Méthodes
1. Préparation de l’environnement de travail et du matériel
Avant toute manipulation, le plan de travail a été soigneusement désinfecté à l’aide d’eau de Javel. Un
bec Bunsen a été allumé afin d’assurer une zone stérile autour de la paillasse. Les mains de l’opératrice
ont été lavées, puis désinfectées avec de l’éthanol à 70 %.
2. Préparation du milieu de culture
Le milieu Sabouraud gélosé a été préparé selon les recommandations du fabricant. Il a été chauffé dans
un bain-marie jusqu’à dissolution complète, puis coulé dans des boîtes de Pétri stériles dans des
conditions aseptiques. Les boîtes ont été laissées à température ambiante pendant quelques minutes
jusqu’à solidification du milieu.
3. Ensemencement des échantillons
Des fragments de la partie inférieure des ongles infectés ont été prélevés avec une pince stérile, puis
placés au centre des boîtes de Pétri contenant le milieu Sabouraud solidifié. Les boîtes ont ensuite été
incubées dans un incubateur à une température comprise entre 25 °C et 30 °C, pendant une durée allant
d’une à quatre semaines, afin de permettre la croissance fongique.4. Extraction de l’huile essentielle de
thym
La plante utilisée pour l’extraction est Thymus pallescens, récoltée en mai 2024 dans la région de
Lardjem (wilaya de Tissemsilt, Algérie). Les parties aériennes (feuilles et fleurs) ont été soigneusement
séchées à l’abri de la lumière et de l’humidité pendant quelques jours.
L’extraction de l’huile essentielle a été effectuée par hydrodistillation à l’aide d’un appareil de type
Clevenger, pendant une durée de 3 à 4 heures, afin d’obtenir un rendement optimal. L’huile obtenue
était de couleur jaune clair et limpide.
Elle a été conservée dans des flacons en verre ambré, stockés à l’abri de la lumière et à une température
modérément basse, pour préserver la stabilité de ses composants volatils et ses propriétés
antifongiques potentielles.Évaluation de l’activité antifongique de l’huile essentielle de thym
Deux souches fongiques ont été isolées à partir des échantillons d’ongles infectés : Trichophyton rubrum
(dermatophyte filamenteux) et Candida albicans (levure pathogène). L’activité antifongique de l’huile
essentielle de thym a été testée sur les deux souches à l’aide de deux méthodes distinctes.
a) Préparation des solutions
L’huile essentielle de thym a été diluée dans le solvant DMSO pour obtenir différentes concentrations :
10 %, 20 %, 30 %, 40 % et 50 %. Les solutions préparées ont été conservées dans des conditions stériles
avant utilisation.
b) Méthode par diffusion sur disques (Candida albicans et Trichophyton rubrum)
Des milieux Sabouraud gélosés ont été préparés et versés dans des boîtes de Pétri. Après solidification,
les milieux ont été ensemencés par étalement de l’inoculum fongique.
Des disques de papier stériles (fabriqués à partir de papier Whatman) ont été placés au centre de
chaque boîte. Un volume de 20 µL de chaque solution diluée d’huile essentielle a été appliqué sur
chaque disque à l’aide d’une micropipette.
Cette opération a été répétée pour chaque concentration d’huile essentielle et pour chaque souche,
avec au moins trois répétitions par condition.
c) Méthode par incorporation dans le milieu (Trichophyton rubrum uniquement)
Pour cette méthode complémentaire, les différentes concentrations d’huile essentielle de thym ont été
directement ajoutées au milieu Sabouraud encore liquide (après sa stérilisation). Après
homogénéisation, le milieu enrichi a été coulé dans des boîtes de Pétri stériles.
Une fois solidifié, un fragment de culture de Trichophyton rubrum a été placé au centre de chaque
boîte. Les boîtes ont ensuite été incubées à une température comprise entre 25 °C et 30 °C pendant 7 à
14 jours.Matériel
1. Matériel biologique
Échantillons cliniques : fragments d’ongles présentant des signes cliniques de mycose unguéale.
Souches isolées : Trichophyton rubrum et Candida albicans identifiés à partir des échantillons après
culture et observation microscopique.
2. Milieu de culture
Milieu Sabouraud gélosé utilisé pour l’ensemencement et la culture des champignons.
3. Matériel chimique
Huile essentielle de thym : extraite par hydrodistillation à l’aide d’un appareil de type Clevenger.
Solvant : DMSO (diméthylsulfoxyde), utilisé pour diluer l’huile essentielle.
Agents de désinfection : eau de Javel et éthanol à 70 % pour la stérilisation du matériel.
4. Matériel de laboratoire
Boîtes de Pétri stériles.
Disques en papier (fabriqués à la main à partir de papier Whatman).
Pinces stériles.
Oese de platine pour l’ensemencement.
Bain-Marie pour le maintien de certaines conditions expérimentales.
Balance de précision.
Appareil de type Clevenger pour l’extraction de l’huile essentielle.
