NORME ISO

INTERNATIONALE 6611
Première édition
1992-02-O 1

Lait et produits laitiers - Dénombrement des

unités formant colonie de levures et/ou
moisissures - Comptage des colonies à 25 “C

iTeh STANDARD PREVIEW

Milk and milk products - Enumeration of colony-forming units of yeasts
([Link])
andlor moulds - Colony-Count technique at 25 “C

ISO 6611:1992
[Link]
5e365ebfa106/iso-6611-1992

Numéro de référence
ISO 6611:1992(F)
ISO 6611:1992(F)

Avant-propos

L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération

mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.

Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-

ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales iTeh STANDARD PREVIEW
requiert l’approbation de 75 % au moins
des comités membres votants.
([Link])
La Norme internationale ISO 6611 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité ISO 6611:1992SC 5, Lait
et produits laitiers, en collaboration avec la Fédération internationale
[Link]
de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques officiels
5e365ebfa106/iso-6611-1992
(AOAC) et sera également publiée par ces organisations.

L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement

à titre d’information.

0 ISO 1992
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse

ii
NORME INTERNATIONALE ISO 6611:1992(F)

Lait et produits laitiers - Dénombrement des unités formant

colonie de levures etlou moisissures - Comptage des
colonies à 25 “C

1 Domaine d’application Toute norme est sujette à révision et les parties

prenantes des accords fondés sur la présente
La présente Norme internationale prescrit une mé- Norme internationale sont invitées à rechercher la
thode de dénombrement des unités formant colo- possibilité d’appliquer les éditions les plus récentes
nies (UFC) de levures et/ou moissisures dans le lait des normes indiquées ci-après. Les membres de la
et les produits laitiers par la technique de comptage CEI et de I’ISO possèdent le registre des Normes
des colonies à 25 “C. internationales en vigueur à un moment donné.

La méthode est applicable

iTeh STANDARDISOPREVIEW
aux produits suivants: 7218: 1985, Microbiologie - Directives générales

- lait, produits laitiers liquides,

([Link])
pour les examens microbiologiques.

ISO 8261: 1989, Lait et produits laitiers - Préparation

- lait sec, poudre de lactosérum non acide,ISOba- 6611:1992des échantillons pour essai et des dilutions en vue
[Link]
beurre en poudre, lactose, de l’examen microbiologique.
5e365ebfa106/iso-6611-1992
- fromages,
3 Définition
- caséine acide, caséine lactique, caséine-
présure, Pour les besoins de la présente Norme internatio-
nale, la définition suivante s’applique.
- caséinates, poudre de lactosérum acide,
3.1 levures et moisissures: Micro-organismes qui,
- beurre, à 25 OC, forment des colonies dans un milieu sélectif
selon la méthode spécifiée dans la présente Norme
- produits laitiers congelés (y compris les gl aces internationale.
de consommation),

- flans, desserts, laits fermentés, crème. 4 Principe

NOTE 1 La méthode n’est pas applicable à la dét ermi-
nation d’un très grand nombre de levures thermolabiles 4.1 Ensemencement en profondeur d’un milieu de
(dans le fromage frais). Dans ce cas, il est préférable culture sélectif défini, coulé dans des boîtes de Petri
d’utiliser la technique d’ensemencement en surface.
avec une quantité spécifiée de l’échantillon pour
essai, si le produit à examiner est liquide, ou une
quantité déterminée de la suspension mère, dans le
cas d’autres produits.
2 Références normatives Préparation d’autres boîtes dans les mêmes condi-
tions, en utilisant des dilutions décimales de
Les normes suivantes contiennent des dispositions l’échantillon pour essai ou de la suspension mère.
qui, par suite de la référence qui en est faite,
constituent des dispositions valables pour la pré-
sente Norme internationale. Au moment de la pu- 4.2 Incubation des boîtes en aérobiose à 25 “C
blication, les éditions indiquées étaient en vigueur. pendant 5 jours.
ISO 6611:1992(F)

4.3 Calcul du nombre d’unités formant colonie 56.2 Solution à I’oxytétracycllne

(UFC) et/ou moisissures par gramme ou par millili-
tre d’échantillon en se basant sur le nombre de co- [Link] Composants
lonies obtenues sur des boîtes choisies à des
niveaux de dilution permettant d’obtenir un résultat
significatif. Chlorhydrate d’oxytétracycline
(w’,*N,0, ,)*HC’ 50 mg
5 Diluants et milieu de culture Eau 50 mg

5.1 Généralités
[Link] Préparation
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir
‘SO 7218. Dissoudre I’oxytétracycline dans l’eau. La solution
doit être préparée juste avant l’emploi. Stériliser la
solution par filtration.
5.2 Composants de base

Voir ISO 8261. 5.6.3 Milieu complet

[Link] Composants
5.3 Diluants d’emploi général
Voir ISO 8261.
Chlorhydrate d’oxytétracycline 10 ml
Milieu de base 90 ml
5.4 Dilua& pour les besoins particuliers

Voir ISO 8261. iTeh STANDARD PREVIEW

[Link] Préparation
5.5 Répartition, stérilisation
([Link])
et conservation des di-
Refroidir le milieu de base stérilisé (5.6-l) à 45 “C.
luants solution
ISO 6611:1992 avant
Juste l’emploi, amener la
Voir ISO 8261. d’oxytétracycline (5.6.2) à 45 “C et ajouter 10 ml de
[Link]
cette solution aseptiquement à 90 ml du milieu de
5e365ebfa106/iso-6611-1992
base.
5.6 Milieu à l’extrait de levure, dextrose,
oxytétracycline et agar-agar 5.7 Gélose à l’extrait de levure, au glucose et au
chloramphénicol
5.6.1 Milieu de base
5.7.1 Composants
5.6.1 .l Composants

Extrait de levure 590 g

Extrait de levure en poudre 590 g Glucose (C,H,,O,) 2090 g
Glucose (C,H,,O,) 20,o g Chloramphénicol (C,,H,2C12N,0,) 0,l g ‘1
Agar-agar 10 g à 15 g 1) Agar-agar 12 g à 15 g 2)
Eau 900 ml Eau 1 000 ml

1) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar. 1) En vue d’obtenir une concentration finale de

100 pg/ml du milieu.
2) Selon le pouvoir gélifiant de I’agar-agar.
[Link] Préparation

Dissoudre les composants du milieu de base (5.6)

ou du milieu déshydraté en chauffant, si nécessaire. 5.7.2 Préparation

Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu’après stéri- Dissoudre les composants dans l’eau en chauffant,
lisation, il soit de 6,6 à 25 “C. si nécessaire.

Stériliser à l’autoclave (6.1) à 121 “C -+ 0,l “C Si nécessaire, ajuster le pH de sorte qu’après stéri-
pendant 15 min. lisation, il soit de 6,6 à 25 “C.

2
 ISO 6611:1992(F)

Répartir le milieu gélosé dans des récipients de ca- l’aide d’un scalpel ou d’un couteau stérile, avant de pro-
pacité appropriée (6.8). céder à l’échantillonnage.

Stériliser à l’autoclave (6.1) à 121 “C -+ 1 “C pen-

dant 15 min. 8 Mode opératoire
NOTE 5 Afin d’améliorer la fidéli té de la méthode, la
6 Appareillage et verrerie préparation des dilutions de vrait etre soi gneusement
normalisée. facteurs influant sur la fidélité sont les
AlTENTiON - Le matériel destiné à entrer en suivants:
contact avec l’échantillon pour essai, le diluant, les - type d’appareillage pour l’homogénéisation;
dilutions ou le milieu de culture, doit être stérilisé
conformément à ISO 8261:1989, 6.1.
- temps d’homogénéisation;
NOTE 2 Le matériel à usage unique est acceptable au -
même titre que la verrerie réutilisable, si ses spécifîca-
Cons sont adéquates.
- temps de décantation des grosses particules;
Matériel courant de laboratoire de microbiologie,
- temps d’agi tation lors de la préparation des dilutions
matériel nécessaire à la préparation des échan- décimales.
tillons pour essais et aux dilutions, comme spécifié
dans I’ISO 8261, et notamment ATTENTION - Prendre les précautions courantes
d’asepsie. Ne pas effectuer les opérations décrites
6.1 Appareils pour la stérlikatlon en chaleur sèche en 8.1 et 8.2 à la lumière directe du soleil.
(four) ou en chaleur humide (autoclave)

Voir ISO 7218. 8.1 Préparation de l’échantillon pour essai et

iTeh STANDARD PREVIEW de la suspension mère
6.2 Étuve, réglable à 25 “C -+ 1 “C.
([Link])
Voir ISO 8261.

6.3 Boites de Petri, de 90 mm à 100 mm de diamè-

tre. ISO 6611:19928.2 Dilutions décimales suivantes
[Link]
Voir ISO 8261.
6.4 Pipettes graduées, bouchées avec 5e365ebfa106/iso-6611-1992
du coton,
étalonnées pour délivrer 1 ml + 0,02 ml ou
10 ml +
- 0,2 ml ou 11 ml --
+ 0,2 ml. - 8.3 Durée des opérations

Voir ISO 8261:1989, 8.3.

6.5 Bain d’eau, réglable à 45 OC -+ 1 “C.

6.6 Appareil de comptage de colonies, comportant 8.4 Ensemencement et incubation

un système d’éclairage avec fond noir, équipé d’une
loupe d’un grossissement de x 1,5 et d’un compteur 8.4.1 Prendre deux boîtes de Petri stériles (6.3). À
numérique mécanique ou électronique. l’aide d’une pipette stérile (6.4), transférer dans
chaque boîte, 1 ml de l’échantillon pour essai si le
6.7 ph-mètre à température compensée, précis à produit est liquide, ou 1 ml de la suspension mère
+ dans le cas d’autres produits.
- 0,l unité de pH à 25 “C.
8.4.2 Prendre
deux autres boites de Petri stériles.
6.8 Fioles ou flacons
À l’aide d’une nouvelle pipette stérile, transférer{
NOTE 3 Des fioles ou flacons de culture munis de cou- dans chacune des boîtes, 1 ml de la dilution lO--
vercle à vis en métal non toxique peuvent être utilisés. (produit liquide) ou 1 ml de la dilution IO-* (autres
produits).

7 Échantillonnage 8.4.3 Si nécessaire, recommencer cette opération

avec les diluti&s décimales suivantes.
II convient que l’échantillonnage soit effectué
conformément à I’ISO 707.
8.4.4 Couler dans chaque boîte de Petri, environ
NOTE 4 Dans les fromages affinés possédant une 15 ml de bélose à I’oxytétracycline (5.6) ou de
croûte de levure ou de moisissures, il peut s’avérer sou- gélose au chloramphénicol (5.7) à 45 OC, préala-
haitable d’exclure la croûte de l’échantillon pour I’ana- blement fondue et maintenue dans le bain d’eau
lyse. Dans ce cas précis, la croûte peut être enlevée à (6.5).
ISO 6611:1992(F)

8.4.5 Mélanger soigneusement I’inoculum au mi- 9 Expression des résultats

lieu de culture et laisser se solidifier en posant les
boîtes de Petri sur une surface fraîche et horizon-
tale.
9.1 Utiliser les dénombrements à partir des boîtes
Préparer égal ement une boîte témoi n avec 15 ml du contenant au moins 10 et 150 colonies au plus.
milieu afi n de contrôler s a sté rilité.
Calculer le nombre N d’UFC de levures et/ou moi-
sissures par gramme ou par millilitre de produit, à
8.4.6 II ne doit pas s’écouler plus de 15 min entre l’aide de la formule suivante:
la préparation de la première dilution et le mélange
de I’inoculum avec le milieu de culture.
cc
8.4.7 Préparer un nombre suffisant de boîtes té- N=(n,+O,i*)d
moins pour véri fier la stérilité.

8.4.8 Retourner les boîtes ainsi préparées et les est la somme des colo nies comptées
placer à l’étuve (6.2) réglée à 25 OC pendant dans le s boîtes reten ues;
4 jours.
est le nombre de boîtes retenues où l’on
NOTE 6 Prendre toutes précautions utiles pour éviter le compte entre 10 et 150 colonies à la pre-
risque d’envahissement, par exemple mière dilution;
- en pfacant un couvercle sur les boîtes de culture après est le nombre de boîtes retenues où l’on
solidification, ou compte entre 10 et 150 colonies à la
deuxième dilution;
- en ajoutant une gout te de glycérol sur le papier-filtre
dans le cou vercle de la boite. iTeh STANDARDd PREVIEW est le facteur de dilution correspondant
à la première dilution.
8.4.9 Ne pas empiler plus ([Link])
de six boîtes. Les piles
NOTE 7 S’il y a plus de deux dilutions retenues donnant
de boîtes ne doivent pas se toucher, ni être en
pour résultat de 10 à 150 colonies, la formule peut etre
contact avec les parois et la partie supérieure deISO 6611:1992 modifiée pour prendre en compte la dilution suivante.
l’étuve. [Link]
Pour trois dilutions, la formule devient
5e365ebfa106/iso-6611-1992
8.5 Interprétation c c
lv = (n, + O,ln, + o,olH,)n
8.5.1 Compter les colonies dans chaque boîte, à
l’exception de la colonie bactérienne éventuelle qui où ?l3 est le nombre de boîtes ret enues où l’on compte
entre 10 et 150 coloni es.
aurait pu se développer. Si nécessaire, distinguer
les colonies de levures et les colonies de moisissu-
res en se basant sur les caractéristiques morpholo-
Arrondir le résultat obtenu à deux chiffres significa-
giques. Voir 8.6. tifs.
Lorsque le nombre à arrondir est 5, sans autres
8.5.2 Ne retenir que les boîtes contenant au moins chiffres significatifs, arrondir de manière que le
10 et 150 colonies au plus. Si des parties de boîtes chiffre placé immédiatement à gauche soit pair. Par
sont envahies par des moisissures ou, s’il est diffï- exemple, 28 500 est arrondi à 28000, et 11 500 est
cile de compter des colonies bien isolées, compter arrondi à 12 500.
les colonies dans des boîtes à la dilution suivante
plus élevée, même si leur nombre risque d’être in- Prendrecomme résultat le nombre d’UFC de levu-
férieur à 10. Dans ce dernier cas, procéder comme res de moisissures
et/ou par millilitre ou par
en 9.2. gramme de produit, exprimé par un nombre compris
entre 1,0 et 9,9 multiplie par 10x, où x est la puis-
sance appropriée de 10.
8.6 Confirmation
EXEMPLE
L’identité de colonies de la taille d’une tête d’épin-
gle ou douteuse doit être recherchée par un examen Un dénombrement d’UFC de levures et/ou de moi-
microscopique. sissures a donné les résultats suivants (deux boîtes
de Petri par dilution ont été incubées);
Si nécessaire, confirmer au moins fi des colonies
à l’examen microscopique, où n représente le nom- - à la première dilution retenue (IO-*): 83 et
bre des colonies dénombrées. 97 colonies;

4
 ISO 6611:1992(F)

- à la seconde dilution retenue (10w3): 33 et tant que ((nombre estimé d’unités formant colonie
28 colonies; de levures et/ou de moisissures par gramme ou par
millilitre~~.
c
c
N - 10 Répétabilité
(n, + C.;n,ld
La différence absolue entre deux résultats d’essai
- 83+97+33+28 241
- - = 10 954 individuels obtenus à l’aide de la même méthode,
[2 +(O,l x 2)]10-* - o,o22 sur un matériau identique soumis à l’essai dans le
même laboratoire, par le même opérateur utilisant
En arrondissant le résultat comme spécifié en 9.1 le même appareillage dans un court intervalle de
on obtient 11000 ou 1,l x 104 UFC de levures et/ou temps, ne doit pas excéder 30 % du résultat le plus
de moisissures par gramme ou par millilitre de bas.
produit.
NOTES
9.2 Si les deux boîtes correspondant à I’échan-
8 Si les conditions de répétabilité ne sont pas remplies
tillon pour essai (produits liquides) ou à la suspen- dans 5 % des cas au plus, il est souhaitable de rechercher
sion mère (autres produits) contiennent moins de les sources d’erreurs possibles.
10 colonies, reporter les résultats. comme suit:
9 Voir dans I’ISO 5725, la définition de la répétabilité.
- moins de 10 UFC de levures et/ou de moisissu-
res par millilitre (produits liquides)
11 Rapport d’essai
- moins de 10 x I/d UFC de levures et/ou moisis-
Le rapport d’essai doit indiquer la méthode utilisée
sures par gramme (autre produits), où d est le
et les résultats obtenus et la manière dont ils sont
facteur de dilution correspondant à la premiére
dilution. iTeh STANDARD PREVIEW exprimés.
tails
II doit, en outre, mentionner
opératoires non prévus dans
tous les dé-
la présente

des dénombrements([Link])
Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les
9.3 S’il n’y a que supérieurs incidents susceptibles d’avoir agi sur les résultats.
à 150, calculer un nombre estimé à partir des boîtes
ayant un nombre de colonies proche de 150 ISO et 6611:1992
le Le rapport d’essai doit donner tous les rensei-
multiplier par l’inverse [Link]
de la valeur correspondant gnements nécessaires à l’identification complète de
à la dilution la plus élevée. Exprimer ce résultat en l’échantillon.
5e365ebfa106/iso-6611-1992
ISO 661 I:l 992(F)

Annexe A
(informative)

Bibliographie

[ 1] ISO 707:1985,Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillonnage.

[2] ISO 57253986, Fidélité des méthodes d’essai - Détermination de la répétabilité et de la reproductibilité
d’une méthode d’essai normalisée par essais interlaboratoires.

iTeh STANDARD PREVIEW

([Link])
ISO 6611:1992
[Link]
5e365ebfa106/iso-6611-1992
 Page blanche

iTeh STANDARD PREVIEW

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