Adhérence Cellulaire 2

I. Introduction et Principes généraux 2

II. Récepteurs d’Adhérence 3
A. Sélectines 3
B. Intégrines 3
C. Cadhérines 4
D. Ig-CAM 5
III. Matrice Extracellulaire (MEC) 5
IV. Adhérences non-jonctionnelles (NJ) et Jonctionnelles (J) 7
A. Adhérence Non-Jonctionnelle 7
B. Adhérence Jonctionnelle 8
1. Jonction Serrée = Jonction Occlusive (Zonula Occludens) 8
2. Jonctions GAP = Jonctions Communicantes 9
3. Jonctions d’Ancrage 9
V. Migration Cellulaire 10
Différenciation Cellulaire 11
I. Principes Généraux de la différenciation - Méthodes d’étude 11
II. Les Cellules Souches (CS) 12
B. Cellules souches adultes (somatiques) - Cellules CSS 13
C. Induced Pluripotent stem cells - Cellules IPS 14
D. Signaux de différenciation (présence induit diff) 14
 Adhérence Cellulaire

I. Introduction et Principes généraux

● Adhérence ≠ Adhésion

● L’adhérence cellulaire (Adh. ₵ ) peut

○ Former des tissus par interactions adhésives stables (Adh. jonctionnelle)
○ Être le résultat d’interactions transitoires et labiles (Adh. non-jonctionnelle)
● Adh. ₵ permet :
○ Cohésion cellulaire, tissulaire et formation d’organes
○ Migration, prolifération et différenciation cellulaire
○ Apoptose et développement embryonnaire
○ Remaniement tissulaire
■ Pathologique : métastase & fibrose
■ Physiologique : réparation tissulaire
○ Réponse inflammatoire

● /!\ Cellule polarisée (Pôle Apical et Basal)

● Pôle Apical : Bordure en brosse
 ● Molécules de reconnaissance à la surface des cellules
○ “Récepteurs/Protéines d’adhérence”
○ Adh. Jonctionnelle
■ Cadhérines, intégrines, connexines.
○ Adh. Non-Jonctionnelle
■ Intégrines, sélectines (cellule-cellule)
■ Intégrine, protéoglycanes transmembranaires (cellule-matrice)

● Mécanisme d’adhérence grâce au cytosquelette (réponse aux récepteurs)

○ Actine et Filaments intermédiaires

II. Récepteurs d’Adhérence

- Protéoglycanes (Mucines), Sélectine, Intégrine, Cadhérine, Ig-CAM

- Prot. transmembranaire avec : exo-domaine (récepteur), une séq.TM et un endo-domaine.

2 possibilités :
● Interaction récepteur-ligand dans le domaine Extra₵
● Interaction récepteur-récepteur d’une autre cellule
○ Interaction homophile : Deux récepteurs de la même classe (Cadhérine/Cadhérine)
○ Interaction hétérophile : Deux récepteurs de nature différente (Integr./IgCAM)
● Suite au signal du récepteur, le domaine cytoplasmique interagit avec le cytosquelette intra₵
et/ou protéines de signalisation intra₵, conduisant à une réponse ₵.

A. Sélectines

➔ Adhérence inter₵ transitoire, non-jonctionnel.

➔ Calcium-dépendant
➔ Interaction hétérophile
◆ Cellule-Cellule
● Fixation des lectines (glucides des mucines)
◆ Différentes sélectines : L, P et E
● L-sélectines pour les Leucocytes (avec ₵ endoth. vasc. )
➔ Endo-domaine interagit avec filaments d’actine par des protéines d’ancrage

B. Intégrines

➔ Hétérodimère α/β interagissent avec MEC

➔ Calcium-dépendant
➔ Interaction hétérophile
◆ Cellule-Matrice
● Fixe fibronectine, laminine, collagène
◆ Cellule-Cellule
● Intégrines – Ig-CAM
➔ Endo-domaine interagit avec filaments d’actine via prot. d’ancrage
◆ α-actinine, taline, filamine, vinculine
 ➔ Faible affinité et très dynamique
➔ Interaction avec un motif RGD (arginine, glycine, asparagine)
➔ 18 types de SU α / 8 SU β

➔ Activation des intégrines par:

◆ Out/In
● Interaction Protéines Extra₵ (ligand)
● Permet conformation active des intégrines → Interaction endoD
● Voies de transduction intra₵
◆ In/Out
● Interaction Endo Domaine (SU β) - Taline
● Liaison avec le cytosquelette donc modification domaine intra₵
● Interaction avec un autre R. Adh. ou R. Intra₵

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C. Cadhérines

➔ Dimères à 5 modules - 80 Cadhérines différentes

➔ Calcium-dépendant
➔ Intéraction homophile
◆ Cellule - Cellule
● Domaine Extra₵ interagit en ZIP si assez de calcium

➔ Endo-domaine interagit avec filaments d’Actine

◆ Via caténine

➔ Intervient dans ceinture d’adhésion

◆ Régule la prolifération, migration, différenciation
◆ Cellules très jointives ⇒ Arrêt de la prolifération

➔ Activation :
◆ Concentration Ca2+ faible
● Mauvaise conformation = Pas d’intéraction
◆ Concentration Ca2+ élevée
● Interaction entre dimères de cellules apposées
 D. Ig-CAM

➔ Super famille des Immunoglobulines

➔ INDÉPENDANT du Calcium

➔ Interaction homophile cellule-cellule

◆ N-CAM / N-CAM (Cellule Neuronale / Cellule Neuronale)
➔ Interaction hétérophile cellule-cellule
◆ I-CAM / Intégrines (Cellule Endothéliale / Cellule Sanguine)

➔ Renforce interactions cellulaires et organise les cellules dans un tissu

III. Matrice Extracellulaire (MEC)

● Produite localement par les cellules (Tissu Conjonctif ++)

○ Fibroblastes (Tissus divers)
○ Ostéoblastes (Os)
○ Chondroblastes (Cartilage)
● Peut s’organiser en
○ Calcifiée (os et dent)
○ Matrice transparente (cornée)
○ En Corde (tendons)
● Stabiliser la structure physique des tissus (est nécessaire à l’organisation des tissus)
● Réguler le comportement des cellules en contact (Migration, prolif, forme et fonction)

● 4 Classes de molécules
○ Gel Hydraté
■ Absorbe l’eau
■ Agrégats de Protéoglycane :
● GAGs greffés (chondroïtine sulfate, héparane sulfate)
● Liés à des protéines de liaison
● Liés à l’acide Hyaluronique
○ Success. disaccharide NAC Glucosamine et Acide N-Acétyl

○ Protéines fibreuses structurales

■ Collagène
● Chaîne α riche en Glycine Proline Hydroxyproline
● RE très dense et actif
● Organisé en fibres perpendiculaires (quadrillage)
● Triples Hélices α font des fibrilles, qui font des fibres de collagène.
■ Elastine
● Fibrilline : grosse Glycoprot. permettant intégrité de l’élastine
● Donne élasticité au tissu
○ Conformation relâchée occupe un volume
○ Conformation étirée par tension diminue le volume
● Prot. MEC majoritaire dans l’aorte
○ Mutations entraînent sténose
○ Syndrome de Marfan (rupture de l’aorte)
○ Protéines modulaires d’adhérence
■ Pont entre 2 structures (R. Extra₵ et MEC)
■ Laminine dans la lame basale
● Lie les intégrines et protéoglycanes d’une ₵ au collagène de la MEC
● Structure en croix : Triple Hélice

■ Fibronectine
● Modules RGD associés au collagène en V
● 2 chaînes liés par ponts disulfures
● Module RGD liés à l’intégrine par 2 SU α/β
● Liaison Intégrine - Collagène

○ Enzymes de dégradation/remodelage de la matrice

■ Métalloprotéinases (MP) dégradent les protéines de la MEC
■ Activité catalytique Zinc-dépendante (Zn2+)
■ Inhibées par les TIMP (Inhibiteurs tissulaires des métalloprotéinase)
● Si prod. MP alors prod TIMP pour contrôler la dégradation MEC
■ C’est un remodelage très précis :
● Collagénase dégrade le collagène
● Gélatinase, …

■ Rôle dans l’invasion tumorale :

● Tumeur primitive limitée par une lame basale
● Delamination :
○ MP produites par ₵ cancéreuses dégradent la lame basale
● Intravasation :
○ ₵ Cancéreuses s’échappent de la tumeur primitive et sont
attirées par le vaisseau sanguin.
○ Passage dans l’endothélium vasculaire
● Extravasation :
○ Cellules emportées dans la circulation
○ Capables de résister aux forces de cisaillement du flux sang.
○ Sortent et traversent l’endothélium vasculaire
● Métastases :
○ Échappent au système immunitaire
○ Résistent, s’installent et prolifèrent
○ Production MEC & Lame Basale pour protection
○ Angiogénèse pour nutrition

■ Possible d’agir en thérapeutique :

● Empêcher angiogénèse
● Cibler les MP → TIMP empêchent délamination
● Prodrogues sensibles aux MP → Drogue activée cible les tumeurs.
○ Peu d’effet 2r car moins de MP en conditions physiologiques
IV. Adhérences non-jonctionnelles (NJ) et Jonctionnelles (J)

A. Adhérence Non-Jonctionnelle

● Ponctuelle
● Transitoire
● Pas de formation de Tissu
○ Intéractions des cellules entre-elles à un moment donné
● Intéractions hétérophiles

➢ Leucocyte dans le sang circulant → Multiples R. Adh. non actifs

➢ Attaque d’un microbe / virus :
○ Macrophages recrutées, produisent cytokines pro-inflammatoires
○ Signale endothélium pour recruter leucocytes :
■ Production de récepteurs interagissants avec les R. Mbrnr des leucocytes

➢ L'extravasation des Leucocytes

○ Sélectines (endothéliales) comme première accroche
■ Se fixent aux Ag Sialyl Lewis X (glucide) du Leucocyte
■ Roulent = Affinité d’intéraction faible
○ Intégrines renforcent adhérence, activées par chimiokines
■ Se fixent aux ICAM endothéliaux
○ Adhérence plus stable ⇒ Extravasation
 B. Adhérence Jonctionnelle

● STABLE
● Adh. J. = Jonctions d’Ancrage + Jonctions Serrées + Jonctions Communicantes
○ Jonctions communicantes : Interaction entre cytosol de 2 ₵ adjacentes
○ Jonctions serrées (Mbr. Apicale) : Barrière entre l’apex et le domaine basolatéral
○ Jonctions d’Ancrage : Complexes d’accroche ₵-₵ ou ₵-MEC

Ordre précis :
● Pôle Apical
○ Jonctions serrées
○ Jonctions Adhérentes
■ = Ceinture Adhérence
○ Desmosomes
○ Forment Complexe de Jonction

● Pôle Basal
○ Jonctions communicantes
○ Adhérence ₵-Matrice (Ancrage)
■ Hémidesmosomes
■ Plaques d’adhésion (focales)

● Jonction d’Ancrage sont un ensemble de

○ Jonctions Adhérentes
○ Desmosomes
○ Hémidesmosomes
○ Plaques d’Adhésion

1. Jonction Serrée = Jonction Occlusive (Zonula Occludens)

● Confinent les protéines à la surface apicale / basolatérale des cellules

● Agrègent les protéines qui ne peuvent pas passer ⇒ Restent en apical/basolateral
● Forme une barrière sélectivement perméable entre milieu apical et basolatéral
○ Assuré par les protéines d’Adhérence Transmembranaire
■ Claudine et Occludine

● Ceinture au pôle Apical des cellules épithéliales

○ Barrière à la diffusion de solutés
 2. Jonctions GAP = Jonctions Communicantes

● Formées de connexons complexes protéiques transmembranaires

○ Un connexon ⇒ 6 Connexines
■ Fermé ou Ouvert en réponse à un stimulus
○ Une connexine : Protéine à 4 Seq. TM.
● Si 2 connexons sont alignées : Passage direct de petites molécules d’une ₵ à l’autre
● Rôle dans la coordination des cellules d’un même tissu

● Dans le développement embryonnaire :

○ Au stade Morula :
■ Cellules autour sont adhérentes par jonctions serrées
■ Cellules internes par jonctions communicantes
● Coordination activité des cellules au sein d’un même tissu
● Transport de molécules (AMPc)
○ Au stade blastocyste :
■ Cellules externes toujours en jonctions serrées
■ Cellules internes gardent leur pluripotence grâce aux jonctions GAP

3. Jonctions d’Ancrage

● Rappel : J. Adhérentes – Desmosomes – Hémidesmosomes – Plaques d’Adhésion

● Une jonction d’ancrage comporte toujours :
○ Récepteur Transmembranaire : Intégrine ou Cadhérine
○ Cytosquelette : Filaments d’actine ou intermédiaires
○ Protéines de liaison : Protéines d’Ancrage intra₵

➔ Jonction Adhérente = Zonula Adherens

◆ Adhérence Cellule - Cellule
● Récepteurs Cadhérines
● Filaments d’Actine
◆ Forment une ceinture d’adhérence sous les microvillosités
● En dessous des jonctions serrées, plus décollées
◆ La ceinture d’adhérence est appelée cortex

➔ Desmosomes
◆ Adhérence Cellule - Cellule
● Récepteurs Cadhérines
● Filaments intermédiaires (Kératine)
◆ Protéines intra₵ lient l'endodomaine des cadhérines aux filaments intermédiaires
◆ Forment une plaque extrêmement dense (en MET)
● Très solide, résiste au stress

➔ Hémidesmosomes
◆ Adhérence Cellule - Matrice
◆ Récepteurs Intégrines
◆ Filaments intermédiaires

➔ Plaques d'Adhésion / Contact focaux

◆ Adhérence Cellule - Matrice
◆ Récepteurs Intégrines
◆ Filaments d’Actine
V. Migration Cellulaire

● Mécanisme important dans le développement embryonnaire et construction organisme

● Intervient dans la métastase

● La migration et certaines modif. d’Adhérence se font par digestion de la matrice

○ En réponse à des stimuli : Chimiotactisme
■ Locomotion cellulaire orientée, en réponse à un gradient de concentration
d’un facteur chimique en solution
■ La MEC joue un rôle dans l’établissement de ce gradient
● Activation des Métalloprotéinases (Collagénase, Gélatinase)
○ La cellule active l’expression puis traduction des enzymes de la digestion de la MEC
○ Migration de cellule microgliale :
■ Due à l’excrétion de chimiokines par neurones et astrocytes

● Chambres de Boyden = Filtres poreux permettant l’étude de cette migration pour tester
différents types de cellules dans différents milieux
○ Cellule attirée par le milieu sous le filtre, pénètre et est attirée par les chimiokines
○ Quantification de la migration :
■ On se débarrasse de la partie supérieure, puis fixe les cellules du dessous et
coloration et on observe
■ Bleu : ₵ passées sous le filtre
○ Test dans diff. conditions pour évaluer la capacité des cellules (microgliales) à migrer.

● Test de blessure puis cicatrisation :

○ Gratter une culture cellulaire, sans différencier l’effet de séparation et de migration
○ Les cellules migrent pour cicatriser la blessure
○ Quantifier le temps de cicatrisation après grattage (en %)
○ Biais de prolifération des cellules à considérer
 Différenciation Cellulaire

I. Principes Généraux de la différenciation - Méthodes d’étude

Différenciation : Capacité d’une cellule non spécialisée à donner dans un environnement défini,
différents types cellulaires fonctionnels assurant des fonctions différentes.
→ Pas de perte ni de gain de gènes, mais résulte d’une activation / inactivation de l’expression
de certains gènes de façon extrêmement régulée.
→ Toutes les cellules d’un même organisme ont le même génome.
→ Chaque cellule spécialisée de l’organisme exprime un groupe de gènes différents
(Expression sélective des gènes)

Plusieurs types de différenciation :

● Morphologique et Structurale : 200 types de ₵
○ Analyse Cytologique
■ Microscopie optique, électronique à transmission, fluorescence
● Biochimique et Physiologique
○ Sécrétions d’insuline, influx nerveux, absorption de nutriments, …
● Moléculaire
○ Diversité qualitative et quantitative des ARNm et protéines

Méthodes d’Analyse :

→ Pour Protéines en extrait total ou fragmentation

● WESTERN BLOT
○ Séparation des protéines en fonction de leur masse moléculaire sur un Gel
○ Gel de Polyacrylamide (car protéines) déposé sur un système d’éponge, pour
transfert des protéines sur la membrane
○ Incubation avec anticorps contre la protéine d’intérêt, liées à des enzymes
chimioluminescentes (Révéler la quantité et qualité des protéines)
○ Témoin de charge “Protéine de Ménage” pour uniformisation des quantités de
protéine dans les puits
○ Analyse semi-quantitative (comparer une qtt à la qtt de protéines de ménage)
 ● Electrophorèse bidimensionnelle
○ Séparation des protéines selon leur point isoélectrique (pH)
○ Ajout SDS Page ⇒ charger négativement les protéines
■ Séparation en fonction de leur taille.
○ Observation des protéines (Morphologie et Quantité)
■ Coupe du gel - étude spectrométrie de masse .
Comparaison organe sain/malade
■ Immunofluorescence
Détection présence, abondance et localisation subcellulaire d’une protéine
■ Suivre par RT-PCRQ (Extraction - Rétrotranscription - PCR en temps réel)

→ Pour ARNs :

● RT-PCR
○ Etude du niveau d’expression d’un gène spécifique
○ Analyse du point final et mesure en continu de la synthèse ADN par incorporation de
fluorescence au fur et à mesure des cycles de synthèse d’ADN (relation inverse)

● Puces à ARN
○ Etude simultanée de l’expression de milliers de gènes (PCR qttv en temps réel)
○ Etude sans aprioris
○ Isolation des ARN totaux puis génération d’ADN par rétrotranscription. Marquage
des ADN puis mise en contact avec la puce, et observation de fluorescence à chaque
spot. Comparaison des différences d’expression.

II. Les Cellules Souches (CS)

Cellules souches = stem cell

Progéniteurs = Cellules souches engagées pour la différenciation

● Auto-renouvellement (Division à l’identique)

● Formation de clone cellulaire (diviser indéfiniment en culture et différencier)
○ Une CS donne 2 cellules filles dont
■ Une restera souche
■ L’autre s’engagera en différenciation (committed cell)
■ Souvent multiplication avant

● 4 Catégories de CS selon leur potentiel de différenciation

○ ₵ Totipotentes – Donne l’embryon et tissus Extra-Embryonnaires (placenta).
– Cellules oeufs et après première division.
○ ₵ Pluripotentes – ₵ embryonnaires capables de donner ttes les ₵ de l’organisme.
○ ₵ Multipotentes – Chez l’adulte
○ ₵ Unipotentes

● Début du développement embryonnaire commun à toutes les espèces animales :

○ Caryotype reste stable pour maintenir info génétique
○ CS embryonnaires pluripotentes pendant le blastocyste
○ Mise en culture et donnent par div/diff l’embryon
 A. Cellules souches embryonnaires - Cellules ES

● Isolées de la masse cellulaire interne du blastocyste

● Possèdent un nombre indéfini de divisions symétriques sans différenciation
● Propriétés clonales
● Caryotype Stable au cours du temps
○ Expriment un f. transcription Oct 4 qui maintient en état prolifératif indifférencié
○ Induit un fct. de croissance FGF 4 à activité auto et paracrine (maintient indifférencié)
○ Perte du point de contrôle R en G1
■ Pas besoin de stimulus externe pour enclencher synthèse d’ADN
■ Pas d’activation du Chromosome X et Télomérase reste active

● Mise en culture sur lit de ₵ nutritives → Maintient état Souche

○ Si lit non présent = Différenciation
○ Provoquer différenciation sélective avec les bons fact. de diff.
○ Si amplification puis différenciation ⇒ Obtention de médicament en injectant les
cellules différenciées dans les tissus ou organes lésés (ex. Cerveau pour Parkinson)

B. Cellules souches adultes (somatiques) - Cellules CSS

● Cellules multipotentes dès la naissance, dans tous les tissus différenciées

● Peuvent se renouveler pendant la durée de vie de l’organisme
● Peuvent se différencier dans une cellule du tissus d’origine
● Donnent toutes les cellules de l’organisme
○ Mais une seule cellule multipotente ne donne les cellules que de son tissu

● Recherches de fct. de diff. spécifiques afin de reconstituer des tissus spé. en thérapie
cellulaire

○ Tout tissu adulte présente des ₵ souches capables de se différencier en ₵ de ce

même tissu
● La différenciation hématopoïétique est l’une des plus importante
● Système nerveux, peau et intestins aussi importants

● Renouvellement constant
○ Au niveau de l’épiderme :
■ Lame Basale : Cellules migrent latéralement donc au fond, les cellules
poussent des 2 côtés. Les cellules ne pouvant plus s’accrocher à la lame
basale se différencient : Perte d’Adhérence à la LB = différenciation

○ Au niveau de l'épithélium intestinal

■ CS au fond des cryptes, puis vont monter le long des cryptes et exprimer
diff. fct. de transcrpt. ⇒ La combinaison d'expressions de ces fct. conduit à
une destinée spécifique
■ En se divisant, les ₵ prennent de plus en plus de place et poussent vers le
haut jusqu’à la perte d'adhérence à la LB : Détachement = MORT
● Anoikis (mort ₵ par desquamation)
■ Constamment renouvelé, très rapidement (¾ jours en entier)
■ Si déséquilibre microbiote ⇒ Pathologies diverses (autisme, dépression)

■ 4 Principaux types de cellules diff. par les CS multipotentes

 ● Goblet Cell : Prod Mucus
● Enteroendocrine cells : Prod Hormone régul. alimentation (glucose)
● Paneth Cells : Secrète Peptide antimicrobien
● Cellules Absorbantes
■ Les CS intestinales peuvent se diviser et choisir leur destination en fct. des
facteurs de transcription exprimés
● Math-1 pour cellule sécretrice

C. Induced Pluripotent stem cells - Cellules IPS

● Les IPS sont des CS induites à la pluripotence

● Cellules somatiques (ex: fibroblastes) obligées à exprimer des fct. de transcrpt. pour
redevenir CS.
○ Cellules diff. (ex: de la peau) puis retour en arrière pour faire des IPS pluripotentes

● Réexprimer 4 facteurs de transcriptions (“Les 4 fantastiques”) pour transformer les micro

blastes différenciées en CS indifférenciées
○ Oct4 : Maintient les ₵ en état de CS et peut produire des CS à partir de ₵ diff.

D. Signaux de différenciation (présence induit diff)

● Régulation exocrine
○ Facteurs de croissance : FGF, EGF, TGFβ, PDGF
○ Hormones : Insuline (IGF 1), hormone de croissance
○ Cytokines : Interleukines

○ Réponse cellulaire dépend de la distance de la ₵ par rapport au signal

○ Dépend aussi de l’âge de la ₵ réceptrice (CSE ou CSS)

● Régulation endocrine
○ Par des facteurs de transcription

● Régulation paracrine
○ Protéines régulatrices sécrétées par les cellules diff.
○ Pour éviter un développement anarchique des cellules (rétrocontrôle)