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Cours 2 Méthodes Directes Et Indirectes PDF

Le document présente les méthodes directes et indirectes de transgénèse végétale, en se concentrant sur des techniques telles que l'électroporation, la biolistique et l'utilisation d'Agrobacterium tumefaciens. Les méthodes physiques et chimiques permettent le transfert d'ADN dans les cellules végétales, tandis qu'Agrobacterium facilite ce processus en intégrant son ADN dans le génome des plantes. Ces techniques sont essentielles pour la création de plantes transgéniques.

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Le document présente les méthodes directes et indirectes de transgénèse végétale, en se concentrant sur des techniques telles que l'électroporation, la biolistique et l'utilisation d'Agrobacterium tumefaciens. Les méthodes physiques et chimiques permettent le transfert d'ADN dans les cellules végétales, tandis qu'Agrobacterium facilite ce processus en intégrant son ADN dans le génome des plantes. Ces techniques sont essentielles pour la création de plantes transgéniques.

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Université Batna 2

Faculté SNV
Département d’écologie et environnement
L3 Biotechnologie végétale

Module: Transgénèse végétale

COURS 2

MÉTHODES DIRECTES ET INDIRECTES


DE LA TRANSGÉNÈSE

Dr. Bousnane N.H


1
I. Introduction

Transférer un gène

Des méthodes Directes Des méthodes indirectes

Chimiques (PEG) Biologique (Agrobacterium)

Physiques (Electroporation
Biolistique)

2
3
1.1. Méthodes physiques

 a) L'électroporation
les protoplastes sont placées dans un champ
électrique de très courte durée et de tension
élevée en présence de l‘ADN à transférer.
Le choc électrique induit la formation de
pores dans la membrane, par lesquels l'ADN
pénètre.

4
5
 b) La biolistique
Des billes de tungstène, d'or, ou de platine, enrobées d'A.D.N., sont projetées à
grande vitesse et pénétrent à travers la paroi des cellules d'explants ou de massifs
embryogènes. L'ADN ainsi transféré est libéré et peut s'intégrer au génome de la
cellule hôte.

La transfection des cellules cibles par des


billes métalliques recouvertes d’acides
nucléiques

Ne provoque pas de lyse cellulaire

Utilisée sur des algues, des cellules de


plantes et même des mitochondries et
chloroplastes

Utilisée pour introduire de l’ADN dans des


tissus intacts 6
Protocol basé sur l’utilisation le canon à particules

1 7

3 8

5 9

6 10 7
1.2. Méthodes chimiques

Le traitement au polyéthylène glycol (P.E.G.) (méthode


chimique)

Les protoplastes sont incubées en présence d'ADN et de PEG.


Cet agent chimique entraîne une déstabilisation de la
membrane cytoplasmique des protoplastes et la formation de
pores permettant la pénétration de l'ADN.

8
9
 Agrobacterium tumefaciens est une bactérie en forme de bâtonnet, de la famille des
Rhizobiacées. Elle se développe dans le sol.

 Elle est attirée par des composés phénoliques dégagés par les plantes dicotylédones
lorsqu’elles sont blessées.

 Au niveau de cette blessure, Agrobacterium est capable de se fixer sur les cellules
végétales qui se multiplient de manière importante, donnant naissance à une
formation tumorale située au niveau du collet, d’où le nom de cette formation : la galle
du collet (crown gall).
•Les cellules de la galle libèrent
des composés chimiques
particuliers dans le milieu : les
opines.

• Agrobacterium présentes près


de la galle, dans le sol, sont
capables d’utiliser alors ces
opines comme source d’azote,
mais aussi de carbone et
10
d’énergie.
Agrobacterium tumefaciens est donc capable d’induire, chez une plante
dicotylédone, la formation d’une galle lui fournissant un substrat. Depuis 1974, on
sait que cette induction est due au transfert d’un petit ADN plasmidique depuis la
bactérie jusque dans le génome des cellules de la plante.

Transfère un fragment d’ADN (l’ADN-T) d’Agrobacterium dans le génome de la plante 11


Modification du plasmide pTi

Avant Après 12
Agrobacterium tumefaciens est donc capable d’injecter un ADN dans une cellule
végétale où il s’insère dans le génome chromosomique. Cet ADN est un fragment de
plasmide (ADN circulaire bactérien de petite taille) : le plasmide pTi.

Agrobacterium réalise donc, naturellement, une transgenèse d’une partie de ses


gènes (grâce à pTi) dans un organisme végétal. L’ADN qui est ainsi transféré est
nommé ADN-T. Il a donc été rapidement proposé, une fois ce mécanisme connu, de
le détourner dans un but de transgenèse. Pour cela, il « suffit » de remplacer l’ADN-
T par un autre ADN portant un gène d’intérêt, par exemple.

13
Résumé des étapes de l’obtention d’une
plante transgénique grâce à Agrobacterium
tumefaciens

14

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