Chapitre 2

Entomologie médicale : techniques

élémentaires

Ce chapitre peut intéresser les entomologistes Prélèvements « non ciblés »

médicaux amenés à faire des prélèvements sur le
terrain ou les biologistes médicaux qui doivent Arthropodes marcheurs
identifier des arthropodes (insectes ou acariens) Aspirateur avec ou sans tissu de filtration
récupérés sur les patients tels que poux, mor-
pions, tiques, larves de mouches myiasigènes, etc. Aspirer, dans un domicile, un secteur (bas de
Le biologiste peut aussi être confronté à l’identi- plinthe, parquet, canapé, lit, etc.) est pertinent
fication d’arthropodes apportés par le patient ou pour recueillir des insectes entiers non détectés
de débris de toutes sortes présentés par celui-ci préalablement et surtout mettre en évidence des
comme des restes d’arthropodes et qui sont ren- micro-acariens, des nymphes, des larves, des œufs
dus responsables de piqûres, de réactions aller- ou des parties d’insectes (mues, antennes, pattes,
giques ou autres nuisances. L’identification for- ailes, etc.). Ajouter un morceau de tissu blanc à
melle sert à fournir ensuite un traitement adapté, mailles serrées à l’extrémité du tuyau permet de
à rassurer le patient ou à l’orienter vers une autre ne pas examiner le sac ou le bac d’aspiration, mais
prise en charge. recueille moins d’éléments. Le morceau de tissu
sera ensuite mis dans un récipient propre, puis
examiné au laboratoire.
Prélèvements Balayage du sol
entomologiques Avec un balai ou finement avec un pinceau, il
est possible de détecter les mêmes éléments que
En entomologie, le prélèvement est l’étape indis- précédemment.
pensable. Il permet d’affirmer avec certitude la
présence de l’insecte ou de l’acarien puis de l’iden- Prélèvement à la pince
tifier. Il est adapté à l’arthropode cible à recueil- Il est parfois simple et aisé de prélever les arthro-
lir. Le prélèvement « non ciblé » est possible mais podes directement à la pince souple (dite « d’en-
hasardeux, donc peu sensible. Les prélèvements tomologie »).
« ciblés » seront listés ci-dessous en fonction de
l’arthropode en question. Cette liste n’est pas Prélèvement aquatique
exhaustive ; seuls les principaux arthropodes d’in- Pour les moustiques ou les simulies, il est possible
térêt médical seront exposés (pour plus de détails de prélever l’eau contenant les larves pour une
sur les poux, morpions, punaises, puces, asticots, étude directe de celles-ci ou pour attendre l’éclo-
tiques, sarcoptes et Demodex, se référer aux cha- sion des imagos après les avoir placés sous mousti-
pitres correspondants). quaire. Pour les simulies, les larves et les nymphes

Parasitologie et mycologie médicales

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46 1. Méthodes

seront récoltées avec leurs supports (plantes aqua- • Larves, nymphes, œufs : il faut s’adapter en
tiques, bois morts immergés, terre, etc.) et étu- fonction de l’arthropode visé : eau propre ou
diées à ces stades ou placées dans une colonne sale, terre humide ou sèche, ensoleillement ou
d’eau avec ébulleur pour obtenir les adultes dans ombrage, etc. Dans le cas des formes imma-
une boîte piège placée sur le dispositif. Pour les tures, il n’existe pas de piège spécifique, la col-
moustiques, les larves et les nymphes mobiles dans lecte se fera manuellement, généralement par
l’eau peuvent être aspirées et identifiées à ce stade, aspiration directe ou filtration de l’eau pour les
ou laissées évoluer, comme indiqué précédem- formes aquatiques.
ment, pour une identification au stade adulte.
Pyemotes
Insectes volants Adultes et larves vivent dans la poussière de bois
De nombreux pièges sont disponibles pour cap- des meubles piqués par des vers de bois (Anobium
turer les imagos, et certains pièges présentent une punctatum généralement). Il faut alors recueillir
spécificité permettant de cibler des familles pré- cette poussière par aspiration, balayage ou sur une
cises d’insectes. grande feuille disposée sous le meuble. Par ail-
leurs, taper le meuble avec le poing permet d’ob-
Piège lumineux tenir une poussière de bois provenant directement
Le modèle le plus classique est le piège lumineux des galeries des vers.
dit « CDC Miniature Light Trap » qui capture
Sclérodermes
préférentiellement les insectes à activité nocturne
ou crépusculaire. Une lumière attire l’insecte, un Les adultes solitaires s’observent souvent au sol
petit ventilateur l’aspire, un filet en continuité de ou tombés sur les meubles. Il est possible de les
l’hélice capture l’insecte et le piège. À partir de attraper directement avec les doigts gantés ou
ce concept, des dizaines de modifications ont été une pince, puis de les déposer dans un récipient
apportées : couleur de la lumière, type d’attrac- hermétique.
tif (phéromones, odeurs, CO2, neige carbonique,
etc.), d’aspiration, ou de capture (filet, récipient, Poux, morpions, punaises, puces,
cellophane adhésive, etc.). La forme globale varie tiques, sarcoptes et Demodex
également (taille, orientation du piège, etc.). (Voir chapitres 40 à 44 et 46.)
Drap éclairé
Un drap blanc tendu entre deux perches et
éclairé par une lumière est attractif pour de nom- Examen direct en
breux arthropodes nocturnes. Là aussi, plusieurs entomologie
variantes existent : taille du drap, couleur du drap
ou de l’éclairage, etc. L’examen direct permet de trier, classer, organi-
ser les différents arthropodes capturés et de les
identifier au minimum au niveau de la classe, de
Prélèvements « ciblés » l’ordre ou de la famille [1]. C’est à l’examen direct
par arthropodes que seront également identifiés le stade, le sexe,
le gorgement, la gravidité, etc., et que sera déter-
Moustiques, phlébotomes, culicoïdes miné le montage ultérieur le mieux adapté au type
• Adultes : le piège CDC, exposé ci-dessus, est le d’arthropode et à son stade évolutif.
piège le plus communément utilisé. En fonction L’examen direct doit être pratiqué dans l’idéal
de l’arthropode ciblé, beaucoup de modifica- le plus précocement après la capture, avec le moins
tions ont été apportées. de transport possible.
 Chapitre 2. Entomologie médicale : techniques élémentaires 47

Les outils doivent s’adapter à la situation et à Conservation, montage et

l’objectif. coloration des arthropodes
Pour le repérage et l’observation, sont utiles :
• sur le terrain ou dans la pièce de prélèvement :
– une petite loupe de poche ×10 ou ×30 ; Réactifs
– une loupe binoculaire transportable ×5 à ×50 ; Réactifs de conservation
– un dermoscope ; en milieu liquide
– un éclairage performant.
• au laboratoire (figure 2.1) : • Éthanol 70° + 5 % de glycérol volume à volume
– une loupe binoculaire (minimum ×75) avec (v à v).
éclairage modifiable en orientation et en • Éthanol 90° ou 95° (8 parties) + eau
intensité et tube photographique si p­ ossible ; (5 parties) + glycérol (1 partie).
– un microscope : sans montage (qui permet • 92 % d’Éthanol 90° ou 95°+ 5 % de formol offi-
d’observer l’arthropode en contre-jour) ; il cinal [37 %] + 3 % de glycérol.
n’est utile que pour de petits spécimens en
Réactifs de montage
dessous du millimètre.
Pour la manipulation et le montage, sont utiles : Réactifs commercialisés
• une ou deux paires de pince Dumont n° 5, une • Résines de synthèse : différentes préparations
pince entomologique (plus ou moins souple commerciales sont disponibles.
selon l’arthropode) ; • Résine d’arbre (sapin baumier) : Baume du Canada.
• deux aiguilles « minuties » (insect-pins) 0,15 ou
0,2 mm montées sur des manches adaptés ou Réactifs préparés au laboratoire
deux seringues avec aiguilles intradermiques ou à Beaucoup des produits utilisés pour préparer ces
insuline ; réactifs sont toxiques. Ces préparations néces-
• quelques verres de montre ou salières, des fioles sitent une hotte chimique (encadrés 2.1 à 2.3).
Erlenmeyer, des béchers ;
• un pinceau.
Planter l’arthropode sur une épingle est déjà un
geste de « montage » et donc d’altération partielle. Encadré 2.1
L’arthropode sera disséqué avec des aiguilles ou Gomme au chloral de Faure
de fins scalpels pour l’appareil génital, l’estomac,
• Gomme arabique 30 g
les glandes salivaires, etc., à sec ou dans de l’eau • Hydrate de chloral 50 g
physiologique. • Glycérol 20 mL
• Eau distillée 50 mL

Mélanger à froid l’eau, l’hydrate de chloral et

le glycérol dans un Erlenmeyer ou un bécher.
Mettre la gomme arabique dans un nouet de
gaze en coton à faire tremper dans le mélange,
à l’abri de la lumière à température ambiante
et sous film plastique de paraffine en agitant
au moins une fois/jour pendant 7 jours. Une
fois la gomme dissoute, transvaser dans un
flacon et conserver à l’abri de la lumière. Si
le liquide s’épaissit au fil du temps, ajouter
quelques gouttes d’eau et agiter doucement.
La gomme au chloral se conserve plusieurs
Figure 2.1. Matériel utile pour l’entomologie au laboratoire. années à température ambiante.
Source : collection ANOFEL, faculté de Reims.
48 1. Méthodes

Encadré 2.2 pour des techniques de biologie moléculaire qui

pourraient être réalisées ultérieurement.
Liquide de Marc André
Les arthropodes arrivent souvent dans un état
• Hydrate de chloral 40 g de dessèchement plus ou moins avancé, parfois
• Acide acétique 30 mL
• Eau distillée 30 mL
fragmentés ou écrasés ; dans ce cas, il faut les
regonfler par une immersion dans l’acide acétique
Mélanger les ingrédients à froid. pur, ou dilué au demi pendant 12 heures, avant
Ce produit se conserve plusieurs années à de pouvoir les observer à la loupe binoculaire en
l’obscurité. vue de leur identification. Toutefois, ce traitement
rend les arthropodes fragiles et peut leur faire
perdre leurs pattes, ailes, antennes, etc. Ils doivent
donc être manipulés avec grande délicatesse.
Encadré 2.3

Lactophénol d’Amman Montage des arthropodes

• Phénol cristallisé 10 g de petite taille
• Acide lactique 10 g
• Glycérine 20 g
Cela concerne de petits insectes ou acariens (2 à
• Eau 10 mL
3 mm) : Pthirus pubis, Pediculus sp., Dermanyssus
Une solution commercialisée prête à l’emploi sp., larves de tiques, puces, etc.
existe dans le commerce.
Montage provisoire
Mettre l’arthropode au centre de la lame dans une
Réactifs pour coloration goutte de lactophénol ou d’acide lactique (60 %
v/v eau). Le recouvrir d’une lamelle et le chauffer
Il en existe plusieurs dont par exemple la solution
sur une platine chauffante 20 à 45 minutes à 60
de bleu de chlorazol B à 0,1 % dans du lactophé-
ou 70 °C (ou une nuit à température ambiante).
nol, le noir chlorazol, la fuschine acide, etc.
Il est préférable lors du montage que les pièces
buccales soient du côté de la lamelle et non de la
Réactifs divers
lame pour une meilleure observation.
Acide acétique, acide lactique 60 %, potasse 10 ou La préparation peut se garder quelques semaines
20 %, xylène. si l’acide lactique en excès est enlevé sur le bord de
la lamelle et si on lute avec une résine de synthèse
ou du vernis à ongles.
Conservation des arthropodes
Montage aux résines de synthèse
Le mieux est que l’arthropode arrive vivant au
ou au baume du Canada
laboratoire dans un récipient fermé et sans liquide.
Il est possible de le garder vivant à +4 °C quelques Une méthode rapide consiste à mettre l’arthro-
heures à quelques jours en ajoutant un morceau pode dans un verre de montre pour le déshydra-
de papier-filtre ou de coton imbibé d’eau dans la ter 5 à 10 minutes dans l’éthanol absolu, puis
boîte/tube pour éviter la déshydratation. L’em- 5 minutes au moins dans du xylène avant de le
ploi d’un liquide de conservation pour transporter monter entre lame et lamelle avec un milieu de
le prélèvement est possible avec quelques inconvé- montage de type résines de synthèse ou baume
nients. Le plus employé est l’éthanol à 70° addi- du Canada. Il conviendra de bien positionner
tionné ou non de 5 % de glycérol, mais il fait dis- l’arthropode au centre d’une lame porte-objet, de
paraître les ornementations colorées des mouches mettre une bonne quantité de résines de synthèse
et des moustiques. La conservation en alcool à ou de baume du Canada et de poser une lamelle
95° assure également la conservation de l’ADN dessus (privilégier l’utilisation de lamelles rondes),
 Chapitre 2. Entomologie médicale : techniques élémentaires 49

après avoir mis une goutte de produit de mon- de poser une lamelle sur laquelle a été déposée
tage sur la face inférieure de la lamelle pour évi- une goutte de gomme. Une légère pression sur
ter les bulles d’air (double montage). Dans le cas la lamelle favorise l’orientation du montage. Le
des exemplaires entomologiques de petite taille, séchage complet dure plusieurs semaines et peut
des lamelles rondes d’un diamètre de 12 mm sont être accéléré par un séjour dans une étuve à 35 ±
recommandées. Positionner si nécessaire un poids 2 °C.
de 10 à 15 g sur la lamelle pour aplatir et laisser
sécher 24 heures.
Ce type de montage permet une bonne conser- Montage des larves de diptères
vation et est généralement suffisant pour l’identifi- responsables de myiases
cation. Pour une observation morphologique plus
fine ou si les arthropodes ne sont pas suffisam- Afin de bloquer leur développement, les larves
ment transparents, car gorgés de sang ou opaques recueillies peuvent être conservées quelques
(exemple des puces), il est nécessaire de détruire jours à +4 °C dans une boîte de Petri, avec un
les tissus intérieurs (de les éclaircir), d’assouplir coton humide. On peut aussi les mettre dans de
la cuticule des insectes et d’éventuellement colo- l’éthanol à 35° (après dilution au ½ de l’alcool à
rer cette dernière. L’arthropode sera alors traité 70°) tiédi puis faire des bains successifs d’alcool
préalablement par une solution d’hydroxyde de de degré croissant jusqu’à 70° afin d’éviter leur
potassium ou de sodium à 10 ou 20 % (une nuit à racornissement.
température ambiante) en perçant éventuellement En préalable au montage, la méthode recom-
l’abdomen ou l’opisthosoma avec une aiguille mandée est l’immersion dans l’eau très chaude,
fine. Afin de neutraliser l’hydroxyde de potas- frémissante mais non bouillante, pendant
sium, l’échantillon doit être soigneusement rincé 30 secondes. La larve est tuée, les phénomènes
dans de l’eau distillée, puis transféré dans l’acide de dégradation sont bloqués et la larve peut être
acétique à 10 % pendant 2 heures. L’insecte sera mesurée en extension. Cette technique permet
ensuite déshydraté dans des alcools de titre crois- aussi de bien observer les ornementations de la
sant (70°, 90°, 100°, soit 6 à 12 heures de bain), larve sous loupe binoculaire et de la conserver
puis dans un bain d’essence de girofle jusqu’à ce dans de l’alcool à 80° ou 70° + 5 % de glycérol si
qu’il tombe au fond, et enfin un passage rapide elle n’est pas montée immédiatement.
(2 à 3 minutes) dans un bain de xylène avant un Pour le montage, ouvrir la larve avec une pointe
montage au baume du Canada ou avec une résine de scalpel sans léser ni l’extrémité antérieure (la plus
synthétique. fine avec les crochets buccaux), ni l’extrémité pos-
Il est possible de colorer les structures chiti- térieure (avec la paire de stigmates respiratoires).
neuses avec des colorants comme le noir chlorazol Après cette incision, il est recommandé d’éclaircir
ou le bleu chlorazol. les larves une nuit dans la potasse à 10 %, de les
rincer à l’eau à trois ou quatre reprises, puis de les
placer au moins une heure à une journée dans le
Montage à la gomme au
liquide de Marc André afin de les éclaircir. Si de la
chloral de Faure
biologie moléculaire est prévue, il conviendra de
Avant d’être mis dans la gomme, les arthropodes n’éclaircir que les deux extrémités. Le montage est
doivent être réhydratés si besoin dans une solu- alors possible directement dans la gomme au chlo-
tion d’éthanol à 40° pendant 5 minutes. ral de Faure. L’extrémité portant les plaques stig-
Une ou plusieurs gouttes de gomme sont mises matiques sera découpée et montée en vue apicale
au centre d’une lame. L’insecte y est déposé avec sous une lamelle. Le reste du corps est monté sous
un pinceau (n° 1 ou 2) ou une pince Dumont, puis une autre lamelle de taille adaptée. Les crochets
placé sur son flanc en l’enfonçant doucement dans buccaux seront montés en vue latérale. En vue de la
la goutte avec une aiguille montée. Les antennes, conservation du montage en collection, il faut pri-
les ailes, les pattes, etc., sont positionnées avant vilégier un montage définitif après déshydratation
50 1. Méthodes

avec rinçage à l’eau puis différents bains successifs Utilisation du MALDI-

dans l’éthanol à 70 %, à 95 % et absolu, chacun TOF pour l’identification
pendant 20 minutes. La déshydratation et l’éclair-
cissement seront terminés dans l’huile essentielle
d’arthropodes d’intérêt
de clou de girofle pendant au moins une heure. Le médical et vétérinaire
montage après dissection sera fait dans le baume
du Canada dilué dans du xylène ou dans une résine La spectrométrie de masse MALDI-TOF (matrix
de synthèse. assisted laser desorption and ionization-Time of
flight), largement développée au cours des cinq der-
nières années, est un outil de choix pour l’identifi-
Colorations cation d’espèces de bactéries, de levures et de cham-
pignons filamenteux. Cette technique est désormais
La solution de bleu de chlorazol à 0,1 % est ajou- utilisée pour l’identification de parasites et d’arthro-
tée pour obtenir 5 % v à v dans la suspension de podes d’intérêt médical et vétérinaire, tels que les
lactophénol contenant l’arthropode. D’autres moustiques, les phlébotomes, les culicoïdes, les
colorants, tels que la fuschine acide ou le noir puces, les tiques, les glossines et les triatomes. Cette
chlorazol, peuvent être utilisés. méthode simple, rapide et reproductible est basée
sur l’utilisation d’empreintes protéiques constituées
par le spectre de masse et sur un profilage protéique
Techniques de biologie à la recherche de biomarqueurs [3].
moléculaire Le MALDI-TOF peut être également utilisé
pour identifier l’origine de repas sanguin, et la
Ces techniques peuvent être intéressantes sur présence éventuelle d’agents pathogènes au sein
des larves des premiers stades dont la morpho- du vecteur.
logie est mal documentée dans la littérature [2].
Les extrémités céphalique et postérieure sont Références
disséquées et traitées comme précédemment en
[1] Mathison BA, Pritt BS. Laboratory identification
vue de leur montage. L’extraction d’ADN est of ectoparasites. Clin Microbiol Rev 2014 ; 27(1) :
réalisée sur le reste du corps. L’identification est 48-67.
possible par amplification et séquençage du gène [2] McDonagh LM, Stevens JR. The molecular syste-
codant le cytochrome oxydase I (COI) ou pour matics of blowflies and screwworm flies (Diptera :
la région ITS2 de l’ADN ribosomal. Si cette Calliphoridae) using 28S rRNA, COX1 and EF-1α :
insights into the evolution of dipteran parasitism.
analyse n’est pas réalisée extemporanément, il
Parasitology 2011 ; 138(13) : 1760-77.
est possible de conserver les larves à –80 °C ou [3] Yssouf A, Almeras L, Raoult D, Parola P. Emerging
dans l’éthanol à 95 % pour éviter la dénaturation tools for identification of arthropod vectors. Future
de l’ADN. Microbiol 2016 ; 11(4) : 549-66.