PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 10.0 2.2.22.

Spectrométrie d’émission atomique

Titrant Indicateur 01/2008:20222

Acide perchlorique Solution de violet cristallisé R

Hydroxyde de tétrabutyl- Solution de bleu de thymol R à

ammonium 3 g/L dans du méthanol R
2.2.22. SPECTROMÉTRIE D’ÉMISSION
Solution éthanolique d’hydroxyde
de sodium
Solution de thymolphtaléine R ATOMIQUE
PRINCIPE GÉNÉRAL
L’émission atomique est le phénomène observé lorsqu’un
rayonnement électromagnétique est émis par des atomes
ou des ions excités. En spectrométrie d’émission atomique,
l’échantillon est soumis à des températures suffisamment
01/2008:20221 élevées pour entraîner, outre la dissociation en atomes, des
taux significatifs d’excitation collisionnelle et permettre
l’ionisation des atomes de l’échantillon. Une fois les atomes
et les ions portés à l’état excité, ils peuvent revenir à des
niveaux d’énergie inférieurs par des transitions énergétiques
thermiques ou radiatives, qui s’accompagnent de l’émission
d’un rayonnement électromagnétique. Le spectre d’émission
2.2.21. FLUORIMÉTRIE d’un élément comporte un plus grand nombre de raies que le
spectre d’absorption correspondant.
La fluorimétrie est une méthode qui utilise la mesure de La spectrométrie d’émission atomique est une technique
l’intensité de lumière fluorescente émise par la substance à de détermination de la concentration d’un élément dans
examiner par rapport à celle émise par un étalon déterminé. un échantillon par mesure de l’intensité de l’une des raies
émises par la vapeur atomique de l’élément générée à partir
Mode opératoire. Dissolvez la substance dans le solvant ou le de l’échantillon. La mesure est effectuée à la longueur d’onde
mélange de solvants indiqué dans la monographie, versez la correspondant à cette raie.
solution dans la cuve ou le tube du fluorimètre et illuminez
par un faisceau de lumière excitatrice autant que possible Le présent chapitre traite uniquement de l’atomisation dans la
monochromatique dont la longueur d’onde est indiquée dans flamme. La méthode de spectrométrie d’émission atomique
la monographie. utilisant une source plasma (ICP-SEA) est décrite dans un
autre chapitre général.
Mesurez l’intensité de la lumière émise sous un angle de 90°
par rapport à la direction du faisceau illuminant, après lui APPAREILLAGE
avoir fait traverser un filtre qui arrête la lumière incidente L’appareillage comprend essentiellement :
et laisse passer la radiation de fluorescence. D’autres types – un système d’introduction et de nébulisation des
d’appareils peuvent être utilisés à condition qu’ils conduisent échantillons,
à des résultats identiques. – une flamme servant à générer les atomes à doser,
Pour l’analyse quantitative, introduisez d’abord dans l’appareil – un monochromateur,
le solvant ou le mélange de solvants utilisé pour dissoudre – un détecteur,
l’échantillon. Ajustez l’instrument à zéro, puis introduisez la – une unité d’acquisition des données.
solution de référence et réglez la sensibilité de l’instrument de La flamme est alimentée par un mélange d’air ou d’oxygène et
façon que le repère soit au-delà de 50. Après avoir effectué le d’un gaz combustible, par exemple, l’hydrogène, l’acétylène, le
deuxième réglage en ajustant la largeur des fentes, procédez propane ou le butane. La source d’atomisation est cruciale, car
à un nouveau réglage du zéro et à une nouvelle mesure elle doit fournir une énergie suffisante pour exciter et atomiser
de l’intensité de fluorescence de la solution de référence. les atomes. La flamme présente l’avantage, sur les autres
Finalement, introduisez la solution de concentration inconnue sources d’atomisation, de générer des spectres atomiques plus
et lisez la valeur indiquée sur la graduation de l’instrument. simples ; sa principale limitation est de manquer, pour de
Calculez la concentration cx de la solution à l’aide de la nombreux éléments, de la puissance voulue pour générer une
formule : émission permettant la mesure. De l’eau acidifiée est le solvant
de choix pour la préparation des solutions à examiner et des
Ic solutions de référence. Il est toutefois possible d’utiliser aussi
cx = x e
Ie des solvants organiques en prenant les précautions nécessaires
pour que le solvant n’affecte pas la stabilité de la flamme.
cx = concentration de la solution à examiner,
INTERFÉRENCES
ce = concentration de la solution de référence, Pour réduire ou éliminer les interférences spectrales, il faut
Ix = intensité de la lumière émise par la solution à choisir une raie d’émission appropriée à la mesure, ou ajuster
examiner, la fente qui détermine la largeur de la bande passante. Les
Ie = intensité de la lumière émise par la solution de interférences physiques sont corrigées en diluant la solution à
référence. examiner, en adaptant la matrice ou en utilisant la méthode
des ajouts dosés. La réduction des interférences chimiques est
Lorsque l’intensité de fluorescence n’est pas rigoureusement possible à l’aide de modificateurs chimiques ou de tampons
proportionnelle à la concentration, la mesure peut être d’ionisation.
effectuée d’après un diagramme d’étalonnage.
EFFET MÉMOIRE
Dans certains cas, la mesure peut être faite par rapport à un Pour limiter l’effet mémoire qui résulte du dépôt de l’analyte
étalon fixe (par exemple un verre fluorescent ou une solution dans l’appareil, il convient d’effectuer des rinçages minutieux
d’une autre substance fluorescente). La concentration de la entre les enregistrements, de diluer (si possible) les solutions
substance à examiner sera alors déterminée sur un diagramme à analyser pour en réduire la teneur en sels, et d’aspirer les
d’étalonnage établi dans les mêmes conditions. solutions aussi rapidement que possible.

Les Prescriptions Générales (1) s’appliquent à toutes les monographies et autres textes 39
2.2.23. Spectrométrie d’absorption atomique PHARMACOPÉE EUROPÉENNE 10.0

MODE OPÉRATOIRE LINÉARITÉ

L’emploi, dans la mesure du possible, de matériel de Préparez et analysez au moins 4 solutions de référence
laboratoire en plastique est recommandé. couvrant l’intervalle d’étalonnage, et une solution à blanc, avec
au minimum 5 réplications.
Utilisez un spectromètre d’émission atomique conformément Calculez la courbe d’étalonnage par la méthode des moindres
aux instructions du fabricant et en opérant à la longueur carrés à partir de l’ensemble des valeurs mesurées. Représentez
d’onde prescrite. Optimisez les conditions expérimentales graphiquement la courbe de régression, les moyennes, les
(température de flamme, hauteur de brûleur, utilisation d’un valeurs mesurées et l’intervalle de confiance de la courbe
tampon ionique, concentration des solutions) en fonction de d’étalonnage. Le mode opératoire est valable si :
l’élément à doser et de la matrice de l’échantillon. Introduisez
une solution à blanc dans le dispositif d’analyse et ajustez – le coefficient de corrélation est supérieur ou égal à 0,99,
l’instrument au zéro ou à la valeur à blanc. Introduisez ensuite – les résidus obtenus pour chaque concentration d’étalonnage
la solution de référence de concentration la plus élevée et présentent une distribution aléatoire autour de la courbe
réglez la sensibilité de façon à obtenir une lecture appropriée. d’étalonnage.
Il est préférable de travailler à des concentrations situées Calculez la moyenne et l’écart type relatif pour la concentration
dans la partie linéaire de la courbe d’étalonnage. En cas la plus faible et la plus élevée de la gamme d’étalonnage.
d’impossibilité, on peut également utiliser des courbes Si le rapport des écarts types estimés pour la plus faible et
d’étalonnage présentant une courbure, à condition de recourir la plus élevée des concentrations d’étalonnage est inférieur
à des logiciels de traitement appropriés. à 0,5 ou supérieur à 2,0, une estimation plus précise de la
Les mesures s’effectuent par comparaison avec des solutions courbe d’étalonnage peut être obtenue par régression linéaire
de référence de concentration connue en élément à doser, soit pondérée. Des fonctions de pondération du premier et du
par la méthode de la courbe d’étalonnage (Procédé I), soit par second degré sont appliquées aux données pour déterminer la
la méthode des ajouts dosés (Procédé II). fonction de pondération la plus appropriée. Si les moyennes
présentent un écart de linéarité par rapport à la courbe
PROCÉDÉ I - MÉTHODE DE LA COURBE D’ÉTALONNAGE d’étalonnage, une régression linéaire bidimensionnelle est
Pour les analyses de routine, il convient de préparer et utilisée.
d’examiner 3 solutions de référence et une solution à blanc. EXACTITUDE
Préparez la solution de la substance à examiner (solution à Vérifiez l’exactitude en utilisant de préférence un matériel de
examiner) comme prescrit dans la monographie. Préparez référence certifié (CRM). En cas d’impossibilité, effectuez un
au moins 3 solutions de référence dont les concentrations en essai de recouvrement.
élément à doser encadrent la concentration présumée de la Recouvrement. Pour les dosages, un recouvrement de
solution à examiner. Pour les dosages, la gamme d’étalonnage 90 pour cent à 110 pour cent doit être obtenu. Pour d’autres
optimale va de 0,7 fois à 1,3 fois la teneur présumée en élément déterminations, par exemple le dosage de traces d’éléments,
à doser ou la teneur limite prescrite dans la monographie. l’essai n’est valable que si le recouvrement se situe dans
Pour les essais de pureté, la gamme d’étalonnage s’étend de la l’intervalle allant de 80 pour cent à 120 pour cent de la
limite de détection à 1,2 fois la limite spécifiée pour l’élément valeur théorique. Le recouvrement peut être déterminé sur
à doser. Tous les réactifs utilisés dans la préparation de la une solution de référence appropriée (matrice) dopée avec
solution à examiner sont ajoutés, à la même concentration, une quantité connue de l’élément à analyser (concentration
aux solutions de référence et à la solution à blanc. médiane de l’intervalle d’étalonnage).
Introduisez chacune des solutions dans le dispositif d’analyse RÉPÉTABILITÉ
avec le même nombre de réplications pour chaque solution de La répétabilité est au maximum de 3 pour cent pour un dosage
façon à obtenir une lecture stable. et de 5 pour cent pour un essai de pureté.
Calcul. Tracez la courbe d’étalonnage à partir de la moyenne LIMITE DE QUANTIFICATION
des lectures obtenues avec les solutions de référence, en Vérifiez que la limite de quantification (déterminée par
représentant les moyennes en fonction de la concentration, exemple par l’approche dite 10 σ) est inférieure à la valeur à
et déterminez la concentration de l’élément à doser dans la mesurer.
solution à examiner à l’aide de la courbe obtenue.
PROCÉDÉ II - MÉTHODE DES AJOUTS DOSÉS
Dans au moins 3 fioles jaugées identiques, introduisez des
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volumes égaux de la solution de la substance à examiner
(solution à examiner) préparée comme prescrit. Ajoutez
à toutes les fioles, sauf une, des volumes croissants d’une
solution de référence de concentration connue en élément à
doser, de façon à obtenir une série de solutions contenant des
quantités progressivement croissantes de l’élément, choisies de 2.2.23. SPECTROMÉTRIE
manière à obtenir des réponses situées dans la partie linéaire
de la courbe, si possible. Complétez au trait de jauge avec le
D’ABSORPTION ATOMIQUE
solvant. PRINCIPE GÉNÉRAL
Introduisez chacune des solutions dans le dispositif d’analyse L’absorption atomique est le phénomène observé lorsqu’un
avec le même nombre de réplications pour chaque solution de atome à l’état fondamental absorbe un rayonnement
façon à obtenir une lecture stable. électromagnétique à une longueur d’onde spécifique et
passe à un état excité. Les atomes à l’état fondamental
Calcul. Calculez l’équation de régression linéaire du graphique
absorbent l’énergie à leur fréquence de résonance, et cette
en utilisant la méthode des moindres carrés et résolvez-la de
absorption se traduit par une atténuation du rayonnement
façon à obtenir la concentration de l’élément à doser dans la
électromagnétique. L’absorption d’énergie est en théorie
solution à examiner.
proportionnelle au nombre d’atomes présents.
Le présent chapitre fournit des informations générales
VALIDATION DE LA MÉTHODE
et décrit les procédures à suivre pour les déterminations
Les performances des méthodes prescrites dans les élémentaires par spectrométrie d’absorption atomique
monographies sont vérifiées à intervalles de temps appropriés. utilisant différentes techniques d’atomisation (flamme,

40 Voir la section d’information sur les monographies générales (pages de garde)