Université Sultan Moulay Slimane
Faculté Des Sciences et Technique Béni Mellal
Travaux Pratique : N° 1
Extraction et séparation des pigments chlorophylliens
Filière : TQPA / Groupe : 1
Réalisé par : Encadré par :
Mme. BELLALI
Sommaire
I. Introduction
II. Matériels Utilisé
III. Etapes Des Préparations
IV. Résultats
V. Conclusion
I. Introduction
Problématique :
➢ Les différentes méthodes de séparer de chlorophylle ?
• L'évaporation
• La filtration
• La centrifugation
• Chromatographie
➢ Comment peut-on savoir d’une manière précise les différentes
constituant du pigment chlorophylliens ?
• Spectroscopie
• Microscopie électronique
• Analyse élémentaire
Objectif :
Le but de cette expérience est d’extraire et de séparé des
pigments présents dans les feuilles d’épinards.
L’identification :
➢ Séparation par Chromatographie par couche mince « CCM »
(Qualitatif)
➢ La mesure d’absorbance par spectrométrie (Quantitatif)
II. Matériels Utilisé
Mortier et Pilon Feuille d'épinard Acetone
Ether de Pétrole
Rotavapor
Ether D’éthylique
Chromatographie sur
couche mince
Filtron de papier + Ballon Rendu
enrênoire
III. Etapes Des Préparations
-Etape 1 : Extraction et Filtration
On a pris un échantillon de feuilles d'épinards et broyé-le dans un mortier
en ajoutant 10 ml d'acétone (d’une manière intermittente) jusqu'à obtenir
une solution homogène. Filtrez ensuite la solution pour recueillir un extrait
pur.
-Etape 2 : Concentration de l’extrait
L'extrait a été placé dans une boule et traité avec un rotavapor pour
éliminer l'acétone. Ce processus a été effectué à une température de 55°C,
qui correspond au point de fusion de l'acétone, jusqu'à l'obtention d'un
extrait pur et sec de pigments chlorophylliens.
Prince de Rotavapor :
Le rotavapor est un appareil utilisé pour l'évaporation sous vide de
solvants d'une solution. Il fonctionne en abaissant le point d'ébullition du
solvant grâce à la création d'un vide, tout en augmentant l'efficacité de
l'évaporation par la rotation du flacon. La chaleur est fournie par un bain
pour accélérer l'évaporation sans dégrader les composés sensibles à la
chaleur. Les vapeurs du solvant sont ensuite condensées et collectées
séparément, permettant ainsi la séparation efficace du solvant tout en
préservant les substances délicates dans la solution.
Suite à l'évaporation, la masse de l'extrait pur a été mesurée afin de
calculer le rendement. Il a été établi que la masse de l'extrait pur est de
6,56 g. Par ailleurs, la masse de la matière végétale initiale est de 10 g. Le
rendement, R%, est calculé selon la formule :
D’où :
= 65,6%
-Etape 3 : Séparation par Chromatographie sur couche
mince (CCM)
L'extrait sec a été dissous dans un volume d'acétone pour le liquéfier,
permettant ainsi le prélèvement de gouttes qui ont été déposées sur une
plaque de chromatographie sur couche mince (CCM). Après séchage de ces
gouttes sur la plaque, celle-ci a été placée dans une cuve contenant un
éluant composer de 40% d'éther de pétrole et 60% d'éther diéthylique.
Cette étape a pour but d'observer la séparation des différents constituants
des pigments chlorophylliens.
