Techniques et Pratique en
Biochimie Analytique
Cette présentation explore les techniques fondamentales et les pratiques
essentielles en biochimie analytique, en mettant l'accent sur les méthodes
couramment utilisées en laboratoire clinique. Nous aborderons les principes
théoriques et les applications pratiques pour garantir une compréhension
approfondie des analyses biochimiques.
Introduction à la Biochimie Clinique et Objectifs
Comprendre la Biochimie Clinique Objectifs des Séances
La biochimie clinique est une discipline cruciale qui applique les Ces séances visent à vous familiariser avec les techniques de
principes biochimiques à l'étude des maladies. Elle permet le laboratoire, à maîtriser l'utilisation des équipements, et à
diagnostic, le pronostic et le suivi thérapeutique à travers l'analyse interpréter les résultats pour une application clinique pertinente.
des fluides biologiques.
Nous commencerons par une vue d'ensemble des concepts clés, puis nous plongerons dans des démonstrations pratiques pour solidifier vos
connaissances et compétences.
Spectrophotométrie : Principes et Applications
La spectrophotométrie est une méthode analytique basée sur la
mesure de l'absorption de la lumière par une solution. Elle est
fondamentale en biochimie pour quantifier diverses substances.
Utilisation d'un spectrophotomètre : Maîtrise de l'appareil et de ses
réglages.
Blanc réactif : Importance pour éliminer l'absorption du réactif.
Étalon : Préparation et rôle dans la quantification.
Solution de travail : Préparation des échantillons pour l'analyse.
Une compréhension approfondie de ces étapes est essentielle pour
obtenir des résultats précis et fiables.
Étalonnage : Courbe de Glucose à 3 Points
01 02
Préparation des Dilutions Calcul du Taux de Dilution
Dilution précise d'une solution mère de glucose pour obtenir des Détermination du facteur de dilution pour chaque point de la gamme.
concentrations variées.
03 04
Établissement de la Courbe Limite de Linéarité
Mesure de l'absorbance et traçage de la courbe d'étalonnage à 3 points. Identification de la plage de concentrations où la relation absorbance-
concentration est linéaire.
Cette méthode permet de quantifier la concentration de glucose dans des échantillons inconnus en se basant sur la relation linéaire entre
l'absorbance et la concentration.
Étalonnage Avancé : Courbe de Protides à 6 Points et Longueur
d'Onde Maximale
Courbe d'Étalonnage des Protides Détermination de la Longueur d'Onde Maximale
(»max)
Établissement d'une courbe d'étalonnage à 6 points de gamme pour
une solution de protides. Cette approche plus détaillée permet une Identification de la longueur d'onde à laquelle l'absorption est maximale
meilleure précision sur une plage de concentrations plus large. pour le glucose et les protides. Cette étape est cruciale pour optimiser
la sensibilité et la spécificité des dosages spectrophotométriques.
Préparation des 6 points de gamme avec des dilutions précises.
Mesure de l'absorbance pour chaque point. Balayage spectral pour le glucose.
Construction de la courbe pour la quantification des protides. Balayage spectral pour les protides.
Sélection de la »max pour chaque analyte.
Dosage du Glucose par Méthode Enzymatique Colorimétrique
Préparation de l'Étalon Réaction Enzymatique
Utilisation d'une solution étalon de glucose à concentration connue Incubation des échantillons avec des enzymes spécifiques qui
pour calibrer la méthode. réagissent avec le glucose pour produire un composé coloré.
Mesure de l'Absorbance Détermination des Concentrations
Lecture de l'absorbance des échantillons et de l'étalon au Calcul de la concentration de glucose dans 2 échantillons à partir de
spectrophotomètre. la courbe d'étalonnage préétablie.
Cette méthode offre une grande spécificité pour la quantification du glucose, minimisant les interférences d'autres substances.
Dosage des Protides par Méthode Colorimétrique
Principe de la Méthode Analyse et Quantification
La méthode colorimétrique pour les protides repose sur la formation Après la réaction, l'absorbance est mesurée au spectrophotomètre, et
d'un complexe coloré entre les protéines et un réactif spécifique, dont les concentrations des échantillons sont déterminées.
l'intensité est proportionnelle à la concentration en protéines.
Mesure de l'absorbance des échantillons et de l'étalon.
Préparation d'une solution étalon de protides. Utilisation de la courbe d'étalonnage des protides pour calculer les
Ajout du réactif colorimétrique aux échantillons et à l'étalon. concentrations de 2 échantillons.
Incubation pour le développement de la couleur. Validation des résultats par rapport aux valeurs de référence.
Méthodes Cinétiques : Mesure de l'Activité Enzymatique
ASAT/ALAT Alpha Amylase
Mesure de l'activité des Aspartate Aminotransférases (ASAT) et Mesure de l'activité de l'alpha amylase, une enzyme digestive.
Alanine Aminotransférases (ALAT). Ces enzymes sont des L'augmentation de la DO est observée au fur et à mesure que
marqueurs importants de la fonction hépatique. La diminution de la l'enzyme catalyse la réaction, indiquant son activité.
DO (densité optique) est suivie au cours du temps.
Les méthodes cinétiques permettent de suivre la vitesse d'une réaction enzymatique en temps réel, fournissant des informations précieuses sur
l'activité des enzymes.
Contrôle de Qualité Interne (CIQ) : Carte de Levy Jennings
Réalisation d'une Carte de CIQ
La carte de Levy Jennings est un outil graphique essentiel pour le
contrôle de qualité interne. Elle permet de suivre la performance d'une
méthode analytique au fil du temps.
Enregistrement des valeurs des contrôles quotidiens.
Tracé des moyennes et des limites de contrôle (±1s, ±2s, ±3s).
Visualisation des tendances et des déviations.
Paramètres Statistiques
Détermination des paramètres statistiques clés tels que la moyenne,
l'écart-type et le coefficient de variation, qui sont cruciaux pour évaluer
la précision et l'exactitude de la méthode.
Interprétation du CIQ : Règles de Westgard et Mesures Correctives
Identification des Erreurs Détermination des Causes Mesures Correctives
Interprétation des cartes de CIQ selon les Analyse des types d'erreurs (par exemple, Mise en Suvre de mesures correctives
règles de Levy Jennings et les règles de dérive, saut, erreur aléatoire) pour identifier appropriées pour chaque type d'erreur afin
Westgard pour détecter les erreurs leurs causes profondes. de restaurer la fiabilité des analyses.
aléatoires et systématiques.
Une interprétation rigoureuse du CIQ est indispensable pour garantir la qualité et la validité des résultats de laboratoire, assurant ainsi la sécurité
des patients.
