ISO/TC 147/SC 2
Date : 2023-02
ISO 23696-2:2023(F)
ISO/TC 147/SC 2
Secrétariat : DIN
Qualité de l’eau — Détermination du nitrate dans l’eau à l’aide de
tubes fermés à petite échelle — Partie 2 : Réaction colorimétrique
à l’acide chromotropique
Water quality — Determination of nitrate in water using small-scale sealed tubes — Part 2: Chromotropic
acid colour reaction
ICS : 13.060.50
Type du document : Norme internationale
Sous-type du document :
Stade du document : (60) Publication
Langue du document : F
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DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Publié en Suisse
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ISO 23696-2:2023(F)
Sommaire Page
Avant-propos ................................................................................................................................................................. iv
Introduction ..................................................................................................................................................................... v
1 Domaine d’application ...................................................................................................................................1
2 Références normatives ..................................................................................................................................2
3 Termes et définitions .....................................................................................................................................2
4 Principe ...............................................................................................................................................................2
5 Interférences .....................................................................................................................................................3
6 Échantillonnage et préparation des échantillons ................................................................................4
7 Préparation des réactifs et des solutions étalons ................................................................................4
8 Appareillage ......................................................................................................................................................4
9 Mode opératoire...............................................................................................................................................5
9.1 Condition de réaction pour la réaction colorimétrique ....................................................................5
9.2 Réaction colorimétrique à l’acide chromotropique ............................................................................5
10 Contrôle qualité................................................................................................................................................5
10.1 Vérification de l’étalonnage .........................................................................................................................5
10.2 Contrôles du système et des interférences ............................................................................................6
11 Calculs ..................................................................................................................................................................6
12 Expression des résultats ...............................................................................................................................7
13 Rapport d’essai .................................................................................................................................................7
Annexe A (informative) Données de performance .............................................................................................8
Bibliographie ...................................................................................................................................................................9
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ISO 23696-2:2023(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le
droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir [Link]/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété. Les détails concernant les références aux droits de
propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration du document sont
indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par l’ISO
(voir [Link]/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir [Link]/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l’eau,
sous-comité SC 2, Méthodes physiques, chimiques et biochimiques.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 23696 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse [Link]/fr/[Link].
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ISO 23696-2:2023(F)
Introduction
Le nitrate joue un rôle important dans la nature et est naturellement présent dans les écosystèmes.
Les principales sources anthropiques sont l’agriculture (engrais et fumier) et les sources industrielles
telles que les entreprises alimentaires, chimiques, papetières, etc., ainsi que l’incidence de processus
naturels de nitrification de formes réduites d’azote. À son tour, le nitrate peut être converti en azote
gazeux en dénitrifiant les bactéries. Ce processus prend une importance stratégique dans les stations
biologiques d’épuration de l’eau.
La présence de concentrations significatives de nitrate dans les eaux de surface et de baignade,
l’eau potable et les eaux usées peut présenter un risque pour la santé humaine et/ou l’environnement.
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NORME INTERNATIONALE ISO 23696-2:2023(F)
Qualité de l’eau — Détermination du nitrate dans l’eau
à l’aide de tubes fermés à petite échelle — Partie 2 :
Réaction colorimétrique à l’acide chromotropique
AVERTISSEMENT — Il convient que les utilisateurs du présent document maîtrisent les
pratiques courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter tous les
problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur
d’établir des pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon le présent document soient
effectués par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination du nitrate en tant que NO3-N dans des
eaux d’origines diverses telles que l’eau naturelle (y compris les eaux souterraines, les eaux de surface
et les eaux de baignade), l’eau potable et les eaux usées, dans une plage de concentration de mesure
comprise entre 0,20 mg/l et 30 mg/l de NO3-N en utilisant la méthode à petite échelle en tubes fermés.
Différentes plages de mesure des méthodes à petite échelle en tubes fermés peuvent être requises.
Les plages de mesure peuvent varier en fonction du type de méthode à petite échelle en tubes fermés
des différents fabricants.
Il appartient à l’utilisateur de choisir l’essai en tubes fermés à petite échelle avec la plage d’application
appropriée ou d’adapter les échantillons dont les concentrations dépassent la plage de mesure d’un
essai par dilution préliminaire.
NOTE 1 Les résultats des essais en tubes fermés à petite échelle sont plus précis au milieu de la plage
d’application de l’essai.
Les méthodes des fabricants pour les tubes fermés à petite échelle sont basées sur la réaction
colorimétrique à l’acide chromotropique dépendant du mode opératoire type du tube fermé à petite
échelle utilisé, voir l’Article 9.
NOTE 2 Les lois, réglementations ou normes peuvent exiger que les données soient exprimées en NO3 après
conversion avec le facteur de conversion stœchiométrique 4,426 81 de l’Article 11.
NOTE 3 Dans le langage habituel du traitement des eaux usées et sur les écrans des photomètres ou des
spectrophotomètres à essai en tube fermé automatisés, le NO3 sans indication de la charge négative est devenu la
notation courante pour le paramètre nitrate et en particulier pour le paramètre nitrate-N. Cette notation est
adoptée dans le présent document, même si la nomenclature chimique n’est pas tout à fait correcte.
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2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 5667-1, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 1 : Recommandations relatives à la conception
des programmes et des techniques d’échantillonnage.
ISO 5667-3, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 3 : Conservation et manipulation des
échantillons d’eau.
ISO 5667-10, Qualité de l’eau — Échantillonnage — Partie 10 : Lignes directrices pour l’échantillonnage
des eaux résiduaires.
ISO 8466-1, Qualité de l’eau — Étalonnage et évaluation des méthodes d’analyse — Partie 1 :
Fonction linéaire d’étalonnage.
ISO 8655-2, Appareils volumétriques à piston — Partie 2 : Pipettes.
ISO/IEC 17025, Exigences générales concernant la compétence des laboratoires d’étalonnages et d’essais.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes :
— ISO Online browsing platform : disponible à l’adresse [Link]
— IEC Electropedia : disponible à l’adresse [Link]
3.1
tube fermé à petite échelle
tube en verre disponible sur le marché, prérempli par le fabricant avec un ou plusieurs réactifs,
destiné à développer une couleur à lire par un photomètre ou un spectrophotomètre
4 Principe
Le nitrate contenu dans l’échantillon à analyser réagit en solution acide avec de l’acide chromotropique
qui est lu à une absorption maximale par un photomètre ou un spectrophotomètre.
La méthode permet d’obtenir la concentration en nitrate présente dans l’échantillon.
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5 Interférences
Les substances interférentes types sont les métaux, les chlorures et la charge organique
[demande chimique en oxygène (DCO)]. Des exemples de concentration maximale compatible sont
donnés dans le Tableau 1.
Chaque fabricant de tubes fermés à petite échelle doit fournir des informations sur les niveaux
d’interférence au-delà desquels l’ion interfère. La concentration des substances interférentes peut
dépendre du rapport entre le volume prélevé et les réactifs pré-dosés dans le tube fermé à petite échelle.
Tableau 1 — Exemples d’ions interférents et charge organique
Substances Concentrations maximales tolérables
mg/l
K+ 500
Na+ 500
Cl⎺ 500
DCO 200
Ag+ 100
Ca2+ 50
Fe2+ 10
Cr(VI) 5
Des concentrations élevées de chlorure nécessitent une précipitation sous forme de chlorure d’argent
avec du sulfate d’argent ou, le cas échéant, par dilution comme décrit ci-dessous dans le présent article.
Lorsque les concentrations en calcium sont supérieures à celles indiquées à titre d’exemple dans le
Tableau 1, la réaction peut produire une turbidité.
Si la concentration d’ions interférents dans l’échantillon dépasse la concentration maximale compatible,
l’utilisateur peut diluer l’échantillon et poursuivre avec la plage de mesure appropriée de la méthode à
petite échelle en tubes fermés.
Dans le cas d’échantillons troubles, une filtration préliminaire est nécessaire en utilisant des filtres
ayant une porosité de 0,45 μm. Avant la filtration, le filtre doit être lavé avec de l’eau ayant le même pH
que l’échantillon. En général, cela peut être fait avec l’échantillon lui-même en éliminant les premiers
millilitres d’échantillon, déjà filtrés.
Pour les interférences avec un échantillon coloré, l’échantillon peut être manipulé comme suit :
a) ajouter l’échantillon au tube fermé à petite échelle sans ajouter de réactifs supplémentaires et
mesurer ;
b) mesurer la valeur de concentration de la solution colorée en ajoutant des réactifs ;
c) soustraire la valeur obtenue en a) de la valeur en b).
Il est de la responsabilité du laboratoire d’identifier les interférences, par exemple en enrichissant
l’échantillon contenant l’ion suspecté avec des étalons contenant une concentration connue d’azote,
voir l’Article 10.
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6 Échantillonnage et préparation des échantillons
Pour les méthodes d’échantillonnage et de stockage des échantillons avant analyse,
procéder conformément à l’ISO 5667-1, l’ISO 5667-3 et l’ISO 5667-10.
Il convient d’analyser les échantillons dès que possible. Pour des périodes de stockage plus longues,
il est recommandé de congeler à une température inférieure à –18 °C comme prescrit dans l’ISO 5667-3.
Pour les nitrates présents dans les eaux usées et les eaux de surface, une filtration sur site est
obligatoire.
En raison des différences dans les tubes fermés à petite échelle utilisés par les différents fabricants,
il est recommandé de suivre les manuels des fabricants.
7 Préparation des réactifs et des solutions étalons
7.1 Eau, la concentration d’azote dans l’eau utilisée doit être inférieure à 25 % de la plage de mesure
inférieure du tube fermé utilisé.
7.2 Nitrate de potassium, KNO3, sel préalablement séché à (105 ± 5) °C pendant 2 h ; des solutions
de nitrate de potassium de concentrations connues disponibles sur le marché peuvent également être
utilisées comme matériau de référence.
7.3 Réactifs fournis par les fabricants pour la méthode des tubes fermés à petite échelle et utilisés
pour déterminer le NO3-N avec les réactions colorimétriques à l’acide chromotropique (voir l’Article 9).
7.3.1 Acide sulfurique, H2SO4.
7.3.2 Métabisulfite de sodium, Na2S2O5.
7.3.3 Acide chromotropique, C10H8O8S2.
8 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
8.1 Tubes fermés à petite échelle, pour différentes plages de mesure de concentrations en NO3-N :
faible, moyenne et élevée.
8.2 Photomètre ou spectrophotomètre pour la mesure des cuvettes.
NOTE En général, un instrument automatisé possède, en mémoire, les courbes d’étalonnage requises pour
une utilisation de routine et peut également en enregistrer de nouvelles.
8.3 Pipettes et micropipettes étalonnées de différents volumes, conformément à l’ISO 8655-2.
8.4 Étuve de séchage, capable de maintenir la température à (105 ± 5) °C pour sécher le matériau de
référence.
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ISO 23696-2:2023(F)
9 Mode opératoire
9.1 Condition de réaction pour la réaction colorimétrique
Il est important de garder à l’esprit que le développement de la couleur qui se produit dans le cadre de
la méthode à petite échelle en tubes fermés est influencé par la température et le pH de l’échantillon.
Afin d’obtenir des données reproductibles, il est généralement recommandé que la température de
l’échantillon et des réactifs soit comprise entre 15 °C et 25 °C lorsque la réaction a lieu. Il convient que
le pH soit maintenu entre 3 et 10.
9.2 Réaction colorimétrique à l’acide chromotropique
Les réactifs contenus dans les tubes fermés à petite échelle, échantillon inclus, pour la réaction
colorimétrique à l’acide chromotropique sont indiqués dans le Tableau 2.
Les ions nitrates réagissent en condition acide avec de l’acide chromotropique (7.3.3) dans un tube
fermé à petite échelle qui est lu dans un photomètre à filtre (8.2) à une longueur d’onde de (430 ± 5) nm
ou dans un spectrophotomètre (8.2) à une longueur d’onde de (410 ± 5) nm.
Tableau2 — Réactifs en tubes fermés à petite échelle donnés en fraction massique,
échantillon inclus, pour la réaction colorimétrique à l’acide chromotropique
Nom du réactif Plage de pourcentage de fraction massique
Métabisulfite de sodium (7.3.2) 0,01 à 5
Acide chromotropique (7.3.3) 0,01 à 1
Acide sulfurique (7.3.1) 75 à 85
10 Contrôle qualité
10.1 Vérification de l’étalonnage
En général, le photomètre ou spectrophotomètre (8.2) de lecture des tubes fermés à petite échelle est
étalonné par le fabricant et les courbes correspondantes sont sauvegardées. De plus,
l’instrument dispose d’un programme de calcul de la concentration de l’analyte à partir de la mesure de
l’absorbance de l’échantillon analysé grâce aux paramètres de la courbe d’étalonnage stockée.
Il convient que l’acceptation de la courbe d’étalonnage soit évaluée en utilisant un matériau de
référence comme solutions de contrôle qualité (diluées à partir de 7.2) de différentes concentrations
dans la plage d’étalonnage et un blanc. Cela doit être répété chaque fois que le fabricant modifie la
courbe stockée (les informations sur les changements d’étalonnage doivent être communiquées par les
fabricants) et/ou le programme de calcul de la concentration de l’analyte ou tel que décrit dans
l’ISO/IEC 17025.
L’utilisateur établit ses propres niveaux de matériaux de référence et critères d’acceptabilité en
fonction de la variabilité statistique fournie par le fabricant du photomètre ou du spectrophotomètre,
ou conformément aux normes en vigueur ou à ses exigences spécifiques. Si les données sont
acceptables, le photomètre ou le spectrophotomètre peut être utilisé. Dans le cas contraire,
un réétalonnage ou une maintenance et un réétalonnage appropriés sont nécessaires.
Chaque laboratoire est responsable de la vérification du système, ce qui inclut le matériau de référence
utilisé, la fréquence et les niveaux de concentration choisis du matériau de référence.
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ISO 23696-2:2023(F)
Il est également possible de créer une courbe d’étalonnage propre à partir de la solution de référence
(7.2) et de la diluer pour obtenir les points d’étalonnage souhaités (au moins cinq doivent être prescrits
conformément à l’ISO 8466-1) et un blanc dans la plage de mesure. Procéder à la lecture des tubes
fermés à petite échelle avec le photomètre ou le spectrophotomètre (8.2). Il est recommandé de stocker
ces courbes d’étalonnage propres sur le photomètre ou le spectrophotomètre.
10.2 Contrôles du système et des interférences
Il est recommandé de vérifier le système à l’aide d’un matériau de référence (7.2), en raison de la
variabilité potentielle des pratiques des fabricants relatives au photomètre ou au spectrophotomètre,
à la méthode suivie et aux réactifs utilisés.
Il est au moins nécessaire de vérifier les principales interférences potentielles pouvant être présentes
dans la matrice (voir l’Article 5). Il est recommandé d’analyser la concentration connue du matériau de
référence enrichi ou la concentration connue d’ions interférents sur l’échantillon. Pour vérifier la
récupération de nitrate, il est recommandé d’analyser un certain nombre d’échantillons représentatifs
de l’activité du laboratoire en ce qui concerne les répétitions et les niveaux.
Il appartient au laboratoire de définir les critères concernant la fréquence du contrôle qualité.
Les critères d’acceptation sélectionnés par le laboratoire doivent être compatibles avec l’incertitude
déclarée.
11 Calculs
La concentration en NO3-N dans l’échantillon analysé est calculée à l’aide de la Formule (1) :
CNO3 −N = ρ × d (1)
où
CNO3-N est la concentration de nitrate-N dans l’échantillon, en mg/l ;
ρ est la concentration lue sur le photomètre ou le spectrophotomètre, en mg/l ;
d est le facteur de dilution, qui tient compte à la fois de la nécessité potentielle d’inclure la
concentration dans le champ d’application de la méthode et de l’ajout potentiel d’acide ou
de base pour la correction du pH.
Si l’analyse est effectuée avec un photomètre ou un spectrophotomètre automatisé disponible sur le
marché, le NO3-N est fourni par le même instrument en saisissant le facteur de dilution.
Si les données sont exprimées en nitrate ( NO3− ), la valeur de concentration en NO3-N doit être
multipliée par le facteur de conversion 4,426 81.
Les concentrations ρ même légèrement supérieures à la limite supérieure de la plage d’application
indiquée dans le manuel du fabricant pour la méthode à petite échelle en tubes fermés appliqué ne
doivent pas être utilisées pour le calcul des résultats ni être consignées comme telles.
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ISO 23696-2:2023(F)
12 Expression des résultats
Les résultats d’analyse obtenus lors de l’application du présent document sont soumis à une incertitude
de mesure à prendre en compte dans l’interprétation des résultats.
Les résultats doivent être fournis avec un maximum de 3 chiffres significatifs.
EXEMPLE
CNO3-N = 0,125 mg/l
CNO3-N = 1,36 mg/l
CNO3-N = 12,3 mg/l
13 Rapport d’essai
Le rapport d’essai doit contenir au moins les informations suivantes :
a) la méthode d’essai utilisée, avec la référence au présent document, à savoir l’ISO 23696-2:2023 ;
b) l’identité de l’échantillon ;
c) l’expression des résultats conformément à l’Article 12 ;
d) tout écart par rapport à cette méthode ;
e) toute circonstance susceptible d’avoir eu un impact sur les résultats ;
f) toute caractéristique inhabituelle observée ;
g) la date de l’essai.
Les performances de la méthode du présent document sont présentées à l’Annexe A.
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ISO 23696-2:2023(F)
Annexe A
(informative)
Données de performance
Un essai interlaboratoires international final a été organisé par l’AQS Baden-Württemberg (AQS BW)
(Allemagne) en février 2022. Quinze laboratoires de cinq pays différents y ont participé avec des tubes
fermés à petite échelle d’un même fabricant.
Un ensemble de six échantillons a été préparé, dont un échantillon d’eau souterraine, un échantillon
d’eau de piscine et deux échantillons d’eaux usées. Lorsque la teneur initiale dans la matrice respective
était trop faible, les échantillons ont été enrichis. De plus, une solution étalon de contrôle qualité a été
distribuée.
Un taux de récupération peut être calculé uniquement pour la solution étalon (échantillon I).
Pour toutes les autres matrices d’échantillons, la valeur assignée ne peut pas être calculée en raison de
la teneur inconnue de la matrice.
Les données de performance sont résumées dans le Tableau A.1.
Tableau A.1 — Données de performance pour différentes matrices et un étalon QM —
Détermination du nitrate par réaction colorimétrique à l’acide chromotropique
Échantillon l n o X x η sR CV,R sr CV,r
% mg/l mg/l % mg/l % mg/l %
A - Eau souterraine/potable 10 40 0,0 — 1,55 — 0,279 18,0 0,099 6,4
B - Eau de piscine 10 40 0,0 — 8,77 — 0,640 7,3 0,198 2,3
C - Eaux usées 1 7 28 12,5 — 52,85 — 2,647 5,0 0,887 1,7
D - Eaux usées 2 10 40 0,0 — 15,39 — 0,399 2,6 0,212 1,4
H - Eau de surface 9 36 10,0 — 10,93 — 0,290 2,6 0,101 0,9
I - Étalon QM 10 38 0,0 0,996 1,26 126,8 0,276 21,9 0,098 7,7
Légende
l : nombre de laboratoires après rejet des valeurs aberrantes
n : nombre de résultats d’essai individuels après rejet des valeurs aberrantes
o : pourcentage de valeurs aberrantes
X : valeur assignée
x : moyenne globale des résultats (sans les valeurs aberrantes)
η : taux de récupération
sR : écart-type de reproductibilité
CV,R : coefficient de variation de la reproductibilité
sr : écart-type de répétabilité
CV,r : coefficient de variation de la répétabilité
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Bibliographie
[1] ISO 7870-2, Cartes de contrôle — Partie 2 : Cartes de contrôle de Shewhart
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