FILIERE : Formation au diplôme de docteur en pharmacie
NIVEAU/SEMESTRE : Quatrième année/S8
MODULE : Biochimie pré-instrumentale
Biochimie Pré-instrumentale
Pr . Adil LAAZIZ
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE
➢ La spectroscopie atomique est utilisée pour déterminer la concentration des éléments dans un
échantillon.
➢ La spectroscopie atomique a joué un rôle majeur dans le développement de notre base de données
actuelle sur les nutriments minéraux et les substances toxiques dans les aliments et en biochimie
clinique.
➢ Les méthodes de spectroscopie atomique sont utilisées pour la détermination qualitative et
quantitative de plus de 70 éléments.
➢ En règle générale, ces méthodes permettent de détecter des quantités de l'ordre de ppm à la partie
par milliard et, dans certains cas, des concentrations encore plus faibles.
➢ Les méthodes de spectroscopie atomique sont également rapides, pratiques et généralement très
sélectives.
➢ Il existe plusieurs types de spectroscopie atomique. La spectroscopie d'absorption atomique (AAS),
la spectroscopie d'émission atomique (AES) et la spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP-MS)
sont les plus courantes.
➢ Ces trois méthodes instrumentales ont largement remplacé les méthodes traditionnelles de chimie
humide pour l'analyse minérale des aliments, bien que les méthodes traditionnelles pour le calcium,
le chlorure, le fer et le phosphore restent utilisées aujourd'hui.
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE Éléments minéraux dans les aliments classés
en fonction de leur importance nutritionnelle
et de leur risque potentiel de toxicité
• En théorie, tous les éléments
du tableau périodique
peuvent être déterminés par
AAS ou AES.
• Dans la pratique, la
spectroscopie atomique est
principalement utilisée pour
déterminer les éléments
minéraux.
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE - Principes généraux
➢ AAS quantifie l'absorption du rayonnement électromagnétique par des
atomes neutres bien séparés à l'état gazeux, tandis que la AES mesure
l'émission de rayonnement par des atomes excités par la chaleur ou
d'autres moyens.
➢ La spectroscopie atomique est particulièrement bien adaptée aux
mesures analytiques car les spectres atomiques sont constitués de lignes
discrètes et chaque élément possède un spectre unique.
➢ Par conséquent, les éléments individuels peuvent être identifiés et
quantifiés avec exactitude et précision, même en présence d'atomes
d'autres éléments.
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE - Principes généraux - Atomisation
• La spectroscopie atomique exige que les atomes de l'élément considéré soient à
l'état atomique (non combinés à d'autres éléments dans un composé) et qu'ils
soient bien séparés dans l'espace.
• Dans les aliments, pratiquement tous les éléments sont présents sous forme de
composés ou de complexes et doivent donc être convertis en atomes neutres
(atomisés) avant que des mesures d'absorption ou d'émission atomique
puissent être effectuées.
• L'atomisation consiste à séparer les particules en molécules individuelles
(vaporisation) et à briser les molécules en atomes. Elle est généralement
réalisée en exposant l'analyte (la substance à mesurer) à des températures
élevées dans une flamme ou un plasma.
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE - Principes généraux - Atomisation
Représentation schématique de l'atomisation
d'un élément dans une flamme ou un plasma.
(Le grand cercle en bas représente une
minuscule gouttelette d'une solution
contenant l'élément (M) en tant que partie
d'un composé).
➢ Une solution contenant l'analyte est introduite dans la
flamme ou le plasma sous la forme d'un fin brouillard.
➢ Le solvant s'évapore rapidement, laissant des particules
solides de l'analyte qui se vaporisent et se décomposent
en atomes qui peuvent absorber le rayonnement
(absorption atomique) ou devenir excités et émettre
ensuite un rayonnement (émission atomique).
SPECTROSCOPIE ATOMIQUE - Principes généraux - Atomisation
Méthodes d'atomisation des analytes
Température
Source d'énergie pour
approximative Méthode d'analyse
l'atomisation
d'atomisation (°C)
Flamme 1700-3150 AAS, AES
Électrothermie 1200-3000 AAS (four à graphite)
Plasma d'argon couplé par
6000-7000 ICP-AES, ICP-MS
induction
SPECTROSCOPIE D’ABSORPTION ATOMIQUE
➢ L'AAS est une méthode analytique basée sur l'absorption du rayonnement ultraviolet ou
visible par des atomes libres à l'état gazeux.
➢ Il s'agit d'une méthode relativement simple qui a été la forme de spectroscopie atomique
la plus utilisée. Toutefois, elle est progressivement remplacée par la spectroscopie à
plasma inductif (ICP) et la spectrométrie de masse à plasma inductif.
➢ Le processus de l'AAS comporte deux étapes :
1) l'atomisation de l'échantillon
2) L'absorption du rayonnement d'une source lumineuse par les atomes libres (l'échantillon,
liquide ou solide, est atomisé dans une flamme ou un four à graphite.
Lors de l'absorption de la lumière ultraviolette ou visible, les atomes libres subissent des
transitions électroniques de l'état fondamental à des états électroniques excités.
➢ Deux types d'atomisation sont couramment utilisés en AAS :
- Atomisation par flamme
- Atomisation électrothermique (four à graphite)
SPECTROSCOPIE D’ABSORPTION ATOMIQUE AAS - Principe
• Cette technique repose sur le principe selon lequel les atomes libres (gaz) générés dans un
atomiseur peuvent absorber un rayonnement à une fréquence spécifique.
• L'AAS quantifie l'absorption des atomes à l'état gazeux.
• Les atomes absorbent la lumière UV ou visible et effectuent des transitions vers des niveaux
d'énergie électronique plus élevés.
• La concentration de l'analyte est déterminée à partir de la quantité d'absorption.
• Les mesures de concentration sont généralement déterminées à partir d'une courbe
d’étalonnage.(après étalonnage de l'instrument avec des étalons de concentration connue).
• La spectroscopie d'absorption atomique est une technique très courante pour détecter et
mesurer la concentration de métaux dans un échantillon à des niveaux très faibles et avec
une grande précision.
• Par rapport aux méthodes traditionnelles de chimie humide, les mesures par AAS sont
extrêmement rapides.
PRINCIPES DE LA SPECTROSCOPIE D’ABSORPTION
ATOMIQUE DE FLAMME
• La quantité de rayonnement absorbée par l'échantillon est donnée par la
loi de Beer-Lambert :
• A= log(I0/I) = abc
• où :
A = absorbance
I0 = intensité du rayonnement incident sur la flamme
I = intensité du rayonnement sortant de la flamme
a = absorptivité molaire
b = longueur du trajet dans la flamme
c = concentration des atomes dans la flamme
L'absorbance est directement liée à la concentration d'atomes dans la flamme.
SPECTROSCOPIE D’ABSORPTION ATOMIQUE AAS - Instrumentation
Les spectromètres d'absorption atomique se composent de 5 éléments
principaux :
1. Source de rayonnement : une lampe à cathode creuse (HCL : hollow
cathode lamp) ou une lampe à décharge sans électrode (EDL : electrode-
less discharge lamp).
2. Atomiseur : un système nébuliseur-brûleur ou un four électrothermique.
3. Monochromateur : un monochromateur à réseau ultraviolet-visible (UV-
Vis).
4. Détecteur : un tube photomultiplicateur (PMT) ou un détecteur à semi-
conducteurs (SSD).
5. Ordinateur
Monochromateur
Détecteur
Lampe à
cathode
creuse
Flamme
Nébuliseur Solution à
tester
DATA
Résultats et courbes d'étalonnage
• Selon la loi de Beer, l'absorbance est directement liée à la
concentration. Toutefois, le tracé de l'absorbance en fonction de la
concentration s'écarte de la linéarité lorsque la concentration
dépasse un certain niveau.
Tracé de l'absorbance en fonction
de la concentration montrant une
non-linéarité au-delà d'une certaine
concentration.
