Syndromes
lymphoprolifératifs
et LNH de bas grade de
malignité
DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE DES
SYNDROMES LYMPHOPROLIFERATIFS
CHRONIQUES
1
Les syndromes
lymphoprolifératifs chroniques
Néoplasies B matures
Néoplasies T matures
Syndromes lymphoprolifératifs des immunodéprimés :
- déficits immunitaires primitifs
- lymphomes et VIH
- sd lymphoprolifératifs post-transplantation
(PTLD)
- ...
Classification OMS des
hémopathies lymphoïdes matures (1999)
Hémopathies lymphoïdes B Hémopathies lymphoïdes T
•Leucémie lymphoïde chronique/ •Leucémie prolymphocytaire T
lymphome lymphocytique •Leucémie à LGL (grands
•Leucémie prolymphocytaire B lymphocytes granuleux)
•Lymphome lymphoplasmocytaire •Syndrome de Sezary
•Lymphome splénique à ly villeux •Leucémie/lymphome T de
•Leucémie à tricholeucocytes l’adulte
•Lymphome de la zone marginale •Lymphome T
nodal ou extranodal angioimmunoblastique
•Lymphome du MALT •Lymphome anaplasique à
grandes cellules
•Lymphome folliculaire
•…
•Lymphome du manteau
•Lymphome B diffus à grandes
cellules
• … Diebold J. Hématologie
2
Classifications histologiques
• Architecture du ganglion
• Origine de la cellule tumorale (cytologie+
marqueurs)
• Analyse cytogénétique ( t 11-14, t 14-18, t8-
14)
• Analyse moléculaire (Bcl2, Bcl1, C myc…)
Représentation schématique
d’un follicule secondaire
Sinus périphérique
ZONE MARGINALE
lymphocytes B
mémoires
Zone claire apicale
Survie =>
C mémoire ou
ZONE DU plasmocytes
MANTEAU
petites cellules B Zone claire basale
naïves Sélection (apoptose)
CENTRE
GERMINATIF Zone sombre
Prolifération
Zone corticale profonde
Modifié d’après P. Felman & O. Gentilhomme. Atlas de cytopathologie ganglionnaire. Eds Arnette. 1997
3
Ganglion
lymphatique
Centre germinatif
Zone du manteau
Zone interfolliculaire
Correspondance entre les cellules lymphoïdes B
humaines et leur contrepartie lymphomateuse
SANS MUTATION DES REGIONS VARIABLES DES IgH MUTATIONS SOMATIQUES DES REGIONS VARIABLES DES IgH
LAL ZONE DU CENTRE
MANTEAU GERMINATIF
Progé-
niteur Sélection Myélome
B Plasmo-
Plasmocyte
cyte multiple
Cellule Mutations
B naïve somatiques
Cellule B
Cellule B
Prolifération
Cellule duduCG
CG Lymphome folliculaire
B CD5+ Lymphome de Burkitt
Commutation
Lymphome diffus à grandes
de classe cellules
Lymphome B monocytoïde
LLC-B Lymphome du MALT
Lymphome Cellule B ?
du manteau mémoire SLVL
LLC-B
Leucémie à tricholeucocytes ?
Leucémie prolymphocytaire ?
4
Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs
Un diagnostic multidisciplinaire …
–Clinique
–Radiologique
–Anatomo-pathologique
–Biologique
• Hématologie : cytologie, immunologie,
cytogénétique, moléculaire
• Biochimie
–…
Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
1- Morphologie :
- Cytologie :
-sanguine : leucémies / lymphomes leucémisés
Hyperlymphocytose > 4 000 ly/mm3 et/ou lymphocytes pathologiques
- médullaire (ponctions, empreintes de BOM)
Infiltration lymphoïde > 30% et/ou lymphocytes pathologiques
-ganglionnaire (ponctions, empreintes de biopsie)
Valeur d’orientation des cytoponctions ganglionnaires, à confirmer
histologiquement +++
- liquide de ponctions …
- Histologie : indispensable au diagnostic de lymphome
- ganglionnaire
- médullaire : lymphomes médullaires, bilan d’extension
- autres tissus : digestifs, cutanés, ORL, …
5
Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
Frottis sanguin
MGG
Leucémie prolymphocytaire B
Frottis sanguin
MGG
(Site Tribvn)
6
Leucémie à tricholeucocytes
Morphologie :
Frottis sanguin
MGG
(Site Tribvn) DU Oncologie, avril 2005
Lymphome folliculaire
Frottis sanguin
MGG
(Site Tribvn)
7
Proliférations clonales T
Classification morphologique :
Leucémie à LGL Leucémie prolymphocytaire T
Syndrome de Sézary Lymphome T de l’adulte (HTLV1)
(Site Tribvn)
Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
2- Immunophénotypage lymphocytaire :
Permet la mise en évidence d’antigènes cellulaires (membranaires, intra-
cytoplasmiques ou nucléaires). Antigènes clusterisés en « CD »
- Cytométrie de flux :
Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux fluorescents.
Analyse des caractéristiques individuelles de chaque cellule d’une
suspension cellulaire, lors de son passage à travers un faisceau LASER
=> Information sur la taille, la structure et la fluorescence de la cellule,
proportionnelle à l’expression de l’antigène testé
Sang
Moelle
parfois ganglion
8
Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
Immunophénotypage :
CD19 PerCP Cy 5.5
CD19 PerCP Cy 5.5
Lambda PE
Kappa FITC
Mean de fluorescence = 103 CD5 APC CD23 PE
CD19 PerCP Cy 5.5
CD19 PerCP Cy 5.5
CD19 PerCP Cy 5.5
FMC7 FITC CD79b PE CD38 PE
Population monotypique lambda de faible intensité
CD5/CD23+, FMC7-, CD79b faible
(M. Legarff) DU Oncologie, avril 2005
Leucémie lymphoïde chronique (LLC)
Immunophénotypage : indispensable au diagnostic
prolifération CD19+, CD5+, CD23+, CD79b– ou de faible intensité, Ig
Kappa ou Ig Lambda de surface de faible intensité (restriction
monotypique)
Score de Matutes (1994) : 0 1
Prolifération B (CD19+), CD5 + -
clonale : CD23 + -
- scores 4 et 5 = LLC FMC7 - +
- scores 0, 1 et 2 ≠ LLC CD79b/CD22 - ou faible FORT
- score 3 : LLC atypiques ?
IgS faible FORT
Autres marqueurs :
- CD10- - CD38+/-
- CD25- - ZAP-70 +/-
DU Oncologie, avril 2005
9
Immunophénotypage des hémopathies
lymphoïdes chroniques B
Marqueurs LLC LPL HCL HCL-V SLVL MCL FL MZL
Intensité faible forte forte forte moyenne forte moyenne/ moyenne/
des Ig de forte forte
surface
CD19 + + + + + + + +
CD22 - + + + + + + +
CD23 + - - - +/- - +/- -
FMC7 - + + + + + + +
CD5 + +/- - - +/- + - -
CD10 - +/- - - - - +/- -
CD25 +/- - + - - - +/- +/-
CD11c +/- - + + + - +/- +/-
CD103 - - + + - - - -
CD79b - + + + + + + +
+ = positif dans la majorité des cas ; +/- = positif dans la minorité des cas ; - = négatif dans la majorité des cas
LLC : Leucémie lymphoïde chronique LPL : Leucémie prolymphocytaire
HCL : Leucémie à tricholeucocytes HCL-V : Forme variante de HCL
SLVL : Lymphome splénique à lymphocytes villeux MCL : Lymphome du manteau
FL : Lymphome folliculaire MZL : Lymphome de la zone marginale
DU Oncologie, avril 2005
Proliférations clonales T
Classification immunologique :
Proliférations de cellules T matures CD3+ TCR+
Marqueurs communs : CD3, CD2, CD5
Autres marqueurs : CD4, CD8, CD25, CD56
LGL-T LGL-NK LP ATL Sézary
CD3/TCR + - + + +
CD2 + + + + +
CD5 + - + + +
CD4 - - + + +
CD8 + - - - -
CD25 - - - + -
CD56 - + - -
LGL : Large granular lymphocyte, NK : Natural Killer, LP : Leucémie prolymphocytaire,
ATL : Adult T Leukemia/Lymphoma
DU Oncologie, avril 2005
10
Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
2- Immunophénotypage lymphocytaire :
- Techniques immuno-histochimiques :
Sur coupes de tissu
Réalisées par les anatomo-pathologistes
CD20 CD3
(Photos : F. Charlotte)
CD20
Ganglion
lymphatique
CD3
Bcl-2
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Lymphome lymphocytique
Petits lymphocytes ( )
prolymphocytes ( )
Immunophénotype
CD20+
CD5+
CD23+
CD10-
Expression de Bcl-2
Hyperplasie folliculaire LNH folliculaire
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Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
3- Cytogénétique :
- Conventionnelle : caryotype
analyse tout le génome
Ex. t(14;18)
- Moléculaire : FISH « Fluorescent In-Situ Hybridization »
ne détecte que les anomalies
recherchées
BCL2, 18q21, green
14q32.3, red,
http://www.infobiogen.fr/services/chromcancer/Anomalies/t1418ID2006.html
Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »
•Détection moléculaire d’une population lymphoïde clonale :
=> Réarrangement des gènes des chaînes lourdes des Immunoglobulines
et du TCR gamma
Configuration germinale des gènes IgH
1 2 3 4 5 n 1 2 3 4 123456
n
RECOMBINAISON D-J
RECOMBINAISON V-D-J
Gènes IgH
réarrangés
VH JH
!!! défaut possible d’informativité si
hypermutations somatiques +++ Leukemia (2003) 17, 2257−2317.
=> toujours analyser un pvt tumoral
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Les différents examens biologiques
dans le diagnostic des SLPC
4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »
•Détection de réarrangements génomiques :
Ex. : IgH-Bcl2 équivalent de la t(14;18)
IgH-Bcl1 équivalent de la t(11;14)
Tous ne sont pas analysables par PCR :
ex. réarrangements de c-Myc
•Détection de l’hyperexpression de la cycline D1 :
PCR quantitative sur cDNA (après rétro-transcription de
l’ARN)
Prélèvements analysables :
sang, moelle, ganglions, tissus, liquide de ponction, ...
Programme
• Leucémie lymphoïde chronique
• Autres syndromes lymphoprolifératifs chroniques
• Cas Cliniques
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