Centre Régional des Métiers de l’Eduction et de
la formation de Rabat-Salé-Kénitra
Cycle de Formation des cadres d’appui
Spécialité : Préparateurs des laboratoires scolaires
Module : TP Biologie
TP d’Extraction et Séparation des pigments
chlorophylliens et
La Dissection de la fleure Hibiscus
Réalisée par :
⮚ Hind BENKAIDA
⮚ Zaynab HAYANI
⮚ Zahra ERRAZIK
⮚ Ghizlane
⮚ Rajaa
⮚ Meryame
Encadrée par :
⮚ Pr.Elabdellaoui
Introduction :
L'extraction et la séparation des pigments chlorophylliens par chromatographie sont des
techniques couramment utilisées en biochimie pour analyser la composition des pigments
dans les plantes et les algues. Les pigments chlorophylliens sont des molécules qui absorbent
la lumière et sont responsables de la photosynthèse, le processus par lequel les plantes et les
algues convertissent l'énergie lumineuse en énergie chimique.
L'extraction de ces pigments implique souvent l'utilisation de solvants organiques tels que
l'éthanol ou l'acétone pour dissoudre les pigments dans les tissus végétaux ou les algues.
Ensuite, la chromatographie est utilisée pour séparer les différents pigments selon leur affinité
pour les colonnes de gel ou les phases stationnaires de solvants.
La chromatographie est une technique de séparation basée sur la différence de polarité et
d'affinité des molécules pour les phases stationnaires et mobiles. Les pigments
chlorophylliens ont des propriétés physiques et chimiques différentes les uns des autres, ce
qui les rend séparables par chromatographie.
Cette technique est utile pour comprendre les processus de photosynthèse et de pigmentation
chez les plantes et les algues, ainsi que pour étudier la qualité des aliments et des
médicaments qui contiennent des extraits de plantes riches en pigments chlorophylliens.
Extraction de la chlorophylle brute
Principe :
L'extraction de la chlorophylle des végétaux permet d’obtenir une solution chlorophyllienne
qui va servir à réaliser la suite des manipulations du protocole. Les feuilles de la plante sont
mises en contact avec de l’éthanol absolu qui va les léser mécaniquement et va détruire les
membranes des cellules dans le but d’en extraire les organites (les lipides et les lipoprotéines
sont solubles dans l'éthanol). Le broyat ainsi obtenu est filtré et la chlorophylle est extraite
grâce au dichlorométhane, solvant d’extraction. Après une seconde filtration, le filtrat est
chauffé afin de garder uniquement les pigments de la chlorophylle.
Objectif :
Mise en place l’extraction de chlorophylle brute.
Extraction de chlorophylle, séparation et identifications des différents pigments
chlorophylliens par chromatographie.
Matériel :
- Hibiscus - Ciseaux
- Entonnoir - Papier filtre
- Eprouvette - Alcool
- Pilon et mortier - Sable fin
- Erlenmeyer
Protocole :
Placer dans un mortier un peu de sable fin.
Ajouter les feuilles d’Hibiscus bien vertes coupées en petits morceaux.
Broyer à l’aide du pilon.
Ajouter progressivement environ 10 ml d’alcool à 90° et continuer à broyer.
Filtrer à l’aide de papier filtre, L’entonnoir, éprouvette le contenu du mortier
Résultat attendu :
La couleur verte des plantes est due à la présence de la chlorophylle
La chlorophylle est un pigment photosynthétique qui absorbe certaines
longueurs d’onde de la lumière visible
La lumière verte n’est pas absorbée mais réfléchie, ce qui donne à la
plante, à ses feuilles ou à sa tige une apparence verte
Séparation des pigments chlorophylliens par la technique
de chromatographie
Principe :
La chromatographie sur couche mince permet une séparation des pigments dans un but
d’analyse. La phase fixe est composée d'une couche solide sur laquelle est déposé un gel de
silice servant de support et la phase liquide est constituée d’un éluant qui sépare les
différents pigments. Plusieurs gouttes de solution de chlorophylle sont déposées sur la phase
fixe à l’aide d’un capillaire pour former une tâche. La plaque de silice est mise en contact
avec la phase liquide qui va migrer et entrainer les pigments de la chlorophylle par
capillarité. Une fois que la migration est terminée, on obtient plusieurs tâches colorées sur la
plaque de silice correspondantes aux différents composants de la chlorophylle.
Objectif :
- Connaitre les constituants de la chlorophylle
Matériel :
- Solution de chlorophylle brute
- Bécher
- Papier wattman
- Solvants organiques (éther de pétrole 85%, acétone 10%, cyclohexane 5%)
Protocole expérimental :
Repérer le bas de la bande de papier à chromatographie : extrémité opposée à
l’orifice par lequel la bande sera suspendue.
Veiller à prendre le papier uniquement par les bords sans poser vos doigts sur la zone
de migration.
Déposer à environ 2 cm du bas de la bande, une dizaine de gouttes de la solution de
chlorophylle brute obtenue, en séchant entre chaque dépôt.
Verser du solvant organique dans l’éprouvette ; la tache de chlorophylle brute doit
être située au-dessus du niveau du solvant.
Suspendre le papier à chromatographie à l’aide d’un crochet fixé sur un bouchon, le
placer dans l’éprouvette et fermer
Faire l’obscurité en recouvrant bécher d’un cache noir et laisser migrer le solvant.
Résultat obtenu :
Le solvant qui sert à la migration des pigments s’imprègne sur tout le papier filtre ce
qui provoque l’illisibilité de la séparation des pigments
La dissection de la fleur Hibiscus
Objectif :
- Connaitre les constituants du fleur Hibiscus
- Faire la formule et le diagramme florale
Matériel :
- Fleure Hibiscus
- Scalpel
- Pinces
- Loup
Protocole expérimental :
- Observation de la fleur entière
- Séparation des pétales
- Identification des étamines
- Identification du pistil
- Coupe longitudinale de l’ovaire
Résultat attendu
