RÉPUBLIQUE DE CÔTE D'IVOIRE

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UPR DE GENETIQUE

MASTER 1 – BIOTECHNOLOGIE-BIOSECURITE-BIORESSOURCES

COURS MAGISTRAL
UE MUTATIONS GENETIQUES

ECUE 1 : MUTATIONS GENIQUES

Dr. N’ZI Jean-Claude

 TABLE DES MATIERES

INTRODUCTION.................................................................................................................................................................................. 4

I. GENERALITES DES MUTATIONS GENIQUES.......................................................................................................................... 5

I.1. Classification des mutations ..............................................................................................................................5

I.1.1. Classification selon qu’elles se transmettent ou non ......................................................................................... 5
I.1.1.1. Les mutations somatiques .......................................................................................................................... 6
I.1.1.2. Les mutations germinales .......................................................................................................................... 7
I.1.2. Classification par l’aspect du phénotype affecté ................................................................................................ 7

I.2. Taux de mutation ..............................................................................................................................................8

I.3. Utilisation des mutations ...................................................................................................................................9

I.3.1. En agronomie ..................................................................................................................................................... 9
I.3.2. Chez l’homme ..................................................................................................................................................... 9

II. DETECTION ET SELECTION DES MUTATIONS GENIQUES ........................................................................................... 10

II.1. Méthodes de détection des mutations ........................................................................................................... 10

II.1.1. Chez les organismes haploïdes ........................................................................................................................ 10
II.1.2. Chez les organismes diploïdes ......................................................................................................................... 10

II.2. Systèmes de sélection des mutants................................................................................................................. 11

II.2.1. Systèmes de sélection chez les microorganismes ............................................................................................ 11
II.2.1.1. La sélection de la réversion des mutants auxotrophes............................................................................ 11
II.2.1.2. La technique de réplique sur velours ....................................................................................................... 12
II.2.1.3. L’enrichissement par filtration ................................................................................................................. 12
II.2.1.4. L’enrichissement à la pénicilline............................................................................................................... 12
II.2.1.5. Sélection de la résistance ......................................................................................................................... 12
II.2.2. Systèmes de sélection chez les organismes supérieurs ................................................................................... 14
II.2.2.1. La technique de la lignée sans petits fils .................................................................................................. 14
II.2.2.2. L’utilisation du chromosome XX (double X) ou X attaché......................................................................... 15

III. MUTATIONS AU NIVEAU DE LA STRUCTURE DE L’ADN ET DE LA PROTEINE .................................................... 16

III.1. Les mutations géniques au niveau de la structure de l’ADN ........................................................................... 16

III.1.1. Les additions et les pertes de bases ............................................................................................................... 16
III.1.2. Les substitutions ............................................................................................................................................. 18

III.2. Les mutations géniques au niveau de l’ARN messager ................................................................................... 18

III.2.1. Les mutations sans effets dites silencieuses................................................................................................... 19
III.2.2. Les mutations conservatrices ou neutres. ...................................................................................................... 19
III.2.3. Les mutations « faux sens » ........................................................................................................................... 19
III.2.4. Les mutations non-sens .................................................................................................................................. 19
III.2.5. Les mutations de phases ................................................................................................................................ 19
III.2.6. Les réversions ................................................................................................................................................. 21
III.2.6.1. La réversion exacte ou réversion vraie ................................................................................................... 21
III.2.6.2. La réversion équivalente ......................................................................................................................... 21

III.3. Les suppressions ............................................................................................................................................ 21

III.3.1. La suppression intra génique .......................................................................................................................... 21
III.3.2. Les suppressions extra géniques .................................................................................................................... 22
III.3.2.1. Les suppresseurs informationnels qui agissent au niveau de la traduction. .......................................... 22
III.3.2.2. Les suppresseurs physiologiques ............................................................................................................ 22

2
IV. BASES MOLECULAIRES DES MUTATIONS GENIQUES .................................................................................................. 23

IV.1. Les mutations spontanées ............................................................................................................................. 23

IV.1.1. Les erreurs dans la réplication de l’ADN ........................................................................................................ 23
IV.1.2. Les lésions spontanées ................................................................................................................................... 25

IV.2. Les mutations induites .................................................................................................................................. 26

IV.2.1. L’incorporation d’analogues de bases ............................................................................................................ 26
IV.2.1.1. Exemple de le 5 Bromo-Uracile (5BU)..................................................................................................... 26
IV.2.1.2. Exemple de la 2 Amino-Purine (2AP) ...................................................................................................... 26
IV.2.2. Modification des bases in situ. ....................................................................................................................... 27
IV.2.2.1. L’acide nitreux (HNO2) ............................................................................................................................ 27
IV.2.2.2. L’hydroxylamine (NH2OH) ...................................................................................................................... 28
IV.2.2.3. Les agents alkylants ................................................................................................................................ 28
IV.2.2.4. Les acridines ........................................................................................................................................... 28
IV.2.2.5. Les radiations non ionisantes.................................................................................................................. 29
IV.2.2.6. Les radiations ionisantes. ........................................................................................................................ 29
IV.2.3. Les courbes d’inactivation .............................................................................................................................. 30

V. MECANISMES BIOLOGIQUES DE REPARATION ............................................................................................................... 31

V.1. Réversion directe de l’altération .................................................................................................................... 31

V.2. Excision Réparation des simples brins............................................................................................................. 31

V.2.1. Réparation par excision de base .................................................................................................................... 31
V.2.2. Réparation par excision de nucléotides ......................................................................................................... 32
V.2.3. Réparation de mésappariements ou MisMatch Repair (MMR) du système Mut HLS ................................... 32

V.3. La tolérance de la zone endommagée ............................................................................................................. 32

V.3.1. Réparation par recombinaison ....................................................................................................................... 32
V.3.2. Réparation post réplicative. ............................................................................................................................ 33
V.3.3. Réparation mutagène ..................................................................................................................................... 33

V.4. Mécanismes de réparation eucaryote ........................................................................................................... 33

CONCLUSION : MUTATIONS ET BIODIVERSITE ................................................................................................................... 35

EXERCICES DE MUTATIONS GENIQUES .................................................................................................................................. 36

3
INTRODUCTION

La mutation est un événement fortuit et rare qui va entraîner un changement héréditaire du

matériel génétique (ADN ou ARN).
- L’événement est fortuit en ce sens qu’il n’est causé ni par la disjonction, ni par la
recombinaison. En effet, une mutation peut toucher au hasard n'importe quel gène, de n'importe
quelle cellule, à n'importe quel moment. C'est un événement aléatoire.
- L’événement est rare en ce sens qu’il se produit à des fréquences très faibles (fréq = 10-6).
- Le caractère héréditaire du changement tient au fait que ce changement est transmis aux cellules
filles et même aux générations suivantes.

Plusieurs agents physiques et chimiques sont en mesure de produire des mutations. Les effets
délétères (ou plus rarement bénéfiques) sont dus à un changement dans le type ou dans la
séquence des bases. L’ADN endommagé fort heureusement peut être réparé. Si ce n’est pas le cas,
l'information contenue dans l’ADN est alors modifiée, produisant des protéines aux fonctions
nouvelles. Ces dernières peuvent à leur tour changer le phénotype de l’organisme concerné,
qualifié alors de « mutant ».

L’importance biologique des mutations est considérable puisqu’elles sont responsables de la

variation qui existe au sein des populations et qui selon la théorie néodarwinienne a permis
l’évolution des espèces. En effet, c’est Darwin qui avait attiré le premier l’attention sur
l’importance des mutations, mais c’est Mendel qui en a fait usage dans ses expériences célèbres.
Le terme de mutation ne fut néanmoins introduit pour la première fois qu’en 1901 par Hugo de
Vries qui travaillait sur une plante nommée Oenothera lamarckiana. Dans les cultures qu’il
réalisa sur cette plante, il observait généralement l’apparition d’une forme géante qu’il baptisa «
forme gigas » et qui par la suite s’avéra être un mutant tétraploïde 4n = 48 alors que la forme
sauvage est diploïde à 2n = 24.

L’ensemble des mutations connues peut se spécifier en deux grandes catégories. La première est
celle des mutations géniques qui affectent la structure des gènes. Elles sont les plus communes.
La deuxième catégorie est celle des mutations chromosomiques qui modifient la structure ou le
nombre de chromosomes. Lorsqu’une configuration chromosomique entière est répliquée, ou bien
lorsque les chromosomes de deux génomes différents se fondent dans la même cellule, la mutation
chromosomique devient alors une mutation génomique.

L’objectif principal de ce cours porte sur la connaissance et la compréhension des

mutations géniques. Les objectifs spécifiques peuvent se décliner en trois points :
- Connaitre la classification, les méthodes de détection et l’utilisation des mutations
géniques.
- Connaitre et comprendre les bases moléculaires des mutations géniques.
- Connaitre et comprendre les mécanismes de réparation des mutations géniques.

4
I. GENERALITES DES MUTATIONS GENIQUES

La mutation génique est un changement héréditaire qui se produit dans un gène unique ou aux
abords de celui-ci. De ce fait, elle est encore appelée mutation ponctuelle.
Lorsqu’on parle de changement, il faut avoir comme point de référence un standard. En
génétique, le standard est fourni par ce qu’on appelle le type sauvage (+) qui peut être soit une
forme qu’on trouve dans la nature, soit une forme utilisée comme standard au laboratoire. La
mutation sera donc tout changement qui provoque un écart par rapport au type sauvage. On
appellera par contre mutation réverse ou réversion tout changement qui provoque un retour de
la forme mutante au type sauvage.
Mutation Réversion
+
a → → → a → → → a+

I.1. Classification des mutations

La classification des mutations peut se faire selon leurs effets sur la structure de l’ADN ou
selon leurs effets sur la fonction des protéines. Mais elle peut se faire aussi par la capacité ou
non de se transmettre ou par l'aspect du phénotype affecté.

I.1.1. Classification selon qu’elles se transmettent ou non

Les mutations peuvent se produire soit dans un tissu somatique soit dans un tissu germinal.
Elles s’appellent alors mutations somatiques et germinales. Une mutation qui touche à la fois
les cellules somatiques et les cellules germinales est une mutation constitutionnelle.
Le plus souvent, une cellule comportant une mutation meurt à plus ou moins brève échéance.
Elle sera alors facilement remplacée. Mais si la cellule mutée reste vivante, elle sera par
divisions successives à l’origine d’un clone cellulaire c'est-à-dire une population de cellules
portant la même mutation. Dans beaucoup de tissus, les cellules ont tendance, après une
division, à rester proches les unes des autres : le résultat observable dans un tissu est l’existence
d’un secteur mutant. Ce secteur sera d’autant plus important que la mutation intervient tôt au
cours du développement de l’organisme. Il peut tout aussi bien correspondre à un organe entier
qu’à un ensemble plus ou moins restreint de cellules. Plus un événement mutationnel se produit
tôt dans le développement, plus le clone sera important. Par contre si la mutation apparait
tardivement, le clone de cellules mutées est moins important.

O
O O
O O O O
O O O O O O O O
OOOOOOOO OOOOOOOO →
Clone cellulaire avec mutation intervenant tôt

5
 O
O O
O O O O
O O O O O O O O
OOOOOOOO OOOOOOOO →
Clone cellulaire avec mutation intervenant tardivement

Une mutation entraine parfois une cancérisation de la cellule. On comprend alors qu’un
foyer de cellules cancéreuses puisse se développer dans un organe.

I.1.1.1. Les mutations somatiques

Une mutation somatique est une mutation qui se produit dans un tissu somatique en
développement et qui provoque l’apparition d’un clone c'est-à-dire une population de cellules
mutantes identiques, descendant de la cellule qui a subi la mutation initiale. On l’appelle aussi
mutation acquise puisqu’elle n’était pas présente initialement dans le génome de la cellule.
Les mutations somatiques c'est-à-dire celles qui ne concernent pas les cellules sexuelles
disparaissent au plus tard avec la mort de l’individu. Elles ne sont donc pas transmises à la
descendance. Le phénotype du clone muté contraste avec celui des cellules sauvages qui
l’entourent. Le clone mutant peut être facilement identifiable à l’œil nu.

Mutation somatique

Il est évident qu’une mutation somatique ne peut pas se transmettre à la descendance.

Cependant chez les végétaux par exemple, si un explant récupéré à partir d’un tissu de clone
mutant est mis en culture in vitro, la plante qui se développera à partir de cet explant aura des
cellules germinales mutées et pourra transmettre la mutation à sa descendance.

→→→

Régénération de plantes mutées à partir d’une mutation somatique

6
I.1.1.2. Les mutations germinales
Les mutations germinales c'est-à-dire celles qui se produisent dans les cellules à l’origine des
gamètes sont au contraire transmissibles à la descendance de l’individu. En effet, une
mutation portée par un spermatozoïde ou un ovule se retrouvera présente dans la cellule œuf et
par conséquent dans toutes les cellules du nouvel individu. Elle devient alors héréditaire.
Si un individu de phénotype en apparence tout à fait normal et dont les caractères étaient
normaux peut porter des cellules reproductrices mutées, celles-ci ne seront décelées que si elles
participent à la formation d‘un zygote.
La reine Victoria fut probablement à l’origine d’une mutation germinale récessive liée au
chromosome X et correspondant à l’hémophilie qui est le défaut de la coagulation du sang.
Cette mutation se manifeste en effet chez certains de ses descendants mâles.

I.1.2. Classification par l’aspect du phénotype affecté

En se basant sur les moyens par lesquels les mutations peuvent être identifiées, on peut
proposer une classification des mutations sans qu’elle ne soit pour autant exhaustive. En effet,
les conséquences phénotypiques d’une mutation peuvent être si multiples que des techniques
biochimiques sophistiquées peuvent être nécessaires pour la mettre en évidence. On connaît :
- Les mutations morphologiques : qui modifient les caractères morphologiques d’un
organisme ; forme, couleur, taille, etc. Exemples drosophiles à ailes vestigiales.
- Les mutations létales : qui se reconnaissent à leur effet létal sur l’organisme. Exemple chez la
drosophile, on connait des mutations létales liées au sexe qui sont provoquées par des rayons X
(Rx).
- Les mutations conditionnelles : qui ne s’expriment que dans certaines conditions appelées
conditions restrictives. Dans les conditions dites permissives c’est le phénotype normal qui
s’exprime. Dans cette classe, les mutants thermosensibles ont été les plus utilisés. Chez la
drosophile, on connaît des mutants dits létaux thermosensibles dominants. Les mouches
hétérozygotes pour cette mutation sont normales à 20 °C qui est la température permissive,
mais elles meurent lorsque la température s’élève à 30 °C qui est la température restrictive.
- Les mutations biochimiques : qui provoquent un changement d’une fonction biochimique de
la cellule par exemple un changement dans la croissance. Si la mutation touche le caractère
croissance, l’individu mutant ne pourra plus pousser ou proliférer. Mais souvent, la croissance
peut être rétablie par l’addition dans le milieu de culture d’une substance nutritive particulière.
Les mutants biochimiques ont été abondamment exploités chez les microorganismes. En effet,
de nombreux microorganismes sont prototrophes c'est-à-dire qu’ils sont autonomes du point
de vue nutritionnel et qu’ils peuvent subsister sur un milieu minimum composé de simples sels
inorganiques, d’une source de carbone, d’une source d’azote et de l’énergie. Les mutants
biochimiques sont le plus souvent auxotrophes c'est-à- dire qu’ils requièrent pour pousser, un
milieu contenant des substances nutritives complètes. On connaît chez les champignons des
mutants auxotrophes pour l’adénine. Ces mutants ne peuvent pousser qu’en présence d’adénine.
On dit encore qu’ils ne peuvent pousser en absence d’adénine.
- Les mutations de résistance : elles confèrent la capacité de croître sur un milieu contenant un
inhibiteur particulier ou un pathogène auquel le type sauvage est sensible. Exemple : Souches
de bactéries sensibles à la streptomycine.

7
I.2. Taux de mutation
On définit le taux de mutation comme étant la probabilité d’apparition d’une mutation par
cellule et par génération. L’évaluation du taux de mutation est difficile. En effet, s’il est facile
de déterminer la fréquence des cellules mutées dans une population, cette fréquence ne reflète
qu’indirectement le taux de mutation. Chez les bactéries par exemple, la fréquence de bactéries
mutées ne sera égale au taux de mutation que si toutes les bactéries mutées observées dans un
étalement ont subi la mutation après la division précédant la mutation. Or, il n’en est pas ainsi
car plusieurs bactéries peuvent correspondre à une mutation si elles sont issues d’une même
bactérie qui a subi la mutation plusieurs générations auparavant.
O
O O
O O O O
O O O O O O O O
OOOOOOOO OOOOOOOO instant t
Taux de mutation à l’instant t = fréquence de mutation = 5/16

O Taux de mutation

O O
O O O O
O O O O O O O O
OOOOOOOO OOOOOOOO instant t
Taux de mutation à l’instant t = 4/16 ?
Chez les organismes supérieurs, on ne peut avoir que des estimations imprécises car la plupart
des mutations ne se manifestent pas dès leur production. De plus, lorsque le caractère muté est
récessif, il faut chez l’homme par exemple plusieurs générations avant que deux allèles mutés
se trouvent à l’état homozygote pour faire apparaître le phénotype mutant nouveau.
Certains taux de mutations spontanées ont été mesurés chez certains organismes. Les chiffres
montrent que ces taux varient d’un organisme à l’autre et chez un même organisme, d’un gène à
l’autre. Cependant, il est établi que toutes les mutations spontanées ont un taux faible. Pour
monter le taux de mutation, on utilise des agents mutagènes.
En 1927, Müller a démontré que les rayons X pouvaient induire des mutations chez la
drosophile. L’année suivante Stadler (1928) a induit des mutations chez l’orge par irradiation
aux rayons X. Les rayons X (Rx) ainsi que les rayons α (Rα), les rayons β (Rβ) et les rayons γ
(Rγ) appartiennent à la classe des radiations dites ionisantes. Toutes les radiations ionisantes
sont mutagènes. On a fait des études expérimentales sur l’induction des mutations par les Rx et
les autres radiations ionisantes chez des organismes variés. Les résultats obtenus ont conduit à
plusieurs conclusions importantes :
- Les radiations ionisantes provoquent des mutations géniques et des mutations
chromosomiques.
- Le taux d’apparition des mutations est fonction de la dose de Rx utilisés. Cette fonction dans
8
le cas de la mutation génique semble linéaire.
- L’effet mutagène des radiations ionisantes est cumulatif c’est-à-dire que le taux de mutation
est fonction de la dose totale de radiation reçue par l’organisme. Par exemple, on a montré chez
la drosophile qu’une dose massive de 6000 roentengs (unité de mesure du taux d’ionisation
provoquée par les Rx) donne 12 % de mutation létale liée au sexe.
Si cette dose est donnée en trois doses de 2000 roentengs toutes les huit heures, on constate
qu’on obtient le même pourcentage de létalité liée au sexe.
Mais cette dernière situation n’est pas générale car chez la souris, on a montré qu’une
irradiation chronique avec de faibles doses de Rx est moins mutagène qu’une dose équivalente
donnée en une seule fois.

I.3. Utilisation des mutations

I.3.1. En agronomie
L’existence des mutations est connue depuis très longtemps par les éleveurs et les agriculteurs
qui en ont tiré parti pour obtenir de nouvelles races d’animaux domestiques et de nouvelles
variétés de plantes cultivées utiles à l’homme. Le domaine où les mutations sont les plus
recherchées est le domaine de l’horticulture précisément dans la floriculture.
L’amélioration des plantes est basée sur la variation naturelle qui existe et qui est mise à profit
dans les hybridations et dans la sélection des recombinants désirés au sein d’une descendance.
Mais on peut indure la variabilité par l’intervention humaine grâce aux traitements mutagènes.
On peut procéder de différentes manières :
- On peut « mutagéniser » le pollen qui servira à la pollinisation. Dans ce cas, les mutations
dominantes apparaîtront à la génération suivante, les mutations récessives pourront être mises
en évidence par autofécondation.
- On peut aussi « mutagéniser » les graines. Dans ce cas, si une cellule de l’embryon qu’elle
renferme peut être atteinte, elle deviendra partie soit d’un tissu germinal, soit d’un tissu
somatique. Dans le cas d’un tissu somatique, toute mutation dominante se manifestera dans la
plante dérivée de cette graine et ce sera là la fin du voyage pour cette mutation. Une mutation
dans un tissu germinal par contre se manifestera au sein des générations suivantes, ce qui
permettra de sélectionner les mutants désirés.
Les exemples de plantes améliorées et sélectionnées à partir de mutations survenues
naturellement ou induites artificiellement par les chercheurs sont nombreux et variés.

I.3.2. Chez l’homme

La relation causale entre la survenue d'un cancer et l'existence d'altérations génétiques est
désormais établie. Dans l'immense majorité des cancers, ces altérations sont somatiques,
uniquement présentes dans les cellules tumorales. Dans 2 % environ des cancers humains, elles
sont constitutionnelles, présentes dans la lignée germinale, et prédisposent alors à la survenue
de cancers héréditaires. Ces altérations génétiques observées au cours de la progression
tumorale sont diverses : délétions chromosomiques, translocations, amplifications et
réarrangements géniques, duplications ou pertes de chromosomes entiers et mutations
ponctuelles. À terme, l'identification de ces mutations aura des retombées diagnostiques,
pronostiques et thérapeutiques.

9
II. DETECTION ET SELECTION DES MUTATIONS GENIQUES

II.1. Méthodes de détection des mutations

La première condition à remplir par une méthode de détection est au moins de permettre dans
certaines conditions à l’allèle mutant de se manifester au niveau phénotypique. De cette
manière une mutation même rare n’échappera pas à la détection.

II.1.1. Chez les organismes haploïdes

La méthode de détection des mutations chez les organismes haploïdes est fort simple car
l’apparition d’un nouvel allèle mutant se manifeste directement. Dans certains cas, le mutant
peut être identifié directement. Chez Neurospora par exemple, des mutations auxotrophes pour
l’adénine ont été localisées au niveau de différents locus. L’une d’entre elles l’adénine-3 (adé-3)
se caractérise par le fait que les mutants accumulent un pigment rougeâtre dans leurs cellules
lorsqu’ils poussent sur un milieu contenant de l’adénine en faible concentration. Pour identifier
de tels mutants, il suffit de faire pousser les spores asexuées sur un milieu contenant peu
d’adénine. Les colonies de couleur rougeâtre qui sont les colonies mutantes se verront
facilement parmi les colonies blanches de type sauvage.
Les différentes situations pour la détection du phénotype mutant chez les haploïdes sont
résumées dans le tableau 1 ci-dessous.
Mutations Mutations Mutations de
Conditionnelles Auxotrophes Résistance

Conditions Conditions Milieu Milieu Sans Agent Avec Agent

permissives restrictives minimum complet inhibiteur inhibiteur

Type Pas de
sauvage Normal Normal Croissance Croissance Croissance croissance

Type Pas de
mutant Normal Mutant Croissance Croissance Croissance Croissance

II.1.2. Chez les organismes diploïdes

Chez ceux-ci, la dominance va constituer un élément primordial. En effet, si la détection des
mutations dominantes ne pose aucun problème puisqu’elles s’expriment, en revanche les
méthodes doivent permettre la détection des mutations récessives. Une des premières méthodes
de détection a été utilisée en 1920 par Lewis et Stadler pour la détection des mutations
affectant la couleur des grains chez le maïs. La couleur du grain est déterminée par un couple
d’allèles I/i. L’allèle dominant I correspond à des grains colorés, l’allèle récessif i correspond à
des grains incolores. Stadler a effectué le croisement ♀ ii x ♂ II.
La méthode consiste à examiner des milliers de grains sur des épis provenant de ce croisement.
La coloration qu’on regarde est celle de l’endosperme triploïde (3n). Il y a deux noyaux
maternels (n + n) et un noyau paternel (n). L’endosperme a le génotype iiI donc le phénotype
coloré car I est dominant. Dans son expérimentation Stadler a observé quelques grains rares de
couleur blanche donc de génotype iii qui reflète un événement mutation de I vers i chez le
parent ♂.

10
Chez la plante Tradescanthia qui se propage végétativement, il existe une méthode simple de
détection des mutations somatiques. Ces plantes sont hétérozygotes pour un gène impliqué dans la
pigmentation. Les allèles récessifs r et dominants R correspondent aux phénotypes rose et bleu.
La pigmentation chez ces plantes se voit dans la fleur au niveau des pétales et des étamines. Chez
cette plante, les étamines sont garnies de poils latéraux formés de chaînes de cellules. Des millions
de cellules individuelles peuvent donc être analysées pour détecter une mutation somatique de
l’allèle R vers l’allèle r qui se traduira par l’existence de poils comportant quelques rares cellules
roses parmi un ensemble de cellules bleues.

La détection des mutants chez l’homme est difficile en pratique du simple fait que les mutations
autosomiques récessives peuvent passer inaperçues parce qu’elles peuvent être transmises de
génération en génération sans se manifester au niveau du phénotype.

II.2. Systèmes de sélection des mutants

La rareté des mutations est un problème pour le chercheur qui tente d’amasser une collection de
mutants spécifiques. Les généticiens peuvent résoudre ce problème de deux manières :
- ils peuvent utiliser un système de sélection c'est-à-dire une méthode qui leur permette d’isoler
facilement un type mutant particulier au sein d’un grand nombre d’individus.
- ils peuvent aussi augmenter le taux de mutation en utilisant des agents mutagènes c'est-à-dire des
produits ou substances dont l’effet biologique induit des mutations à un taux nettement supérieur
à celui des mutations spontanées.
Il existe une grande variété de systèmes de sélection. C’est chez les microorganismes que l’on
trouve la plupart des exemples de systèmes sélectifs. Ceci ne signifie pas que de tels systèmes
n’existent pas pour les organismes supérieurs mais leur mise en œuvre chez ces derniers n’est pas
aussi simple que chez les microorganismes. En effet, on peut facilement produire un million des
spores ou de bactéries. La production d’un million de souris ou même de drosophiles requiert un
investissement énorme en temps, en argent ou même en espace de laboratoire.

II.2.1. Systèmes de sélection chez les microorganismes

II.2.1.1. La sélection de la réversion des mutants auxotrophes
Cette sélection vers la prototrophie est simple et directe. Pour sélectionner par exemple un
mutant auxotrophe pour l’adénine, la souche mutante est mise en culture dans un milieu liquide
contenant de l’adénine. Après plusieurs temps de générations cellulaires, la suspension est étalée
sur un milieu solide ne contenant pas d’adénine. Les seules cellules qui pourront proliférer sur ce
milieu sans adénine sont celles qui n’ont plus besoin d’adénine pour pousser et qui sont apparues à
la suite de la formation d’une mutation réverse dans la culture de départ.
Réversion
Mutant ad- → → → R é v e r t a n t s ad+ (Schéma Sélection de révertants ad+)

11
II.2.1.2. La technique de réplique sur velours (Figure 1)
Elle a été mise au point par Joshua et Esther Lederberg en 1952 pour sélectionner des
bactéries mutantes. Un morceau de velours stérile est tendu sur un tampon cylindrique. La
surface du velours est délicatement mise en contact avec des colonies de bactéries qui se sont
développées sur un milieu solide contenu dans une boite de Pétri. Ce contact permet à la surface
du velours de retenir une partie des bactéries de chaque colonie. On obtient ainsi une réplique
de la culture mère. La réplique sert de matrice pour ensemencer des milieux sélectifs.
- Pour sélectionner des mutants auxotrophes pour le tryptophane par exemple, la réplique d’une
culture sur milieu complet sert à ensemencer un milieu minimum (milieu sans Trp).
La sélection se fait à partir de la boite mère après avoir identifié les sauvages Trp+, on pourra
isoler le mutant. La sélection est plus aisée si on ne fait pas pousser beaucoup de bactéries.
- Pour sélectionner des mutants résistants à la streptomycine (St) par exemple, la réplique d’une
culture sur milieu sans St sert à ensemencer un milieu contenant de la St. Les colonies qui sont
capables de se développer sur ce milieu sont des mutants résistants à la St qui sont ainsi
sélectionnés. (Schéma Sélection de mutants Str et Trp- par la technique de réplique sur velours).

II.2.1.3. L’enrichissement par filtration (Schéma Sélection de mutants Leu- par filtration)
Cette méthode est utilisée pour sélectionner des mutants auxotrophes de champignons à
mycélium. Une suspension de spores prototrophes est cultivée dans un milieu liquide. La
suspension est ensuite filtrée à travers un filtre en fibres de verre. Les cellules mutantes
auxotrophes ne pourront pas se développer dans le milieu minimum liquide et seront récupérées
dans le filtrat de la suspension. Les cellules prototrophes qui auront développé un mycélium
seront retenues par le filtre. Le filtrat de la suspension pourra être étalé sur des milieux sélectifs.
Ainsi, si on veut sélectionner des mutants auxotrophes pour la leucine par exemple, il suffira
d’étaler un aliquote du filtrat sur un milieu solide contenant de la leucine.

II.2.1.4. L’enrichissement à la pénicilline

Cette méthode est utilisée pour sélectionner des mutants auxotrophes de bactéries. Le principe
est simple et basé sur le fait que la plupart des bactéries sont très sensibles à la pénicilline mais
seulement quand elles sont en croissance. Si on ajoute cet antibiotique à une suspension de
bactéries en croissance dans un milieu minimum, les cellules prototrophes sont tuées parce
qu’elles prolifèrent. Les cellules auxotrophes survivent parce qu’elles sont incapables de
croître. On récupère les bactéries auxotrophes sur un filtre et on les lave pour éliminer la
pénicilline. Pour sélectionner les bactéries auxotrophes pour le tryptophane par exemple, il
suffira de les étaler sur un milieu minimum contenant du tryptophane.

II.2.1.5. Sélection de la résistance

Chez les bactéries, les mutants les plus faciles à cribler sont ceux qui donnent un avantage sélectif par
rapport au type sauvage. C’est le cas des mutations qui confèrent une résistance par rapport à un phage
ou à un antibiotique. Par exemple la bactérie de l’intestin Escherichia coli est parasitée par un grand
nombre de phages dont le phage T1. Si l’on couvre une boite de Pétri par une grande quantité de
bactéries (109 cellules) et de phages T1, la plupart des bactéries seront tuées. Les quelques rares
bactéries résistantes aux phages sont les bactéries mutantes qui ont été baptisées historiquement Tonr (T.
One résistance). Ces bactéries survivront et formeront des colonies qui pourront être isolées.

12
 A

Figure 1. Réplique sur velours, A : une boite où des cellules ont déjà formé des clones est appliquée
sur un cylindre recouvert d'un velours, puis sur le même velours qui a retenu dans ses poils des cellules
de chaque clone, on applique plusieurs boites sur lesquelles le velours dépose quelques-unes de ces
cellules. B : la matrice a donné deux boites où les colonies sont disposées de la même façon, on peut
repérer facilement celles qui sont auxotrophes pour l'arginine.

13
II.2.2. Systèmes de sélection chez les organismes supérieurs
Isoler des mutations chez un organisme supérieur est une tâche beaucoup plus complexe que
chez les microorganismes. Historiquement, deux méthodes ont été également mises en œuvre
chez la drosophile.

II.2.2.1. La technique de la lignée sans petits fils

En 1928, Hermann Müller a mis au point une méthode qui permet d’isoler n’importe quelle
mutation chez la drosophile à condition qu’elle soit localisée sur le chromosome X. Cette
technique est connue sous le nom de « grandson lineage technic ». Müller a construit d’abord
un chromosome X particulier appelé clB qui porte une inversion. L’allèle c est un suppresseur
de crossing-over. L’allèle l correspond à une mutation létale récessive. L’allèle B correspond à
une mutation semi dominante de l’œil appelé mutation Bar qui contrôle le nombre et la
disposition des facettes de l’œil. Les individus mâles clB meurent. Ils sont porteurs de l’allèle
létal l. Les femelles hétérozygotes sont des hémi Bar.
Müller a soumis un mâle sauvage à l’irradiation aux Rayons X. Ce mâle a été ensuite croisé
avec une femelle hétérozygote hémi Bar. Les femelles F1 hémi Bar sont croisées
individuellement avec des mâles sauvages. L’analyse des descendances F2 obtenues permet de
mettre en évidence les mutations induites par les Rayons X sur le chromosome X.
- Si la mutation induite est létale, la F2 comportera uniquement des femelles.
- Si la mutation induite n’est pas létale, les mâles F2 exprimeront cette mutation.
Rayons X
+ + + +
♂ c l B m //Y → →→ ♂ c+ l+ B+ m //Y

♀ c l B m+ // c+ l+ B+ m+ X ♂ sauvage irradié
↓
F1
♂ c+ l+ B+ m Y
♀
c+ l+ B+ m // c l B m+ c l B m+ // Y
c l B m+ ♀ hémi Bar ♂ létal
c+ l+ B+ m // c+ l+ B+ m+ c+ l+ B+ m+ // Y
c+ l+ B+ m+ ♀ sauvage ♂ sauvage

♀ F1 hémi Bar c+ l+ B+ m // c l B m+ X c+ l+ B+ m+ // Y
↓
F2
♂ c+ l+ B+ m+ Y
♀
c+ l+ B+ m+ / / c+ l+ B+ m c+ l+ B+ m // Y
c+ l+ B+ m ♀ sauvage ♂ portant la mutation m
c l B m+ c+ l+ B+ m // c l B m+ c l B m+ // Y
♀ hémi Bar ♂ létal

14
II.2.2.2. L’utilisation du chromosome XX (double X) ou X attaché
On connaît chez la drosophile des femelles exceptionnelles porteuses d’un chromosome double
X (XX) ou X attaché et d’un chromosome Y. L’existence d’un chromosome double X est due à
la non disjonction des chromosomes X à la méiose. Si l’on croise un mâle traité par un agent
mutagène comme l’EMS (Ethyle Méthyl Sulfonate) avec une femelle exceptionnelle, on peut
directement déceler une mutation sur le chromosome X paternel.
- Si la mutation induite est létale, la descendance ne comportera que des femelles.
- Si la mutation n’est pas létale, la descendance mâle sera à l’origine d’une nouvelle lignée.
EMS
♂ X//Y →→→ ♂ Xm//Y
♀ X+X+//Y x ♂ Xm//Y
↓
♂ Xm Y
♀
X+X+//Xm X+X+ //Y
X+X+ triplex létal ♀ à X attaché
m
X Y Y//Y
Y ♂ portant la mutation m duplex létal

15
III. MUTATIONS AU NIVEAU DE LA STRUCTURE DE L’ADN ET DE LA
PROTEINE

III.1. Les mutations géniques au niveau de la structure de l’ADN

L’ADN (acide désoxyribonucléique) est formé de deux chaînes polynucléotidiques
complémentaires reliées entre elles par des liaisons hydrogènes qui s’établissent
transversalement entre une purine et une pyrimidine et plus précisément entre l’Adénine (A) et
la Thymine (T) d’une part et entre la Guanine (G) et la Cytosine (C) d’autre part. Les bases
puriques sont A et G et les bases pyrimidiques sont T et C. Un gène correspond à une séquence
spécifique de paires de bases purines et pyrimidines d’une molécule d’ADN (Figure 2).
C=G
A=T
G≡C
T≡A
Ainsi toute modification d’un élément de la séquence peut provoquer l’apparition d’une
mutation génique. Les mutations géniques se répartissent sous cet angle en deux grandes
classes.

III.1.1. Les additions et les pertes de bases

- L’addition (ou insertion) est l’ajout d’une paire de bases ou d’un petit nombre de paires de
bases au sein de la séquence d’un gène.
- La perte de bases (ou micro délétion) est la disparition d’une paire de bases ou d’un petit
nombre de paires de bases.
L’addition et la perte de bases entraînent un décalage du cadre de lecture de la séquence.

16
Figure 2a. Structure primaire (un nucléotide) de l’ADN

Figure 2b. Un simple brin d'ADN

17
III.1.2. Les substitutions
Elles consistent en un remplacement d’une paire de bases par une autre sans que le nombre de
paires de bases au total ne soit modifié. On distingue deux types de substitutions :
- la transition qui correspond à la substitution d’une purine par une purine ou à la substitution
d’une pyrimidine par une pyrimidine. Il y a deux transitions possibles :
A=T→G≡C et G≡C →A=T
- la transversion qui correspond à la substitution d’une purine par une pyrimidine et vice-
versa. On a quatre transversions possibles :
A=T →C≡G A=T →T=A
G≡C →C≡G G≡C →T=A

Un exemple de mutation par substitution est à l’origine de la drépanocytose ou anémie

falciforme. Cette maladie est caractérisée par une anomalie de la forme des globules rouges.
Alors que les individus normaux ont des globules rouges bien arrondis, chez les malades, les
globules rouges ont une forme filamenteuse en faucille qui s’accentue lorsque la pression
d’oxygène diminue comme c’est le cas en haute altitude. La maladie est gouvernée par un
gène semi dominant. Chez les homozygotes Hbs//Hbs, la maladie est sévère et provoque la
mort infantile. Les hétérozygotes Hbs//HbA supportent les conditions normales d’oxygénation
mais leurs globules deviennent anormaux lorsque l’oxygène se raréfie. Ces hétérozygotes sont
donc défavorisés en haute altitude mais sont très résistants à la malaria et au paludisme.
L’analyse de la séquence d’acides aminés des protéines HbA et Hbs montre que la molécule
d’hémoglobine (Hb) est composée de quatre chaînes polypeptidiques appelées globines : deux
chaînes α et deux chaînes β. L’ensemble comporte environ 600 acides aminés. A l’exception du
peptide n°4 de la chaîne β, tous les autres fragments sont identiques. Le peptide n°4 de HbA
diffère de celui de HbS par sa mobilité électrophorétique.
L’étude de la séquence montre :
Pour HbA: Val – His – Leu – Thr – Pro – Glu – Glu – Lys.
Pour HbS: Val – His – Leu – Thr – Pro – Val – Glu – Lys.
Il y a eu substitution de Glu par Val. La deuxième base (A) dans Glu a été remplacée par U dans
Val (voir correspondance au niveau ADN).
On a mis en évidence de nombreuses Hb mutées différentes de HbS. Dans chacune de ces
formes mutantes, on a toujours substitution d’un acide aminé par un autre (Figure 3).

III.2. Les mutations géniques au niveau de l’ARN messager (codon)

Elles se présentent comme des accidents de copie au niveau des bases au cours de la réplication de
l’ADN. L’accident de la copie peut être une base mal copiée, une base oubliée ou une base
supplémentaire insérée. L’ADN nouvellement synthétisé ne sera donc plus l’exacte réplique de
l’ADN parental. Si la mutation se produit au niveau d’un gène, l’ARNm transcrit à partir de ce
gène sera également modifié. Selon les modifications qui interviennent, la protéine synthétisée
sera très différente ou non de la protéine initiale codée par le gène sauvage. Pour bien comprendre
les mutations qui interviennent au niveau des protéines, nous allons examiner les différentes
mutations possibles en raisonnant cette fois au niveau du codon donc de l’ARN messager
(ARNm) bien que l’origine de l’erreur soit au niveau de l’ADN.
Le raisonnement est pourtant juste dans la mesure où toute mutation sur une partie de l’ADN
(parties codantes) qui s’exprime entraîne automatiquement un changement au niveau de l’ARNm.
Des erreurs de copie peuvent se produire lors de la transcription mais elles sont insignifiantes car
chaque ARNm a une durée de vie courte. Ainsi, si un ARNm a subi une mutation, cela est
négligeable devant des milliers d’ARNm qui n’en ont aucune.

18
III.2.1. Les mutations sans effets dites silencieuses
Dans ces mutations, un codon a été remplacé par un autre codon codant pour le même acide
aminé. Si le codon UUU est remplacé par le codon UUC, la mutation qui en résulte sera sans
effet parce que ces deux codons codent pour la phénylalanine. Bien qu’il y ait eu une mutation,
elle n’aura aucune conséquence sur la protéine.
Sauvage Mutant
ADN Matrice → -- A A A -- → -- A A G --
ADN brin codant → -- T T T -- → -- T T C --
ARN messager → -- U U U -- → -- U U C --
Protéine → Phe Phe

III.2.2. Les mutations conservatrices ou neutres

Dans ces mutations, un codon codant pour un acide aminé est remplacé par un autre codon
codant pour un acide aminé du même groupe. Par exemple AAA qui code pour la lysine est
muté en AGA qui code pour l’arginine. Au niveau de la protéine, il y a changement concernant
la structure primaire puisque la lysine est remplacée par l’arginine. Cependant, comme ces deux
acides aminés appartiennent au même groupe d’acides aminés basiques, cette mutation sera le
plus souvent sans conséquence car elle n’altérera pas la fonction de la protéine.

III.2.3. Les mutations « faux sens »

Dans le cas de ces mutations, un codon est remplacé par un autre codon donnant un acide
aminé chimiquement très différent. Par exemple, le codon AAG qui code pour la lysine (Lys)
est muté en GAG qui code pour l’acide glutamique (Glu). Comme la lysine est un acide aminé
basique et l’acide glutamique est un acide aminé acide, une telle mutation donnera naissance à
une protéine, le plus souvent anormale. Celle-ci peut être totalement inactive, partiellement
active ou seulement active dans certaines conditions. Ce 3ème cas correspond aux mutants
thermosensibles.

III.2.4. Les mutations non-sens

Une mutation non-sens transforme un codon codant pour un acide aminé donné en un codon
non-sens (stop = UAA, UAG, UGA). Par exemple, le codon UGC qui code pour la cystéine est
muté en UGA qui est un codon stop. Si la mutation se produit dès le début de la chaîne
peptidique, les conséquences sont graves mais si la mutation n’intervient qu’en fin de chaîne,
cela peut parfois être négligeable.

III.2.5. Les mutations de phases

Toute addition ou délétion d’un nombre paire de bases non multiple de trois aboutit à un
changement de la phase de lecture. Ces mutations sont graves si le déphasage a lieu dès le début
de la traduction. On obtient en effet dans ce cas une protéine complètement différente ou pas de
protéine du tout s’il y a des codons stop.
ARNm S AUG AUA GCC AAU AAG CAU ACC GCU AGC CCA UAA.
Protéine S Met – Ile – Ala – Asn – Lys – His – Thr – Ala – Ser – Pro stop
ARNm M AUG AUA GCC AAU AUA GCA UAC CGC UAG CCC AUAA.
Protéine M Met – Ile – Ala – Asn – Ile – Ala – Tyr – Arg stop
19
 Figure 3A- Différents types de mutations ponctuelles

Drépanocytose ou Anémie falciforme

C'est une maladie caractérisée par des difficultés respiratoires chez les individus atteints. Les malades
possèdent une hémoglobine, protéine impliquée dans le transport du dioxygène dans le sang, anormale et non
fonctionnelle. Cette maladie est héréditaire et peut donc être transmise de génération en génération.
L'origine de cette anomalie est donc liée à une modification du programme génétique de l'individu. La
comparaison des séquences d'ADN du gène codant pour une hémoglobine normale et celle codant pour
l'hémoglobine drépanocytaire montre une différence unique entre ces deux séquences, un nucléotide (A) étant
remplacé par un autre (T).

Figure 3 b : Principe de la mutation par substitution à l’origine de la drépanocytose

20
Le polypeptide M est plus court et cette mutation est due à une insertion de U entre la 13è et la
14è base de l’ARNm S.

III.2.6. Les réversions

III.2.6.1. La réversion exacte ou réversion vraie
Dans ce cas, le codon muté subit une mutation qui permet de revenir à la forme sauvage initiale.
La réversion vraie restitue exactement au site muté la structure initiale. C’est un événement
rare.
AAA → GAA → AAA
↓ ↓ ↓
Lys Glu Lys
Sauvage Mutant Révertant

III.2.6.2. La réversion équivalente

Dans ce cas, le codon muté subit une mutation qui permet d’obtenir une forme équivalente à la
forme sauvage initiale.
CGC → CCC → CAC
↓ ↓ ↓
Arg Pro His
Basique Acide Basique

III.3. Les suppressions

La suppression est une deuxième mutation qui peut rétablir un phénotype sauvage. La
deuxième mutation est dite suppresseur de la première. La suppression peut avoir lieu dans le
même gène (suppression intra génique) ou avoir lieu dans un autre gène (suppression extra
génique).

III.3.1. La suppression intra génique

Elle peut être réalisée dans le cas où une addition est associée à une délétion et réciproquement.
Dans la protéine du révertant, il reste un fragment à séquence anormale mais qui ne participe
pas directement à l’expression de la fonction de la protéine. Dans le cas où la première mutation
est un changement d’une base (substitution) dans un codon conduisant à une protéine faux sens
inactive, on peut imaginer qu’une seconde mutation du même type dans un autre site rétablisse
la fonctionnalité de la protéine donc du phénotype sauvage.
Chez E. coli, on sait que le remplacement de l’acide glutamique en position 210 dans la
protéine A du tryptophane synthétase par la glycine conduit à une protéine A inactive. Chez ce
mutant, la substitution de la cystéine en position 174 par la tyrosine restaure l’activité de la
protéine A. La restauration de cette activité est liée à l’existence de cette double mutation. En
effet, la protéine A du simple mutant M1 qui a comme acide aminé en position 174 la tyrosine,
est inactive, de même que la protéine du simple mutant M2 qui possède la glycine en position
210. Mais, le double mutant M1M2 est de type sauvage.
174 210
Sauvage Cys Glu
Mutant M1 Cys Gly
21
 Mutant M2 Tyr Glu
Double mutant M1M2 Tyr Gly

III.3.2. Les suppressions extra géniques

Il existe différents modes de suppression extra génique.
III.3.2.1. Les suppresseurs informationnels qui agissent au niveau de la traduction
Ce sont des suppresseurs de non-sens ou de faux sens causés par une mutation dans le gène
d’un ARNt. Ce type de suppresseur est allèle spécifique mais non gène spécifique.
- Les suppresseurs de non-sens : c’est le cas lorsqu’un gène qui code par exemple pour
l’ARNt porteur de la sérine subit une mutation dans son anticodon qui le rend capable de
reconnaître et de s’aligner sur un codon non-sens (exemple UAG). Dans ce cas, la continuation
de la traduction est assurée.
ARNt AGC ←Sens de lecture AUC←Sens de lecture
ARNmS → UGC → ARNmM → UAG
Ser Stop
(On supprime ce stop grâce à une mutation au niveau de l’anticodon)

- Les suppresseurs de faux sens. Dans ce cas, un gène qui code pour l’ARNt porteur de la
glycine par exemple subit une mutation dans son anticodon qui le rend capable de reconnaître et
de s’aligner sur un codon de l’arginine par exemple.
ARNt CCA ← Sens de lecture GCA←Sens de lecture
ARNmS → GGU → ARNmM → CGU
Gly Arg

III.3.2.2. Les suppresseurs physiologiques

- Suppresseurs agissant sur une voie parallèle : une première mutation supprime une voie
métabolique. La suppression correspond à une deuxième mutation qui ouvre une autre voie qui
mène à la synthèse du même produit fabriqué par la souche sauvage.
- Suppresseurs agissant au niveau de l’expression d’un gène : une première mutation induit
la production d’un composé en petites quantités. La suppression correspond à une deuxième
mutation qui améliore l’efficacité du transport des petites quantités du composé. La première
mutation diminue donc l’expression d’un gène c'est-à-dire la quantité finale de protéine active
synthétisée, la deuxième mutation augmente l’expression du gène et compense l’effet de la
première.
- Suppresseurs agissant sur la même voie de régulation (suppression par épistasie) : de
nombreux processus biologiques sont régulés. Cela fait intervenir des protéines qui sont
activées séquentiellement pour aboutir à l’activation ou à l’extinction de l’expression des gènes
cibles. La suppression agit en altérant l’activité d’un répresseur ou d’un activateur.

22
IV. BASES MOLECULAIRES DES MUTATIONS GENIQUES
Les mutations géniques ou ponctuelles décrites ; addition, délétion, substitution, peuvent avoir
plusieurs origines selon qu’elles apparaissent spontanément ou qu’elles sont induites.

IV.1. Les mutations spontanées

La molécule d’ADN possède la remarquable propriété d’autoréplication. En effet, à partir d’une
molécule-mère d’ADN, l’ADN-polymérase fabrique deux molécules d’ADN filles identiques à
la molécule d’origine. Dans une cellule humaine, à chaque génération, ce sont 6,4 milliards
de paires de nucléotides qui sont ainsi répliqués.
Aucun système de copie n’étant infaillible, on comprend aisément qu’il puisse se produire de
temps en temps des erreurs : une incorporation de nucléotide non complémentaire, un «
oubli » de nucléotide ou au contraire un ajout de nucléotide surnuméraire. Même si la fiabilité
de l’ADN-polymérase peut être considérée comme excellente, on estime qu’elle se « trompe
» environ une fois pour 100 000 nucléotides insérés. De plus, même en dehors des périodes de
réplication, l’ADN peut être endommagé et sa séquence s’en trouve modifiée. A l’origine des
mutations spontanées, on a donc des erreurs d’appariement (Mésappariements) dans la
réplication de l’ADN et des lésions spontanées.

IV.1.1. Les erreurs dans la réplication de l’ADN

Une erreur se produit dans la réplication de l’ADN lorsqu’une paire de bases illégitimes se
forme durant la synthèse. Les paires de bases qualifiées d’illégitimes sont A-C, C-A, T-G et G-
T par opposition aux paires de bases légitimes c'est-à-dire A = T et G ≡ C.
Pour comprendre comment des paires de bases illégitimes se forment, il est important de
rappeler que chacune des bases de l’ADN peut se trouver sous deux formes appelées
tautomères qui sont en équilibre. Parmi les deux formes tautomériques, l’une est fréquente dans
les conditions physiologiques normales. Ce sont les formes amines de l’adénine et de la
cytosine et les formes cétoniques de la guanine et de la thymine. Ce sont les formes décrites
par Watson et Crick lorsqu’ils ont établi l’hypothèse de la structure secondaire de l’ADN. Les
formes rares sont les formes imines de l’adénine et de la cytosine et les formes énoliques de la
guanine et de la thymine. Si au cours de la réplication de l’ADN, une adénine en place dans
l’une des chaînes polynucléotidiques modifie sa forme tautomérique, elle forme des liaisons
hydrogènes avec la cytosine alors que normalement elle s’unit à la thymine. Au cours de la
réplication suivante, cette adénine en reprenant sa forme tautomérique normale s’unit à la
thymine. Parallèlement la cytosine introduite à la génération précédente dans la chaîne
complémentaire s’unit à la guanine. Ainsi, dans une des chaînes d’ADN filles de la deuxième
génération, la paire A=T est remplacée par la paire G≡C. Il s’agit d’une transition.
A=T

A*=C A=T

A=T G≡C A=T A=T

Principe de mutation suite à une erreur d’appariement

23
Formes amines, imines, cétoniques et énoliques des bases azotées

24
IV.1.2. Les lésions spontanées
Les plus fréquentes sont la dépurination et la désamination. De ces deux lésions spontanées,
la plus courante est la dépurination qui consiste en la perte d’un résidu purine adénine ou
guanine par la chaîne d’ADN suite à la rupture du lien entre le désoxyribose et la base.

Dans certaines conditions, une base azotée peut être insérée au niveau du site apurique, ce qui
entraîne le plus souvent une mutation car il y a trois chances sur quatre pour que la base qui
s’insère ne soit pas la bonne.
Il est important de noter qu’à 37 °C, une cellule animale perd environ dix purines de son ADN
en une génération c'est-à-dire en 20 heures. Ainsi, si de telles lésions devaient persister, la
cellule subirait de graves dommages génétiques ; étant donné qu’au niveau de ces sites
apuriques, il ne serait pas possible d’insérer la base complémentaire de la purine originale à la
réplication suivante de l’ADN. Il existe heureusement dans la cellule des mécanismes qui
éliminent ces sites apuriques.
La désamination concerne les cytosines et conduit à la formation d’uracile.

Cytosine → Uracile
Formation de l’uracile à partir de la cytosine

Les uraciles s’apparient donc à l’adénine lors de la réplication. Il en résulte une transition
d’une paire G=C vers une paire A=T.
G=C

G=C A=U

G=C G≡C A=T A=U

Principe de mutation à la suite d’une cytosine transformée en uracile

L’un des enzymes de réparation de la cellule peut également reconnaître les uraciles et les
exciser. Le « trou » qui en résulte est ensuite comblé et donne lieu à une mutation.

25
IV.2. Les mutations induites
Les agents mutagènes ou mutagènes induisent les mutations par au moins deux mécanismes
différents ; soit par le remplacement d’une base de l’ADN, soit par l’altération d’une base de
telle sorte qu’elle s’apparie de manière spécifique mais illégitime avec une autre base.

IV.2.1. L’incorporation d’analogues de bases

On appelle analogue de base des agents chimiques qui ont des structures suffisamment voisines
de celle d’une base azotée de l’ADN pour être à l’occasion incorporée dans la chaîne
nucléotidique en lieu et place de ces bases.

IV.2.1.1. Exemple du 5 Bromo-Uracile (5BU)

Le 5BU est principalement un analogue de la thymine dont il se différencie en portant un atome
de brome en position 5 en lieu et place du radical méthyle CH3 de la thymine.

Thymine → 5 bromo uracile (forme cétonique)

Analogie entre la Thymine et le 5 Bromo-Uracile
Le 5BU comme la thymine existe sous deux formes tautomériques. Dans sa forme cétonique, il
s’apparie avec l’adénine comme la thymine mais dans sa forme énolique rare, il s’apparie à la
guanine. Ainsi, si le 5BU dans sa forme cétonique est incorporé en face d’une adénine, il
s’apparie à la réplication suivante sous sa forme énolique à la guanine. Il en résulte une
transition de A=T vers G=C.

A=T

A=5BUc A=T c = cétonique

A=T G≡5BUe A=T A=T e = énolique

G=C A=5BUc
Principe de la mutation provoquée par le 5BU

Secondairement, le 5BU est analogue de C. Dans ce cas, il s‘apparie à G dans sa forme amine et
à A dans sa forme imine.

IV.2.1.2. Exemple de la 2 Amino-Purine (2AP)

Adénine → 2 Amino-purine (forme amine)

Analogie entre l’adénine et la 2 Amino-Purine
26
La 2AP est principalement analogue de l’adénine dont elle ne diffère que par la position du
groupe amine qu’elle porte au carbone 2 au lieu du carbone 6 comme chez l’adénine.
La 2AP existe également sous deux formes tautomériques. Dans sa forme amine fréquente, elle
s’apparie avec la thymine, dans sa forme imine rare, elle s’apparie avec la cytosine.
Ainsi si la 2AP dans sa forme amine est incorporé en face d’une thymine, elle s’apparie
ensuite à la cytosine sous sa forme imine. Il en résulte une transition de A=T vers G=C.
A=T

A=T 2APa=T a = amine

A=T A=T 2APi=C A=T i = imine

2APa=T G=C
Principe de la mutation provoquée par la 2AP
La 2AP est secondairement, analogue de G. Dans ce cas, il s‘apparie à C dans sa forme
cétonique et à T dans sa forme énolique.

IV.2.2. Modification des bases in situ

On peut induire également les mutations par des agents variés chimiques comme physiques.
Différents mutagènes peuvent modifier les bases azotées déjà en place dans une chaîne
bicaténaire d’ADN. En deux réplications successives, une transition est alors réalisée du fait des
appariements illégitimes qui sont intervenus.

IV.2.2.1. L’acide nitreux (HNO2)

Il provoque la désamination oxydative de l’adénine, de la cytosine et de la guanine, les
transformant respectivement en hypoxanthine, en uracile et en xanthine. L’hypoxanthine peut
s’apparier à la cytosine, l’uracile peut s’apparier à l’adénine et la xanthine à la thymine.

Hypoxanthine Uracile Xanthine

Produits obtenus par action de NHO2 sur l’Adénine, la Cytosine et la Guanine
Sous l’action de HNO2, l’adénine en place dans la chaîne perd son radical amine NH2 et est
transformé en hypoxanthine qui va s’apparier au cours de la réplication à la cytosine. Au cycle
suivant, la cytosine s’apparie à la guanine. Il en résulte une transition de A=T vers G≡C.
HNO2
A=T H=T

H=C A=T

H=C G≡C
Principe de la mutation provoquée par l’acide nitreux
27
IV.2.2.2. L’hydroxylamine (NH2OH)
Sous l’action de l’hydroxylamine (NH2OH), la cytosine donne naissance à l’hydroxyl amino
cytosine qui s’apparie avec l’adénine. Une paire nucléotidique G≡C est ainsi transformée en
A=T. L’hydroxylamine n’induit pas de transition dans le sens inverse.

IV.2.2.3. Les agents alkylants

Les principaux agents alkylants sont le gaz moutarde qui est le premier mutagène chimique
connu, le méthyle éthyle sulfonate (EMS), et le méthyle nitrosoguanidine (NG).
Bien que ces agents mutagènes puissent ajouter un alkyle c'est-à-dire un groupement éthyle
pour l’EMS et un groupement méthyle pour la NG en de nombreuses positions sur les quatre
bases, le pouvoir mutagène est surtout corrélé à l’addition d’un alkyle sur l’oxygène en position
6 de la guanine pour former O6 alkyle guanine. L’EMS provoque l’éthylation de l’oxygène en
position 6 de la guanine pour donner le O6 éthyle guanine (GO6) qui s’apparie illégitimement
avec la thymine. Il en résulte une transition de G≡C vers A=T.

Guanine EMS O6 éthyle guanine

Produit obtenu par action de l’EMS sur la guanine

G≡C O6-G≡C

O6-G≡T G≡C

A=T
Principe de la mutation provoquée par l’EMS

L’instabilité des purines alkylées entraîne une dépurination de l’ADN. La guanine est
remplacée par d’autres bases. On peut avoir donc au cours des réplications des transversions
c'est-à-dire des substitutions de G≡C par T=A.
Les agents alkylants sont des polluants de l’atmosphère et des eaux. Ils sont très dangereux à
cause de leur action mutagène importante et de leur toxicité assez faible. Ils sont émis par les
industries et peuvent rester longtemps indétectés. Les mutations qu’ils induisent n’apparaissent
pas immédiatement mais après un délai de plusieurs années.

IV.2.2.4. Les acridines

Les acridines sont des colorants comme la proflavine. Ce sont des molécules planes qui ont à
peu près les mêmes dimensions qu’une paire de bases. Elles peuvent s’insérer entre deux
purines voisines situées sur le même brin d’ADN. La conséquence d’une telle incorporation se
traduit par une addition ou une délétion de bases. Il y a addition quand l’acridine s’insère durant
la réplication sur la chaîne matricielle. L’addition se présente sur la chaîne complémentaire
néosynthétisée. Il y a délétion quand l’acridine s’insère durant la réplication sur une chaîne en
formation car elle empêche l’insertion d’une base. Les produits modifiés comportant l’addition

28
ou la délétion sont détectables lors de la réplication suivante.

Proflavine (Acridine-3,6-diamine)

IV.2.2.5. Les radiations non ionisantes

Elles augmentent la réactivité des molécules sans les scinder en ions. Les plus efficaces de ces
radiations non ionisantes sont les ultraviolets (UV) d’une longueur d’onde d’environ 260 nm
qui sont fortement absorbés par l’ADN. Les UV produisent deux types de modifications
chimiques dans la molécule d’ADN : la photodymérisation et l’hydratation.
- La photodymérisation est l’établissement sous l’action des UV de liaisons covalentes entre
deux pyrimidines contiguës sur un même brin d’ADN.
Les dimères les plus fréquemment rencontrés sont ceux qui unissent deux thymines. Ces
dernières perturbent la forme hélicoïdale de l’ADN. Ainsi, la distorsion qui se produit au niveau
du dimère empêchera ou non l’enzyme de réplication de franchir la région du dimère lors de la
réplication qui suit l’irradiation.
Si l’enzyme de réplication la franchit, n’importe qu’elle base peut être insérée dans la région du
dimère. Comme il y a trois chances sur quatre pour que cette base soit mauvaise, on aboutira
ainsi à une erreur qui induira une mutation.
- L’hydratation concerne la cytosine. La cytosine hydratée ne s’apparie pas avec la guanine
mais avec l’adénine. Il en résulte des mutations de type substitution de base.

IV.2.2.6. Les radiations ionisantes

Les rayons X (Rx) ont été les premiers à induire des mutations dans les expériences conduites
par Müller en 1927. Les effets des radiations ionisantes comme les Rx ou les Rγ sont de type
moléculaire, cellulaire, tissulaire et jouent sur l’organisme et sur les populations.
Les effets moléculaires sont directs ou indirects : l’effet direct découle de l’absorption
d’énergie peu sélective par les acides nucléiques, l’effet indirect découle de l’action des
produits issus de la radiolyse de l’eau. L’effet direct aboutit à des ruptures de chaînes alors que
l’effet indirect aboutit à des lésions de bases.
Les radiations ionisantes produisent surtout des mutations chromosomiques. Elles sont en outre
souvent responsables d’une faible proportion de mutations géniques. Chez E. coli, certaines
expériences ont montré que les mutations géniques sont provoquées par des erreurs au moment
de la réplication au niveau du « trou » induit par la molécule qui sert de matrice.
En général, les effets des rayonnements dépendent de divers facteurs liés :
- à la dose et au débit de dose,
- aux caractéristiques du rayonnement (type, énergie),
- au type cellulaire, au tissu et au sujet (susceptibilité individuelle) qui sont irradiés.

On s’intéresse dans ce cours aux rayonnements ionisants mais, il en existe d’autres qui
sont par exemples les téléphones mobiles, les micro-ondes, les lignes à haute tension, etc.

29
IV.2.3. Les courbes d’inactivation
Les rayons UV, les Rx, les Rγ produisent des mutations. Une grande partie des gènes mutés
étant létaux, de nombreux individus irradiés sont éliminés et parmi les survivants, différents
types de mutants pourront être observés. On peut établir la courbe représentant la proportion
d’individus survivants en fonction de la dose de radiation en cordonnées semi logarithmiques.
On observe :
La courbe à un coup : chez les haploïdes, il suffit de toucher une cible pour entraîner la
létalité.
La courbe à deux coups : chez les diploïdes, pour avoir la létalité, il faut toucher les deux
gènes sauf si on a affaire à un gène dominant.
La courbe à n coups : Il faut toucher n cibles pour entrainer la létalité.

Courbes d’inactivation

Courbes de survie

Courbe à un coup

Courbes de survie

Courbe à n coup

30
V. MECANISMES BIOLOGIQUES DE REPARATION

L’ensemble des mutations spontanées et induites précédemment décrites indique que l’ADN
subit des lésions. Les cellules vivantes pour garder la stabilité et la pérennité de ce matériel
génétique ont développé des systèmes enzymatiques qui par des processus variés réparent les
lésions de l’ADN. La manière la plus simple de réparer une lésion (de l’ADN) est évidemment
de l’exciser au plus vite de manière à régénérer la base normale. Cependant il faut souligner
que l’excision directe n’est pas toujours possible car certains dommages sont irréversibles.
On estime que les complexes enzymatiques notamment les endonucléases corrigent 99,9 % des
erreurs. Chez l’homme par exemple, il existe 130 complexes de réparation. On appelle alors
mutation, une modification de la molécule d’ADN qui a échappé aux processus de réparation.
Lors des réplications ultérieures, la mutation peut se transmettre au cours des cycles cellulaires
successifs.

V.1. Réversion directe de l’altération (Restauration de la zone endommagée)

Ce type de réparation utilise très peu de protéines et restaure immédiatement les lésions.
- La Photo-réactivation : Les photolyases sont des enzymes activées par l’énergie lumineuse
et qui participent à la réparation de l’ADN endommagé par les UV en coupant les liaisons
covalentes au niveau des dimères de thymine. L’enzyme de photo réaction (EPR) par exemple
se fixe sur le photodimère et clive les liaisons covalentes pour régénérer les deux bases de
départ.
- Les Enzymes du groupe des Alkyle Transférases (AT) : Les AT éliminent directement
certaines lésions comme les groupes alkyles ajoutés par l’EMS et la nitrosoguanidine en
position 6 des résidus guanines. Le méthyle transférase de E. coli est bien connu. Cet enzyme
transfère le groupe méthyle de la O6 guanine en un résidu cystéine en son sein.
- La Réversion de coupure simple brin : Se fait par une ADN ligase lorsqu’il n’y a pas de
pertes de bases.
- La Réversion de dépurination : Se fait par une purine invertase et restaure la liaison
osidique, enzyme spécifique d’une base.

V.2. Excision Réparation des simples brins (Suppression de la zone endommagée)

V.2.1. Réparation par excision de base (Base Excision Repair ou système BER)
Ce mécanisme est présent chez les procaryotes et les eucaryotes et est essentiellement impliqué
dans les réparations de mutations endogènes jusqu’à 4 nucléotides. Le système BER permet
l’élimination des bases anormales et la réparation du site AP. Les sites AP sont formés en
général à la suite de la perte spontanée d’un résidu purine ou d’un résidu pyrimidine.
Ces sites apuriques ou apyrimidiques sont équivalents d’un point de vue biochimique et sont
appelés sites AP (A privatif et P = purine ou pyrimidine). Leur réparation fait intervenir les
endonucléases et les ADN glycosylases.
- Toutes les cellules contiennent des endonucléases qui peuvent attaquer les sites AP. Elles
sont vitales pour la cellule parce que la perte spontanée d’une purine est un événement
relativement fréquent. L’action de ces enzymes débute par la coupure de liens phosphodiesters
au niveau des sites AP. La cassure ainsi introduite déclenche un système de réparation par
excision qui fait entrer en jeu une exonucléase, l’ADN polymérase et l’ADN ligase.
31
- Les ADN glycosylases ne clivent pas les liens phosphodiesters de l’ADN mais coupent la
liaison N-glycosidique entre la base anormale et le désoxyribose, entraînant l’apparition d’un
site AP. Il y a uniquement extraction de la base sans coupure de liaison phosphodiester. Il existe
de nombreuses glycosylases dans la cellule, chacune reconnaît une (plusieurs) base (s)
modifiées différentes. Une endonucléase 3’-5’ coupe la liaison phosphodiester adjacente au site
AP, l’ADN-polymérase I enlève le site AP et synthétise le morceau d’ADN manquant, puis
l’ADN-ligase met en place la liaison Phosphodiester manquante. Comme glycosylase, on peut
citer l’uracile ADN glycosylase qui excise de l’ADN les uraciles qui résultent de la
désamination des cytosines.

V.2.2. Réparation par excision de nucléotides (Nucléotide Excision Repair ou système NER)
Ce mécanisme est présent chez les procaryotes et les eucaryotes et permet la réparation de
plusieurs nucléotides. Il prend également en compte une endonucléase 3’-5’, l’ADN-
polymérase I et l’ADN-ligase. Le système NER correspond au mécanisme de réparation par les
UV (UVr). Le complexe UVr A, B, C, D reconnaît les distorsions de l’ADN. Chez E. coli, la
nucléase UVr A, B, C hydrolyse le 8ème lien phosphodiester en 5’ et le 4ème lien phosphodiester
en 3’ du photodimère de pyrimidine. Ceci produit un segment simple brin de 12 nucléotides et
des extrémités 3’OH et 5’P. L’oligonucléotide qui porte la lésion est éliminé et le trou qui en
résulte est bouché par l’ADN polymérase I et fermée par l’ADN ligase. La nucléase UVr A B C
D forme aussi des oligonucléotides de 13 bases.

V.2.3. Réparation de mésappariements ou MisMatch Repair (MMR) du système Mut HLS

Ce mécanisme est également présent chez les procaryotes et les eucaryotes et est post-
réplicatif. Il permet la réparation des erreurs d’appariement entre les chaînes d’ADN après la
réplication ainsi que les petites délétions ou additions. Le mécanisme Mut HLS nécessite la
reconnaissance du brin néosynthétisé de l’ADN grâce aux méthylations des adénines du brin
anciennement synthétisé de l’ADN, ceci permettant la distinction entre les deux brins. Une
endonucléase rompt ensuite le brin néosynthétisé et la partie portant la lésion est éliminée. Mut
S reconnaît le mésappariement, Mut L se lie et active Mut H, et Mut H est une endonucléase
qui coupe en aval de l’erreur du mésappariement. Il y a ensuite action d’une exonucléase et
d’une hélicase, puis de l’ADN-polymérase I et finalement de la ligase.

V.3. La tolérance de la zone endommagée

V.3.1. Réparation par recombinaison
La réparation par recombinaison correspond à la synthèse translésionnelle (TLS) qui consiste
à poursuivre la réplication de l’ADN au niveau d’une lésion du brin matriciel de l’ADN ne
permettant aucun appariement. Elle se réalise en même temps que la réplication. L’ADN-
polymérase II a un rôle important dans la reprise de la synthèse d’ADN après la lésion, l’ADN-
polymérase III est alors transitoirement expulsée pour que la réplication puisse continuer.
L’ADN-polymérase III arrive au niveau d’une erreur et est éjectée par les enzymes de la TLS
qui remplacent la base erronée ou alors qui permet la poursuite de la réplication un peu plus
loin (ceci suivant l’ADN-polymérase utilisé (II, IV ou V)).
Remarque : La TLS est généralement mutagène, en effet, elle place juste des nucléotides, pas
forcément les bons, à l’endroit où se situe la lésion du brin matriciel, et ceci pour permettre la

32
poursuite de la réplication de l’ADN. Les polymérases impliquées dans la TLS sont : Pol II, IV
et V (pas d’activité exo 3’5’) mais aussi Pol III.

V.3.2. Réparation post réplicative

Certains systèmes de réparation peuvent reconnaître les lésions même après le passage de la
fourche réplicative. L’un d’entre eux est le système de réparation par recombinaison encore
appelé « by pass lesion ». Ce système implique le gène Rec A (Rec pour recombinaison) qui
code pour la protéine Rec A. Le principe de la réparation est le suivant : si un ADN contient un
photodimère par exemple, au cours de la réplication, l’ADN polymérase saute la lésion. Il en
résulte une brèche appelée lacune post réplicative sur le brin néosynthétisé. La rec A protéine
permet alors une recombinaison c'est-à-dire un échange entre deux segments homologues. Les
deux segments étant représentés l’un par un brin parental et l’autre par un brin fils. Cette
recombinaison produit une nouvelle brèche sur le brin parental. Interviennent ensuite d’autres
enzymes (nucléases, ADN polymérase I, ligases) qui permettent d’éliminer le dimère et de
combler la brèche.

V.3.3. Réparation mutagène

Un scénario alternatif au blocage de la réplication par un dimère est d'insérer un nucléotide en
face du dimère pour poursuivre la réplication (scénario "mute" ou "meurt"). Ce mécanisme est
connu chez les bactéries et intervient probablement chez les Eucaryotes.

V.4. Mécanismes de réparation eucaryote

Les mécanismes de réparation ont été hautement conservés au cours de l’évolution : le
mécanisme de réparation eucaryote a des analogies avec E. coli. Chez l’Homme, on identifie
des gènes impliqués dans différents types de la réparation : réversion directe du dommage, le
système BER, le système NER, la réparation des mésappariements, la réparation par
recombinaison. Chez les eucaryotes, il n’y a pas d’équivalent du système SOS avec
augmentation importante de l’expression des protéines impliquées dans la réparation ; mais
plutôt relocalisation et concentration des protéines de réparation dans des complexes sub-
nucléaires.
Attention ! Le système d’opéron n’existe pas chez les eucaryotes, le génome étant trop
compliqué, et ainsi il n’y a donc pas de système de réparation de type SOS (donc pas de
protéine de type Rec A).

33
 Réparation par excision de base

Système de réparation par cassure simple brin et altération des bases suivis d’excision et de ré-synthèse
1- Une glycosylase reconnait l’altération de l’ADN.
2- Une endonucléase coupe la lésion.
3- Élimination de la partie lésée.
4- Polymérase + ligase.

34
CONCLUSION : MUTATIONS ET BIODIVERSITE

Le phénomène de mutation est certes peu fréquent, mais étant donné le nombre de nucléotides
présents dans l’ADN d’une part et le nombre de divisions des cellules à l’origine des gamètes
d’autre part, il est acquis qu’un spermatozoïde ou un ovule comporte toujours plusieurs dizaines
de mutations. L’existence de mutations est donc finalement un phénomène banal.

Nous savons que pour un gène, il existe le plus souvent plusieurs « versions » différentes
appelées allèles. C’est de cette diversité des allèles que découle la diversité génétique d’une
population et, par la même, la diversité des individus d’une même espèce.
- La comparaison des allèles d’un gène montre que ceux-ci diffèrent en général par quelques
nucléotides seulement. L’origine commune des divers allèles d’un gène ne fait pas de doute.
C’est en effet par mutation que se forme un nouvel allèle.
- Lorsqu’un individu hérite d’un nouvel allèle, celui-ci devient transmissible de génération en
génération : à long terme, il peut se répandre dans une population.
- Ainsi le phénomène de mutation, s’il peut se révéler souvent néfaste à l’échelle de l’individu,
doit être compris comme étant le fondement même de la biodiversité des populations et des
espèces.

En effet, pendant la réplication de l’ADN surviennent des erreurs spontanées et rares, dont la
fréquence est augmentée par l’action d’agents mutagènes. L’ADN peut aussi être endommagé
en dehors de la réplication. Le plus souvent, l’erreur est réparée par des systèmes enzymatiques.
Quand elle ne l’est pas, si les modifications n’empêchent pas la survie de la cellule, il apparaît
une mutation, qui sera transmise si la cellule se divise.
Une mutation survient soit dans une cellule somatique (elle est ensuite présente dans le clone
issu de cette cellule) soit dans une cellule germinale (elle devient alors héréditaire).

Les mutations en général et les mutations géniques en particulier sont donc la source aléatoire
de la diversité des allèles, fondement de la biodiversité.

35
EXERCICES DE MUTATIONS GENIQUES

Exercice 1
Le pénicillium est un champignon filamenteux qui produit des spores asexuées à profusion. La
souche sauvage est capable de synthétiser la leucine. Comment procéderiez-vous pour isoler
des mutants auxotrophes pour la leucine ?

Exercice 2
Chez la levure, la souche sauvage est capable de synthétiser la proline qui est nécessaire à sa
croissance. Comment procéderiez-vous pour isoler des révertants à partir d’un mutant
auxotrophe pour la proline ?

Exercice 3
À partir de levures haploïdes, prototrophes pour l’arginine, comment tireriez-vous profit de la
technique de réplique sur velours pour isoler des mutants arginine dépendants ?

Exercice 4
Chez la drosophile, Muller a soumis un mâle sauvage à l’irradiation aux rayons X et l’a croisé
ensuite à une femelle hémi Bar porteuse des gènes clB. Comment appelle-t-on cette expérience
? Quel est son but ? Donnez le résultat théorique de cette expérience.

Exercice 5
A partir d’un type sauvage d’une protéine contenant de la tyrosine, on a obtenu un mutant non-
sens. Est-il possible d’obtenir un révertant en traitant la souche mutante avec de l’EMS ?

Exercice 6
Est-il possible d’induire des mutations non-sens correspondant sur l’ARNm au triplet UAG,
UAA et UGA en traitant une souche sauvage avec de l’acide nitreux qui provoque uniquement
des transitions : A = T vers G = C ou T = A vers C = G dans l’ADN ? (On donne ADN sauvage
: TACG).

Exercice 7
Comparez les mécanismes d’action de 5BU et de l’EMS lors de la formation de mutations. A la
lumière de ces mécanismes, expliquez la spécificité de ces deux mutagènes.

Exercice 8
La désamination de la cytosine est intervenue spontanément dans une molécule d’ADN. Quelle
mutation peut-elle en résulter et quel système de réparation préconisez-vous pour éviter de
telles mutations ?

Exercice 9
On isole chez E. coli, une souche sauvage (S) et deux mutants (X, Y) présentant respectivement
les séquences d’ADN suivantes :
S: 3’ATTGTACATGTATTTGAATACCCAAACCATATCGCACT 5’
36
 X: 3’ATTGTACATGTGTTTGAATAGCCCAAACCATATCGCACT 5’
Y: 3’ATTGTACCATGTATTTGAATACCCAAACCATATCGCACT 5’
A l’aide du code génétique ci-dessous, déterminez pour les individus S, X, et Y, les séquences
d’ARN messager et de polypeptides les plus longues. Donnez les bases moléculaires des
mutations X et Y.

Le code génétique

Exercice 10
Chez Neurospora, on réalise le croisement entre deux souches l’un A et l’autre a, A et a sont les
types conjuguants. Dans la descendance parfaitement fertile, on isole 9 descendants pris au
hasard et numérotés de 1 à 9. Ces descendants sont croisés entre eux et avec les souches
parentales. On étudie la fertilité de ces croisements représentés dans le tableau ci-après :
Type A 1 3 4 5 6
Type a
2 F F 0 F 0
7 F F 0 F 0
8 F F 0 F 0
9 F F F F F
F signifie parfaitement fertile. 0 signifie complètement stérile.
Expliquez ces résultats en fonction de la présence de mutation récessive méi (méiose) dans
l’une des souches parentales. méi est une mutation méiotique qui provoque un arrêt brutal de la
méiose et conduit à la formation de produit méiotique abortif.

Exercice 11
Soit une espèce de fleurs à pétales bleus, la mutation w produit des pétales blancs, dans une
plante de génotype ww. Un simple événement de réversion se produit durant le développement
d’un pétale. Sous quelle forme cet événement pourra-t-il être détecté sur ce pétale ?
37
Exercice 12
La souche A de Neurospora contient une mutation adénine-3 qui reverse spontanément à une
fréquence de 10-6. La souche A est croisée avec une souche de type sauvage nouvellement
isolée. On récupère les souches Adé-3 de la descendance. Parmi 28 descendants Adé-3
analysés, 13 reversent à une fréquence de 10-6 ; 15 reversent à une fréquence de 10-3. Proposez
une hypothèse qui explique ce résultat.

Exercice 13
Vous utilisez l’acide nitreux (HNO2) pour faire reverser un allèle mutant Nic II de Neurospora.
Vous traitez les cellules, les étalez sur un milieu ne contenant pas de nicotylamine et recherchez
les colonies prototrophes. Pour deux allèles mutants, vous obtenez les résultats suivants :
a. Avec l’allèle 1 de Nic II, vous n’obtenez aucun prototrophe.
b. Avec l’allèle 2 de Nic II vous obtenez 3 colonies prototrophes A, B, C. Le croisement A par
sauvage donne 100 descendants qui sont tous prototrophes. Le croisement B par sauvage donne
78 prototrophes et 22 qui requièrent la nicotylamine pour pousser. Le croisement C par sauvage
donne 96 prototrophes et 4 qui requièrent la nicotylamine pour pousser. Expliquez ces résultats.

Exercice 14
Chez Neurospora crassa, à partir d’une souche (Tyr-) on a obtenu un (Tyr+). L’analyse
génétique a révélé qu’il s’agissait d’un suppresseur extragénique. A l’issue du croisement
révertant x sauvage, on a isolé une souche appelée A, de génotype Tyr+, Su. Afin de savoir si
ce suppresseur supprime les mutations Leu-, Ade-, Canar (résistance à la canamycine), on fait 3
croisements :
Leu+ Su x Leu- Su+ Ade+ Su x Ade- Su+ Canas Su- x Canar Su+
Min Min Nombre Min Min Nombre Min Min Nombre
+ Leu d’asques + Ade d’asques + Cana d’asques
+ + + + + +
+ + 50 + + 25 + + 45
+ + + + -
- + + + -
+
-
+ + + -
+ + 25 + - 5
- + + -
- + + +
1. Les 3 mutations sont-elles suppressibles ? 2. Localisation de ces suppressions ? 3. Quelles
informations supplémentaires auraient été obtenues en utilisant Tyr- Su dans les croisements ?

Exercice 15
Chez la drosophile le gène vg à l’état homozygote entraîne la formation d’ailes vestigiales. Ce
gène est situé sur le chromosome II. On entretient un stock de mouches (par transfert
périodique sur milieu neuf) où mâles et femelles sont homozygotes. On voit apparaître un jour
dans le stock une mouche à ailes normales. On la croise avec une mouche homozygote sauvage
vg+ : on obtient en F1 des mouches à ailes normales et en F2 : 13/16 de mouches à ailes
normales et 3/16 de mouches à ailes vestigiales. Interprétez ce résultat.
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