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Efficacité des huiles essentielles de trois plantes aromatiques contre la
mycoflore d’altération du niébé (Vigna unguiculata L., Walp) collecté dans les
magasins de vente du Sud-Bé...
Article in Journal of Applied Biosciences · April 2017
DOI: 10.4314/jab.v109i1.12
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7 authors, including:
Kpatinvoh Brice Euloge Sènan Adjou
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University of Abomey-Calavi
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Edwige Ahoussi-Dahouenon Konfo Tétédé Rodrigue Christian
University of Abomey-Calavi University of Abomey-Calavi
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Kpatinvoh et al., J. Appl. Biosci. 2017 Efficacité des huiles essentielles de trois plantes aromatiques
contre la mycoflore d’altération du niébé (Vigna unguiculata L., Walp) collecté dans les magasins de vente du
Sud-Bénin
Journal of Applied Biosciences 109: 10680-10687
ISSN 1997-5902
Efficacité des huiles essentielles de trois plantes
aromatiques contre la mycoflore d’altération du niébé
(Vigna unguiculata L., Walp) collecté dans les magasins
de vente du Sud-Bénin
Brice Kpatinvoh, Euloge S. Adjou, Edwige Dahouenon-Ahoussi, T. R. Christian Konfo, Brice Atrevi,
Mohamed M. Soumanou, Dominique C. K. Sohounhloue
Laboratoire d’Etude et de Recherche en Chimie Appliquée, Ecole Polytechnique d’Abomey-Calavi, Université d’Abomey-
Calavi, 01 BP : 2009 Cotonou, (Bénin).
Adresse pour correspondance : edahoussi_95@[Link]
Original submitted in on 13th January 2017. Published online at [Link] 31st January 2017
[Link]
RESUME
Objectif : La présente étude vise à évaluer l’activité antimicrobienne des huiles essentielles extraites des
feuilles fraîches de Cymbopogon citratus (L.), de Cymbopogon nardus (L.), et de Eucalyptus saligna (S.), sur
les moisissures isolées des stocks de niébé de quelques magasins de vente du sud-Bénin.
Méthodologie et Résultats : Pour ce faire, un échantillonnage a été réalisé dans les grands magasins de
stockage du niébé situés dans les marchés de Ouando (Porto-Novo) et de Dantokpa (Cotonou) suivi de la
recherche et l’isolement de la mycoflore d’altération. Des tests antifongiques ont été réalisés avec les huiles
essentielles de Cymbopogon citratus (L.), Cymbopogon nardus (L.), et de Eucalyptus saligna (S.), afin
d’évaluer leur potentiel antifongique. Des résultats obtenus, il ressort que les souches fongiques isolées des
échantillons de niébé sont essentiellement Aspergillus flavus (L.), Aspergillus tamarii (K.) et Penicillium
roqueforti (T.). Les tests antifongiques ont permis de démontrer l’activité des huiles essentielles testées contre
la flore fongique contaminant le niébé, avec des concentrations minimales d’inhibition (CMI) dépendantes du
type fongique et de la dose d’huile essentielle testée. Les fortes activités antifongiques sont obtenues avec les
huiles essentielles de Cymbopogon citratus (L.) et de Cymbopogon nardus (L.) avec des CMI comprises entre
de 0,05 et 1µl/ml.
Conclusion : Le potentiel antifongique de ces plantes offre donc une approche novatrice dans la gestion
intégrée des stocks de niébé au Sud du Bénin.
Mots clés : niébé, moisissures, huiles essentielles, activité antifongique.
ABSTRACT
Objective: The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of essential oils extracted from fresh
leaves of Cymbopogon citratus (L.), Cymbopogon nardus (L.), and Eucalyptus saligna (S.), on isolated fungi of
cowpea collected from a few retail store in southern Benin.
Methodology and Results: Sampling was carried out in a few large cowpea retail store located in the markets of
Dantokpa (Cotonou) and Ouando (Porto-Novo), followed by research and isolation of the alteration mycoflora.
Antifungal tests were carried out with various essential oils in other to assess their antimicrobial potential.
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contre la mycoflore d’altération du niébé (Vigna unguiculata L., Walp) collecté dans les magasins de vente du
Sud-Bénin
Results obtained, indicated that the microbial strains isolated from the cowpea samples are essentially
Aspergillus flavus (L.), Aspergillus tamarii (K.) and Penicillium roqueforti (T.). Antimicrobial tests have
demonstrated that essential oils have high antimicrobial activities against fungal flora contaminating cowpea
with minimal inhibition concentrations depend on fungi and the dose of essential oil tested. The highest
antifungal activities were obtained with essential oils from Cymbopogon citratus (L.) and Cymbopogon nardus
(L.) with MIC ranged from 0.05 to 1µl/ml.
Conclusion: The antifungal potential of these plants therefore offers an innovative approach in the management
of cowpea stocks in southern Benin.
Keywords: cowpea, fungi, essential oils, antifungal activity, Benin.
INTRODUCTION
Les problèmes rencontrés en Afrique par les perspective de contrôle post-récolte des denrées
producteurs pendant la phase post-récolte des alimentaires augmente le risque de résidus toxiques
produits agricoles ont été longtemps négligés, dans les produits alimentaires (Hammer et al., 1999).
confondus à ceux liés à la production. Pendant ce En raison de la sensibilité croissante des
temps, les pertes post-récoltes enregistrées sont de consommateurs à cette pollution résiduelle et des
plus en plus croissantes, car les technologies effets toxiques de nombreux fongicides de synthèse,
traditionnelles de stockage et de transformation l'importance de l’utilisation de produits alternatifs
mises en œuvre sont généralement inadéquates naturels devient nécessaire (Bankole, 2004). De
avec des risques d’infestation des produits stockés même, la restriction imposée par l'industrie
par des moisissures toxinogènes (Fandohan et al., alimentaire et les organismes de réglementation sur
2003). Le niébé (Vigna unguiculata L., Walp) l'utilisation de certains additifs alimentaires
constitue la légumineuse à graine la plus importante synthétiques ont conduit à un regain d'intérêt dans la
en Afrique tropicale (Zannou, 1995). Nonobstant son recherche d'alternatives, comme des composés
importance, les pertes causées par les insectes et naturels, en particulier ceux d'origine végétale
les moisissures sont les plus importantes, en raison (Hammer et al., 1999). Plusieurs études ont montré
du climat tropical et inter-tropical très favorable à leur que les extraits de plantes possèdent de
développement et du type de stockage, peu propice nombreuses propriétés dont l’une des plus
à la lutte contre les insectes ravageurs des stocks importantes est l'activité antimicrobienne
(de Groot, 2004). Malgré l’existence d’une gamme (Yehouenou et al., 2010; Soumanou et Adjou 2016).
de technologies visant la réduction des pertes post- L'utilisation des huiles essentielles en tant qu'agents
récolte, plusieurs contraintes persistent encore au antimicrobiens présente deux avantages principaux :
niveau du processus stockage/conservation, ainsi le premier est leur origine naturelle qui signifie plus
que la transformation du niébé. Ces contraintes sont de sécurité pour la population et l’environnement et
beaucoup plus accentuées au niveau de nos le second est qu'elles sont considérés à faible risque
marchés où la méthode de conservation du niébé de développement de résistance par des
favorise la prolifération des moisissures et des microorganismes pathogènes (Tatsadjieu et al.,
déprédateurs dans les produits stockés. La lutte 2010). Ainsi, la présente étude vise à évaluer
chimique a toujours été la principale mesure pour l’activité antifongique des huiles essentielles de de
réduire l'incidence des contaminations post-récoltes Cymbopogon citratus (L.), de Cymbopogon nardus
dans les produits alimentaires. Cependant, (L.) et de Eucalyptus saligna (S.) sur les moisissures
l'application à des concentrations élevées de ces isolées des stocks de niébé en conservation dans
produits chimiques synthétiques dans une quelques grands magasins de vente du Sud-Bénin.
MATERIEL ET METHODES
Échantillonnage du niébé : Les graines de niébé magasins de stockage du niébé situés dans les marchés
utilisées dans cette étude sont collectées dans les grands de Ouando (Porto-Novo) et de Dantokpa (Cotonou). Le
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choix de ces magasins de stockage est basé sur le fait (1995) et Tabuc (2007). La fréquence d’apparition de
qu’ils constituent des zones d’approvisionnement pour les chaque moisissure a été ensuite calculée.
vendeurs grossistes qui se chargent ensuite de les livrer Collecte du matériel végétal et extraction des huiles
aux vendeurs détaillants. essentielles : Le matériel végétal utilisé est constitué des
Détermination de la teneur en eau des graines de feuilles fraiches de Cymbopogon citratus (L.), de
niébé collectée : La teneur en eau des échantillons de Cymbopogon nardus (L.), et de Eucalyptus saligna (S.),
niébé collectés, a été déterminée par étuvage direct de collectées à Abomey-Calavi (Sud du Bénin) et identifiées
5g d’échantillon à 105°C pendant 24 heures, de, selon la par l’Herbier National. L’extraction des huiles essentielles
méthode décrite par De Knegt and Brink (1998). a été effectuée, par hydrodistillation grâce à un appareil
Évaluation de la pression parasitaire fongique : Afin de type Clevenger. L’huile essentielle séparée de la
d’évaluer l’étendue de la contamination par les phase aqueuse a été séchée sur le sulfate de sodium
moisissures dans les différents échantillons d’arachide (Na2SO4) et conservé à 5°C à l’obscurité. Le rendement
collectés, le taux de contamination fongique des d’extraction (R) est exprimé par rapport au matériel
échantillons a été investigué. La technique de végétal frais et son calcul s’est fait de la manière suivante
l'ensemencement direct (Direct Plating) décrit par Pitt et :
al. (1994) a été utilisée. C’est l’une des méthodes R% = (Mh / Ms) x 100 où Mh est la masse d’huile
appropriées pour détecter, évaluer le taux de essentielle obtenue et Ms représente la masse de matière
contamination des échantillons et isoler des mycètes des végétale utilisée.
denrées alimentaires (N’Guyen, 2007). Par échantillon, Tests antifongiques : L’activité antimicrobienne des
cent (100) graines de niébé ont été prélevées puis huiles essentielles a été évaluée in vitro et a pour but de
désinfectées en surface grâce à une solution chlorée déterminer la concentration minimale inhibitrice (CMI) et
(0,4%) pendant une minute à température ambiante. Elles la concentration minimale fongicide (CMF) de ces huiles
sont ensuite placées sur le milieu de culture Yeast Extract essentielles. Ces tests ont été effectués en milieu solide
Sucrose Agar (YES) préalablement coulé dans des boîtes sur les différents types de moisissures isolées des
de Pétri de 9 cm de diamètre. Les boites de Pétri ainsi échantillons de niébé collectés. La détermination de la
ensemencées sont ensuite incubées à 25°C pendant cinq CMI a été réalisée par la méthode décrite par
jours. Cette méthode permet d’isoler prioritairement la deBillerbeck et al. (2001) et Adjou et al. (2012). Dans des
flore fongique se trouvant à l’intérieur des graines. La boites de petri de 9 cm de diamètre et contenant chacun
méthode d'ensemencement par dilution a été également 20 ml du milieu de culture Sabouraud au
utilisée dans le but de rechercher la flore fongique se Chloramphénicol, stérilisé pendant 15 min à 121°C et
trouvant à la surface des graines. La technique utilisée refroidi à 45°C, on ajoute aseptiquement des quantités
est celle décrite par Nguyen (2007). Vingt-cinq (25) décroissantes d’huiles essentielles. Des disques
grammes de chaque échantillon ont été prélevés et mycéliens de 6 mm de la souche fongique à tester sont
additionnés à 225 ml d’eau peptonée tamponée. Le déposés au centre de chaque boite de pétri. Des témoins
mélange a été agité pendant 15 minutes. Ensuite, 0,1 sans extraits ont été réalisés. L'incubation est réalisée à
millilitre de cette suspension a été étalé sur le milieu de 28°C pendant 5 jours. Les diamètres de la croissance
culture YES. Les boites de Pétri ont été incubés à 25°C mycélienne sont mesurés et comparés à celui de témoin.
pendant 5 jours. Le taux de contamination (TC) par La CMI correspond à la plus faible concentration à partir
échantillon a été calculé selon la formule suivante : TC= de laquelle aucune croissance fongique n'est observée.
(NI / NT) x 100 où NT représente le nombre de graines Aux concentrations expérimentales où aucune croissance
présentant un développement de moisissures et NI le ni germination n’est observée, nous avons testé l’activité
nombre total de graines (Adjou et al., 2013). fongicide ou fongistatique. Ce test consiste à prélever le
Isolement et identification des mycètes : Les disque mycélien qui n’a pas poussé en fin d’incubation de
moisissures qui se sont développées sur les différents la boite de Pétri et à le réintroduire dans un milieu de
milieux de culture ont été purifiées par repiquages culture neuf sans huile essentielle. Dans le cas où la
répétés. Les cultures pures de moisissures ont été croissance mycélienne est toujours inhibée, on parle
examinées macroscopiquement et microscopiquement, et d’activité fongicide de l’huile essentielle et dans le cas
leur identification a été réalisée à l'aide du schéma contraire, il s’agit de l’activité fongistatique (Yehouenou et
taxonomique basé sur l’aspect des vésicules, des métula, al., 2012).
des phialides et l’onctogénicité des spores en utilisant la Analyses statistiques : Les résultats ont été analysés
méthode décrite par Singh et al. (1991), Filtenborg et al. par la méthode de variance (ANOVA) à l’aide du logiciel
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STATISTICA (Stat., Soft, Inc, 1995). La comparaison des Cette méthode d’analyse consiste à chercher les
moyennes est effectuée par le test de la plus petite moyennes qui diffèrent significativement les unes des
différence significative LSD (Least Significant Difference). autres. Les différences sont significatives lorsque P<0.05.
RESULTATS ET DISCUSSIONS
Rendement d’extraction : Les rendements obtenus Bénin. Ce rendement est largement supérieur à celui
après extraction des huiles essentielles des trois plantes obtenu par François et al. (2009) et Kanko (2010) qui
investiguées sont présentés dans le Tableau 1. L’analyse sont respectivement 0,67 et 0,7% sur la même espèce
de ce tableau montre que les rendements en huile végétale. Par contre le rendement en huile essentielle de
essentielle varient d’une espèce végétale à une autre. Cymbopogon nardus est proche à celui obtenu par Reis
Ces rendements sont compris entre 1,72% et 6,88%. Le et al. (2006) et supérieur à celui obtenu par Silva et al.
rendement en huile essentielle de Cymbopogon citratus (2011). Ces différences observées au niveau des
(L.) est proche à celui obtenu par Ayédoun et al.,(1997) rendements pourraient être liées à la zone de collecte, la
Nonviho (2010) et Konfo et al. (2012) qui ont étudié les nature du sol, et le stade de développement de la plante.
huiles essentielles extraites des feuilles récoltées au
Tableau 1 : Rendement d’extraction des huiles essentielles
Espèces végétales Familles botaniques Rendement en huile essentielle
(%)
Cymbopogon nardus Poaceae 6,88
Cymbopogon citratus Poaceae 4,31
Eucalyptus saligna Myrtaceae 1,72
Humidité des graines de niébé collectées : Le tableau l’humidité relative de l’air dans cette zone agroécologique.
2 présente les résultats de l’évaluation du taux d’humidité En effet, la zone des pêcheries et des cultures
des échantillons de graine de niébé collectés dans les maraîchères (Zone agroécologique VIII), située au sud
marché de Marché Dantokpa (Cotonou) et de Marché de du Bénin possède une humidité relative très élevée à
Ouando (Porto-Novo). De l’analyse de ces résultats, il cause de l’alizée maritime qui souffle au-dessus de la
ressort que le taux d’humidité des graines de niébé surface de l’Océan Atlantique (Adjou et Soumanou,
collectées varie de 1,66± 0,04% à 1,89± 0,01%. Les 2013). Ces vents recueillent l'eau qui s'évapore de la
taux d’humidité élevés observés dans les échantillons surface des mers et jouent ainsi un rôle fondamental dans
collectés dans le marché de Dantokpa (Cotonou) le soulèvement à très haute altitude de l'air équatorial par
pourraient être liés à la méthode de conservation des convection humide après qu'ils aient atteint la zone de
graines dans les magasins de stockage, mais aussi à convergence intertropicale.
Tableau 2: Taux d’humidité des échantillons de niébé collectés
Lieux de collecte Zone agroécologique Humidité (%)
Marché Dantokpa (Cotonou) Zone des pêcheries et des cultures 1,89± 0,01a
maraîchères
Marché de Ouando (Porto-Novo) Zone des terres de barre 1,66± 0,04b
Les valeurs sont des moyennes (n= 3). Les valeurs portant la même lettre dans la même colonne ne sont pas
significativement différentes (p < 0,05)
Flore fongique des échantillons de niébé collectés : identifiées. Il s’agit de Aspergillus flavus (L.), Aspergillus
Les figures 1, 2 et 3 présentent l’aspect macroscopique et tamarii (K.) et Penicillium roqueforti (T.). Selon Pitt et
microscopique des différentes espèces de moisissures Miscamble, (1995), les moisissures du genre Aspergillus
isolées des échantillons de niébé collectés. D’après les et Penicillium prolifèrent principalement pendant le
observations macroscopique et microscopique, deux stockage sur des substrats dont l’humidité est assez
genres de moisissures répartis dans trois espèces sont basse. Hors le taux d’humidité des échantillons collectés
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au marché Dantokpa (Cotonou) est de 1,89% et de ce fait Houssou et al. (2009) ont isolé et identifié Aspergillus
favorable au développement les moisissures (Castegnaro flavus dans les échantillons de niébé récoltés au Bénin.
et Pfohl-Leszkowicz, 2002). Ces moisissures peuvent se Cette moisissure productrice potentielle d’aflatoxine
développer dans les aliments pauvres en eau au cours du contamine les graines de niébé. Ainsi, la durée de
stockage et les produits dont l’activité hydrique a été stockage est un facteur qui influence l’incidence de ces
réduite. Selon Riba et al. (2005), le manque de ventilation espèces de moisissures sur les graines. Les facteurs
couplé à une température élevée, favorise la croissance zone de collecte et type de variété sont sans effet
des champignons, comme Aspergillus et Penicillium. significatif sur cette incidence (Houssou et al., 2009).
Figure 1 : Aspects macroscopique et microscopique des isolats d’Aspergillus flavus (L.) qui contaminent le niébé en
post-récolte
Figure 2 : Aspects macroscopique et microscopique des isolats d’Aspergillus tamarii (K.) qui contaminent le niébé en
post-récolte
Figure 3 : Aspects macroscopique et microscopique des isolats de Penicillium roqueforti (T.) qui contaminent le niébé en
post-récolte
Tests antifongiques : Les résultats de la détermination concentrations minimales fongicides (CMF) des
des concentrations minimales d’inhibition (CMI) et différentes huiles essentielles testées sur les souches
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fongiques isolées des échantillons de niébé sont l’activité antifongique des huiles essentielles de
présentés dans le Tableau 3. De l’analyse de ces Cymbopogon citratus (L.) et de Cymbopogon nardus (L.)
résultats, il ressort que les huiles essentielles de serait due à l’action des monoterpènes oxygénés. En
Cymbopogon citratus (L.), de Cymbopogon nardus (L.), effet, les travaux de Yoshimura et al., (2010) ont montré
sont plus actives sur les souches microbiennes testées, que les huiles essentielles riches en monoterpènes
que l’huile essentielle de Eucalyptus saligna (S.). Cette oxygénés possèdent des effets délétères sur les
forte activité des huiles essentielles de Cymbopogon membranes mitochondriales des moisissures, ce qui
citratus (L.), de Cymbopogon nardus (L.), pourrait être en provoque une inhibition du métabolisme énergétique
dépendre de leur composition chimique. En effet, l’huile mitochondrial et entraine des perturbations des processus
essentielle de Cymbopogon citratus (L.), collectée au Sud physiologiques et biochimiques de la cellule. L’activité
du Bénin est majoritairement composée de géranial antifongique modérée de l’huile essentielle de E. saligna
(41,3%), de néral (33%), de myrcène (10,4%), de acétate serait due à sa composition chimique qui diffère de celles
de géranyle (2,4%) (Konfo, 2012), et celle de des huiles essentielles de Cymbopogon citratus (L.) et de
Cymbopogon nardus (L.) est majoritairement composée Cymbopogon nardus (L.). De même, l’activité
de citronellal (30,54%), de géraniol (23,93%) et de antimicrobienne des huiles essentielles est non
citronellol (7,65%) (Koba et al., 2009). Ces deux huiles seulement le résultat de ses composés majoritaires mais
essentielles sont majoritairement composées de aussi l’effet de synergie entre les composés minoritaires
monoterpènes oxygénés (87,0% - 74,16%). Ainsi, (Soumanou and Adjou 2016).
Tableau 3 : Activités antifongiques des huiles essentielles testées sur les souches fongiques isolées des échantillons de
niébé collectés
Souches Concentrations Huiles essentielles testées
fongiques Minimales Cymbopogon Cymbopogon nardus Eucalyptus saligna
citratus
Aspergillus flavus CMI (µl/ml) 0,05 1 15
CMF (µl/ml) 1 2 20
Aspergillus tamarii CMI (µl/ml) 0,05 0,2 15
CMF (µl/ml) 1 1 20
Penicillium CMI (µl/ml) 0,05 0,05 10
roqueforti
CMF (µl/ml) 1 1 15
CONCLUSION
La présente étude réalisée sur les échantillons de niébé possèdent des propriétés antifongiques très prononcées
en post-récolte a montré que ces échantillons sont sur les trois espèces de moisissures isolées. Par contre,
contaminées par les moisissures, notamment Aspergillus l’huile essentielle de Eucalyptus saligna (S.) s’est révélée
flavus, Aspergillus tamarii et Penicillium roqueforti Les moins active sur les souches microbiennes testées. Ces
tests antifongiques réalisés sur les souches microbiennes huiles essentielles peuvent donc constituer une
isolées, ont montré que les huiles essentielles de alternative crédible dans la lutte contre les moisissures
Cymbopogon citratus (L.) et Cymbopogon nardus (L.) contaminant le niébé en post-récolte au Bénin.
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