Cours de Technique de Nursing de Laboratoire éd.

2024-2025

INTRODUCTION
Avant de parler des techniques de laboratoire, il est nécessaire de connaitre
d’abord la classification des microorganismes infectieux par groupes de risque. Cette
classification n’est applicable qu’aux travaux de laboratoire et est présentée comme suit :
Groupe de risque 1 (risque faible ou nul pour les individus ou la collectivité) :
microorganisme qui, selon toute probabilité, ne peut causer de maladie humaine ou animale.
Groupe de risque 2 (risque modéré pour les individus, faible pour la
collectivité) : Germe pathogène capable de provoquer une maladie humaine ou animale mais
qui ne présente vraisemblablement pas un sérieux danger pour le personnel de laboratoire, la
collectivité, le bétail, ou l’environnement. Une exposition en laboratoire est susceptible
d’entrainer une infection grave, mais qui peut être traitée ou prévenue efficacement ; par
ailleurs le risque de propagation de l’infection est limité.
Groupe de risque 3 (risque important pour les individus, faible pour la
collectivité) : Germe pathogène qui cause habituellement une grave maladie humaine ou
animale, mais qui ne transmet généralement pas d’un individu à l’autre. Il existe un
traitement et des mesures préventives efficaces.
Groupe de risque 4 (risque important pour les individus comme pour la
collectivité) : Germe pathogène qui cause habituellement une grave maladie humaine ou
animale et peut se transmettre facilement d’un individu à l’autre, soit directement, soit
indirectement. Il n’existe généralement ni traitement, ni mesure préventives efficaces.
Les laboratoires sont désignés comme suit :
 Laboratoire de base-sécurité biologique niveau 1
 Laboratoire de base-sécurité biologique niveau 2
 Laboratoire de confinement-sécurité biologique niveau 3
 Laboratoire de confinement à haute sécurité-sécurité biologique niveau 4
Le niveau de sécurité biologique est un indice composite basé sur le type d’organisation, le
mode de construction, les moyens de confinement et l’appareillage de laboratoire ainsi que
les pratiques et mode opératoires à observer pour travailler sur les agents appartenant aux divers
groupes de risque.

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Le tableau ci-après indique le rapport groupe de risque et niveau de sécurité

biologique, mais il n’assimile pas les groupes de risque au niveau de sécurité biologique des
laboratoires conçus pour travailler sur des microorganismes appartenant à ces groupes.
Groupe Niveau Type Pratique Appareillage
de de de de
risque sécurité laboratoire laboratoire de sécurité
1 De base de Enseignement de BTM Aucun, paillasse
niveau de base sans protection
sécurité
biologique 1
2 De base de Services de santé
BTM et Paillasse sans
niveau de primaire ; vêtement protection et
sécurité laboratoire protecteurs, logo ESB contre le
biologique 2 d’analyses ou de
de risque risque d’aérosols
recherche biologique
3 Confinement- Diagnostic Comme niveau BTM ou autres
niveau de spécialisé ; 2, plus moyens de
sécurité recherche vêtements confinement
biologique 3 spéciaux, accès primaire pour
réglementé et l’ensemble des
flux d’air dirigé activités
4 Confinement à Manipulation de Comme niveau ESB classe III
haute sécurité- germes 3, plus SAS à air ou combinaison
niveau de pathogènes à l’entrée, pressurisées
sécurité dangereux douche à la utilisée avec une
biologique 4 sortie et ESB classe II,
élimination autoclave à deux
spécifique des portes formant
déchets SAS mural, air
filtré
BTM : bonnes techniques microbiologique
ESB : enceinte de sécurité biologique
Chaque pays ou région devra établi une classification nationale ou régionale, par
groupe de risque, des microorganismes. Cette classification devra reposer sur les critères
suivant :
 Pathogénicité du germe

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 Mode de transmission et gamme d’hôtes, qui peuvent dépendre de l’état

immunitaire de la population locale, de la densité et la mobilité des hôtes, de la présence de
vecteurs appropriés et de niveau d’hygiène de l’environnement
 Possibilité de prendre localement des mesures préventives efficaces,
lesquelles peuvent comprendre : une prophylaxie par vaccination ou administration d’immun
sérum (immunisation passive), des mesures sanitaires concernant par exemple l’hygiène des
aliments, l’élimination des réservoirs animaux ou des arthropodes vecteurs.
 Possibilité de dispenser localement un traitement efficace : immunisation
passive, vaccination post-exposition, utilisation d’anti-infectieux et d’agent chimio-
thérapeutique ou antiviraux, sans négliger le risque d’apparition de souches pharmaco
résistants.
Pour déterminer le niveau de sécurité biologique, on prend donc en compte le
microorganisme, les installations et moyens existants ainsi que les pratiques et les modes
opératoires à respecter pour que le travail de laboratoire s’effectue dans les bonnes
conditions de Sécurité.
La sécurité biologique consiste dans la mise en œuvre d’un certain nombre de
principes, de techniques et de pratiques de confinement visant à prévenir le risque accidentel
d’exposition de personnel à des agents pathogènes ou à des toxines, ou encore de libération
de telles substances.
La sureté biologique consiste dans la mise en place d’un certain nombre de
mesures d’ordre administratif et de gestion de personnel, en vue de réduire le risque de perte,
de vol, d’utilisation en mauvais escient, de détournement ou de délibération délibérée
d’agents ou de toxines, ou encore de libération de telles substances.
Le véritable fondement de la sureté biologique réside dans l’application en laboratoire des
pratiques de sécurité biologiques.

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CHAPITRE I : TECHNIQUES GENERALES DE LABORATOIRE

1.1. ORGANISATION D’UN LABORATOIRE

Figure 1 Laboratoire classique eu niveau de sécurité 2.

- Rôle du Laboratoire
Le laboratoire et santé sont liés à de nombreux points de vue. Il est cependant nécessaire
de dépasser les conceptions importées qui régissent parfois encore nos comportements.
En ces temps révolutionnaires, il nous faut radicaliser tous les aspects de la médecine,
afin de les placer dans une perspective authentique. Ce principe nous amène à envisager les
activités du laboratoire sous trois angles différents :
> Le premier est celui qui vise à une précision plus grande du diagnostic grâce aux
examens de laboratoire. La rigueur des techniques et de leur utilisation doit permettre de
mieux reconnaître les maladies et leur évolution ; le traitement prescrit peut-être plus
spécifique, plus simple, et finalement plus économique. Le niveau technique du
laboratoire conditionne donc en partie l'efficacité de la médecine curative.

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> Le second point de vue concerne l'ensemble des activités d'un laboratoire en tant
que maillon essentiel de la connaissance épidémiologique du milieu. Le rapport du
laboratoire doit devenir, par sa précision, le point de départ d'une appréciation de
l'environnement pathologique. Cette appréciation permet à la fois une meilleure
orientation de la médecine curative et préventive. Les soins sont plus efficaces, et des
activités de prévention peuvent être mieux orientées grâce au laboratoire. L'évaluation
d'un programme de santé publique repose parfois en grande partie sur les données
fournies par le laboratoire comme c'est le cas dans de nombreuses parasitoses et
maladies infectieuses.

> Enfin, en troisième lieu, le laboratoire peut fournir à l'éducation sanitaire de

précieux outils de démonstration. La participation de personnes sensibilisées à un
exercice pratique démonstratif favorise certainement la persuasion et les modifications
de comportement favorables à la santé. Il suffit de songer à l'effet que provoque le fait
de montrer des larves d'anguillules mobiles sous l'objectif du microscope, pour se
convaincre soi- même que le laboratoire peut participer à la motivation recherchée par
l'éducation sanitaire.
Par ces trois aspects complémentaires, les activités du laboratoire s'inscrivent bien dans
la perspective d'une authentique promotion de la santé. La conjonction d'activités
curatives, préventives et éducatives est en effet la meilleure méthode pour favoriser le
progrès de la santé de chaque citoyen.

La mise en place d’un laboratoire, la répartition de locaux et des taches, l’équipement, les
conditions même du travail varient suivant la destination du service auquel il est attaché. Un
laboratoire peut être à destination :
 Médicale
 Industrielle (laboratoire de microbiologie appliquée orienté vers le contrôle et recherche
dans le domaine de l’industrie alimentaire)
 Recherche fondamentale
Quel que soit la destination de laboratoire, certaines règles générales doivent être respectées
quand son installation. Elles concernent la surface prévue qui doit tenir compte de :

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 La place occupée par les appareils

 La nature du travail envisagé et en conséquence de personnes
 Les services administratifs et des pièces de servitude
Les services administratifs comprennent : la direction technique, le secrétariat, la salle d’archive
et de réunion.
Les services de servitude comprennent : la salle de préparation, salle de stérilisation, les réserves,
salle d’animalerie, salle de balance et autre appareil de précision, chambre noire, salle d’étude et
d’incubateur….
La réparation des locaux
Le laboratoire proprement dit qui occupe une position centrale doit être :
 Facilement accessible
 A proximité immédiate de pièces de servitude
Tables de travail ou Paillasses : Elles sont caractérisées par :
 Leur dimension
 La nature de leur revêtement
 Leur installation et leur équipement
Dimension des paillasses
Les paillasses doivent être suffisamment vastes pour permettre l’installation du matériel et
l’arrangement de produits à examiner sans gêner les manipulations. Les dimensions prévues sont
les suivantes : 75 cm profondeur, 130 cm de largeur et la hauteur de 75-80 cm.

L’ensemble de dimensions doit permettre le travail en position assise. Si plusieurs rangés

des paillasses sont prévues, la distance les séparant sera de 160 cm.
Orientation des paillasses
L’orientation de paillasses face à la lumière du jour est conseillée sauf pour les tables de
microscope. Il faut éviter l’installation des tables de manipulation sur les axes porte-fenêtre.
Dans les laboratoires modernes les portes de travails sont placées dans des box ou des cabines à
usage individuel.
Equipement
Les paillasses doivent être pourvus au minimum :
 D’une arrivée de gaz par poste de travail
 D’une alimentation et évacuation d’eau

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 De plusieurs prises de courant électrique

 De Bec Bunsen ou lampe à alcool, un bain marie
 Du matériel nécessaire aux manipulations stériles
 Matériel nécessaire pour la coloration
 Des portoires pour tubes à essai
 Des récipients destinés à recueillir les matériels usagés
I.2. Matériels de laboratoire
I.2.1. Principaux appareils
Appareils destinés à la production de la chaleur :
 Le Bec Bunsen, la plaque chauffante,
 Le bain-marie, qui permet de maintenir par immersion dans l’eau ou dans l’huile des
substances à une température déterminée uniforme et stable pour répondre aux
exigences de nombreuses manipulations. Pour des températures < à 100°C, le bain-
marie à l’eau alors que pour celle > à 100°C, on utilise le bain-marie à l’huile ou
paraffine
 Les étuves : ce sont des chambres calorifugées en bois, en métal à double paroi
remplies de matières isolants et d’eau. De nombreux types existent : four pasteur ou
stérilisateur à l’aire chaud, le poupinel, étuve bactériologique
 Les autoclaves
Appareils producteurs de froid
1. Réfrigérateurs
Des nombreux réactifs biologiques, biochimiques, la plupart de milieux de culture,
certaines cultures bactériennes doivent être conservées à basse températures ce qui justifie
l’utilisation des appareils producteurs de froid.
2. Congélateurs
Les congélateurs sont utilisés dans la conservation des réactifs, des sérums, des souches
virales qui nécessitent de très basses températures (-12 à -25°C).
3. Glacières portatives
Les glacières sont utilisées pour le transport des échantillons prélevé sur terrain comme
les échantillons pour l’analyse bactériologique de l’eau, contrôle des produits alimentaires.
4. Lyophilisation

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Appareil servant à la conservation des produits sans altération de leur qualité pendant un
temps supérieur à celui que permettent les autres précédés.

Appareils producteurs de vide

Certaines techniques utilisées au laboratoire s’effectuent sous pression réduite : filtration,
lyophilisation, remplissage d’ampoules, nettoyage de pipettes …
Agitateurs
L’agitation favorise et accélère certaine réaction ; elle permet une meilleure oxygénation
des bactéries aérobies en culture liquide. D’une façon générale, l’agitation peut permettre ; au
cours des préparations, le mélange de deux produits solides, la dissolution ou la dispersion d’une
substance dans un liquide. Agitateur en rouleau, agitateur vortex….
Broyeurs
Facilite par exemple, l’étude bactériologique des produits solides comme les denrées
alimentaires.
Centrifugeurs
La centrifugation permet : soit pour débarrasser un liquide des éléments qu’il contient en
suspension soit pour concentrer dans le culot des éléments intéressant comme les bactéries, les
parasites ou les éléments minéraux, soit pour permettre la mise en évidence rapide et nette du
résultat d’une certaine technique.
Balances
La préparation des réactifs, des milieux de culture, des colorants exige la prise des
quantités précises d’où l’intérêt d’une balance de précision dans un laboratoire.
Spectrophotomètre
Un spectrophotomètre est un appareil qui permet de mesurer l'absorbance d'une solution
homogène à une longueur d'onde donnée.
Microscope
I.2.2. Verrerie
Boite de Pétri, tube à essai, tube à hémolyse, erlenmeyers, bécher, verre à pieds, pipettes,
ballon à fond plat, ballon à fond rond, fiole jaugée, éprouvette, entonnoirs
I.2.3. Les différents matériels
1. Cellules hématimètres : Nageote, Neubauer, Malassez, etc…

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2. Compteur à une touche, à 2 touches, à 6 touches

3. Support de western green
4. Minuterie ou chronomètre
5. Anse de platine
6. Appareil de sahli
7. Etc …….
I.3. DIFFERENT SERVICES DE LABORATOIRE
Le laboratoire biomédical se divise en différents services à savoir :
a) Le service de prélèvement
C’est un service qui assure le recueil des échantillons au laboratoire. On entend par
« échantillon », toute substance biologique destinée à être analysée (ex : sang, urines, selles, pus,
sperme,...).
Dans ce service les matériels suivants peuvent être trouvés :
 Seringue (10 ml, 5 ml, 2 ml)
 Les aiguilles
 Garrot
 Vaccinostyle ou lancettes
 Ouate
 Flacons propres et flacons stériles
 Bassin réniforme
 Bistouri
 Pince spéciale pour la biopsie
 Abaisse langue
 Lit
 Chaise et table
 Speculum
 Désinfectant
 Etc.
b) Le service de parasitologie
Les analyses dans ce service permettent de détecter les parasites dans le sang, les selles, les
urines, les secrétions, ….

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Les matériels suivants y sont nécessaires :

 Le microscope
 Les lames porte-objets
 Les lamelles couvre-objets
 La centrifugeuse
 Les baguettes
 Râtelier à lames
 Tubes coniques
 Etc.
Les examens suivants peuvent y être effectués :
 Selles directes
 Selles enrichies
 Goutte épaisse (G.E)
 Goutte fraiche (G.F)
 Sédiment urinaire (culot urinaire)
 Analyse des sécrétions à frais
 Etc.
c) Le service d’hématologie
C’est un service chargé d’analyse les éléments figurés du sang.
On y trouve les matériels suivants :
 Microscope
 Appareil de Westergreen
 Appareil de Sahli
 Appareil de Lovibond
 Les cellules hématimètres :
o Cellule de Thomas
o Cellule Malassez
o Cellule Neubauer
o Cellule de Fushs-Roserthal
 Les compteurs :
o De globules blancs

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o Pour la fourmule leucocytaire

 Lames porte-objets et lamelle
 Tube de Westergreen
 Appareil de l’hématocrite
 Plaques d’opale pour le groupage sanguin
 Microscope
 Etc.
On y effectue les analyses suivantes :
 Dosage de l’hémoglobine (Hb)
 Formule leucocytaire (F.L)
 Test d’Emmel (T.E)
 Numération de globule banc (N.G.B)
 Numération de globule rouge (N.G.R)
 Groupage sanguin (G.S)
 Test de compatibilité
 Vitesse de sédimentation (V.S)
 Hématocrite (Htc)
 Myélogramme
 Volume globulaire moyen (V.G.M)
 Teneur corpusculaire moyen en hémoglobine (TCMH)
 Etc.
d) Le service de biochimie
C’est un service chargé des analyses biochimiques pour le diagnostic de certaines maladies
métaboliques.
Les matériels suivants peuvent y être trouvés :
 Tubes standards pour dosage de protéines
 Portoirs
 Pince porte-lame (en bois)
 Bec bunsen
 Uréomètre
 Spatules

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 Spectrophotomètre
 Balance de précision
 Réchaud
 PH mètre
 Etc.
On y effectue les analyses suivantes :
 Dosage de protéine :
o Dans les urines (protéinurie)
o Dans le L.C.R (albuminorachie)
 Dosage de sucre :
o Dans le sang (glycémie)
o Dans les urines (glucosurie)
 Dosage des certains minéraux (Zinc, potassium, Sodium)
 Dosage de la bilirubine totale
 Acétone
 Calcémie
 Cholestérol
 Transaminase
 Urée
 Etc.
e) Le service de microbiologie
C’est le service spécialisé pour les analyses bactériologiques, la culture microbienne et la
recherche de la sensibilité des microorganismes aux antibiotiques.
Les matériels suivants y sont trouvés :
 Etuve
 Autoclave
 Microscope
 Boite de pétri
 Tube à essai
 Pipette pasteur
 Pissettes

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 Fioles jaugés
 Erlenmeyer
 Eprouvette
 Entonnoir
 Ecouvillon
 Lampe à alcool
 Conteneur
 Four pasteur (poupinel)
 Minuterie
 Bain-marie
 Etc.
Les analyses suivantes y sont effectuées :
 Coloration simple au bleu de methylene
 Coloration de Gram
 Culture microbienne et antibiogramme
 Coloration de Ziehl-Neelsen
 Etc.
f) Le service d’immuno-sérologie
Ce service s’intéresse aux analyses ou interviennent les réactions antigènes-anticorps.
Les matériels suivants y sont trouvés :
 Lames spéciales
 Agitateur
 Différents Kits de réactifs
 Un réfrigérateur
 Minuterie
 Etc.
Parmi les examens effectués dans ce service on peut citer :
 Test de widal-Felix
 V.D.R.L
 T.P.H.A
 Test d’hépatites (B, C)

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 Test de VIH/SIDA
 Etc.
g) Le service d’archivage
C’est un service spécialisé dans la documentation. On y trouve les différents registres tels que :
 Registre de résultats (en général)
 Registre d’inventaire
 Registre des résultats pour des analyses spécialisées (ex : immuno sérologie, transfusion
sanguine, HIV, …)

On peut aussi y trouver les documents tels que :

 Les contrats
 Les P.V de remise-reprise
 Les ouvrages
 Etc.
I.4. TECHNIQUES DE COLORATION
1.4.1. Coloration de Gram
La coloration de Gram est basée sur la différence de perméabilité des bactéries à l’alcool,
donc sur leur capacité à retenir dans leur cytoplasme et leur paroi un colorant primaire. Cette
différence de perméabilité est liée à une différence de structure pariétale des deux grands groupes
Gram + et Gram – et se trouve coloré avec de nombreux autres caractères.
Réactifs :
- Cristal violet : colorant primaire
- Lugol : Précipitation du cristal violet
- L’alcool : décolorant
- Safranine (ou fuchsine) colorant secondaire

Diverses techniques sont utilisées, mais toutes respectent la chronologie suivante :

 Recouvrir la lame de solution de cristal violet pendant une minute
 Laver abondamment pour éliminer toute la solution, l’eau qui s’écoule doit être claire
 Recouvrir la lame avec la solution de liquide lugol pendant une minute
 Laver abondamment à l’eau

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 Décolorer avec l’alcool pendant une minute

 Colore avec la solution de safranine pendant 30 secondes
 Laver à l’eau et puis laisser sécher
 Examiner à l’objectif 100x
1.4.2. Coloration Ziehl Neelsen à chaud
Matériels : Gants, masque haute filtration, eau distillée ou filtrée, fuchsine basique phéniquée,
alcool acide à 3% (éthanol plus acide chlorhydrique), bleu de méthylène.
TECHNIQUE
- Recouvrir complètement la lame de fuchsine, démarrer le chronomètre pendant 10
minutes
- Chauffer doucement la lame. Dès l’apparition des premières vapeurs, compter à la 1 ere,
3eme et 6eme minutes en maintenant l’émission de vapeur sans faire bouillir ni assécher la
lame.
- Rincer délicatement la lame à l’eau robinet (distillée ou filtrée) jusqu’à ce que le liquide
de rinçage soit incolore, égoutter.
- Recouvrir la lame avec une solution alcool – acide à 3 % jusqu’à ce que la lame soit
complètement décolorée
- Rincer la lame à l’eau robinet (distillée ou filtrée), égoutter
- Recouvrir la lame de bleu de méthylène et laisser agir 1 minute
- Rincer délicatement la lame à l’eau robinet
- Laisser sécher à l’air.
- Examiner à l’objectif 100X
1.4.3. Coloration au Bleu de méthylène
 Apres réalisation d’un frottis, recouvrir la lame de bleu de méthylène ;
 Laisser agir 1 minutes ;
 Laver à l’eau ; sécher et observer à l’immersion ;
 Toutes les cellules apparaissent bleues.
Technique de coloration simple permettant d’étudier la morphologie cellulaire.
1.4.4. Coloration de Giemsa
Méthode Rapide

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Solution de travail : Giemsa à 10%, (1 ml de solution mère dans 9 ml d’eau tamponnée ou

autres volumes équivalents)
Colorer pendant 10 à 15 minutes.
Méthode Lente
Solution de travail : Giemsa à 3 %, (3 ml de solution mère dans 97 ml d’eau tamponnée
ou autres volumes équivalents)
Colorer pendant 30 à 45 minutes
1.4.5. Coloration de May Grunwald – Giemsa
 La préparation est immergée 3 min dans la solution de May Grunwald ;
 Transférer 3 minutes dans l’eau neutre
 Colorer 15 minutes dans la solution de Giemsa à 10 % ;
 Les bactéries sont colorées en bleu ; les cellules eucaryotes ont leur noyau coloré en bleu,
leur cytoplasme en rose
I.5. L’EAU AU LABORATOIRE
On a grandement besoin de l'eau au laboratoire. On dispose souvent de trois sources d’eau
:
L'eau ordinaire : c'est l’eau de la distribution pour le nettoyage de matériel pour la stérilisation
par la chaleur humide, pour la décontamination dans le bain Marie, pour l’hygiène personnelle du
personnel de laboratoire.

L'eau distillée : préparation des réactifs, préparation des milieux des cultures
L'eau tamponnée et l’eau déminéralisée, servant à la préparation des réactifs, des milieux de
culture des colorants.
Contrôle de qualité de l’eau distillée
On utilise une solution aqueuse de nitrate d’argent (AGNO3) à 1,7% (1,7 g dans 100 ml).
Mewttre dans un bécher 10ml d'eau distillée puis 2 gouttes d’acide nitrique, 1 ml de solution
d'AgNO3 à 1,7 % l’eau doit rester parfaitement claire. Mais si elle montre une légère turbidité
blanchâtre, elle n’est pas de bonne qualité et par conséquent ne doit pas être utilisée pour
préparation des réactifs et des colorants. Le pH de l’eau distillée est généralement acide et varie
entre 5 et 5,5
L'eau tamponnée

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L’eau distillée est généralement acide et l’eau déminéralisée le devient au contact avec de
l'air. Pour de nombreuses utilisation au laboratoire, il est nécessaire de donner à l'eau distillée un
pH neutre aux environs de 7 (une telle eau est appelée eau neutralisée) et d'y ajouter et y
maintenir si possible en dissolvant des substances tampon (l’eau tamponnée).
Comment préparer l’eau tamponnée ?
Matériel : éprouvette de 10n à 100ml (cylindre gradué), ballon jaugé de 1l, Comparateur ou de
papier indicateur de pH, gamme étroite de pH, bleu de bromothymol, hydrogenophospate de
sodium 2H2O (Na2HPO4 et KH2PO4).
Méthode :
- Peser très exactement 3,76 g de Na2HPO4 .2H2O
- Vesser dans un ballon jaugé de 1 litre
- Peser ensuite très exactement 2,1 g de dihydrogenophospate de potassium (KH2PO4)
- Ajouter de l’eau jusqu’à la marque 1 L : conserver la solution dans flacon à réactif de
verre blanc au réfrigérateur. Apres contrôle du pH, à l’aide du papier indicateur, le pH
doit être de 7,0 à 7,2 placer dans un tube à essai, boucher au coton et stériliser à
l’autoclave
CHAPITRE II : SECURITE AU LABORATOIRE
2.1. Les accidents de laboratoire

Beaucoup de gens ont souffert des maladies dues aux accidents de laboratoire, certaines
de ces infections ont été fatales. Le travail dans un laboratoire biomédical doit s'effectuer dans
des conditions aseptiques. On doit éviter de contaminer le matériel sur lequel on travail et de se
contaminer soi-même. L'asepsie est donc la règle d’or au laboratoire biomédical.
Tous les échantillons dans les laboratoires doivent être considérés comme potentiellement
pathogènes. C'est ainsi qu'il faudra porter les uniformes, les gants, la blouses et les chaussures.
Cette précaution de protection non seulement pour les échantillons envoyés pour analyse
bactériologique, mais aussi des échantillons LCR, de sang, des urines, envoyés pour les autres
analyses.
Les principaux accidents associés au travail de laboratoire sont : les infections, les blessures, les
brûlures, les effets nuisibles de produits chimiques toxiques, les explosions causant les blessures
et les chocs électriques.

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LES INFECTIONS : elles peuvent être causées par des microorganismes entrant dans le corps
par la peau, les yeux, la bouche, les voies respiratoires

La peau et les yeux ; Les germes pathogènes entrent par la peau à travers les blessures, les
écorchures, les morsures d’insectes et d'autres lésions, les microorganismes sont prélevés par les
mains à partir de la palliasse et des équipements qui ont été accidentellement contaminé par les
pipettes mais souvent non remarquable, de gouttelettes ou de liquide renversé et peuvent être
transférer aux yeux par les doigts.
La bouche : les microorganismes peuvent être ingérés soit pendant le pipetage à la bouche, soit
par le bout de pipette qui a été touché par les doigts contaminés, Ces infestions peuvent arriver
aussi par contact direct de la bouche, par les doigts contaminés ou par la nourriture gardée et
consommée au laboratoire
Les voies respiratoires : beaucoup de procédés de laboratoire libèrent l'aérosol dans
l’atmosphère. Ce dernier peut être inhalé et causés des maladies graves.
LES BRULURES
Elles peuvent être causées par
 Les substances chimiques inflammables, les colorants et certains réactifs qui entre en
contact avec la lumière
 La flamme de la lampe à alcool ou flamme de Bac Bunsen ou à partir d’un équipement
électrique mal installé ou encore d’un circuit électrique surchargé.
 Les substances chimiques corrosives qui entrent en contact avec la peau ou ingérés lors du
pipetage par la bouche
LES BLESSURES
Elles peuvent être causées par :
 Les cassures
 L’utilisation de matériel en verre déjà cassé ou en marchant sur les débris de verres

LES EFFETS NUISIBLES DES PRODUITS CHIMIQUES TOXIQUES

Ils peuvent être causés :

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 L’inhalation de la fumée à partir de produits chimiques toxiques (acide fort : acide

nitrique)
 L’ingestion des produits chimiques toxiques lors du pipetage par la bouche
 Contact de la peau avec les produits chimiques
LES CHOCS ELECTRIQUES
Ils peuvent être causés par :
 Circuit électrique incorrect
 Une installation incorrecte d’équipement sans isolant
 Le toucher du courant électrique sans isolant
LES EXPLOSIONS
Elles peuvent être causées par :
 Les substances chimiques explosives incompatibles
 Echappement de gaz explosifs
Les facteurs qui contribuent aux accidents de laboratoire
La plupart des accidents au laboratoire résultent de la mauvaise pratique au laboratoire
notamment :
 Manque d’entrainement ou de maitrise de techniques
 Manque de concentration pendant le travail
 Manque d’utilisation de support
 Siège instable
 Les conditions climatiques chaudes et humides
 Manque de soin et la négligence
 Fatigue de la suite d’un travail épuisant
 La précipitation
 Le travail à des heures tardives
2.2. Comment prévenir les accidents de laboratoire ?
Les accidents de laboratoire peuvent être évités par :
 La pratique de l’hygiène personnelle et la réduction de contact avec les matériels infectés
 La manipulation des tous les échantillons et matériel avec beaucoup de soins.
 Le pipetage par la bouche strictement interdite
 Le bon emplacement des échantillons et de matériel contaminé

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 Par la vaccination contre les pathogènes infectieux les plus fréquents du milieu.
a) Hygiène personnelle
L'hygiène personnelle peut être entretenue par (en) :
- Lavage des mains et des bras avec du savon avant et après le travail.
- Le port de blouse et d’autres uniformes exigés
 Evitant de manger, boire, fumer ou d'appliquer des produits cosmétiques.
 Évitant de mettre le stylo, crayon. Ou tout autre article dans la bouche, près des yeux ou
dans les cheveux.
 Port des gants obligatoire pour la manipulation des échantillons
 Couvrant toutes blessure ou morsure d'insectes.
 Contrôle médical régulier.
b) Manipulation des échantillons avec soin
Des précautions spéciales doivent être prises lors de la manipulation des échantillons, plus
particulièrement les échantillons de sang et la manipulation des matériels contaminés. Le manque
de soin dans la manipulation des échantillons, de culture ou tout autre matériel infecté peut
conduire à la contamination des doigts, de la paillasse et à la formation d’aérosol.
Tous les échantillons, toutes les cultures et les autres matériels qui ont été examinés dans le
laboratoire doivent être décontaminés avant d’être jetés.
Code de bonne conduite au laboratoire
Extrait du Code de déontologie de l’Association Internationales des technologies de
laboratoire médical
 Dédier les acquis de la science (de laboratoire clinique) au profit de l’humanité
 Placer le bien – être et le service de patients avant vos propres intérêts.
 Etre responsable de la qualité et de l’intégrité des services de laboratoire clinique
 Ne pas abuser de vos compétences professionnelles ou les connaissances pour le profit
personnel et ne pas déplacer quelque chose ne vous appartenant pas
 Etre à tout moment courtois, patient et attentif aux patients et à leurs proches.
Sauvegarder l’intimité et la dignité des patients
 Ne pas divulguer à toute personne non autorisée, les résultats de vos investigations et
traiter avec la stricte confidentialité des informations concernant un patient.

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 Respecter et travailler en harmonie avec les autres membres de votre équipe ainsi que tous
les professionnels de santé
 Promouvoir les soins de santé et la prévention et la lutte contre les maladies
 Suivre les instructions de travail et s’assurer que les patients et autres ne sont pas mis en
danger
 Savoir quoi faire si un accident ou un incendie se produit et comment appliquer les
premiers soins d’urgence
 Ne pas consommer de l’alcool ou prendre des médicaments sans prescription qui pourrait
nuire à votre rendement durant le travail ou en cas d’urgence
 Utiliser le matériel, réactifs et équipements de laboratoire correctement et ne gaspillez pas
les réactifs ou autres fournitures de laboratoires
 S’efforcer d’améliorer les acquis, connaissances professionnelles et adopter des avancées
scientifiques qui profitent aux patients
 Remplir complètement et de façon faible les exigences de votre employeur.

En général :

 Le pipetage à la bouche est prohibé ;

 Eviter de manger, boire, de fumer, de garder la nourriture et d’appliquer les produits
cosmétiques au laboratoire ;
 Le laboratoire doit être gardé net, propre et libéré des matériels inutiles au travail ;
 Les paillasses doivent être décontaminés une fois par jour ou moins et après tout
renversement du matériel ;
 Les doivent être lavées après manipulation des matériels infectés, des animaux du
laboratoire et avant de quitter le laboratoire ;
 Toute procédure (manipulation) doit être conduite soigneusement pour éviter la formation
d’aérosol ;
 Tout liquide contaminé ou déchet solide doit être décontaminé avant d’être jeté ou
manipulé de nouveau ;
 Le port d’une blouse, des gants et d’autres uniformes doit être obligatoire ;

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 Les verres de sécurité doivent être portés pour protéger les yeux pendant la manipulation
de certaines substances ;
 Les portes du laboratoire doivent être fermées pendant le travail et l’accès au laboratoire
doit être contrôlé par le Chef du laboratoire surtout lorsque les expériences sont en cours ;
 L’utilisation des aiguilles et des seringues soit se faire avec beaucoup de soins ;
 Tout renversement, tout explosion dangereuse ou encore tout accident doit être signalé
immédiatement au chef du laboratoire ;
 Ne pas utiliser la verrerie cassée ou brisée pout éviter tout accident ; l’usage de tout
matériel doit se faire conformément aux normes ;
 S’assurer que tout le personnel de labo est vacciné contre les principales maladies
infectieuses, toute personne à immunité compromise ne peut pas travailler dans un service
pour manipuler les agents infectieux.
CHAPITRE III. LE MICROSCOPE
3.1. La microscopie : c’est l’étude du microscope et de son usage.
3.2. Le microscope : c’est un instrument d’optique, qui grâce à des lentilles grossissement
permet de voir les objets invisibles à l’œil nu.
C’est un instrument d’optique, qui grâce à des lentilles grossissantes permet de voir les objets
invisibles à l’œil nu.

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HISTORIQUE
Il existe deux grandes sortes de microscopes :
 Le microscope optique comporte plusieurs lentilles (petits disques de verre),
ainsi que des dispositifs de mise au point et de choix du grossissement. On
place l’objet à examiner sur une lame de verre, que l’on dispose sous
l’objectif de l’appareil. Cette préparation est éclairée par l’intermédiaire d’un
miroir orientable (ou d’une lampe). Les lentilles situées dans le corps de
l’appareil donnent une image fortement agrandie de l’objet.
 Le microscope électronique ou la lumière est remplacée par un faisceau
d’électrons et les lentilles optiques par des lentilles magnétiques.
Le microscope électronique, qui permet d’observer des objets aussi petits que
des virus, est un outil très important pour la recherche scientifique. Le
microscope optique reste cependant l’outil de référence en matière
d’enseignement, pour les examens de laboratoire, et c’est bien sûr l’outil idéal
de l’amateur.
COMPOSITION DU MICROSCOPE
Les différentes parties de microscope sont regroupées en 4 systèmes :
 Système de support

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 Système de grossissement
 Système d’éclairage
 Système de réglages
A) Système de support : Il comprend
 Le pied
 La potence
 Le revolver porte objectif
 La platine
 Le chariot,
B) Système de grossissement
Il constitue par de combinaison de lentille. Dernières sont fixes en 2 assemblages
placés chacun à l’extrémité d’un long tube
 Le premier assemblage de lentille, situé en bas du tube, juste au-dessus de la préparation à
examiner est l’objectif.
 Le deuxième assemblage de lentilles est en bas du tube ; on y place l’œil, c'est l'oculaire.

A. Les objectifs
 Le grossissement est indiqué, pour chaque objectif par un chiffre gravé sur la monture.
- L'objectif l0 x grossit l0 fois
- L'objectif 40 x grossit 40 fois
- L'objectif 100 x grossit 100 fois
 Le numéro d'ouverture numérique : c'est un autre chiffre gravé à côté du
grossissement. Par exemple :
- 0,30 pour un objectif l0x
- 0,65 pour un objectif 40x
- 1,30 pour un objectif I00x
 Distance frontal d’un objectif : c'est la distance entre la lame et la lamelle frontale de
l’objectif lorsque l’image est nette. Plus le pouvoir de grossissement augmente plus la
distance frontale diminue.
L'objectif 10 x : distance frontale 5 à 6 mm
L’objectif 40x : distance frontale 0,5 à 1,5 mm

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L’’objectif 1.00x : distance frontale 0,15 à 0,20 mm

 Pouvoir séparateur : c'est le pouvoir qui permet devoir séparément et distinctement deux
points très rapprochés. Plus le pouvoir séparateur de l'objectif est grand, plus l’image est
nette.
Le pouvoir séparateur d'un bon microscope de laboratoire médical est d'environ 0,25 Um,
alors que le pouvoir séparateur de l’œil humain normal est de 0,25.mm.
B. L'oculaire
Le grossissement est indiqué sur l’oculaire.
- Un oculaire 4 x grossissent 4 fois l’image produite par l’objectif
- Un oculaire 6x grossissent 6 fois l’image produite par l’objectif
- Un oculaire 10x grossissent 10 fois l’image produite par l’objectif
Pour connaitre le grossissement de l’objet observe, il suffit donc de multiplier les
valeurs de grossissement de l’objectif et de l’oculaire.
Par exemple : si l’objectif est grossit 40 fois par l’objectif' 40x et 10 fois par l’oculaire 10 x, le
grossissement total sera de 40 x 10 = 400 fois.
Selon le nombre d'oculaire rencontré dans un microscope, on distingue le microscope
monoculaire et binoculaire
C) Système d'éclairage
1. La source lumineuse
De préférence la lumière électrique qui permet un réglage plus facile. Elle est
fournie une lampe incorporée à l’intérieur du microscope ; au-dessous de la platine ou par une
lampe extérieure placée devant le microscope. Si non ; la lumière du jour. Le microscope ne doit
pas être utilisé ni placé directement à la lumière du jour. Il doit être bien éclairé mais employé
sous une source de lumière tamisée. Si le soleil est vif, on peut le placer derrière une bouteille ou
un ballon rempli d'eau qui atténuera l'éclairage.
2. Le miroir
Il sert à renvoyer la lumière sur la préparation à examiner. Il y a une face plane et une face
concave.
3, Le condensateur
Il sert à concentrer les rayons lumière et à la diriger sur la préparation à examiner. On
peut le monter ou l’abaisser, il doit être centré et réglé correctement.

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4. Le diaphragme
Il est placé dans le condenseur ; il sert à diminuer ou à augmenter l’angle et par
conséquent à modifier la qualité de lumière qui passe dans le condenseur.
5. les filtres
Ce sont des verres circulaires colorés rencontrés au – dessous du condenseur. Ils peuvent
être laissés ou retirés selon le type de préparation examinée.
D) Système de réglage
Il comprend :
1) La vis de mise au point rapide
C'est la vis la plus grande. On l’utilise pour obtenir un réglage approximatif.
2) La vis de mise au point fine
Avec un mouvement beaucoup plus lent, elle de permet parfaire la netteté.
3) La vis de montée-descente da condenseur
Elle permet de monter le condenseur pour augmenter l’intensité de l'éclairage ou de
l’abaisser pour la diminuer.
4) La vis du centrage du diaphragme
Habituellement au nombre de trois : une de front, une autre à gauche, une autre à droite ;
elles servent à centrer exactement le condenseur par rapport à l’objectif.

5) La barrette du diaphragme
C'est une petite tige fixée sur le condenseur ; on le tire pour fermer ou ouvrir le
diaphragme et augmenter ou diminuer ainsi à la fois l’angle et l’intensité de l’éclairage.
6) Les vis du chariot
Elles servent à déplacer la lame porte objet sur la platine :
 Une vis pour la déplacer d'avant en arrière
 Une vis pour à déplacer de gauche à droite
3.2. INSTALATION D'UN MICROSCOPE
 S'assurer que l’emplacement ou sera installé le microscope est protégé de la poussière et
de l’humidité.
 Vérifier que le local est sur et possède une porte fermée à clé pour prévenir tout
enlèvement non autorisé du microscope.

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 Vérifier que l’emplacement du microscope se trouve loin des points d'eau ou des secteurs
où l’on manipule de produits chimiques, de façon à éviter toutes projections ou
éclaboussures,
 Il faut également éviter les endroits exposés à la lumière solaire directe.
 Vérifier que l’emplacement choisi a une prise de courant compatible avec le système
d'éclairage du microscope.
 Elle doit être en bonne état et alimentée en courant de voltage, d'intensité et de fréquence
conformes aux normes en vigueur.
 Installer le microscope sur une surface horizontale, qui doit reposer sur une structure
rigide laissant suffisamment de place pour les jambes de l’opérateur.
 Pour favoriser une bonne position de travail, prévoir une chaise de hauteur réglable avec
un bon soutien dorsal. Le cas échéant, prévoir un repose-pied devant le poste de travail.
 Eviter de placer le microscope à proximité d'appareils produisant des vibrations comme
des centrifugeuses ou des réfrigérateurs.
 Essayer de ne pas déplacer le microscope, surtout, s’il est utilisé quotidiennement de
façon intensive.
 Couvrir le microscope avec une housse de protection contre la poussière si on ne l’utilise
pas pendant longtemps, en veillant à ce qu'il ne soit pas exposé une humidité.
3.3. Mise au Point des images
Les manouvres se font dans l’ordre suivant et sans regarder à travers l’oculaire.
 On Place la lame sur la platine en ayant soin d'amener au regarder à travers d’oculaire
 On incline le miroir à peu près vers la source lumineuse
 Fixer l’objectif à utiliser en face de la lame tout en regardant de côté.
 Ouvre tout grand le diaphragme
 Placer le condenseur soit au contact de la lame' soit à mi-chemin ou soit en bas selon
l'objectif utilisé.
 Manipuler la platine par réglage de vis micrométrique.
 Regarder à travers l‘oculaire, faire remonter doucement la platine ; on s'arrête lorsque la
préparation commence à apparaitre

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3.3.1. Mise au Point Précise

Tout en continuant à regarder à travers l'oculaire, on saisit le bouton de la vis
micrométrique et, par des petits mouvements de va et vient revient la mise au point. L'on ne
s'arrête que quand l’image est très nette.
3.3.2. Place du condenseur
- Objectif à faible grossissement, abaisser le condenseur à fond.
- Objectif à grossissement moyen, placer le condenseur à mi -course
- Objectif à fort grossissement, remontrer le condenseur à fond.
Placer une goutte d'huile à immersion sur la partie à examiner de la lame colorée. Cette huile à
immersion sert à centrer la lumière vers la préparation.
3.3.3. Les images vues au microscope
 Le Champ microscopique est le disque de la lumière à travers l’oculaire après la mise au
point ;
 Comment situer les objets On peut situer les champs par rapport à un cadran de montre.
Par exemple œufs d’ascaris est à 3 heures.
 Inversion des images
 Les objets vus en bas du champ sont en fait en haut.
 Les objets vus à droite du champ sont en fait à gauche.
Il en est de même si on déplace la lame vers l’avant, l’objet examiné va vers
l'arrière. Si on déplace la lame vers la droite, l’objet examiné va vers la gauche.
 Changement d'objectifs
Remonter le tube porte -objectif avant de passer à un objectif plus puissant, puis remettre
au point. Pour garder un objet dans le champ lorsqu'on change d'objectif, il faut le placer
bien au centre du champ microscopique.

3.4. Entretien du microscope

Cet entretien doit être quotidien, car c'est de lui que dépend le maintien en bon état du
microscope et donc la qualité des examens de Laboratoire.
3.4.1. Matériel nécessaire
 Papiers à lentilles ou papiers absorbants blancs,
 Peau de chamois,

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 Xylène,
 Housse en plastique,
 Armoire chauffante avec 1 ou 2 ampoules de 40 watts
 Dessiccateur de 15 à 20 cm de diamètre contenant au moins
2505 gel de silice bleu.
 Nettoyer quotidiennement pour qu'on débarrasse de la poussière.
 A la fin de chaque journée de travail, le nettoyer complètement au jet d'air avec la poire
au caoutchouc.
Nettoyage des objectifs
 Objectif sec : souffler sur la lentille et l’essuyer avec un linge doux, d'un mouvement
transversal, et non circulaire.
 Objectif à immersion : essuyer l’huile avec du papier à lentille (ou absorbant)
Nettoyage des oculaires
 Nettoyer la face supérieure de la lentille au moyen d'un linge doux ou papier absorbant
 Nettoyer au pinceau fin la face inferieure de la lentille, à l’intérieur du tube
 Le condenseur est nettoyé comme les objectifs, avec un linge fin. Nettoyer des lentilles
avec un pinceau spécial pour lentille,
S'il reste de la poussière à la surface des objectifs, l’enlever avec le papier spécial.
PRECAUTION
 Ne pas utiliser du papier ordinaire pour nettoyer les lentilles car cela pourrait les rayer.
 Pour éviter de laisser des traces de doigts, ne pas toucher les lentilles avec les doigts nus,
 Ne pas nettoyer les lentilles des oculaires ou des objectifs avec du tissu ou du papier car
cela pourrait endommager le revêtement protecteur de ces éléments optiques.
 Nettoyer ces surfaces avec un pinceau en poil de chameau ou en soufflant de l’air avec
une poire en caoutchouc
 Eviter d'appuyer l’objectif contre les lames car cela pourrait endommager la lamelle
couvre-objet ou la lentille frontale de l’objectif.
 Faire la mise au point lentement et soigneusement
 Utiliser les deux mains pour soulever le microscope, l’une tenant le bras du microscope et
l’autre son socle.

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 Eviter de toucher l’ampoule avec les doigts lors de son remplacement. Les traces de
doigts diminuent l’intensité lumineuse.
 Vérifier que la tension d'alimentation est correcte, afin de prolonger la durée de vie de
l’ampoule. Si possible, utiliser la plus faible intensité lumineuse nécessaire pour faire les
observations.
 Raccorder le microscope a un stabilisateur de tension si le voltage n'est pas stable.
 Ne pas faire tremper les objectifs dans le xylène ou alcool
 N'utilise pas du papier ordinaire ou l’ouate pour nettoyer les lentilles.
 Ne jamais laisser le microscope sans les oculaires
CHAPITRE IV : EXAMENS DE SANG
4.1 Prélèvement du sang
4.1.1. Prélèvement capillaire
La technique la plus utilisée et la moins chère pour la prise d'échantillons hématologiques dans
des conditions difficiles est le prélèvement de sang capillaire. Ceci est particulièrement vrai pour
les enfants ou lorsque seule une petite quantité de sang est nécessaire (de l'ordre de 100 μl).
Le 4ième doigt de la main gauche (le majeur ou l’annulaire). De préférence sur le côté du doigt
qui est moins sensible que l’extrémité.
Pour les nourrissons de moins de 6 mois, le talon ou le gros orteil
Précaution
- Ne prélevez jamais du sang à un doigt ou un pied infecté.
- Ne prélevez jamais du sang à un bras où coule une perfusion.
- Le prélèvement capillaire doit être suffisamment profond pour obtenir un écoulement
libre du sang. Si une pression importante doit être exercée pour obtenir un volume de sang
suffisant, une erreur de dilution du sang par du liquide tissulaire sera introduite.
a) Matériels :
- Lancette stérile, morceaux de coton et Lame porte objet
b) Technique
- Si possible, demandez au patient de se laver les mains avec un savon doux et de l’eau
chaude, puis de séchez-les minutieusement.
- Massez légèrement l’endroit à prélever ;

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- Désinfectez l'endroit choisi avec un tampon de coton imbibé de désinfectant et laissez

sécher
- Sortez la lancette de son emballage et piquez d'un coup sec et rapide. Jetez
immédiatement la lancette dans un conteneur à aiguilles.
- Exécutez une pression légère sur le doigt, afin de réaliser un meilleur écoulement de
sang.
- Essuyez la première goutte de sang avec le tampon de coton sec (pour éliminer l'alcool à
70 % qui restait éventuellement. Sauf dans le cadre de la recherche des microfilaires où
la sensibilité de la recherche est plus grande dans la première goutte de sang).
- Prélevez le sang pour le test à effectuer, en pressant de votre main gauche le doigt piqué
pour faire sortir le sang.
- Couvrez l'endroit de la piqûre avec le coton sec et demandez au patient de le maintenir
pendant quelques minutes.
4.1.2. Prélèvement veineux
Les prélèvements s’effectuent au niveau de plis du coude, revers de la main, veines de pieds et
veines et artères fémorales.
a) Matériels
Garrot, paires de gants, tube vacutenair, aiguille et corps transparent, désinfectant, ouates sec,
portoir, marqueur.
b) Techniques
 Demander à votre patient(e) sa main la moins utilisé pour effectuer le prélèvement (en cas
de brûlure, paralysie, perfusion en place… passer à l’autre main)
 Poser un garrot légèrement serré. Observer le réseau veineux au pli du coude.
 Palper délicatement les veines en profondeur à la recherche de la meilleure veine
 Enfiler une paire de gants.
 Passer sur la zone choisie, un tampon imbibé de désinfectant de haut en bas sans repasser
sur la zone déjà traitée.
 Positionner l'aiguille fixée sur la porte tube dans l'axe de la veine avec un angle de 30°
environ.
 Piquer

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 Enfoncer le tube vacutenair positionné dans le porte tube. Retirer le tube, dès l'arrêt du
flux, et en introduire un autre en prenant soin d'immobiliser la porte tube afin que
l'aiguille ne bouge pas au niveau de la veine.
 Positionner au niveau du point de piqûre un coton propre et sec et enlever l'aiguille d'un
coup sec en appuyant immédiatement.
 Etiqueter
4.2. Examen parasitologiques
4.2.1. Goutte épaisse (GE)
Déposer sur une lame porte objet dégraissée, une goutte de sang (2 fois le volume utilisé
pour un frottis).
A l’aide du coin d’une lame, étaler le sang sous forme d’un cercle d’un centimètre de diamètre en
tournant avec des mouvements circulaires. (Essuyer le coin de la lame qui a servi à étaler le
sang !)
Laisser sécher en position horizontale, à l’abri des mouches et des poussières.
Laisser sécher à plat sur un support. Ne jamais fixer à la chaleur ou à l'alcool.
(On peut aussi utiliser du sang prélevé à la veine pour d’autres examens. Si ce sang contient des
anticoagulants, le sang risque de se décoller de la lame durant le lavage : il faut bien sécher la
goutte épaisse avant la coloration !)
Colorer avec la solution de Giemsa à 10 %.
4.2.2. Goutte fraiche(GF)
Déposer sur une lame porte objet dégraissée, une goutte de sang ;
Ajouter une goutte d’eau physiologique et mélanger les 2 solutions ;
Couvrir avec la lamelle et examiner au microscope,
4.3. Examens hématologiques
4.3.1. Vitesse de sédimentation (VS)
Le sang recueilli sur un anticoagulant est placé dans un long tube de western green tenu
en position verticale. Les hématies tombent au fond du tube, laissant surnager une couche de
plasma. La hauteur de cette couche de plasma, après une heure d’attente, traduit la vitesse de
sédimentation des hématies
Matériels : tube de western green, support de western green, pompe pipette, minuterie et solution
de citrate trisodique à 3,8 %

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Méthode
- Mettre dans un tube 0,4 ml de la solution de citrate trisodique à 3,8%
- Ajouter 1,6 ml de sang veineux et mélanger
- Aspirer le sang citrate dans le tube de western green jusqu’à la graduation 0 en utilisant
la pompe pipette ;
- Fixer le tube au support de western green en assurant qu’il est absolument vertical.
Éviter les bulles d’air dans le tube
- Attendre 1 heure (démarrer la minuterie) et noter la hauteur de la couche de plasma en
mm à partir de zéro du haut du tube
4.3.2. Test d’Emmel
1. But :
Le test d’Emmel est un test simple qui permet d’aider au diagnostic de l’anémie falciforme ou
drépanocytaire. La drépanocytose est une anomalie (fréquente en Afrique) de l’hémoglobine.
Lorsque le sang est peu oxygéné, cette hémoglobine devient insoluble, forme les longues chaînes
dans les globules rouges, les globules rouges changent alors de forme et prennent un aspect en
faucille.
2. Principe :
Les globules rouges vont être artificiellement désoxygénés permettant à ceux contenant
l’hémoglobine anormale de changer de forme et de devenir des drépanocytes (cellules en
faucilles).
Ce test ne permet pas de faire la différence entre les homozygotes, qui sont malades et les
hétérozygotes, qui sont ‘’simplement ‘’porteurs.
3. Réalisation du test
IL en existe deux méthodes :
A. Méthode à la paraffine ou cire de bougie (Méthode lente)

 Prendre une goutte de sang et la déposer sur une lame porte-objet

 Couvrir la lame avec la lamelle couvre-objet en prenant soin qu’il n’y a pas de bulle d’air
 Sceller la lamelle sur la lame avec de la paraffine ou de la cire de bougie
 Prendre bien attention à ce que tout soit bien scellé
 Laisser 24 heures et lire la lame le lendemain

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 Plusieurs endroits de la lame doivent être parcourus

 Utiliser l’objectif 40 x pour bien voir les cellules.
B. Méthode au métabisulfite de Sodium (méthode rapide)
 Prendre une goutte de sang et la déposer sur une lame porte-objet
 Déposer une goutte de métabisulfite de sodium à 2 % sur la lame
 Mélanger les 2 et le couvrir d’une lamelle en prenant soin qu’il n’y a pas de bulle d’air
 Placer la lame dans une boite fermée avec un linge humide
 Laisser 15 minutes dans cette boute et examiner la lame porte-objet.
Le test doit être rapporté comme positif dès que des cellules falciformes sont découvertes.
Bien que ce test ne soit pas quantitatif, une indication peut être donnée quant à la proportion de
cellules falciformes.
Préparation de la solution de métabisulfite de sodium à 2% :
N.B : La solution est instable et doit être changée chaque jour.
 Peser 0,2 g de réactif et le transférer dans un flacon de 15 ml ;
 Ajouter 10ml d’eau filtrée ;
 Mélanger jusqu’à ce que le réactif soit complètement dissout dans l’eau.
CHAPITRE V : EXAMENS DES SELLES
5.1. Prélèvement des selles
Le prélèvement des selles se fait au moyen des matériels préparés au laboratoire. En
général, un flacon muni d'un bouchon, ce flacon doit être bien lavée.
Recueillir l'échantillon au centre de la masse fécale et en principe les selles fraichement prélevée
doivent être directement amenées au laboratoire et directement examinées.
Le prélèvement doit être suffisamment important pour permettre une analyse suffisante, il ne doit
être ni souillé, ni mélangé à l'urine car celui-ci les germes végétatifs. Un certain nombre de
recommandations sont à respecter pour obtenir un prélèvement de qualité :
- Les selles doivent être émises dans leur totalité, dans un récipient en plastique transparent
propre et sec ;
- Éviter les aliments à résidu : légumes secs, légumes verts, fruits ;
- Éviter les laxatifs ou les absorbants intestinaux (charbon) qui surnagent les préparations
microscopiques ;

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- Conserver les prélèvements à la température de laboratoire elles doivent y parvenir le plus

rapidement possible : une heure au maximum ;
- Dans le cas d'un examen différé de quelques jours. Une partie du prélèvement sera fixée
dès l'émission selon deux méthodes :
 Méthode de SAPARO LAWLESS et STRUME (MIF)
Dans un tube à hémolyse mélanger 0,15m1 (ou 3 gouttes) de Lugol à 5% 2,35ml de solution
de MIF (Merthilate iode formol) puis déposer aussitôt une quantité de selles et homogénéiser
l'ensemble avec l’agitateur. Cette première méthode permet de conserver des formes végétatives
des protozoaires ;
 Eau formolée
A 5 % pour les selles fermes
A 10% pour les selles pâteuses
A 15 % pour les selles liquides
Cette deuxième méthode permet la lyse des formes végétatives des protozoaires
5.3. Examen macroscopique des selles
- L’aspect des selles (selles dures, moulées, molles, pâteuses ou liquides)
- La couleur (noir, jaune, verte, brune)
- La présence des sangs ou des glaires
- La présence d’éléments nutritionnels
- La présence des parasites (anneaux des ténias, oxyures, ascaris).
- Leur abondance.

ASPECT DES SELLES DANS CERTAINES PATHOLOGIES

Selles molles, contenant le pus,  Shigellose
 Dysenterie à EIEC (Entero invasif)
mucus mélangé au sang
 Campylobacter enteritis
Selles molles avec sang et mucus (pH acide)  Dysenterie amibienne

Molles ou moulées souvent avec sang  Schistosomiase

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et mucus

Diarrhée sanguinolente (avec GB)  EHEC 0175 (Entero hémorragique)

Diarrhée aqueuse  ETEC(Entero toxinogène)

 EPEC (Entero pathogène)
 Cryptosporidiose
 Rotavirus
Eau de riz avec le flocon de mucus  Choléra

Selles molles ou liquides et parfois avec du sang,  Infection à Salmonella

mucus et pus

Molles, couleur pâle, mousseuses, odeur  Giardia

nauséabonde qui flotte sur l’eau  Autres conditions de malabsorption

Selles fluides (contenant le lactose et pH en  Déficience en lactase

dessous de 6)

Selles noires molles ou moulées (sang occulte )  Melæna (saignement gastro –

intestinal)
 Vers recourbés (maladie)
 VTEC : verotoxine
 Thérapie en fer

NB : On peut aussi rencontrer du sang dans les selles d'un patient souffrant d'hémorroïde, colites
ulcéreuses ou tumeurs des voies intestinales.
Les selles normales apparaissent brunes et dures ou moulées. Les selles des enfants sont jaunes -
vertes et moulées.
5.4. Examen microscopique des selles
Il s'agit d'un examen essentiel qui doit être réalisé le plus rapidement possible après
émission des selles. Cet examen permet de mettre en évidence les œufs, les larves d'helminthes,
les kystes des protozoaires.

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Il permet également de détecter la présence des polynucléaires, d’hématies ou encore d'apprécier

l'état des fonctions digestives, la flore bactérienne et mycosique intestinale.

5.1.2. Examen direct des selles :

a) Matériels
Bâtonnets applicateurs, lames porte objets, lamelles couvre objets, crayons ou marqueur
indélébiles pour marquer les lames, flacons compte-gouttes contenant la solution
physiologique 0.85 % (8 .5 g /l).
b) Mode opératoire :
Inscrire le nom ou le numéro du malade sur le côté gauche de la lame avec un crayon gras
ou marquer. Déposer une goutte de solution physiologique au milieu de la moitié de la
lame :
A l’aide d’un bâtonnet applicateur, prélever une ponction de selles environs 2 gramme
(soit la taille d’une tête d’allumette) et la dépose dans la goutte de soluté physiologique.
Mélanger les selles avec la goutte de façon à obtenir une suspension ;
Couvrir la goutte avec une lamelle ; pour cela tenir la lamelle incliner au contact de la
lame, toucher le bord de la goutte et abaisser doucement la lamelle de façon à éviter la
formation de bulle d’air. (Les préparations idéales content 2 mg des selles sont uniformes
pas trop épaisses pour que les débris de matières fécales ne cachant pas de parasites, ni
trop minces pour qu’il y n’ait pas de vide dans la préparation).
Examiner la préparation avec l’objectif 10x ou si nécessaire, l’objectif plus puissant en
possédant de façon systématique (de haut en bas ou de gauche à droite), de façon à
observer la totalité de préparation couverte par la lamelle. Si l’on observe des parasites ou
les éléments suspects, passer à l’objectif supérieur pour voir leur morphologie plus en
détail.
Les selles liquides doivent être examinées sans dilution.
5.4.2. Examen après coloration des selles
Les dilutions des selles sont réalisées selon les modalités décrites ci haut. Coloration en
solution de Lugol double
Cette coloration est utile Pour :

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- Identifier les protozoaires et leurs Kystes ;

- Identifier la flore iodophile du colon (apparaît en brun),
- L’amidon mal digéré (apparaît en bleu)
 Coloration au MIF (Merthilate iode formol)
Cette technique est utile Pour :
- Fixer et colorer les formes végétatives et kystiques des protozoaires ;
- Fixation des œufs et des larves d’helminthes ;
- La conservation des selles plusieurs mois voire plusieurs années en boîte de Pétri.
Pour un nouvel examen, il suffit de remettre en suspension les sédiments en agitant
énergiquement et de laisser la préparation 15 à 20 minutes.
 Coloration sur lame
- Diluer les selles dans un peu d'eau physiologique puis ajouter une goutte de MIF
- Recouvrir d'une lamelle et lutter (ou sceller) la préparation à la vaseline ou en vernis en
ongles.
 Coloration en tube
Dans un tube à hémolyse, mélangé, et dans cet ordre :
- 0,15 ml d'une solution de Lugol à 5% à 25 ml d'une solution de MIF ;
- À l'aide d'un agitateur en verre déposer dans le fond du tube, une petite quantité des selles,
si bien mélanger l’ensemble pour avoir une préparation homogène ;
- Laisser reposer 20 à 30 minutes.
- Dès que la sédimentation est complète, la coloration est achevée ;
- Avec une pipette pasteur prélever dans la partie supérieure riche en protozoaires.
La coloration peut aussi se faire :
- Avec le bleu de Méthylène pour la recherche des leucocytes lorsque les selles sont molles
- Avec la fuchsine basique lorsqu’on suspecte Campylobacter enteritis
- Coloration de Gram et test de mobilité à partir de l’eau peptonée alcaline lorsqu’on
suspecte le choléra
5.5. Techniques de concentrations ou d'enrichissement des selles

Ces techniques ont pour but, à partir d'une grande quantité, d'obtenir dans un faible
volume, les œufs, les larves, les kystes trop rares dans les selles qui n'ont pas pu être descellés à

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l’examen direct. Tout examen parasitologiques des selles doit être accompagnée d'une ou de deux
techniques de concentration.
On distingue :
- Les techniques physiques et
- Les techniques physico-chimiques aussi appelées techniques diphasiques.
5.5.1. Technique de sédimentation en eau glycérinée

Technique utilisée pour la recherche des Schistosoma mansoni, mais utilisée également
pour trouver les œufs d'ascaris non fécondés et les larves d'anguillule.
Diluer 5 g des selles dans 300ml d'eau glycérolé à 0,5%
Réaliser 3 sédimentations successives en verre à pied d'une heure, 45 minutes et 30 minutes.

5.5.2. Technique de flottation de WILLIS

C'est une technique simple, rapide d'exécution et peu coûteuse :

- Diluer les selles au 1/100 dans une solution aqueuse de NaCl (25%) ; la densité forte (de
1,2) va jouer un rôle parce que les œufs d'helminthes moins dense flottent) ;
- Filtrer rapidement ; -
- Verser la suspension obtenue dans un tube à essai jusqu’à former un ménisque bombé au-
dessus du bord. Puis placer délicatement dessus une lamelle en évitant les bulles d'air.
- Cinq minutes plus tard, retirer la lamelle et la déposer sur lame.
- Examiner rapidement la préparation avant la cristallisation des selles par dessiccation.
Cette technique permet une bonne concentration des œufs d'ankylostomes.

5.5.3. Technique MIF concentration (diphasiques).

- Dans un verre à pied, dilué au 1/100 des selles dans la solution MIF ;
- Tamiser à travers une passoire des mailles de 0,5 à 1mm
- Transvaser 10 ml des filtrats dans un tube à centrifuger et y ajouter 4 ml d'éther ;
- Laisser 1 cm environ entre le niveau supérieur de l'éther et le bord du tube ;
- Recouvrir le tube à centrifuger et agiter énergiquement ;

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- Laisser reposer 2 minutes ;

- Centrifuger une minute à 1700 tours par minute ;
- Après centrifugation, 4 couches se superposent (elles sont de haut vers le bas) :
 Éther ;
 Résidu lipophile ;
 Solution de dilution et
 Le culot à examiner.
- Retourner rapidement le tube au-dessus d'un évier en faisant couler l'eau pour entraîner
l'éther, tout en maintenant le tube retourner vers le bas ;
- Essuyer les parois avec un peu de coton ;
- À l'aide d'une pipette pasteur ajouter une goutte d'eau physiologique ;
- Laisser monter le culot par capillarité, puis déposer sur une lame, recouvrir d'une lamelle
et passer à l’examen.
Recherche des levures
En cas de présence des levures à l'examen direct, une culture sur milieu de
SABOURAUD est réalisée. L'identification des levures se fait grâce aux galeries auxonogramme.
5.6. CONSERVATION DES PARASITES ET PREPARATION DE LAMES
DIDACTIQUES
La conservation des parasites et préparation des lames permanente est obligatoire.

- Pour le contrôle de test microscopiques de parasitologie et à de fins de formation.

- Quand les échantillons sont envoyés par les laboratoires périphériques dans le cadre de
contrôle de qualité

- Lorsque les échantillons doivent être envoyés à un laboratoire de référence pour

l’indentification du parasite

- Lorsque des spécimens sont recueillis sur le terrain, par exemple au cours des enquêtes
épidémiologiques
Supports permanents
Spécimens secs colorés

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Trypanosomes, parasites du paludisme, leishmaniose, microfilaires et autres parasites en

frottis colorés sont mieux préservés en utilisant un polymère plastique tel que DPX, Hystomount
ou permout.
Placez une goutte de milieu de montage sur le frottis sec, sans huile et colorer, couvrir
avec une lamelle et laisser pour sécher à l’air. Retirez l’excès de montage. Ces préparations
peuvent être conservées pendant plusieurs années avec une bonne conservation de la morphologie
du parasite, sans décoloration, ni perte de la transparence.
Spécimens humides
Une préparation d’un spécimen humide peut être montée tout simplement en luttant
autour de la lamelle avec l’un des produits de montage (polymère plastique) mentionnés ci-
dessus.
Pour faire une préparation permanente d'un spécimen de selles contenant des œufs et kystes, il est
nécessaire de faire le montage de selle qui ont été mélangés avec le conservateur de Bayer (voir
texte suivant) ou du résidu obtenu après concentration avec le formol-éther. La méthode la plus
simple de faire une préparation permanente est d'utiliser la technique de double lamelle :
1) Déposer une goutte de l'échantillon de selles et le conservateur de Bayer ou le formol-
éther sur une lamelle couvre-objet de 22 x 22mm.
Couvrir avec une lamelle de petite taille, par exemple, 18x18 mm.
2) À l’aide papier absorbant, enlever l’excès de liquide autour de la lamelle de couverture.
3) Déposer une goutte de DPX, HystoMount, Permount ou similaires sur la lame.
4) Abaissez la lame, déposer la préparation de sorte que la plus grande lamelle couvre-objet
soit au-dessus. Le milieu de montage doit remplir la zone autour de la petite lamelle.
5) Laisser sécher à l’air libre toute la nuit. Pour assurer une étanchéité complète, la
préparation peut être luttée avec le vernis à ongles clair.
Conservateurs et fixateurs des parasites
Pour des raisons didactiques et des programmes de QC externe, il est utile de pouvoir
préserver des parasites dans des échantillons de selles, en particulier les œufs et les kystes. Pour
conserver et identifier des Trophozoites d'Entamoeba histolytica, les fixateurs spéciaux et
méthodes de coloration sont requises.
Conservation des œufs et des kystes à l’aide de la solution de Bayer

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La solution de Bayer est recommandée car elle préserve la morphologie des œufs et
kystes des selles. C'est une solution de formol modifiée contenant le chlorure de cuivre, l’acide
acétique glacial et le formol. La solution stock est stable indéfiniment à la température ambiante.
Ces préparations peuvent être examinées sans coloration à l'observation directe (échantillonnage
de sédiments) ou examinées après concentration par l'éther-formol.
Solution de Bayer est utilisée comme suit :
1) Préparer une solution par dilution 1/10 de la solution stock Bayer (réactif N o 10) par
exemple, utilisé 1 ml de solution et 9ml d'eau distillée ou filtrée.
2) Emulsionner environ 1 g de matières fécales dans 3-4 mi de solution de travail Bayer.
Utilisez un bocal à bouchon à vis étanche.

Remarque : Si les produits chimiques pour préparer la solution de Bayer ne sont pas disponible,
utiliser une solution saline de formol 10% v/v, mais cela ne préservera pas les œufs et kystes
fécaux comme la solution de Bayer, il en est de même de la période de conservation qui ne sera
pas aussi longue.

Fixation de matières fécales pour les trophozoites d’histolytica Régulièrement, les

trophozoites d'E. histolytica sont habituellement identifiés par leur motilité et les globules rouges
ingéré. Le choix du fixateur dépend de la méthode de coloration utilisée. Le fixateur SAF (acétate
de sodium, acide acétique, formaldéhyde) est généralement utilisé lorsqu'on utilise la méthode de
coloration de fer hématoxyline et PVA (alcool polyvinylique) ou méthanol absolu lorsque vous
utilisez une méthode de coloration trichrome.
Les détails de ces fixateurs et les méthodes de coloration peuvent être trouvé dans le Training
Manual, diagnostic de Parasites intestinaux (WHO/CTD/SIP/98.2), 1998 et d'autres publications
portant sur les méthodes de la parasitologie.

Conservation des œufs de Schistosome dans les urines

Les œufs de S. haematobium peuvent être conservés dans l’urine en ajouter 1 ml de
solution à 1 % v/v d'eau de Javel domestique à chaque
10 ml d'urine. L'échantillon peut être examiné après centrifugation, sédimentation de gravité, ou
par la technique de filtration Nuclepore.

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L'eau de Javel empêche également la précipitation des phosphates.

Remarque : Lorsque l'échantillon est conservé avec l’eau de Javel, l’'urine est inadaptée pour des
tests chimiques, par exemple pour la détection de protéines ou de sang. Aussi, il ne sera pas
possible de détecter les globules rouges au microscope parce que les hématies sont lysées par le
produit chimique.
Conservation des vers intestinaux
Les échantillons peuvent être fixés et préservés comme suit :
1) Porter les gants et lunettes de protection, préparer le fixateur comme suit :
95% v/v éthanol . . . ………………………50 ml
Eau distillée ou bouillie……………………………45ml
Solution de formaldéhyde, concentrée............... 10 ml
Acide acétique glacial…………………………… 5ml
ATTENTION : La vapeur de formaldéhyde et l’acide acétique glacial sont irritants, donc
s'assurer que le laboratoire est bien aéré.
L'éthanol à 95 % est inflammable, le garder bien loin de toute flamme.
2) Transférer le fixateur dans un bécher et à une température de 60-65° C.
3) Si le spécimen est un segment de la douve ou de ténia, l’aplatir entre deux dispositifs
lâchement reliés avec une bande élastique.
4) Placer l'échantillon dans le fixateur et remuer doucement pendant quelques minutes.
Laisser l’échantillon dans le fixateur jusqu'au lendemain.
5) Transférer le spécimen dans un container ayant 5% v/v de glycérine dans 70 % v/v
d'éthanol. Bien conserver le spécimen au magasin dans cette solution.
Coprologie parasitaire
Examens parasitologiques des selles
Tout examen parasitologiques des selles comporte :
- Un examen macroscopique des selles ;
- Un examen microscopique des selles ou examen direct ;
- Un examen microscopique après concentration, éventuellement on applique un examen
spécial pour identifier certains parasites après avis du biologiste.
5.7. COPROCULTURE
JOUR 1 :

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Si l'échantillon est dur : ou moulé, réaliser une dilution dans une solution stérile d'eau
peptonée (1 ml)
Inoculer l'échantillon dilué dans le milieu Xylose Lysine Desoxycholate Agar ou dans SS
agar
Incuber en aérobiose à 35-37oC toute la nuit
S'il y a suspicion de Cholera : Eau peptonée alcalin
Inoculer dans I'EPA et incuber à 35-37°C pendant 5-8 heures
Ensuite ensemencer le Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose (TCBS) agar :
Incuber à 35-37oC en aérobiose toute la nuit
Si on suspecte E.coli ,
Inoculer l'échantillon dans Mac Conkey agar
Incuber la boite de Pétri en aérobiose à 35-37oC une nuit
JOUR 2 :
Lire et noter les résultats :
Sur XLD et Mac Conkey :
Rechercher les Salmonella ou Shigella, éventuellement E.coli
Exclure Proteus en faisant le test d'UREASE
Identification présomptive :
- Lysine Decarboxylase LDC et Indole.
- Mobilité
- Kligler lron Agar
Identification sérologique
Réaliser l'antibiogramme
Sur TCBS :
Rechercher les colonies suspectes (jaune)
Coloration de Gram
Subculture sur Gélose Nutritive
Est d'Oxydase
Identification sérologique
Sur Mac Conkey :
Rechercher les colonies suspectes WEC 0157

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Réaliser le test d’agglutination

CHAPITRE VI : EXAMEN DES URINES
6.1. Prélèvement des urines
Le prélèvement sera réalisé de préférence sur les urines du matin ou si vous n'avez plus
uriné depuis au moins trois heures.
a. Matériel
 Flacon stérile a large goulot
b. Techniques
 Chez l'homme :
Les urines à analyser peuvent être recueillies par miction normale.
 Eliminer le 1er jet d'urines pour ne recueillir dans un flacon stérile que les 20-30 ml
suivants au minimum en prenant soin de ne pas toucher l'intérieur du récipient.
 Chez la femme :
 L’avez-vous les mains avec du savon. Rincez abondamment
 Lavez la vulve avec une compresse
 Répétez l'opération 3 fois en gardant la vulve ouverte
 Ouvrez le gobelet. Faites très attention de ne pas toucher le côté interne du couvercle, ni
du gobelet
 Posez le couvercle, face externe sur l'évier, sans toucher la face interne.
 Eliminer le 1er jet d'urines dans le W.C., puis faites entrer le 2 ème jet dans le gobelet, sans
toucher le jet d'urine avec la main
 Refermez le gobelet sans toucher la face interne du couvercle
 Remettez immédiatement

 NOURRISON
 Utiliser un collecteur stérile spécifique. Ce dispositif à usage unique adapté à l’anatomie
se pose après désinfection soigneuse et ne peut être laissé en place plus d'une heure.
6.2. Examen macroscopique
Décrire l’aspect ou l’apparence de l’échantillon et faire un rapport sur la coloration, la
turbidité. Les urines normales sont claires, jaunes pales ou jaunes.

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La coloration de l’urine peut changer suite à la consommation de certains médicaments ou de

certains aliments.
Quelques exemples de l’aspect de l’urine et les cause possible :
Aspect de l’échantillon Causes possibles

Trouble Infection bactérienne

Rouge trouble Schistosomiase ou infection

Brun et trouble du à l’hémoglobine Fièvre et autres conditions qui causent

l’hémolyse intra vasculaire

Jaune brun ou vert brun du à la bilirubine Hépatite virale aigue

Jaune orange Hémolyse et cellules hépatocytes

Blanc lacté Wuchereria bancrofti

Examiner les urines immédiatement après le prélèvement si cela n’est pas possible, conserver
l’échantillon au réfrigérateur entre 4 -6°C. Mais si la durée de conservation doit dépasser 2
heures, ajouté de l’acide borique en raison de 0,1 g pour 100 ml d’urines.
Les échantillons destinés à la culture bactériologique ne peuvent pas être conservés avec un
produit bactéricide comme l’acide chlorhydrique, le chloroforme, l’eau de javel.
6.3. Examen microscopique des urines
6.3.1. Sédiments urinaires
L’urine contient en suspension des éléments microscopiques, on les rassemble par
concentration et on examine une goutte de culot au microscope entre lame et lamelle. Comme
tous ces éléments forment un sédiment dans les urines au bout de quelques heures, on les appelle
alors Sédiments.
Matériels : centrifugeur électrique ou à main, tube coniques à centrifuger, compte goute pasteur,
lame porte objet, lamelle couvre objet.
Méthode
- Mélanger délicatement l’urine, remplir aussitôt au ¾ un tube à centrifuger ;
- Centrifuger à 1500 Tours pendant 5 minutes

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- Rejeter le surnageant en retournant rapidement le tube, remettre le tube a la position

normale
- Secouer le tube pour mélanger de nouveau le culot. Aspirer quelques gouttes du culot
dans une pipette.
- Déposer une goutte sur la lame et couvrir d’une lamelle
- Examiner aussitôt au microscope à l’objectif 10x puis à 40x
On peut trouver dans le culot urinaire des éléments comme le Globule rouge, les leucocytes, les
cellules épithéliales, les œufs et larves des parasites, les levures, les trichomonas, les cylindres,
les cristaux, les spermatozoïdes, …
6.3.2. Examens parasitologiques complémentaires des urines
 Recherche des œufs de schistosoma haematobium
Cette recherche s’effectue dans les urines émises le matin ou après un effort, ou encore sur la
totalité des urines de la journée. Il faut alors dans ce cas, recueillir le dépôt, car les œufs des
Schistosoma haematobium sédiment au fond du bocal. L’observation microscopique se fera au
faible grossissement et les œufs volumineux des Schistosoma haematobium seront rapidement
reconnus.
 Recherche des trichomonas vaginalis
Dans les 2 sexes on peut desceller les formes végétatives de Trichomonas vaginalis dans le
culot de centrifugation des urines examinées à frais ou colorées par MAY GRUNWALD -
GIEMSA
 Recherche des microfilaires
A l’examen du culot de centrifugation à frais ou après coloration on peut desceller les
microfilaires de Wuchereria bancrofti, Loaloa, onchocerca volvulus.
 Recherche des Globule rouge
La présence de GR dans les urines peut être due à une infestation par les Schistosoma ou à
une infection bactérienne.
Chez les femmes cependant, cette présence peut être due à leur cycle de menstruation.
 Recherche des cellules épithéliales
Il est normal de trouver un peu de cellules épithéliales dans les urines mais lorsqu’elles s’y
trouvent en grande nombre, leur présence indiquerait cette fois-là une infection, une
inflammation ou une contamination vaginale.

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 Recherche des levures

Les levures peuvent être trouvées dans les urines (candida albicans). Il faudra cependant les
différencier des globules rouges par test d’hémolyse à l’acide acétique dilue. Les globules rouges
peuvent être hémolysés et les levures restent intactes.

6.4. EXAMENS BIOCHIMIQUES DE L’URINE

1. pH de l’urine
L’urine normale fraiche est acide. Elle a un pH aux environ de 6. Mesure de pH de l’urine (au
moyen d’un pH mètre)
Placer dans un verre de montre, une bande de papier indicateur universel,
Laisser tomber quelques gouttes d’urine fraiche sur le papier, saisir le papier avec une pince
anatomique et comparer la couleur obtenue à celle de l’échelle.
Noter l’unité de pH indiquée par la couleur la plus proche de l’échelle. Selon les résultats notés,
choisir une bande de papier indicateurs pour la zone limitée correspondante recommencer la
mesure dans un autre verre de montre et noter la valeur correspondant à l’échelle.
Le pH normal de l’urine fraiche est d’environ 6 (5 à 7). Si le pH de l’urine varie entre 4,5 à 5,5,
l’urine est acide et cela fait penser soit à certains types de diabète ou simplement à la fatigue
musculaire. Si le pH se trouve entre 7,8 et 8 : on dit que l’urine est alcaline et on peut penser à
l’infection des voies urinaires ou encore à l’alimentation végétarienne

2. Glycosurie : Recherche et dosage de glucose

A l’aide d’une pipette, déposer 5 ml de solution de Bénédicte dans un tube à essai, ajouter 8
gouttes d’urines et bien mélanger. Placer le tube pendant 5 minutes dans un bécher plein d’eau
bouillante. Laisser refroidir la température ambiante. Observer tout changement de couleur ou
toute apparition de précipité et noter le résultat de la manière suivante.
Couleur Résultats (Présence du Concentration
glucose approximative mmol/l

Bleu Négatif 0

Vert Trace 14

Vert avec précipité jaune + 28

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Jaune à vert foncé ++ 56

Brun +++ 83

Orange à rouge brique ++++ 111 ou plus

3. Recherche des protéines dans les urines

Principe : Quand on ajoute de l'acide sulfosalicylique à des urines contenant des protéines il se
forme un précipité blanchâtre.
- A I ‘aide d'une pipette verser 5ml d'urines dans un tube à essai à compte-goutte, ajouter à I
‘urine 2 gouttes d’acide sulfosalicylique à 30%.
- Comparer sur un fond sombre avec un tube d'urines non traitées.
Résultat positif : quand on ajoute le réactif, il se forme un précipité blanc.
4. Présence d'urobilinogènes dans les urines
- A t'aide d'une pipette, verser 5ml d'urines fraîches dans un tube à essai
- Ajouter 0,5ml de réactif d'EHRLICH
- Laisser agir pendant 5min puis contrôler la coloration
- Résultat : Couleur rouge foncée : test positif, quantité excessive d'urobilinogènes.
5. Composés cétoniques dans les urines
Principe : Lorsqu'on ajoute des ferrinitrosopentacyanure de Na à des urines contenant des corps
cétoniques, on obtient une coloration rouge violet.
Procédé : Juste avant l'épreuve, mettre dans un tube à essai quelques cristaux de
ferrinitrosopentacyanure de Na de manière à remplir le fond du tube. Ajouter 5ml d'eau distillée
et agiter jusqu’à ce que les cristaux soient presque dissous. Dans un autre tube à essai, mesurer 10
ml d'urines. Ajouter à l’urine l0 gouttes d'acide acétique, 10ml de la solution fraîchement
préparée de ferrinitrosopentacyanure de Na en tenant la pointe du compte-goutte contre la paroi
du tube, verser 20 gouttes d'ammoniac à la surface de liquide' Attendre 5 min avant de contrôler
les résultats.
Le résultat est positif lorsqu'il se forme à la surface de liquide un anneau rouge violet. Si l’anneau
est rosâtre on note + ;

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Si l'anneau est rouge, on note ++ et si l'anneau est violet foncé on note +++.
6. Test de grossesse
Il est possible de déterminer si une femme est enceinte en testant ses urines, soit à l'aide d'un
réactif de commerce soit en injectant de l'urine à des animaux de laboratoire.
Pour le test de grossesse, l'échantillon doit être prélevé dès le réveil, recueillir les premières
urines du jour dans un flacon propre et le test doit se faire sans attendre ; dans le cas contraire,
conserver l'urine au réfrigérateur.

 Test immunochimique :
Il existe actuellement dans le commerce de nombreux réactifs qui permettent de déterminer si
une femme est enceinte ou non.
Mode opératoire : suivre les recommandations du fabriquant.
 Test biologique :
On fait recours aux animaux, mais les 2 plus couramment utilisés sont : le crapaud et la
grenouille mâle. On injecte l’urine à tester ; 1ml à l'animal. Si la femme est enceinte l'animal
stimulé par les hormones de l'urine émet des spermatozoïdes observés par l'observation du liquide
local.
Selon le réactif et le type de test utilisé on obtient un résultat positif à partir du 5 ème ou du 9ème jour
de retard des règles.
4.5. Examens cytobactériologiques des urines (ECBU)
Examen microscopique
- Il doit toujours précéder l‘ensemencement. Il permet une numération des éléments figurés
et fournit des informations sures
- La morphologie des bactéries présentes dans les urines.
- Estimation semi quantitative des éléments figurés ; une lecture à l’objectif 40x entre lame
et lamelle réalisée à partir du culot de centrifugation permet cette estimation.
- La présence de 5 à 7 leucocytes par champ correspond au taux assez nombreux. Au-delà
de ce nombre, le taux est dit nombreux ou très nombreux.
Dans certains cas particuliers, il est recommandé de procéder à une numération exacte au moyen
de la cellule hématimètre (cellule de MALASSEZ).

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En cas d'infection urinaire, une leucocyturie est généralement supérieur à 10 4 leucocyte/ml

d'urine.
L'examen à l'état frais sert également à reconnaître les cylindres. Enfin, cet examen met en
évidence la présence éventuelle des parasites :
- Trichomonas
- Les œufs de Schistosoma
- Les levures
La morphologie des bactéries présentes dans les urines est étudiée grâce à une observation
réalisée à partir du culot coloré en Gram. Cette lecture conditionne le choix des milieux
d'isolement.
Ces bandelettes donnent des indications sur divers composants de l'urine :
- La présence des leucocytes
- La présence des nitrates et
- le pH de l'urine
Ces bandelettes Sont utiles mais ne remplacent en aucun cas l'examen microscopique ni la
culture.
Mise en culture (culture pour) :
1. Numération des bactéries :
Elle peut s'effectuer de diverses manières :
1. Dilution de l’urine au 1/10 ; 1/100 ; 1/1000 et étalement de 0,1 ml de dilution sur milieu
approprié en boîte de Pétri.

2. Méthode des anses calibrées

Une anse de 10 microlitre est diluée dans un 1ml d’eau stérile. Une anse de cette dilution
est étalée sur un milieu gélosé approprié en boîte de Pétri. Une colonie correspond à 10 4 bactéries
par millilitre.
3. Méthode de la lame immergée :
On plonge dans l’urine fraîchement émise une lame comportant le milieu de Mac Conkey et
CLED-agar.
N.B : Une urine infectée contient généralement plus de 105
Bactéries/ml.

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2. Ensemencement
Un ou plusieurs milieux de culture sont choisis en fonction de l’examen microscopique :
- En présence des bacilles Gram- on peut choisir le milieu de Drigalski ou Gélose lactosée à
l'éosine bleu de méthylène (EMB)
- Coques Gram+ on prend la gélose au sang ou gélose au chocolat incubée sous l'atmosphère
enrichie au CO2
Après une incubation à 37oC pendant 24 à 48 h, les colonies suspectes sont identifiées selon des
procédures spécifiques.
3. L'Antibiogramme
Devant une infection urinaire confirmée : leucocyturie > 10 4 d'urine et les bactéries >
105/ml. L'étude de la sensibilité aux antibiotiques est essentielle pour la mise en place d'un
traitement à visée curative.
4. Cas particuliers
En cas de culture stérile, dans un contexte de leucocyturie (10 4/ml) il faut penser aux bactéries
exigeantes :
- Les mycobactéries :
L'examen réalisé sur la totalité des premières urines du matin après une restriction hydrique 3
jours de suite.
- Recherch des germes intracellulaires comme : mycoplasme, chlamydia trachomatis,
Neisseria gonorrhoeae
- Recherche des levures :
Culture sur SABOURAUD et identification au moyen des galeries appropriées.
Actuellement des techniques de biologie moléculaire, comme l'hybridation de I'ADN, la PCR (=
technique d'amplification), ... facilitent largement les diagnostics des maladies infectieuses.

Expédition des urines vers un autre laboratoire

Laboratoire de parasitologie.
Les urines seront additionnées d'un antiseptique ou d'un conservateur comme l'acide
chlorhydrique fumant ou l'eau de Javel du commerce (4 gouttes pour 10 mt d'urines).
Laboratoire de bactériologie
L'urine sera envoyée ensemencée dans un milieu de transport

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CHAPITRE VII : EXAMEN CYTO-BACTERIOLOGIQUE DU LIQUIDE CEPHALO-

RACHIDIEN
7.I. Agents pathogènes possibles
BACTÉRIES Gram positif
Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae (Groupe B), Listeria monocytogenes
Streptococcus suis, Neisseria menigitidis, Haemophilus influenza type b,
BACTÉRIES Gram négatif
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus spp, Salmonella spp, Flavobacterium
menigosepticum
Également Mycobacterium tuberculosis et Treponema pallidum.
Remarque : Les bactéries peuvent se retrouver dans le L.C.R. Lorsqu'il y a une lésion au cerveau
VIRUS
En particulier les virus Coxsackie, Echovirus, et Arbovirus. En outre, le virus herpès
simplex 2, Virus de la Varicelle et de Zona et virus de chorioméningite lymphocytaire (LCM).
Rarement le poliovirus peut être isolé de liquide céphalo-rachidien.
CHAMPIGNONS
Cryptococcus neoformans (principalement chez les malades de sida) et moins
fréquemment les espèces d'Aspergillus.
PARASITES
Espèces de Trypanosoma et Naegleria fowleri. Rarement les larves d'Angiostrongylus
cantonensis et Dirofilaria immiltis (L.C.R. contient généralement des éosinophiles),
Egalement Toxoplasma gondii (principalement chez les malades du sida)
Notes sur les agents pathogènes
 L'inflammation des méninges (membranes qui recouvrent le cerveau et moelle épinière)
est appelée méningite. Les agents pathogènes peuvent atteindre les méninges par la
circulation sanguine ou parfois partant des sites voisins tels que l'oreille moyenne ou les
sinus nasaux.
Fièvre, maux de tête, raideur de la nuque et l'intolérance de la lumière sont des
symptômes typiques de méningite bactérienne aiguë. Chez les enfants, des vomissements,
des convulsions et apathie sont communs. Un syndrome hémorragique est associé avec la
méningite à méningocoques.

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7.2 : PRELEVEMENT ET TRANSPORT DU LCR

Le liquide céphalo-rachidien doit être recueilli par un personnel expérimenté. Il doit être
recueilli aseptiquement afin d'empêcher toute contamination du système nerveux central.
 PRELEVEMENT DE L.C.R.
Le recueil ne peut être que par Médecin ou par un infirmier spécialisé. Ce liquide
peut servir à réaliser les analyses biochimiques, bactériologiques et cytologiques.
a) Matériels
Trocart, Mandrin, Flacon stérile, Ouate, Désinfectant, sparadrap, etc…
b) Techniques
- Le LCR est prélevé avant tout antibiotique dans le contexte d'asepsie rigoureuse grâce à
une ponction lombaire
- L’aiguille de fonction lombaire est enfoncée entre la 4 ème et la 5ème vertèbre lombaire,
dans une profondeur de 4 à 5 cm, on retire le mandrin et le LCR coule de l’aiguille.
- Recueillir quelques gouttes dans un tube stérile (tube 1) et 2 à 3 ml dans un autre tube
(tube 2)
- Eliminer le premier tube s'il contient les hématies
- Retirer l’aiguille et faire un pansement à l’endroit.
- Le tube 2 peut servir à réaliser les analyses biochimiques (glucorrachie, réaction de
pandy, etc.), cytologique, parasitologiques (recherche de trypanosome) et
bactériologiques (coloration Gram, coloration de ziehl, culture)
Précaution à prendre
- Examiner le LCR le plus vite que possible, car une fois prélevée, les éléments cellulaires
et le trypanosome se lisent rapidement. Le glucose aussi détruit rapidement, sauf, s'il est
préservé à l’oxalate les de fluorée,
- Travailler avec soin et économie : c'est un liquide difficilement prélevé qu'il ne faut pas
gaspiller
- Le LCR peut renfermer des germes virulents, il faudra donc observer les règles de la
biosécurité.
N.B: les résultats doivent être transmis au médecin dès qu'ils seront disponibles.
7.3. Examen macroscopiques
1. signaler l‘aspect du L.C.R.

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Le LCR est normalement clair, souvent qualifié de l'eau de roche.

Cependant, cet aspect normal peut subir des modifications :
- Liquide hémorragique
Traumatisme vasculaire lors du prélèvement ou une hémorragie méningée
- Liquide xanthochromique
De couleur jaune : Ce liquide peut évoquer une hémorragie méningée ancienne ou une
atteinte tuberculeuse des méninges
- Liquide trouble
Modification provoquée par une hypercytose et oriente vers une méningite purulente à
méningocoque (= Neisseria meningitidis).
NB : Les méningites virales et les méningites bactériennes décapitées par une antibiothérapie
peuvent s'accompagnées d'un liquide céphalorachidien clair.
Un caillot dans le L.C.R. indique une concentration riche en protéines avec une augmentation de
fibrinogène, comme cela peut se produire avec une méningite pyogène ou lorsqu'il y a
constriction de la colonne vertébrale.
7.4. EXAMENS MICROSCOPIQUES
5.4.1. Numération des éléments
a) procédure
1. Mélanger le L.C.R. (échantillon n°2 non centrifugé). Préparer une dilution de 1/2 c'est-à-
dire mélanger 100 µl de L.C.R. avec 100 µl de solution de Turk ;
2. laisser réponse pendant 3 minutes
3. Utiliser la cellule améliorée de Nageotte (ou Neubauer améliorée), s'assurer que la
cellule ainsi que la lamelle couvre-objet sont parfaitement propres.
4. A l’aide d'une pipette Pasteur fine ou un tube capillaire, remplissez. Soigneusement la
chambre de comptage avec le L.C.R. dilué bien mélangé. Le liquide ne doit pas dépasse la
capacité des canaux de chaque côté de la chambre.
5. Attendre environ 2 minutes puis compter les globules blancs au microscope (à l’objectif
40x).
Pour la cellule de Nageotte : Compter dans 4 bandes (2 bandes à gauche et 2 bandes à droites)

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'
Nombre d elements compte x facteur de dilution
Nombre d’éléments ¿
1 , 25 x Nombre de bande

Pour la cellule de Neubauer : Compter dans 4 grands carrés

'
Nombre d elements compte x facteur de dilution x 10
Nombre d’éléments ¿
Nombre de grands carrées

Remarque : Lorsque les éléments sont trop nombreux pour les compter, diluer le L.C.R. de 1 / 20
(L.C.R. 20 µl mélangée avec 380 µl de diluant), remplissez la cellule et compter les éléments en
tenant compte du facteur de dilution. Multiplier les cellules comptées par 20.
Remarque : Les échantillons qui contiennent du sang ou de caillot ne conviennent pas pour le
comptage des cellules. Faire la coloration Gram et signaler la présence de leucocytes et des
bactéries comme décrit précédemment.
7.4.2. Numération différentielle de leucocytes
PROCEDURE
1. Agiter le tube no 2 et centrifuger à environ 1 000 tours pendant 5 - 10 minutes (Prélever
une petite quantité de L.C.R. non centrifugé pour la numération des éléments si c'est
nécessaire).
Pour le cas de L.C.R. purulent, un frottis pour coloration de Gram peut être mieux préparé
à partir de l'échantillon non centrifugé.
2. Transférer le liquide surnageant dans un autre tube (à utiliser pour les tests de glucose et
des protéines si requis).
3. Mélanger le sédiment. Transférer plusieurs gouttes sur une lame, réaliser un frottis mince,
Sécher à l'air dans un endroit sûr.
4. Colorer par la solution May Grunwald – Giemsa
5. Compter les différents leucocytes et noter que les globules blancs sont principalement
polynucléaires neutrophiles ou les lymphocytes. S'il y a un mélange des deux, estimer
approximativement le pourcentage de chaque type de cellule.
La méningite est décrite comme :

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- Pyogènes (purulente), quand le L.C.R. contient principalement les polynucléaires neutrophiles

(cellules de pus), comme dans le cas de méningite aiguë causée par N. meningitidis, H.
influenzae, et S. pneumoniae. Les cellules de pus se trouvent également dans le L.C.R. dans le
cas de méningo-encéphalite amibienne aiguë.
- Lymphocytaire, lorsque le CLR contient principalement des lymphocytes, comme la méningite
causée par des virus, M. tuberculosis et C. neoformans. Les lymphocytes sont retrouvés dans le
L.C.R. lors d'une méningo-encéphalite de trypanosomiase et de neurosyphilis.
7.4.3. COLORATION GRAM
Une coloration de Gram est requise lorsque le L.C.R. contient des leucocytes
(neutrophiles). Elle peut également fournir des informations utiles lorsqu'un L.C.R. est inadapté
pour la numération des cellules ou les tests biochimiques (par exemple lorsqu'il est hémorragique
ou contient des caillots).

PROCEDURE
6. Agiter le tube no 2 et centrifuger à environ 1 000 tours pendant 5 - 10 minutes (Prélever
une petite quantité de L.C.R. non centrifugé pour la numération des éléments si c'est
nécessaire).
Pour le cas de L.C.R. purulent, un frottis pour coloration de Gram peut être mieux préparé
à partir de l'échantillon non centrifugé.
7. Transférer le liquide surnageant dans un autre tube (à utiliser pour les tests de glucose et
des protéines si requis).
8. Mélanger le sédiment. Transférer plusieurs gouttes sur une lame, mais éviter une
préparation trop épaisse car cela rendra difficile la décoloration. Sécher à l'air dans un
endroit sûr.
9. Fixer à l’alcool la préparation et colorer par la technique de Gram.
Examiner le frottis au microscope et rapporter les leucocytes et bactéries en utilisant les objectifs
40x et 100x.
Bactéries :
- Gram négatifs diplocoques intracellulaires qui pourrait être de N. meningitidis.
- Gram positifs diplocoques ou Streptocoques courts, cela pourrait être de S. pneumoniae. Il
est souvent possible de voir les zones non colorées de capsules autour des bactéries.

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- Bacilles à Gram négatif : H. influenzae, surtout si filamenteuses ou autres formes

polymorphes
- Bacilles Gram négatif pourraient être également E. coli ou autres coliformes, surtout chez
le nouveau-né.
- Formes inégalement colorées, de taille variable : cellules de levure (certaines montrant le
bourgeonnement), évocateurs de C. neoformans. Il est préférable de réaliser la coloration
à l’encre de Chine. Le frottis contiendra généralement les lymphocytes.
N.B. : Signaler immédiatement au médecin traitant les résultats de la coloration de Gram.

7.4.4. Coloration de ziehl Neelsen

Frottis de Ziehl-Neelsen lorsque la méningite tuberculeuse est suspectée.

Lorsque la méningite tuberculeuse est cliniquement suspectée ou le L.C.R. contient des
lymphocytes et la concentration de glucose est basse et le taux de protéines élevé, les BAAR
cependant sont difficiles à détecter dans le L.C.R. La technique suivante augmente les chances de
les observées :
1. centrifuger le L.C.R. et mélanger les sédiments. Transférer plusieurs gouttes de sédiments sur
une lame, laisser sécher.
2. fixer la préparation sèche avec du méthanol et colorer par la technique de Ziehl-Neelsen.
3. examiner le frottis tout d'abord avec l’objectif 40x pour voir la répartition, puis avec l'objectif
100x pour détecter les BAAR. Examiner toute la préparation.
7.4.5. Coloration à l’encre de Chine

Lorsque la méningite cryptococcique est cliniquement suspectée, p. ex. patient avec HIV,
ou lorsque les cellules de levure sont détectées lors de la coloration Gram, examiner une
préparation à l’encre de Chine ou examen à frais par microscopie à fond noir pour observer les
levures encapsulées.
l. Centrifuger le L.C.R. et mélanger les sédiments.
2. transférer une goutte du culot sur une lame, couvrir avec une lamelle et observer au
microscope à fond noir ou ajouter une goutte de l’encre de Chine, mélanger et recouvrir d'une
lamelle couvre-objet.

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Lorsque l’encre n'est pas disponible, utilisez une solution de nigrosine 200 g/l (20 % p/v).
Remarque : Ne faites pas une préparation trop épaisse, dans le cas contraire les cellules et les
capsules ne seront pas observables.
3. examiner la préparation à l’aide de l’objectif 40x. Recherchez les cellules ovales ou rondes,
certains montrant des cellules en herbe, irréguliers en taille, mesurant de 2 à 10 pm de diamètre et
entouré d'une grande capsule non colorée. Très occasionnellement, les capsules sont absentes.
N.B: Lorsque les levures encapsulées sont détectées dans le L.C.R., un diagnostic présomptif de
la méningite cryptococcique peut être fait. Informer immédiatement le médecin traitant.
Détection d'une méningite cryptococcique par antigène : Les antigènes solubles sont
disponibles et permette de détecter immunologiquement à la fois dans le sérum et L.C.R. des
patients infectés par C. neoformans.
7.4.6. Examen à frais
Un L.C.R. frais est nécessaire pour détecter les trypanosomes. 15 minutes après le
prélèvement, les trypanosomes commencent à perdre leur motilité et sont rapidement lysés. Les
trypanosomes sont généralement peu nombreux et par conséquent, une recherche minutieuse
d'une préparation fraiche est requise pour détecter les parasites mobiles.
7.5. CULTURE

Utilisez le tube no1. Si le L.C.R. est clair ou légèrement trouble, centrifuger l'échantillon
dans un tube stérile pendant environ 15 minutes.
Ensemencer le sédiment sur les milieux de culture.
N.B: le liquide céphalorachidien doit être ensemencé puis incubé sous CO 2 dès que possible après
le prélèvement. Lorsqu'il n'est pas possible de le faire immédiatement après, il doit être maintenu
à 35-37°C (pas au frigo).
Gélose au sang et Gélose chocolat
- Ensemencer l'échantillon sur gélose chocolat et gélose au sang.
Lorsque les diplocoques Gram positif sont observés dans le frottis Gram, ajoutez un
disque optochin à la gélose au sang pour aider à l’identification de S. pneumoniae.
- Incuber les deux boites sous atmosphère enrichie en dioxyde de carbone entre 35 et 37°C
jusqu'à 48 heures, recherchant la croissance après une nuit d'incubation.

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Lorsque le patient est un nouveau-né : ensemencer l'échantillon également sur gélose de Mac
Conkey. Incuber en aérobiose à 35-37°C durant une nuit.
Recherche des mycobactéries : en présence d'un liquide lymphocytaire, et chaque fois que le
clinicien suspecte une méningite tuberculeuse, il est nécessaire d'ensemencer 2 milieux.
- Milieu de LÖWENSTEIN - JENSEN (2 fois) 2 milieux
- Milieux de COLETSOS (2 fois aussi) 2 et d'examiner directement après coloration de
Ziehl pour permettre la mise en évidence de la présence des bacilles acido alcoolo
résistants
7.6. TESTS BIOCHIMIQUES DU L.C.R

Les tests biochimiques du L.C.R. incluent le dosage des protéines et de glucose.

Remarque : Lorsque le frottis de coloration Gram montre les microorganismes et leucocytes, peu
d'informations supplémentaires seront fournies par les tests biochimiques comme le dosage des
protéines et de glucose. Quand cependant aucune bactérie n'est observée dans le frottis de
coloration Gram et le nombre d'éléments est élevé ; le dosage de protéine et glucose peut aider à
spécifier les raisons pour lesquelles les lymphocytes sont retrouvés dans le L.C.R., par exemple
méningite virale (protéine légèrement élevée, glucose normal) ; de méningite tuberculeuse (riche
en protéines, faible taux de glucose)
7.6.1. DOSAGE DE GLUCOSE DÀNS LE L.C.R.

Le glucose doit être dosé dans les 20 minutes qui suivent le prélèvement de L.C.R., dans
le cas contraire un résultat faussement faible sera obtenu en raison de la glycolyse. Utilisez-le
surnageant de L.C.R. centrifugé ou non centrifugé si l'échantillon apparaît clair.
Le glucose peut être mesuré dans le L.C.R. en utilisant la technique colorimétrie ou une simple
technique semi-quantitative en utilisant le réactif de Benedict.
Le taux normal de glucose dans le L.C.R.est de 2,5 - 4,0 mmol/l (45 – 72 mg % ou 0,45 –
0,75g/l).
Dans le sang : concentration du glucose sanguin chez le sujet à jeun.
 Sang veineux : sérum ou plasma : 3 - 5 mmol/l ou 0,55 - 0,90gl
 Sang capillaire : 3,63 - 5,5 mmol/l ou 0,6 – 1g/l.

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La concentration en glucose dans le L.C.R. est réduite dans la plupart des formes de méningite,
sauf la méningite virale.
Dans les méningites bactériennes pyogènes c'est nettement réduit et peut être même indétectable.
TECHNIQUE DE DOSAGE
Dans un tube à centrifuger, verser au moyen d'une pipette 1,9ml d'acide trichloracétique.
A la pipette 0,1ml de sang total (ou plasma) au fond du tube ou 0,4 ml de LCR.
- Aspirer de la solution d’acide trichloracétique pour rincer la pipette.
- Bien mélanger et attendre 5 minutes.
- Centrifuger à grande vitesse pour sédimenter les protéines précipitées.
- Prendre 3 ; gros tubes à essai et les marquer comme suit :
Tube Neutre (N)
Tube Référence(R)
Tube malade (M)
Dans chaque tube, mettre au moyen de la pipette : Tube N : 1 ml d'eau distillée et 5 ml de réactif
à l’orthotoluidine. Dans le tube R : mettre 1ml de solution dérivé du glucose et 5 ml de réactif à
l'orthotoluidine et dans le tube M : 1 ml de surnageant et 5 ml de réactif à l'orthotoluidine.
- Agiter chaque tube puis le placer dans un bain Marie bouillant pendant 10 minutes pour faire
apparaître la coloration verte :
- Retirer les tubes, les refroidir dans l’eau froide pendant 15 minutes
- Mesurer la coloration obtenue au spectrophotomètre à 630 nm.
LCR : La concentration du glucose égale DOM/DOR x 2,78 si la concentration est exprimée en
mmol/l. Mais si la concentration est en g/l on a DOM/DOR x 0,5.
Sang : La concentration du glucose dans le sang sera égale à DOM/DOR x 11,1 pour la
concentration exprimée en mmol/l ou DOM/DOR x 2 en g/l.
7.6.2. DOSAGE DES PROTEINES TOTALES ET GLOBULINES

Utiliser le surnageant après centrifugation ou le liquide non centrifugé s'il apparait clair.
Le test de Pandy est utilisé pour mesurer une augmentation de globuline dans le L.C.R. Il est utile
lorsqu'il n'est pas possible de mesurer les protéines totales dans le L.C.R.

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Le taux normal de protéines totales dans le L.C.R. est de 0,15-0,40 g/l (15 - 40 mg %). Une
valeur jusqu'à 1 ,0 g/l (100 mg %) est normale chez le nouveau-né. Seulement les traces de
globuline se trouvent dans le L.C.R. normal, insuffisante pour donner un test de Pandy positif.
Un accroissement de protéines totales avec test de Pandy positif se produit dans toutes les formes
de méningite, de méningite amibienne et méningo-encéphalite due par la trypanosomiase, malaria
cérébrale, tumeurs du cerveau, lésion cérébrale, compression de la moelle épinière, la
poliomyélite, le syndrome de Guillain-Barré (souvent la seule anomalie), et Polynéphrite. Une
augmentation des protéines se produit également en cas des maladies qui causent des
changements dans les protéines plasmatiques.
Lorsque tes protéines totales sont supérieures à 2,0 g/l (200 mg%), le niveau de fibrinogène
entraine la coagulation de LCR. Cela peut provoquer de grave méningite pyogène, ou une
hémorragie.
Remarque : dans le cas de maladies du système nerveux comme la sclérose en plaques,
neurosyphilis et certains troubles du tissu conjonctif, il est possible de trouver des tests de Pandy
positifs pour les globulines avec une légère montée ou même un taux normal de protéine totale.
7.7. Diagnostic immunologique de la méningite bactérienne aiguë

La recherche directe de l'antigène dans le L.C.R. peut fournir un diagnostic rapide de

méningite bactérienne aiguë, en particulier lorsque le patient a été traité avec des agents
antimicrobiens et que les bactéries ne peuvent pas être détectées dans un frottis de coloration
Gram ou par culture. Les tests sont disponibles pour détecter N. meningitidis des groupes A, B,
C, Y et W135, H. influenza type b, S. pneumoniae et S. agalactiae.
Les Fabricants de tests au latex sont Bio-Rad Laboratoires, BD
Diagnostics et bio Mérieux. Les tests de coagglutination sont disponibles chez KaroBio
Diagnostic.
CHAPITRE VIII : EXAMEN DE SPERME
L’analyse de sperme (liquide séminal) est souvent pratiquée dans un laboratoire de
microbiologie. Lors de l’évaluation de la fertilité masculine, l’analyse de base de sperme (liquide
séminal) comprend généralement :
- Mesure du volume
- Mesure du pH et de la viscosité

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- Examen d’une préparation fraiches pour estimer le pourcentage de spermatozoïdes mobile

et viable et à chercher les leucocytes et les bactéries
- Numération de spermatozoïdes
- Examen d’une préparation colorée pour estimer le pourcentage de spermatozoïdes avec la
morphologie normale.
8.1. COLLECTE ET TRANSPORT DE SPERME
1. Donner à la personne un flacon étanche, propre et sec, et lui demander de prélever un
échantillon de spermes à la maison après 3 à 7 jours d’abstinence sexuelle. Les bains
chauds sont à éviter dans ce laps de temps
NB : le coït interrompu : cette méthode de collecte ne doit pas être utilisé parce que la première
partie de l’éjaculat (souvent contenant la plus forte concentration de spermatozoïde) peut être
perdue. La mobilité des spermatozoïdes ainsi que le pH peuvent être contaminé avec les bactéries
et les leucocytes de ce dernier.
2. Demandez à la personne d’écrire son nom sur le récipient, date et heure de collecte,
période d’abstinence et de livrer le spécimen au laboratoire le plutôt possible.
Pendant, le liquide l’acheminement vers le laboratoire doit être maintenu proche que
possible de la température corporelle
3. Pour réduire le délai entre le recueil et l’analyse, on recueille généralement le sperme du
sujet directement au laboratoire, ou il se masturbe dans une pièce prévue à, cet effet, après
s’être soigneusement lavé les mains et le pénis.
Le patient ne doit pas être atteint d’une maladie infectieuse.
6.2. Examen de laboratoire
ATTENTION : manipuler le sperme avec soin parce qu’il peut contenir des agents
pathogènes comme les virus de l’hépatite, le VIH, virus de l’herpès.
1. Mesurer le volume
Le sperme normal est épais et visqueux après é jaculation. Il devient liquéfié habituellement
dans les 60 minutes dû à un fibrinolysine dans le liquide. Une fois liquéfie, mesurer le volume
du liquide en ml à l’aide d’un petit cylindre gradué. Volume normal : généralement 2 ml ou
plus.

2. Mesurer le pH

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En utilisant un papier indicateur de pH gamme étroite, répandre une goutte de sperme

liquéfié sur un papier
Après 30 secondes, enregistrer le pH.
Le pH normal devrait être 7,2 ou plus
3. Mobilité
Placez une goutte (10 – 15 µl) bien mélanger le sperme liquéfié sur une lame et recouvrir
d’une lamelle
Faire la mise au point à l’aide de l’objectif 10x : s’assurer que les spermatozoïdes sont
repartis uniformément (si non, re- mélanger le sperme et examiner une préparation)
En utilisant l’objectif 40x, examiner plusieurs champs pour évaluer la mobilité :
 Excellent (progression rapide) : les spermatozoïdes bougent bien en ligne droite à travers
le champ microscopique ;
 Faible (progression lente) : les spermatozoïdes bougent lentement, en zigzaguant ;
 Progression non (agitation sans progression) : les spermatozoïdes bougent mais
n’avancent pas ‘seules les flagelles bougent).
Dénombrer au total 100 spermatozoïdes, et noter combien sont mobiles. Enregistrer le
pourcentage des mobiles et immobiles
Mobilité normale : Plus de 50 % des spermatozoïdes mobiles dans les 60 minutes suivant
l’éjaculat.
Présence de cellules dans le sperme : noter la présence des leucocytes ou des globules
rouges. En cas de présence de leucocytes, examiner un frottis de coloration Gram

4. Viabilité
Mélanger une goutte (10 – 15 µl) de sperme avec une goutte de 0,5 % de solution
d’éosine sur une lame
Après 2 minutes examiner la préparation au microscope. A l’objectif 10x puis passer à
l’objectif 40x et calculer le pourcentage de spermatozoïdes viable et non viables. Les
spermatozoïdes viables restent non colorés, les spermatozoïdes non viables sont rouges.
Viabilité normale : 75 % de spermatozoïdes ou plus devraient être viables
5. NUMERATION DES SPERMATOZOÏDES

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 En utilisant un tube gradue, faire une dilution de 1/20(10 µl de sperme avec 190 µl de
liquide immobilisant) et bien mélanger
 Remplir la cellule de Neubauer améliorée de sperme dilué, attendre 3 à, 5 minutes pour
que les spermatozoïdes s’installent.
 Compter le nombre de spermatozoïdes à l’objectif 40x
-Neubauer : Compter le nombre de spermatozoïdes dans 4 grands carrés

Nbre de spermatozoïdes comptés x dilution x 10

Nb de spermatozoïdes¿ ml
Nbre de grands carrés

6. La morphologie de spermatozoïdes
Estimer le pourcentage de spermatozoïdes ayant une morphologie normale dans une
préparation colorée.
Mélanger bien le sperme liquéfié, faire un frottis mince sur une lame. Fixer le frottis
encore fais (non séché) avec l’éthanol 95 % v/v pendant 5 à 10 minutes, et laisser sécher à
l’air.
Laver le frottis avec la solution de bicarbonate de sodium formol à éliminer le mucus
pouvant être présents. Rincer le frottis avec l’eau de (1/20) fois
Recouvrir le frottis avec la fuchsine carbone diluée (1/20) et laisser colorer pendant 3
minutes. Laver à l’eau.
Appliquer le contre colorant en couvrant le frottis avec le bleu de méthylène de loeffler
dilué (1/20) pendant 2 minutes. Laver à l’eau, égoutter et laisser sécher à l’air libre
Noyau (tête) ……………………………………bleu foncé
Cytoplasme……………………………………. Bleu pale
Pierce intermédiaire et queue ………… Rose -Rouge
Morphologie de spermatozoïdes
Examiner les spermatozoïdes normaux et anormaux à l’aide de l’objectif100x
Compter 100 spermatozoïdes et calculer le pourcentage d’éléments ayant une
morphologie normale et anormale
Les spermatozoïdes normaux : mesurent 50 - 70µm de longueur. Chacun se compose
d’une tête de forme ovale (avec coiffe d’acrosome) qui se mesure 3 – 5 x2 – 3 µm, une
courte pièce intermédiaire et une queue longue et fine (au moins 45 µm de longueur).
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Dans le sperme normal, au moins 50 % des spermatozoïdes devraient montrer une

morphologie normale. La plupart des échantillons contiennent plus de 20 % formes
anormale
Les spermatozoïdes anormaux : les anomalies suivantes peuvent être observées :
Tête :
 Grosse ou petite
 Forme anormale et tête effilée (pyriforme
 Coiffe de l’acrosome absent ou anormal.
 Noyau contient des vacuoles ou chromatine qui sont inégalement répartie.
 Deux têtes
 Corps résiduel supplémentaire, c’est à dire gouttelette cytoplasmique
Pièce intermédiaire
 Absence ou de taille augmentée
 Apparait divisée (deux volet
 Angulée
Queue
 Absence ou fortement réduite en longueur
 Double queue
 Queue enroule, de calibre irrégulier ou multiple
N.B : les résultats anormaux de sperme doivent être vérifiées en examinant un échantillon
supplémentaire, en particulier lorsque la numération des spermatozoïdes apparaisse non viable et
anormal. Lorsque les anomalies sont présentes dans le second échantillon de sperme et des tests
supplémentaires sont indiqués dans un centre spécialisé.
NORMES

INTERPRETATION TYPE DE SPERMOGRAMME

Asthenozoospermie Normal 50 - 100 %

Légère 35 – 49 %

Importante 20 – 34 %

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Sévère 10 – 19 %

Très sévère 5–9%

Extrême < 5%

TERATOZOOSPERMIE Normal 15 – 100 %

Légère 10 – 14 %

Importante 5–9%

Sévère 1–4%

Extrême 0

POLYZOOSPERMIE 250 Millions

OLIGOSPERMIE Normal 20 – 250 Millions

Légère 15 – 19 Millions

Importante 10 - 14 Millions

Sévère 5 - 9 Millions

Très sévère 1 - 4 Millions

Extrême < 1 Millions

AZOOSPERMIE 0

Anomalies du VOLUME ASPERMIE ABSENCE

HYPOSPERMIE < 1,5 ml

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HYPERSPERMIE > 6 ml

CHAP IX : LES DIFFERENTS PRELEVEMENTS

8.1. L'identité complète du patient doit être renseignée :

 Nom de naissance, prénom, nom marital pour les femmes mariées,

 Date de naissance,
 Sexe,
 Numéro d'entrée d'hospitalisation uniquement pour les patients hospitalisés
 Doivent être mentionnés également :
 L’identité du service demandeur (laboratoire extérieur),
 L’identité du médecin prescripteur et du préleveur,
 La date et l'heure du prélèvement,
 La nature des prélèvements échantillons envoyés : sang, LCR, urines. ...
 La nature des examens demandés
8.2. L’étiquetage de l'échantillon biologique
- Le préleveur doit étiqueter les récipients contenant l'échantillon biologique au moment du
prélèvement, de façon à éviter toute erreur sur l'identité de la personne.
- Le préleveur doit être identifié par son nom ou ses initiales.
- L'étiquette doit comporter le nom, le prénom et la date de naissance du patient, ainsi que
la date, l’heure, la nature et le site du prélèvement.
Attention : les données d'identification du patient portées sur les échantillons doivent être
strictement identiques à celles de la demande d'examen sans quoi l'analyse risque d'être annulée
ou retardée.
9.3. Les modalités de prélèvement
Les précautions "standards" pour tous les prélèvements doivent être appliquées, afin de
réaliser un prélèvement dans des conditions d'hygiène et de sécurité pour le patient et mais aussi
pour le personnel.

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 Tout produit pathologique doit être considéré comme potentiellement infectieux.

 Le préleveur habilité doit respecter les règles de soins et d'hygiène, (port de gants,
blouses, et dans certains cas de masques ou lunettes de protection)
 Avant et après tout prélèvement, le préleveur doit réaliser une ANTISEPSIE DES
MAINS sur des mains propres et sèches en l’absence de souillures macroscopiques avec
une solution hydro-alcoolique à séchage rapide.
 Les prélèvements sont réalisés avec du matériel stérile à usage unique. Le récipient
destiné à recevoir le prélèvement doit être adapté à la nature du prélèvement et des
analyses, en particulier en matière de sécurité et d'étanchéité, afin d'éviter tout risque de
contamination et de pollution.
 Des volumes insuffisants peuvent donc donner lieu à des résultats faussement négatifs.
 La fermeture des récipients doit être hermétique, pour ne pas contaminer l’extérieur des
flacons ou des tubes.
 Il ne faut pas transporter une seringue avec son aiguille ; celle-ci doit être retirée avec un
dispositif de sécurité.
 Le matériel utilisé pour le prélèvement doit être éliminé dans la filière des déchets
infectieux (matériel piquants tranchants dans collecteurs conformes)
9.4. Le personnel réalisant l’acte de prélèvement
 Infirmier(e)s
 Médecins
 Biologistes médicaux
9.5. Différents types de prélèvements
Les différents types de prélèvements qu'on peut effectuer au laboratoire sont :
9.5.1. Prélèvement des sécrétions vaginales
Les prélèvements de l'appareil génital permettent de faire une étude bactériologique
standard ou plus spécifique avec recherche de Chlamydia trachomatis, de mycoplasmes, de
streptocoques et de gonocoques ; mycologique (ex : Candida albicans) ; parasitaire (ex :
Trichomonas vaginales), indispensable à la reconnaissance et au traitement d'une infection
génitale.
Chez la femme, les prélèvements S'effectuent au niveau de l’endocol, du vagin, de la vulve ou
des lésions éventuelles.

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b) Précaution

Prévenir la personne soignée (si besoin la personne de confiance désignée) du

déroulement et du but du prélèvement.
- La patiente devra éviter toute toilette intime, tout traitement local (crème, gels, savons...),
ainsi que tout rapport sexuel dans les 24 heures précédant l’examen.
- Il est conseillé d'éviter le prélèvement pendant la période menstruelle, car la flore est
modifiée (sauf avis contraire du prescripteur),
- Femme ménopausée : paroi vaginale fragile,
- Femme vierge : ne pas poser de spéculum,
- Éviter les contaminations de l'échantillon par les germes du bas de l’appareil génital.
- Si prescription conjointe d'ECBU, réaliser 1 er prélèvement vaginal avant le recueil des
urines'
- Les prélèvements des secrétions vaginal doivent se faire sous éclairage après mise en
place d'un spéculum stérile.
- Les prélèvements se font avant toute application d'antiseptique, avant traitement anti-
infectieux.
b) Matériel et équipement :
Table gynécologique, Spéculum, Écouvillons avec milieux de transport, écouvillons spéciaux,
lames et lamelles, Gants ;
c) Technique
- Placez la patiente en position gynécologique sur le lit,
- Effectuer un lavage simple des mains avant et après le prélèvement.
- Mettre des gants non stériles à usage unique.
- Maintenir la vulve ouverte au moyen de pouce et index
- Introduire le speculum d’abord verticalement puis horizontalement, en suite tourné
de façon que la petite cuillère soit tournée vers le haut par son vice,
- Introduire l’écouvillon stérile dans le vagin,
- Prélever les secrétions au niveau de col de l’utérus
- Enfin, retirer le speculum verticalement pour ne pas traumatiser la patiente.

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- Une fois l'examen réalisé, jeter le matériel à usage unique et décontaminer le

matériel réutilisable pour l'envoyer à la Stérilisation Centrale et faire un essuyage humide
des surfaces (table, chariot, paillasse) au Détergent-Désinfectant.
9.5.2. Prélèvement de secrétions urétrales
Ce prélèvement est effectué pour différentier les différents types d’infections urétrales
a) Matériels : Ecouvillon stérile, Lames, Gants
b) Techniques

Le patient ne doit pas uriner pendant les 4 heures précédant l'examen. Mettre le patient en
position debout.

En cas d'écoulement purulent : on recueille l'écoulement sur l'écouvillon, on peut

éventuellement favoriser son écoulement en massant l'urètre : placer le pouce sur la face
inférieure de la verge et en maintenant une pression modérée, remonter sur 5 cm d'un mouvement
lent. Répéter le massage jusqu'à ce que du pus apparaisse au niveau du méat.

S'il n'existe que peu ou pas d'écoulement : maintenir le sexe d'une main et de l'autre enfoncer
l'écouvillon humidifié de 0,5 à 1 cm, le tourner une fois sur lui-même puis retirer délicatement.
Etaler les écoulements sur les lames.
9.5.3. Prélèvement de crachat
La qualité du prélèvement de crachat conditionne par la fiabilité du résultat. S'assurer que
l'échantillon contient des matières visqueuses ou purulentes et pas uniquement de la salive liquide
et mousseuse.
Il est préférable de prélever les crachats le matin à jeun. Si le prélèvement n'est pas
effectué à jeun, demander au patient de se rincer d'abord la bouche, pour éviter la présence
d'aliments dans les crachats.
Le premier échantillon est prélevé sur place, lors de la consultation ou au laboratoire, à l’air libre
et à l'écart d'autres personnes.
Le deuxième échantillon est prélevé le matin à jeun, par le patient seul à son domicile (lui
fournir le pot et s'assurer qu'il sait comment procéder).

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Si un troisième échantillon est demandé, le prélèvement est effectué au laboratoire lorsque

le patient ramène le deuxième échantillon.

Procédure

 Donner au patient un pot à crachat

 Le patient doit respirer profondément, retenir sa respiration quelques secondes et expirer
recommencer 2 à 3 fois et tousser ; les crachats proviennent du fond des poumons et sont
expulsés au cours d'efforts de toux.
 Recueillir environs 3 ml et fermer hermétiquement le crachoir
Si la collecte du crachat est effectuée en Présence d'un membre du personnel celui
– ci doit porter un masque haute filtration.
Toujours vérifier la qualité de l’échantillon, refaire le prélèvement si l’échantillon
n’est pas satisfaisant.

9.5.4. Prélèvement nasal

Ce prélèvement consiste à recueillir les secrétions nasales pour des recherches
bactériologiques.
a) Précaution
Ne pas employer les produits antiseptiques ni autres traitements externes avant le
prélèvement.
b) Matériels
- Ecouvillon stérile, Lampe à alcool, milieu de culture, lame porte- objet
c) Techniques
- Faire asseoir le malade en face d'une source lumineuse,
- Allumer la lampe à l’alcool
- Prélever les sécrétions au niveau de cloison inter nasal doucement tout en évitant de le
perforer
- Etaler ou tremper dans le milieu de transport ou encore dans le bouillon.
9.5.5. Prélèvement de la gorge

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Ce prélèvement est effectué pour mettre en évidence les germes responsables

d'affections de la gorge : Streptocoques, Bacilles diphtériques, candida, Spirochètes, etc.
a) Précaution

Il doit être réalisé avant toute antibiothérapie locale ou générale.

b) Matériels
- Ecouvillon stérile, Abaisse langue, Lame porte – Objet, Milieu de culture
c) Techniques
- Faire asseoir le malade en face de la lumière,
- Demander au malade d’ouvrir la bouche sans tenir la langue (l’émission du son ‘’aaah’’
par le patient a pour but de diminuer le réflexe nauséeux)
- Pendant ce temps, d’une main, appuyer l’abaisse langue sur le ¾ avant la langue, on doit
voir apparaitre les amygdales et le fond de la gorge
- De l’autre main, introduire l’écouvillon : ne pas toucher la langue qui est plein de germes
- Repérer la partie infectée de la gorge (elle sera très rouge ou blanche selon le cas).
- Frotter l’écouvillon sur la partie enflammée, et si l’on ne remarque rien d’anormal,
écouvillonner les amygdales et les voiles du palais,
- Etaler sur deux lames ou mettre dans le milieu de transport.
- Frotter l'écouvillon sur la partie enflammée, et si l’on ne remarque rien d'anormal,
écouvillonner les amygdales et les voiles du palais,
- Etaler sur deux lames ou mettre dans le milieu de transport
9.5.6. Prélèvement auriculaire
a) Matériels
- Gants, Ecouvillon stérile, Lame porte- objet
b) Techniques
Pus de paracentèse :
Réaliser le prélèvement à l’aide de deux écouvillons fins
(Alginate ou dacron) montés sur tige métallique.
Otites chroniques :
Le prélèvement est en général effectué à l’aide de 2 écouvillons fins (alginate ou
dacron montés sur tige métallique).

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Otites externes :
On élimine les débris et croûtes présents dans le conduit auditif à l'’aide d'un
premier écouvillon en coton humide, puis deux écouvillonnages successifs sont réalisés.

2. 3. 1. 4. Prélèvement oculaire

a) Matériels
- Gants, Ecouvillon stérile, Lame porte- objet

b) Techniques
Elles concernent essentiellement les prélèvements conjonctivaux :
 Pour un examen préopératoire, le prélèvement doit alors être réalisé immédiatement avant
l’intervention chirurgicale
 Conjonctivite : le prélèvement sera effectué
 Avant toute toilette faciale
 Au niveau de l’angle interne de l’œil
 Avec un écouvillon stérile.
9.6. Expédition de prélèvements à un autre laboratoire

Le laboratoire périphérique est appelé à expédier des prélèvements au laboratoire

de l’échelon supérieur ou au laboratoire spécialisé, pour des examens qui ne peuvent pas être
effectués sur place.
Ex : Les examens histologiques d'une biopsie

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