UNIVERSITE MARIEN NGOUABI
FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES
Le 16 mai 2025
NIVEAU : LICENCE 2 BIOLOGIE
L2BIO
UE DE BIOLOGIE EXPERIMENTALE : PHYSIOLOGIE
VÉGÉTALE
Présenté par :
Dr BOKATOLA MOYIKOLA Carine épouse OKO, Maître-Assistante (CAMES), Faculté des
Sciences et Techniques, Université Marien NGOUABI(Botaniste-Ecologue)
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PLAN DES TRAVAUX PRATIQUES
• Manipulation 1 : La photosynthèse
• Manipulation 2 : La succion
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MANIPULATION 1 : La photosynthèse
Définition Energie Energie
lumineuse chimique
Lumière
CO2 + H2O Glucide + O2
Pigments
assimilateurs
Amidon = produit
final de la
photosynthèse 3
Les pigments assimilateurs
Les pigments assimilateurs sont de deux types :
• Les chlorophylles a et b
• Les caroténoïdes (carotènes et xanthophylles)
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Objectifs de la manipulation
Objectif 1 : Mettre en évidence la présence des pigments assimilateurs
et l’amidon qui est le produit final de la photosynthèse.
Objectif 2 : Séparer les différents pigments assimilateurs.
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Méthodes
Séparation des pigments assimilateurs
Il existe deux méthodes pour séparer les pigments assimilateurs
La méthode quantitative (spectrophotométrie)
La méthode qualitative (la solubilité différentielle et la chromatographie sur
papier)
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La spectrophotométrie
La spectrophotométrie mesure l’absorbance d’une solution à une longueur d’onde
donnée.
• Les chlorophylles et les caroténoïdes absorbent certaines radiations dites actives
pour la photosynthèse dans la gamme de longueur d’onde comprise entre 400 et
700 nm
• L’absorption maximale se réalise dans le bleu (inferieur à 500 nm) et dans le rouge
(650 et 700 nm)
• Avec les spectres d’absorption enregistrés, on peut déterminer la concentration du
pigment et obtenir la quantité du pigment d’où on parle de méthode quantitative
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La solubilité différentielle
• Cette méthode sépare les pigments par leur solubilité différentielle.
• La couche benzénique contient la majeure partie de la chlorophylle a et b et la
couche alcoolique les caroténoïdes.
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la chromatographie sur papier
• La chromatographie sépare les pigments par leur vitesse de diffusion
différente dans les capillaires du papier de chromatographie.
• Cette vitesse de migration dépend de la grosseur de molécules (pois
moléculaire). Ainsi les pigments les plus lourds seront en bas et les plus
légers en haut.
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Travail à faire
Feuilles (4g)
Sable + 20ml
d’alcool +
CaCO3 Broyage
broyat
Extrait
alcoolique de Filtration
pigment (EAP)
Filtrat = extrait brut de
pigment
Le reste du filtrat Chromatographie
à diluer jusqu’à sur papier 0,5 ml
25 ml d’alcool du filtrat 10
Tube T1 : La réaction de KRUSS
• 2 ml EAP + 3 ml d’essence + 2 à 3 gouttes d’eau
agitation
+ 3 ml d’essence +
2 à 3 gouttes d’eau
2ml
EAP
T1 11
Tube T2 : La réaction de saponification
T2 = 2 ml EAP + 3 ml d’essence + 2 à 3 gouttes d’eau + KOH
Caroténoïdes
agitation
Précipitation des sels de
+ KOH
chlorophylle
Solvant
T1
T2
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Tube T3 : La réaction de
phéophytinisation
T3 = 2 ml EAP + 2 à 3 gouttes de HCl
agitation
Apparition de la
coloration brune due à
+ HCl la formation de la
phéophytine
2 ml de
EAP
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Tube T4 : La réaction de réapparition de la
chlorophylle
Réapparition de la
coloration verte
suite au retour de
l’atome de
magnésium au
centre des quatre
noyaux pyrroliques
T3 + Zn + chauffage
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comportement de l’atome de magnésium
• Si l’on ajoute du Zn et après chauffage, la coloration verte réapparait
parce que le Zn chasse le Mg2+ qui regagne sa place au milieu des quatre
noyaux pyrroliques.
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Mise en évidence de l’amidon
1. Les feuilles vertes sont couvertes par du papier alu pendant 24 h dans la
nature ;
2. Après récolte, les feuilles sont plongées dans l’alcool bouillante ;
3. Ensuite, les feuilles sont plongées dans l’eau bouillante ;
4. Après les feuilles sont plongées dans l’eau iodée ;
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résultats attendus sur la mise en
évidence de l’amidon
• Les parties non couvertes seront colorées en bleu de nuit
• Les parties recouvertes seront colorées en bleu claire
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conclusion sur la mise en évidence de
l’amidon
• Les parties non couvertes étant éclairées ont réalisé la synthèse de
l’amidon qui est le produit final de la photosynthèse
• Les parties protégées avec du papier alu étant isolée de la lumière,
n’ont pas réalisées la photosynthèse. D’où la coloration bleu clair qui
marque l’absence de la synthèse de l’amidon.
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