la formule leucocytaire
Prlvement: sang veineux sur EDTA (ou citrate de Na),
ventuellement sang capillaire
LHmogramme est automatis compltement ou
partiellement dans les laboratoires
Numrations: GR, GB, Plaquettes.
Valeurs et constantes:
-rythrocytaires:
-Taux Hmoglobine sanguin Hb
-Hmatocrite Ht
-Volume Globulaire Moyen VGM
-Concentration Corpusculaire Moyenne en Hb CCMH
-Taux Corpusculaire Moyen en Hb TCMH
-Indice de Distribution des Rouges IDR
-plaquettaires:
-Thrombocrite THT
-Volume Plaquettaire Moyen VPM
Indice de Distribution Plaquettaire IDP
Formule leucocytaire: rpartition des diffrentes sous-populations de
leucocytes: PN, PE,PB,L,M
-FL manuelle par lecture microscopique de frottis color au MGG (100
200 leucocytes rpertoris), si anomalie de FL automatise
-FL automatise (5000 10000 leucocytes rpertoris)
Les rsultats sont rendus en valeur relative % et en valeur absolue par
mm
3
, mais linterprtation nest valable que sur les valeurs absolues
GR, Hb, Hte,VGM,TCMH,IDR: orientation du diagnostic des anmies
Plaquettes: diagnostic des pb dhmostase primaire
GB, FL: diagnostic des pb infectieux, inflammatoires, leucmiques
LHmogramme: NFS Numration Formule (leucocytaire) Sanguine
Anciennes units Facteur x
Units
internationales
Globules rouges 10
6
par mm
3
10
6
T/L (tra, 10
12
)
Hmoglobine g/100 ml
0,621
mmol/L
Hmatocrite % ou dl/dl 0,01 L/L
VGM 3
F/L (femto,10
-15
)
TCMH pg 0,062 fmol (femto,10
-15
)
CCMH % ou g/100ml 0,062 mmol/L
Globules blancs 10
3
par mm
3
10
6
G/L (giga, 10
9
)
Plaquettes 10
3
par mm
3
10
6
G/L (giga, 10
9
)
GR
Homme 4,5 6 .10
6
/mm
3
Femme 3,8 5,5 .10
6
/mm
3
Hmatocrite
Homme 40 54 %
Femme 37 47 %
Hmoglobine
Homme 13 17 g/100ml
Femme 12 16 g/100ml
VGM 82 98 fl
CCMH 32 36 %
TCMH > 27 pg
IDR <15 %
Plaquettes 150 000 450 000 /mm
3
GB 5000 10 000 /mm
3
Granulocyte neutrophile 1500 7000 /mm
3
Granulocyte osinophile 0 400 /mm
3
Granulocyte basophile 0 100 /mm
3
Lymphocyte 1500 4000 /mm
3
Monocyte 200 800 /mm
3
Dfaut Paramtres Excs
Erythropnie GR Polyglobulie
Hemodilution Hmatocrite Hemoconcentration
Anmie Hmoglobine
Microcytose VGM (Normocytose) Macrocytose
Hypochromie CCMH
*
Hypochromie TCMH (Normochromie)
IDR Anisocytose
Thrombopnie Plaquettes HyperThrombocytose
Leucopnie GB Hyperleucocytose
Neutropnie Granulocyte neutrophile
Polynuclose
neutrophile
Granulocyte osinophile Hyperosinophilie
Granulocyte basophile Basocytose
Lymphopnie Lymphocyte Hyperlymphocytose
Monocytopnie Monocyte Monocytose
*La CCMH est considre comme un indice moins sensible de lhypochromie que la TCMH dans les anmies, en effet
la TCMH diminue avant la CCMH dans linstallation dun cas danmie
Automatisation de l'hmogramme
La chronologie par tapes
1980 1954 1972 1994 1990 2000
Semi Auto
GB Plt
VGM
GR Hb
Hte
Automates
Numration Formule 3 pop. Formule 5 populations
7 par.
- Plt
8 par.
(+ Plt)
18 par.
(HD)
22 par. + +
(NFS) Rtic. Etaleur/Colorateur
Pentra 120 Retic Horiba-ABX
Pentra 60 Horiba-ABX
CELL-DYN 3700
Abbot Laboratories
CELL-DYN SMS
Abbot Laboratories
ACT 5DIFF
Beckman
Coulter
Coulter HMX
Beckman Coulter
Sysmex
XT
LH 1500 Series Automation Beckman Coulter
CELL-DYN WorkCell Abbott Laboratories
Deux principes trs diffrents:
LA NUMERATION DES TROIS LIGNEES GR, GB, PLT
La Variation dimpdance
Principe Coulter du nom des inventeurs (Wallace and Joe
Coulter- 1953), Mthode de rfrence, la plus rpandue.
Utilise pour les numrations, et la formule leucocytaire
approche.
La mesure optique
Associe les principes de bases de la Cytomtrie en Flux (1977):
-focalisation hydrodynamique
-diffraction lumineuse recueillie diffrents angles /incidence
Utilise surtout pour la numration des GB associe la FL,
cependant quelques automates utilisent la mesure optique pour
les numrations des 3 lignes GR, GB, PLT (Bayer automate
ADVIA 120, Sysmex automate XT2000)
La variation d'impdance
Principe Coulter
Electrode interne
Electrode
externe
Flux de diluant conducteur
Vide rgul
Temps
U
Bac de
comptage
I= constante
Saphir perc
dun micro-
orifice
Diamtre 4mm
Micro-orifice,
surface s
U= R I et R = r l / s
Impulsion
La valeur de limpulsion de tension U
est proportionnelle au volume cellulaire
r: rsistivit et l: largeur
1 impulsion U
= 1 particule
Construction des histogrammes de distribution volumtrique:
1-amplification des impulsions (V en mV)
2-tri des impulsions selon des seuils lectroniques
3-Rpartition des impulsions dans des canaux lectroniques (256 ou 128)
en fonction du niveau dimpulsion donc du volume cellulaire
4-comptage des impulsions dans un intervalle de volume cellulaire
U = f(volume cellulaire)
Seuil
Histogramme de distribution volumtrique
Numration des Globules Rouges et des Plaquettes
Bac de comptage des GR/PLT
Comptage et mesure du volume partir d'une suspension cellulaire dilue
en solution isotonique: taux de dilution lev (1/10 000 1/20 000 ), ce qui
permet de rendre ngligeable une interfrence des GB
Un seul bac de comptage:
Toute particule d'un volume suprieur 25 fl (et infrieur 250 fl) est
compte comme un GR
Toute particule dun volume suprieur 2 fl (et infrieur 25 fl) est
compte comme une PLT
Chaque particule est place dans un histogramme de distribution
volumtrique
Numration des Globules Rouges
Histogramme des GR
Mise en vidence de fragments de
cytoplasme ou de grandes
plaquettes par l'analyse de
l'histogramme partir de 24 fl.
La traine peut correspondre aux :
Passages en concidence
Agrgats cellulaires
Cellules ages
Globules blancs
VGM
Numration des Globules Rouges
Les paramtres calculs
L'IDR ou RDW (Red Cell Distribution Width)
L'IDR est une valeur statistique correspondant au CV % calcul sur la
distribution des rouges = coefficient d'anisocytose.
50
100 200 100 200
50 50
100 200
IDC Normal< 15% IDC Elev 18 % IDC trs Elev 35 %
Double
population
Ht = Hmatocrite Ht = (GR 10
6
/mm
3
x VGM fl ) / 10
TCMH = Teneur cellulaire moyenne en hmoglogine.
TCMH en pg = (Hb g/100 ml / Nb GR) x 10
CCMH = Concentration cellulaire moyenne en hmoglobine.
CCMH en % = (Hb en g/100 ml / Nb GR 10
6
/mm
3
x VGM) x 1000
Numration des Plaquettes
Histogramme des PLT et paramtres calculs
VMP
Grandes Plaquettes > 20 fl
Petites plaquettes, dbris ? < 2 fl
Le Thrombocrite
TCT ou THT %= (VMP fl x Nb de
Plaquettes 10
3
/mm
3
) x 1000
L'IDP ou PDW
Indice de distribution plaquettaire CV
% sur la distribution volumtrique
des PLT= coefficient danisocytose
plaquettaire
Numration PLT
Existent des seuils variables
permettant limination risques dinterfrences et
numrations justes
Grandes plaquettes
GR
microcytaires
Petites plaquettes
Dbris
Shizocytes
Numration des globules blancs
Bac de comptage des GB
Comptage partir d'une suspension cellulaire dilue en liquide
hmolytique: taux de dilution faible, (1/200 1/300)
Un bac de comptage rserv
Toute particule d'un volume suprieur 35 fl est compte comme un
globule blanc.
Les globules rouges sont lyss (ammonium quaternaire, ferri cyanure,
cyanure de K+), permet la libration de Hb CyanMetHb
Une partie de la dilution des leucocytes passe dans une cuve
spectrophotomtrique pour la mesure 540 nm
Source lumineuse LED
Cuve de
mesure
Filtre
Photo-dtecteur
Le rsultat de numration est assujeti
une correction dite "correction de
concidence".
Occasionnellement deux ou trois
cellules peuvent traverser l'orifice de
comptage en mme temps.
Une impulsion de grande amplitude est
gnre.
La frquence de ces passages en
concidence est statistiquement
prvisible en fonction du nombre de
cellules. Cette correction est ralise
automatiquement par les analyseurs.
Correction de passage en concidence
Doublet ou triplet cellulaires
Temps
U
LA FORMULE LEUCOCYTAIRE automatise
TROIS POPULATIONS ou CINQ POPULATIONS (5 Diff)
La formule leucocytaire 3 populations ou formule approche, (GRA /
Lympho / Mono): pour la majorit des automates, elle est ralise par
analyse par variation dimpdance des volumes cellulaires des globules
blancs, aprs lyse des GR, et action diffrentielle dune lyse mnage
sur les GB, lyse qui modifie leur volume.
Cette FL approche na pas de valeur lgale, et trs peu de valeur
fonctionnelle, un automate de ce type dcharge lautomate principal du
passage de sangs de patients sans anomalie
La FL complte ou 5 populations, permet en associant plusieurs
principes technologiques, lanalyse des GN, GE, GB, M, L, et le
reprage facilit de populations anormales du sang (lymphocytes
atypiques, cellules immatures prcurseurs, rythroblastes)
Il est des circonstances o il faut effectuer obligatoirement une formule
au microscope, et ne pas se contenter de la formule de lautomate:
FL du nouveau-n
Premier examen dun malade avec nettes anomalies de numration
Variations brutales et inexpliques par rapports aux NF antrieures
Incohrence avec le contexte clinique ou thrapeutique
Alarmes de lautomate pour lesquelles il ny a pas dexplication vidente
au vu du dossier et/ou des examens antrieurs
Alarmes de lautomate pour distribution cellulaires inhabituelles sur les
graphes
Formule 3 populations
Rle de la lyse diffrentielle (Cytolyse mnage)
La membrane devient semi-
permable
Le contenu cytoplasmique est
libr
La membrane cytoplasmique
se rtracte autour du noyau et
des granulations
Le volume final dpend de la
taille du noyau, de sa
lobularit et des granulations.
Histogramme diffrentiel volumtrique de GB
Dtermination de 3 sous-populations
Reconnaissance des cellules d'aprs le volume rsultant, par variation
dimpdance
3 sous populations : Lymphocytes, Monocytes, Granulocytes.
Les anomalies de distribution sont signales par des alarmes.
Lymphocyte, 30 100 fl
Mono 100 160 fl
Granuleux, 160 450 fl
Alarme L1:
agrgats PLT,
Erythroblastes
Alarme M2, G1: Prcurseurs
Granulocytes, Eosinophilie
Analyse automatise individuelle des caractristiques cellulaires
naturelles ou modifies dun seul leucocyte PERFORMANCE
Analyse sur un nombre lev de leucocytes (5000 10000):
PRECISION de la FL automatise par rapport FL microscopique
Circulation des GB , aprs hmolyse des GR, individuellement, spars,
dans un systme liquide de flux laminaire: Focalisation Hydrodynamique
ou gainage cellulaire, principe de base de la technologie de CytoMtrie en
Flux (CMF)
Apparition successive des GB indivualiss dans un ensemble de mesure,
permettant une analyse optique simultane de plusieurs paramtres
naturels (volume cellulaire, prsence de granulation, htrognit du
noyau) ou modifis (coloration, fluorescence) de la cellule.
(CFM = FACS Fluorescence Activated Cell Sorter )
Formule Leucocytaire 5 populations
Hydrofocalisation
FOCALISATION
HYDRODYNAMIQUE
Flux
de
gainage
Flux chantillon
Flux
chantillon
Flux
de
gainage
Flux
de
gainage
- Suspension cellulaire expose une surpression (1 bar) injecte au centre d'une veine
liquide d'entranement (liquide de gainage) circulant une vitesse diffrente
- Sortie de la suspension cellulaire par un rtrcissement d'un micro-orifice 50 m 300
m
- Absence de mlange "Suspension cellulaire/ liquide de gainage" car densit du liquide
de gainage > densit du liquide suspension cellulaire
- Ecoulement laminaire des cellules: 500 5000 cellules/sec, 25 36 km/H, sparation
1mm, orientation des cellules selon leur plus grand axe dans le flux, et dformation
cellulaire uniforme en fonction de la cellule
La mesure optique
SOURCE
Cellule
photolectrique
Diluant
Diluant
Diluant
Diluant
Echantillon
Diffraction lumineuse
La cellule passe individuellement devant un faisceau lumineux conventionnel (lampe halogne
vapeur de Hg ou de Xe) ou LASER (Argon, Kryton-Argon, Helium-Neon)
Diffraction lumineuse
Intensit de la lumire diffracte peut tre corrle des
caractristiques morphologiques cellulaires:
- Intensit de la lumire diffracte par la cellule, recueillie dans l'axe de la lumire
incidente, dite "diffraction aux petits angles" (2 6), (FALS Forward Angle Light Scatter,
ou FSC Forward Scatter Channel), est en relation proportionnelle avec la taille cellulaire ,
la forme cellulaire, et lindice de rfraction cellulaire
- Intensit de la lumire diffracte par la cellule, recueillie de 8 90 de l'axe de la
lumire incidente, "diffraction aux grands angles", (RALS Right Angle Light Scatter, ou
SSC Side Scatter Channel), est relation proportionnelle avec l'htrognit du contenu
cellulaire, prsence/absence et taille de granulation cytoplasmique, forme et taille du
noyau, rapport N/C, densit chromatinienne du noyau, ce Paramtre est appel
Granularit
Dtection aux petits angles :
Taille
Dtection aux grands angles: Granularit
Formule 5 Populations : critres de reconnaissance
Les automates associent divers principes technologiques permettant
laccs divers critres de reconnaissance
Variation Impdance (= Volume cellulaire)
Principe Coulter pour le volume, ou mesure optique pour la taille
Diffraction lumineuse (= taille cellulaire et Granularit)
Diffraction de la lumire par la cellule (diffrents angles)
Cytochimie slective
Coloration dun lment de la cellule, par simple affinit
(ex:coloration des granulations osinophiles) ou par activit
enzymatique chromogne slective (ex: peroxydase des
granulations)
Conductivit (opacit) Courant Radio Haute Frquence (RF)
Structure de la cellule par un conduction courant haute frquence
Cytolyse
Lyse slective de populations. Ex: tous les GB sauf PB.
(videmment dans tous les cas de FL complte automatise, la
lyse de GR est obligatoire
Dtermination de la formule 5 populations
Chaque socit sur ses automates combine plusieurs technologies et
donc plusieurs critres de reconnaissance
Impdance + Conductivit HF + Diffraction lumineuse
BeckmanCoulter Automates MAXM, HmX, GenS, LH500, LH750
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Actvit peroxydasique)
BayerDiagnostics Automates Advia120, Technicon H2, H3
Impdance + Cytolyse + Cytochimie (Coloration des granulationsEo.)
HoribaAbx Automates Pentra60, Pentra80, Pentra120
BayerDiagnostics Automates Advia70
BeckmanCoulter Automates ACT 5Diff
Diffraction lumineuse + Cytochimie (Eosino) + Cytolyse
Sysmex SF3000, XE2100
Diffraction lumineuse multi-angulaire sans cytolyse
AbbottDiagnostics Automates CELL-DYN 3200, 3700, 4000
Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
Absorption
lumineuse
Volume
Traitement des cellules
coloration des granulations
Eosinophiles (noir chlorazol)
Matrice LMNE
Liquide
de
gainage
Lampe
tungstne
Saphir
Double
Focalisation
hydrodynamique
Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
MATRICE LMNE
Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
Histogramme volumtrique Basophiles
Traitement des
cellules :
Lyse de tous les
blancs sauf des
Basophiles
Saphir
Mesure du Volume
par variation
dimpdance
Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
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Volume
Absorbance
Bruit
de
fond
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Ly
Mo+Ba
Ne
Eo
LyA
GCI
GCI
Basophiles
Noyaux
GB
Volume
Nombre
Histogramme Basophiles
Matrice LMNE
Horiba ABX
Impdance/Cytolyse/Cytochimie
Exemple dhmogramme complet sur Pentra Horiba ABX
Beckman Coulter
Impdance/ConductivitHF/Diffraction
Diffraction : Surface,granulations
V
o
l
u
m
e
Conductivit
noyau
Mesures
optiques
Saphir: Mesure
dimpdance
Diffraction lumineuse
Rotated Light Scatter angle
10 70 =(Granularit)
Mesure
Volume
Mesure
Conductivit
courant radio
haute frquence
Diffraction
Conductivit
Beckman Coulter
Impdance/Conductivit/Diffraction
L
M
PE
PN
GRA
M
L
Soustraction des
coordonnes
Diffraction des
PN, PE, du nuage
GRA, pour
rvler PB
PB
L
M
Beckman Coulter
Impdance/ConductivitHF/Diffraction
Analyse en 3D
Volume
Diffraction
Conductivit
Ly
Mo
Ba
Ne
Eo
Exemple dhmogramme complet sur Beckman Coulter HmX
Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Numration
Taille
Complexit du noyau
Laser ARGON
7
0
90, Polarise
PMT2
Conplexit du
cytoplasme
Granulations
Eosinophiles
90 ,Dpolarise
PMT1
Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Angles de diffraction et critres de reconnaissance
1/3 (0) Taille
1/3 (0) Taille
10 Structure
10 Structure
90Pol/ 90dep Granulations
Faisceau laser
P
o
l
a
r
i
s
a
t
i
o
n
Abbott Diagnostics
Diffraction Laser multi-angulaire
Diffractogrammes
Taille
Structure
90 Polaris
90 Dpolaris
Ba
Ly
Mo
Ne+Eo
Dbris
Eo
Ne
LA NUMERATION AUTOMATISEE DES RETICULOCYTES
Exemple sur automate Pentra 120Rtic Horiba ABX
Marquage fluorescent des ARN rsiduels
Fluorochrome: Thiazole orange
Focalisation dans cellule de
mesure, dune dilution sanguine
1/3000 dans diluant isotonique +
thiazole orange
2 informations recueillies:
-comptage et volume par
impdance (saphir)
-signal dintensit de
fluorescence OFL mise 530
nm, dclench par excitation
transitoire, recueillie 90 du
trajet optique
Matrice Rticulocytes Pentra 120 Horiba ABX
Volume
OFL Intensit
Fluorescence
GR matures
Rticulocytes
fluorescence leve
Rticulocytes
fluorescence moyenne
Rticulocytes
fluorescence faible
Bayer-Technicon
Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Diffraction lumineuse enregistre sous deux angles diffrents
Traitement des cellules :
substrat chromogne
rvlateur de l'activit
peroxydasique
Matrice
PEROX
Cellule
photolectrique
Lentille
Miroir semi-
transparent
Miroir semi-
transparent
Lentille
Petit angle 2/3
=
Taille
Grand angle 5/15
=
Activit
Peroxydasique
Lampe tungstne-
vapeur Halogne
Miroir semi-
transparent
Traitement des cellules
; Lyse de tous les
[Link] sauf des
[Link]
Diagramme
Basophiles
Cellule
photolectrique
Lentille
Miroir semi-
transparent
Lentille
Petit angle 2/3
=
Taille
Grand angle 5/15
=
Densit
chromatinienne
Laser
Bayer-Technicon
Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Bayer-Technicon Diffraction/Cytolyse/Cytochimie
Diagramme Perox et Diagramme Basophiles
Densit Chromatinienne /Segmentation
Taille
Neutrophiles
Eosinophiles
LUC
Dbris
L
y
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Diagramme PEROX Diagramme BASOS
Taille
BASOS
Noyaux
monolobs
Noyaux
Polylobs
Mo
Activit peroxydase
Sysmex
Volume/RF/Cytolyse
Traitement des cellules :
Lyse diffrentielle et partielle des
blancs.
~
Courant haute frquence
Courant continu
Source
frquence
radio
Condensateur
Impulsion RF
Impulsion
impdance
Sonde
radio-
frquence
Saphir
Diagramme RF/Volume
Volume/RF/Cytolyses
Traitement des
cellules : Lyse
diffrentielle. Elle
lyse tous les blancs
sauf les Basophiles
Traitement des
cellules : Lyse
diffrentielle. Elle
lyse tous les blancs
sauf les Eosinophiles
Canal Eosinophiles
Canal Basophiles
Histogramme Eosino, et Histogramme Baso
Volume/RF/Cytolyses
Matrice RF/Volume et Histogrammes Eo et Ba
Volume /DC
RF
Gr
Mo
Ly
Dbris
Eo
Ba
Volume
Volume
Nb
Nb
Le marquage dautres types cellulaires
Les Rticulocytes
Marquage fluorescent sur ARNs rsiduels
Numration
Taille
Complexit.
Laser ARGON
7
0
PMT2
Rticulocytes
PMT1
PMT3
Filtre FL1 auto commutable
Abbot
Rticulocytes
Fluorescence vs Complexit
Diffraction lumineuse +
Cytolyse
Sysmex
Sysmex
Diffraction lumineuse/Cytolyse
Diode Laser
Cytomtre
Photo-diode
Petit angle
Photo-diode
Grand angle
Lyse des hmaties
Coloration des Eo.
Destruction des
Ne et Eo
Ly, Mo, et Ba
intacts
Diffraction lumineuse/Cytolyse
Enregistrement de deux angles de diffraction
Petits angles = Taille
(1-6)
Grands angles = Densit intracellulaire
(8-20)
Faisceau laser
Grands angles = Densit intracellulaire
Petits angles = Taille
Diffraction lumineuse/Cytolyse
Formule Ly, Mo, Eo, Ne+Ba
Diffraction grands angles
D
i
f
f
r
a
c
t
i
o
n
p
e
t
i
t
s
a
n
g
l
e
s
Ne+Ba
Mo
Ly
Eo
Dbris
Diffraction lumineuse/Cytolyse
Dtermination de la 5 me pop : les Neutrophiles
Diffraction grands angles
D
i
f
f
r
a
c
t
i
o
n
p
e
t
i
t
s
a
n
g
l
e
s
Ne+Eo
Mo + Ly
Ba
Schizocytes
Ne% = 100 % - Ly% - Mo % - Eo % - Ba %
Diffraction lumineuse avec ou
sans cytolyse complmentaire
Abbott
Rticulocytes
Nouveau bleu de mthylne
Cytolyse complmentaire
Abbott (CD 3200)
Cytolyse : le NOC
CD 3200
Comptage optique des noyaux nus
Une action plus forte de la lyse provoque la destruction des
membranes et la libration des noyaux.
Diffraction lumineuse +
Marquage
Abbott
Marquage l'iodure de
propidium
CD 4000
Numration
Taille
Complexit.
Laser ARGON
7
0
90 Pol.
PMT2
Lobularit
Granulations
Eosinophiles
90 Dpol.
PMT1
PMT3
Viabilit Blcs
Erythroblastes
Les noyaux nus des
cellules lyses et les
noyaux des cellules
mortes sont
marqus par
l'iodure de
propidium
Analyse de la fluorescence
Marquage des noyaux accessibles
Noyaux nus
Lkc non
viables
Lkc
viables
LE MARQUAGE D'AUTRES
TYPES CELLULAIRES
RETICULOCYTES
CD4/CD8
Lymphocytes T4/T8
Marquage des sites CD4/CD8 par cytosphres (Ag-Ac)
