PARIS VI : PIERRE ET MARIE CURIE

1er semestre 2019-2020 – Valérie Brocheriou

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BIOLOGIE CELLULAIRE

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FICHE DE COURS 11 : TRAFIC

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INTRACELLULAIRE
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Mécanique générale du trafic

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CPCM – 106 Bd Saint Germain 75006 PARIS – Tel : 01.46.34.52.25

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 Mécanique Générale du Trafic

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Table des matières

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I. Signaux et machineries p.3

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II. Mécanique moléculaire p.5

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III. Bilan p.15

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 Mécanique Générale du Trafic

I. Signaux et machinerie
Un signal, porté par la protéine à transporter ou par on récepteur, est reconnu et pris en charge
par des protéines adaptatrices, qui vont permettre le recrutement de protéines de manteau et le

N
N
bourgeonnement de la membrane donneuse. Ce signal indique aussi à la vésicule vers quelle

BO
R
membrane receveuse elle doit se diriger.

O
tS
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1) Transports vésiculaires

id
Br
de
Ils s’effectuent entre un compartiment donneur et un compartiment receveur.

re
N’existent que chez les Eucaryotes.

ai
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em
Ex
Le flux vectoriel des protéines de la voie de sécrétion, à l’intérieur des cellules, depuis leur

EA
lieu de synthèse, le REG, jusqu’à leur compartiment final (REG ; Golgi ; Lysosomes ;

U
G
Membrane plasmique ; Milieu extracellulaire) est conduit grâce à des :

N
M
- vésicules de transport mantelées, qui se déplacent le long de

SA
- rails fournis par le cytosquelette microtubulaire,

E
N
- et les moteurs moléculaires dynéines et kinésines.

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2) Vésicules mantelées (50- 100 nm)

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pl

Selon son lieu de devenir, la protéine est empaquetée dans une vésicule de type particulier,
em

recouverte d’un manteau protéique (molécules de recouvrement) qui peut être de deux
Ex
EA

sortes : à coatomères COP ou à clathrine/ adaptine AP.

U
G
N

Ce mode d’empaquetage particulier contribue à la reconnaissance de la classe de protéine et à

M
SA

son envoi à un compartiment receveur spécifique.

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3) Rôles du manteau :
R
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- Déformation mécanique de la membrane, pour bourgeonner la vésicule (forme et taille
ge

de la vésicule) : Comment déformer une membrane en une vésicule ? C’est le rôle des
id
Br

manteaux protéiques, de larges édifices moléculaires, sortes de polymères de surface,

de

qui s’assemblent sur la face cytosolique des membranes intracellulaires. Ils imposent à
re

la membrane une forte courbure et donnent ainsi naissance à un bourgeon d’un

ai
pl

diamètre de moins de 100nm, précurseur d’une vésicule de transport individualisée.

em
Ex

- Tri et concentration des protéines destinées à être transportées. Le manteau a donc

un rôle de sélection de la protéine cargo et d’adressage spécifique à son compartiment
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receveur
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4) Facteurs fusogènes
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Enfin, des facteurs fusogènes spécifiques, les v- et t- SNAREs, les protéines Rab, protéines
E

transmembranaires, et le complexe cytosolique NSF/ SNAP participent également à la

N
N

reconnaissance spécifique vésicule/ membrane du compartiment receveur, et jouent un rôle

BO

dans l’adressage des protéines empaquetées.

R

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 L’adressage d’une protéine empaquetée dans une vésicule à son compartiment receveur
s’effectue en 4 étapes :
- bourgeonnement de la vésicule
- guidage de la vésicule
- arrimage de la vésicule
- fusion des membranes

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II. Mécanique moléculaire

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1) Les vésicules
de

LES VESICULES RECOUVERTES

re
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STRUCTURE ET BOURGEONNEMENT
pl
em
Ex

Coatomères Clathrine et Adaptine

EA

- Complexes protéiques à 7 (COPI) ou 4 - Réseau polyédrique de clathrines = protéine à

U

(COP II) sous- unités 3 chaînes lourdes et 3 chaînes légères

G
N

s’agençant en triskélion
M
SA

- COP I permet navette :


E

entre saccules des dictyosomes - Adaptines (AP) = adaptateurs entre vésicule

N
N

 du Golgi vers le REG (voie retour) (se fixe à un récepteur transmembranaire ou

BO

 du Golgi vers la MP par sécrétion au cargo transmembranaire) et clathrine

R
O

constitutive (voie sécrétoire) - AP1 : Vésicules de sécrétion contrôlée

tS

- AP2 : Vésicules d’endocytose

ge
id

- COP II permet navette du REG vers le - AP3 : Vésicules destinées aux lysosomes
Br

Golgi
de

- Transports spécifiques
re

- Transports spécifiques
ai

- Recrutement des coatomères GTP- - Manteau se disloque tout de suite après

pl
em

dépendant (GTPases Arf et Sar) bourgeonnement de la vésicule grâce à une

Ex

- Le manteau se disloque au moment de la enzyme de découvrement ATP- dépendante

EA

fusion avec la membrane cible, par de la famille Hsp70

U

- Manteau de clathrines permet rassemblement

G

hydrolyse du GTP
N

localisé des récepteurs au niveau d’une plage

M
SA

membranaire particulière impliquée dans le

E

bourgeonnement de la vésicule, le puits

N
N

recouvert.
BO

- La vésicule est fermée et détachée par action

R

d’une GTPase, la dynamine

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• Les vésicules à clathrine
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►en endocytose
id
Br

►en sortie du Golgi, en sécrétion régulée et en envoi aux lysosomes

de
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Le manteau de clathrine permet de concentrer en face cytosolique de la vésicule des protéines

N
N
BO

adaptatrices, les adaptines, qui établissent le lien avec :

R

- La protéine à transporter, quand elle est transmembranaire

- Un récepteur transmembranaire de chargement du cargo, quand il est soluble

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 Ces protéines adaptatrices contribuent au tri et à l’adressage spécifique du cargo, ce qui est
possible de part l’existence de plusieurs variants d’adaptines.

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Le variant d’adaptine choisi, dépendant de la protéine cargo à transporter, est choisi

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par une séquence signal du domaine cytosolique du récepteur de chargement. O
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EA

L'activité GTPase de la dynamine facilite la formation de l'étranglement des puits

U

tapissés de clathrine et est essentielle dans la scission des vésicules de la surface

G
N

membranaire.
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L'endocytose par récepteur permet aux cellules de communiquer avec leur environnement

BO
R
par l'intermédiaire de récepteurs membranaires qui captent diverses macromolécules
O
tS
biologiques importantes présentes dans le milieu extracellulaire. Ce processus est essentiel
ge

pour les cellules puisqu'il contrôle des fonctions aussi diverses que l'apport spécifique de
id
Br

nutriments, la réponse cellulaire aux hormones et autres facteurs de croissance, la capture des
de

antigènes par les cellules présentatrices. C'est également la voie d'entrée dans les cellules de
re
ai

certains pathogènes.
pl
em
Ex

Le mécanisme d'endocytose le mieux connu est celui qui implique les puits recouverts de
EA

clathrine. Ceux-ci se creusent pour former des vésicules recouvertes qui bourgeonnent à
U
G

partir de la membrane, puis perdent rapidement leur manteau de clathrine. Ces vésicules
N
M

découvertes qui transportent les complexes récepteur-ligand fusionnent ensuite entre elles et
SA

forment les endosomes

E
N
N
BO
R

Des vésicules à clathrine/ adaptine, comme indiqué plus haut, sont également impliquées dans
O
tS

la sécrétion contrôlée et l’envoi aux lysosomes à partir du réseau trans golgien.

ge
id
Br
de

• Les vésicules à coatomères

re
ai

► CopII du REG vers le Golgi

pl
em

► CopI entre les saccules golgiens

Ex

► CopI en sortie du Golgi, en sécrétion constitutive

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Les petites protéines G monomériques

E
N
L’assemblage de la quasi- totalité des manteaux protéiques est contrôlé par un groupe de

N
BO
petites protéines G (GTPases monomériques), aux remarquables propriétés d’interaction
R
avec les membranes : les protéines Arf et Sar. O
tS
ge
id

Toute protéine G adopte deux conformations, l’une liée au GDP et l’autre liée au GTP, et
Br

seule cette dernière est capable d’interagir avec des protéines cibles. Arf- GDP et Sar- GDP
de
re

sont essentiellement solubles dans le cytosol et sans interaction avec les manteaux. Arf-
ai
pl

GTP et Sar- GTP sont au contraire fortement attachés aux membranes lipidiques et servent
em

de point d’ancrage aux manteaux.

Ex

Cet équilibre entre formes inactives (GDP) et actives (GTP) est contrôlé par les protéines
EA
U

GEF et GAP :
G
N
M

GEF : facteur d’échange nucléotidique, qui échange sur la protéine le GDP contre du GTP
SA

GAP : facteur qui catalyse l’hydrolyse du GTP en GDP

E
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 Arf contrôle l’assemblage des manteaux CopI et clathrine et Sar celui des manteaux CopII
(vésicules de transport du REG au Golgi par exemple).

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(M/S N°10, Vol 18, 2002)

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 2) Guidage des vésicules
- Reconnaissance spécifique entre membranes donneuse et receveuse

- Implique des protéines membranaires, des récepteurs de surface, spécifiques de la protéine

N
cargo, de la membrane vésiculaire et de la membrane cible

N
BO
R
- Rôle des protéines de manteau et protéines adaptatrices

O
tS
ge
- Les SNAREs sont des protéines transmembranaires qui se trouvent au cœur de toutes les

id
Br
réactions de fusion intracellulaires. Elles sont ancrées dans la membrane des vésicules

de
intracellulaires (v-SNARE; VAMP pour les vésicules synaptiques) et celle de leur

re
ai
compartiment cible (t-SNARE ; par exemple, SNAP25 et syntaxine).

pl
em
Ex
Quand la vésicule membranaire s’approche de sa cible, les domaines cytosoliques des v- et t-

EA
SNARE s'associent en un faisceau d'hélices parallèles de grande stabilité. L'implication des

U
G
faisceaux parallèles d'hélices qui se forment lors de l'assemblage du complexe SNARE

N
M
pourraient fournir l'énergie nécessaire au rapprochement des membranes et à la formation du

SA
pore de fusion.

E
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em
Ex
EA
U

- Les protéines SNAREs sont définies par une séquence très conservée (motif SNARE) située
G
N

dans la région Cter de leur domaine cytoplasmique.

M
SA

- Un v- SNARE interagit spécifiquement avec un t- SNARE. L’interaction entre SNAREs est

E
N

médiée par un complexe cytosolique, le complexe NSF/ SNAP ; l’identité du v- SNARE

N
BO

définit le compartiment receveur avec lequel elle doit fusionner, et le t- SNARE qu’elle doit
R

reconnaître.

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E
N
N
BO
- Une communication (sous la forme d’un pore) s’établit entre les deux compartiments
R
O
membranaires à l’endroit où la fusion membranaire sera déclenchée. Le pore de fusion peut
tS
ge

être transitoire et se refermer ou s’étendre de sorte que la fusion entre les deux compartiments
id
Br

devient complète.
de
re
ai

3) Amarrage
pl
em
Ex

L’interaction trans- SNARE est stabilisée et sa spécificité est augmentée par les protéines
EA

Rab, actives sous forme GTP- liée

U
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ge
id
Br

4) Fusion des membranes

de
re
ai

- Interaction des bicouches lipidiques de la vésicule et de la membrane cible 

pl
em

nécessité d’exclure les molécules d’eau

Ex
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 - Un pore se forme, les molécules transportées sont libérées puis les protéines de la
vésicule sont recyclées ; le complexe SNARE est dissocié par action de NSF/ SNAP.

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 III. BILAN
► Les voies de transport vésiculaire
Endocytose : internalisation de molécules du milieu extra- cellulaire vers le milieu
intra- cellulaire/ endosomes/ vésicules à clathrine
Exocytose : sécrétion de molécules intra- cellulaires dans le milieu extra- cellulaire

N
Constitutive : tous les types cellulaires ; permanente ; recyclage des lipides et

N
BO
protéines de la membrane plasmique et des composants de la matrice extra- cellulaire ;

R
O
vésicules Cop I

tS
Régulée : cellules spécialisées ; en réponse à un signal ; vésicules à clathrine

ge
Voie retour : maintien de l’identité du REG et du Golgi ; protéines résidentes

id
Br
de
►Les étapes du transport vésiculaire

re
ai
pl
Bourgeonnement Guidage Amarrage Fusion

em
►Protéines du manteau SNAREs Petites protéines G : Entre

Ex
Déformation de la membrane Protéines protéines Rab bicouches

EA
Tri et concentration des protéines cargo transmembranaires lipidiques

U
G
Vésicule : v- SNARE Plusieurs variants

N
M
CopI Membrane receveuse : t- Exclusion

SA
7 sous- unités SNARE Reconnaissance de l’eau

E
Plusieurs variants spécifique entre

N
N
BO
Intra- golgien Plusieurs variants SNAREs SNAREs =

R
Sécrétion constitutive tS
O treuil
Reconnaissance spécifique
ge

Cop II v/ t  complexe hélicoïdal

id

4 sous- unités trans- SNARE

Br
de

Plusieurs variants
re

Du REG au Golgi
ai
pl
em

Clathrine/ adaptines
Ex

Triskélion
EA

Structure hexaédrique
U
G

En endocytose
N
M

En sortie du Golgi : vers les lysosomes ; en

SA

sécrétion contrôlée
E
N
N
BO

►GTPases (petites protéines G

R
O
tS

monomériques)
ge

Actives (GTP) Inactives (GDP)

id

GAP
Br
de
re

GEF
ai
pl

Sar
em

Vésicules à Cop I et clathrine

Ex

Arf
EA

Vésicules à Cop II
U
G
N

►Scission de la vésicule à clathrine : GTPase

M
SA

dynamine
E
N
N

► Enzyme de découvrement ATP-

BO
R

dépendante de la famille Hsp70 pour disloquer

le manteau de clathrine

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 SEQUENCES D’ADRESSAGE

ORGANITE NOM DE NATURE CLIVAGE ACTEURS

LA SEQUENCE
SEQUENC
E

N
N
BO
ADRESSAGE AU Peptide Amino- Oui Particule cytosolique

R
REG signal terminale Signal SRP (Signal

O
tS
Co- traductionnel 10 à 30 acides peptidase de la Recognition Particule)

ge
aminés face cisternaire Fixation à peptide signal

id
Br
majoritairemen du REG et ribosome

de
t hydrophobes Arrêt traduction

re
ai
Envoi au REG grâce

pl
em
aux rails microtubules/

Ex
kinésine

EA
Complexe

U
G
transmembranaire du

N
M
REG : Récepteur de la

SA
SRP (lié au GTP) et

E
N
récepteur du ribosome

N
BO
(ribophorine) ; canal de
R
O translocation
tS

ADRESSAGE AU Séquence de Riche en Lys et Non Importine (protéine

ge
id

NOYAU localisation Arg transporteuse

Br

Post- traductionnel nucléaire Séquence cytosolique)

de
re

(NLS) exposée en Microtubules/ dynéine

ai

Nucléoporines des
pl

surface de la
em

protéine pores de l’enveloppe

Ex

nucléaire
EA
U

Du NOYAU AU Séquence Courte Non Exportine

G

d’export
N

CYTOSOL séquence Nucléosquelette/

M

nucléaire d’acides Microtubules/ kinésine

SA

(NES ou aminés Nucléoporines des pores

E
N

de l’enveloppe nucléaire
N

SEN) hydrophobes
BO

régulièrement
R
O

espacés (de 2
tS
ge

acides aminés
id

en général)
Br

Chaperons d’envoi à la
de

ADRESSAGE A Pré- Amino- Oui

re

LA séquence terminale Protéase de la mitochondrie,

ai
pl

MITOCHONDRIE Hélice matrice maintenant protéine

em

Post- traductionnel amphiphile mitochondriale linéaire

Ex
EA

portant un Microtubules/ kinésine

U

domaine riche Récepteur de la

G
N

en Lys et Arg membrane externe

M
SA

(chargé +) et Canal de translocation

E

un domaine (point de rapprochement

N
N

hydrophobe entre membrane externe

BO
R

et membrane interne.
TIM TOM)

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 ADRESSAGE Marqueur Mannose 6- « Oui » Domaine signal
AUX glucidique phosphate Mannoses reconnu sur protéine
LYSOSOMES M6P déphosphorylé NAcétylglucosamine
Post- traductionnel s dans phosphotransférase et
lysosome NAcétylglucosaminidas
e

N
N
BO
Récepteur au M6P

R
Acidification (pompes à

O
tS
protons)

ge
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