Biosignalisation et culture cellulaire

Chapitre 1 : Signalisation cellulaire

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 3
Février 2018
 Introduction
Intérêt de communiquer ?
- Afin d’induire une action : proliférer, se différencier, migrer, se
maintenir fonctionnel ou tout simplement mourir…

- Afin de se coordonner : coordination fonctionnelle des cellules

dans un microenvironnement donnée jusqu’au niveau de
l’organisme

- Afin de répondre aux questions de la cellule : Où suis-je ? Qui

suis-je ? Que dois-je faire ?

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 4
Février 2018
 Introduction
Organismes unicellulaire et pluricellulaire
La signalisation cellulaire a été essentiellement abordée dans le
cadre d’organismes multicellulaires, elle peut toutefois intervenir
entre les cellules de deux organismes distincts.

Exemples :
- Mammifères : l'embryon communique avec des cellules de l'utérus.
- Bactéries : dans l'appareil digestif humain, les bactéries échangent des
signaux entre elles et avec les cellules épithéliales et du système
immunitaire.
- Levures : Lors de l'accouplement de Saccharomyces cerevisiae, certaines
cellules envoient autour d'elles un signal peptidique qui stimule des
récepteurs à la surface d'autres cellules de levure lors de l'accouplement.
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 5
Février 2018
 Définition
Dans certains cas, l'activation du récepteur provoquée par la
liaison du ligand à un récepteur est directement couplée à la
réponse de la cellule au ligand.
Cependant, pour de nombreux récepteurs situés à la surface de la
cellule, les interactions ligand-récepteur ne sont pas directement
couplées à la réponse de la cellule. Le récepteur activé doit tout
d'abord interagir avec d'autres protéines au sein de la cellule
avant que l'effet physiologique du ligand sur le comportement de
la cellule ne se manifeste.
Il arrive fréquemment que le fonctionnement d'une chaîne de
plusieurs protéines cellulaires en interaction soit modifiée à la
suite de l'activation du récepteur. L'ensemble des modifications
cellulaires induites par l'activation du récepteur est appelé voie ou
mécanisme de transduction du signal (wikipedia)
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 6
Février 2018
 Définition
La signalisation cellulaire : qu’est-ce que c’est ?
- La signalisation cellulaire (signalisation transmembranaire ; transduction du
signal) est le processus par lequel les cellules communiquent avec leur
environnement et répondent temporairement aux différents stimuli
qu’elles peuvent percevoir (jusqu’à un certain degré en fonction des cellules).

- C’est un système complexe de communication qui régit les processus

fondamentaux des cellules et leur permet de coordonner leur activité.

- En 2016, 15,4 % de tous les articles scientifiques utilisant le terme

« cell » ont également utilisé l’expression « signaling » (Pubmed). Il
apparaît donc que les mécanismes de signalisation représentent un
important domaine de recherche et d’étude dans les sciences
biologiques.
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 7
Février 2018
 Définition
Interdisciplinarité
Le domaine de la signalisation cellulaire a émergé d’une multitude de disciplines
considérées comme historiquement distinctes :
- Endocrinologie : signalisation de la réponse hormonale
- Neurosciences : action des neurotransmetteurs
- Immunologie : cytokines et interleukines. Activation des cellules du système
immunitaire par les antigènes
- Pharmacologie : mécanismes d’action des drogues
- Oncologie : certains oncogènes encodent pour des molécules qui participent à la
signalisation cellulaire
- Biologie cellulaire : la matrice extracellulaire et le cytosquelette influencent et
participent à la transduction du signal.
- Biologie du développement : Les gènes requis pour le développement codent
souvent pour des composants du signal de transduction
- Pharmacogenomique : Les composants du signal de transduction sont des cibles
idéales pour la recherche de médicaments
- Génomique, proteomique : 30% génome de métazoaires codent pour des molécules
de signalisation cellulaire
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 8
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire
Il existe différents types de moyens par lesquels les cellulles
communiquent entre elles :

- Intracrine
- Juxtacrine
- Autocrine
- Paracrine
- Synaptique
- Endocrine

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 9
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Intracrine)
Ce mode de communication concerne des molécules telles que
certaines cytokines et hormones où celles-ci agissent au niveau du
cytoplasme des mêmes cellules qui les ont produites.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 10
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Contact direct)
Ce mode de communication concerne quelques facteurs de croissance ainsi que
certaines cytokines et hormones et surtout dans les phénomènes d’adhésion et
de reconnaissance immunitaire. L’action peut s’effectuer par interaction entre 2
molécules membranaires des cellules juxtaposées.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 11
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (juxtacrine)
Ce mode de communication concerne surtout les ions (Ca++). L’échange
s’effectue entre les cellule par jonction communicante entre les cytoplasmes
des 2 cellules ou jonctions gap ce qui permet une réponse coordonné et rapide.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 12
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Autocrine)
Ce mode de communication concerne des molécules telles que des
hormones et des cytokines où celles-ci agissent au niveau des
membranes cellulaires des mêmes cellules qui les ont produites.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 13
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Paracrine)
Ce mode de communication concerne des molécules telles que
certains peptides où ceux-ci agissent au niveau des cellules
voisines des cellules qui les ont produites.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 14
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Synaptique)
Ce mode de communication concerne exclusivement les
neurotransmetteurs qui sont libérés au niveau des fentes
synaptiques stimulant la cellule cible.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 15
Février 2018
 Introduction
Rappel : Formes de communication cellulaire (Endocrine)
Ce mode de communication concerne les hormones endocrines
qui sont véhiculées à travers le sang vers leurs cellules cibles.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 16
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire

1. Molécule signale

2. Récepteur du signal

3. Transducteur du signal
(optionnel)

4. Effecteur du signal

5. Réponse au signal

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 17
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale
Le signal transmit à la cellule cible peut se présenter sous
différentes formes :
Signal
moléculaire
Signal
physique
Polaire Non polaire Signal
gazeux

Stéréocils et photons

Monoxyde d’azote

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 18
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale
- Neurotransmetteurs : dopamine, sérotonine,
acétylcholine, glycine, adénosine
- Neuropeptide : endomorphine, vasopressine,
Signal ocytocine
moléculaire - Chemokines : IL 1-18, GM-CSF, G-CSF
- Hormones peptidiques : glucagon, somatostatine,
LH, FSH, GH, prolactine insuline.
Polaire Non polaire
- Régulateurs de développement : delta, serrate,
Wnt, BMP, hedgehog, nodal
- Facteurs de croissance : TNFα, TNFβ, EGF, VEGF,
BDNF, NGF, FGF
- Matrice extracellulaire : fibronectine
- Molécules d’adhésion : cadhérines
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 19
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale

- Hormones stéroïdes : estrogènes , androgènes,

Signal glucocorticoïdes, vitamine D.
moléculaire - Hormones thyroïdiennes
- Acides gras
Polaire - Vitamine A
Non polaire

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 20
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale

Signal
physique

Le déplacement des cils vers la

strie vasculaire ouvre les canaux
Stéréocils et photons
cationiques : le potassium (K+)
entre et la cellule ciliée est
dépolarisée ; dans le même
temps un autre cation, le calcium
(Ca²+) entre lui aussi.
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 21
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale L’adsorption de l’énergie lumineuse par les photo-
pigments initie la réponse nerveuse, en l’occurrence
une hyperpolarisation de la cellule
photoréceptrice.
Pour les bâtonnets et les cônes, ce pigment s’appel la
rhodopsine
L’activation de la rhodopsine (qui est un récepteur)
Signal
physique
par la lumière déclenche un signal intracellulaire

Stéréocils et photons

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 22
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale
Les photons

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire
Cours de Signalisation cellulaire – Pr. Jérôme Guerlotté 23
Université des Antilles et de la Guyane, Domaine Sciences, Technologies, Santé
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale• Le NO est un radical libre qui peut diffuser à
travers la membrane plasmique et affecter les
cellules avoisinantes.
• La NO synthase est responsable de la fabrication
de NO à partir d’arginine et d’oxygène.
• L’action du NO s’effectue principalement à partir
de l’activation de son récepteur cible (l’enzyme
soluble guanylate cyclase) qui lorsqu’elle est
Signal
gazeux
activé, produit un second messager la cGMP
• Actions :
- Relâchement des vaisseaux sanguins
- Régulation de la libération de
Monoxyde d’azote neurotransmetteurs
- Réponse immunitaire cellulaire

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 24
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La molécule signale
L'acétylcholine libérée L'oxyde nitrique (NO) "un messager passe-muraille"
par les nerfs sur les
cellules endothéliales,
provoque la relaxation
des cellules
musculaires lisses de
la paroi vasculaire.

Cet effet paracrine

est indirect, il passe
par la formation
d'oxyde nitrique (NO)
dans la cellule
endothéliale, lequel
traverse les deux
membranes et va
stimuler son récepteur
intracellulaire, la
guanylate cyclase du
GMPc dans la cellule Guanylate cyclase
musculaire adjacente
en interagissant avec
son atome de Fe Cours de Signalisation cellulaire – Pr. Jérôme Guerlotté
OIM5
Marir Rafik Université des Antilles et de la Guyane, Domaine Sciences, Technologies, Santé
!
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 25
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 26
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires
Un récepteur est une protéine de la membrane cellulaire ou du
cytoplasme ou du noyau cellulaire qui se lie spécifiquement à un facteur
spécifique ou un ligand, tels qu’un neurotransmetteur, une hormone, une
protéine un peptide un lipide ou un gaz.

Cette interaction crée une modification du récepteur qui conduit, par

exemple, à l’ouverture du canal lié au récepteur, ou se transmet par
l’intermédiaire de réactions enzymatiques à l’effecteur distant du
récepteur.

Les modifications du comportement du récepteur protéique induites par

le ligand conduisent à des modifications physiologiques qui constituent
les « effets biologiques » du ligand.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 27
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires
Les 6 grandes classes de récepteurs

I – Récepteurs canaux ioniques (ionotropiques)

II – Récepteurs (7TM) couplés aux protéines G

III – Récepteurs enzymes (RTK..)

IV – Récepteurs associés à une enzyme (JAK, STAT)

V – Récepteurs nucléaires

VI - Récepteurs de contact

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 28
Cours de Signalisation cellulaire – Pr. Jérôme Guerlotté
Février 2018 Université des Antilles et de la Guyane, Domaine Sciences, Technologies, Santé
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : Récepteurs nucléaires
- Ils ont principalement un rôle de facteur
de transcription : ce sont des protéines qui
agissent dans le noyau (en relayant des
signaux hormonaux) et qui modulent la
transcription des gènes.
- Ils agissent en trans : ils induisent la
transcription de gènes codant des
protéines qui à leur tour activent de
nombreux autres gènes.
- Certains agissent sur d'autres voies de
signalisation intracellulaire.
- Ils peuvent être classés en deux principales
catégories selon leur mécanisme d'action
et leur distribution subcellulaire en
absence de leur ligand (Type I et Type II)
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 29
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : Récepteurs nucléaires
Récepteur nucléaire de type I : situés dans le cytosol puis délocalisés dans le
noyau. Son activation induit :
• la dissociation d'une protéine de choc thermique
• la translocation active du récepteur nucléaire du cytoplasme vers le
noyau
• l'homo-dimérisation du récepteur nucléaire
• sa fixation sur une séquence spécifique de l'ADN : HRE « Hormone
Responsive Element » .
Récepteur nucléaire de type II : toujours maintenus dans le noyau, fixés sous
forme d'hétéro-dimères (avec un autre R. de type "retinoid X receptor") à
l'ADN. En l'absence de ligand, ces récepteurs sont souvent complexés à des
protéines co-répressives. la fixation du ligand induit :
• la dissociation des co-répresseurs et le recrutement de protéines co-
activatrices de la transcription
• recrutement de protéines de transcription (ARN polymérase)
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 30
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : Récepteurs nucléaires
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : Récepteurs membranaires

Un récepteur membranaire comporte une partie

extracellulaire où se trouve le site de
reconnaissance de la molécule informative, une
partie transmembranaire et une partie
intracellulaire.
Pour activer un récepteur membranaire, la
molécule informative n’a pas à pénétrer dans la
cellule. L’activation des récepteurs membranaires
par les messagers déclenche des modifications
qui peuvent rester localisées à la membrane,
s’étendre à l’ensemble du cytoplasme ou
atteindre le noyau.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 32
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les récepteurs canaux
On peut distinguer schématiquement trois types de récepteurs membranaires : les
récepteurs canaux, les récepteurs enzymes et les récepteurs liés aux protéines G.
La caractéristique générale des récepteurs canaux est d’avoir une réponse
instantanée et de courte durée.
L’ouverture du canal nécessite souvent l’interaction simultanée de deux molécules
activatrices (récepteur nicotinique à l’acétylcholine et récepteur GABAA).

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 33
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les récepteurs enzymes
Quels sont les 4 principaux types de récepteurs enzymes

1 - Récepteurs à activité Tyrosine Kinase (RTK)

2 - Récepteurs à activité Sérine/Thréonine Kinase (TGFβ, Activine)

3 - Récepteurs à activité Guanylate cyclase (ANF)

4 - Récepteurs à activité Tyrosine ou Sérine Phosphatase (PTP, CD45)

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 34
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les récepteurs enzymes
Possédant une activité enzymatique.
La modulation de son activité est de
type kinase ou guanylate cyclase ou
phosphatase :
1) Protéine kinase. Pour la plupart
tyrosine kinases (RTK) ex
récepteur à l’insuline. Il en existe
aussi à activité sérine/thréonine
kinase.
2) Guanylate cyclase. L’activation
de ce récepteur provoque la
formation, de GMPc à partir de
GTP. Ces GMPc activent des
protéines kinases.
3) Phosphatase. Impliquées dans
des cascades de
Marir Rafik déphosphorylation (plus rares)
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 35
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les récepteurs enzymes

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 36
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les RCPG
Les RCPG ont une structure commune à 7 hélices α transmembranaires (TM1-TM7) présentant
3 boucles extracellulaires (E1, E2 et E3) et 3 boucles intracellulaires (I1, I2 et I3).
L'extrémité N-terminale de la protéine est extracellulaire et l'extrémité C-terminale est
intracellulaire. Leurs ligands sont variés : hormones, neurotransmetteurs, chimiokines, ions
calcium, phéromones, photons etc.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 37
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les récepteurs cellulaires : les RCPG
Les RCPG sont classés selon leurs propriétés pharmacologiques en 4 principales super familles :
- classe A rhodopsin like (la plus large et la plus étudiée); classe B secretin-like, classe C
metabotropic glutamate/pheromone, et classe F frizzled receptors

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 38
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Désensibilisation des récepteurs

Internalisation Internalisation Régulation

Phosphorylation Boucle de
et et recyclage négative des
IV -3-B : Régulation négative du nombre total de récep
séquestration
et découplage
protéines de
rétro-
fonctionnel régulation
signalisation
cular Biology of the Cell)

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 39
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Désensibilisation des récepteurs
La phosphorylation de résidus Ser ou Thr de l'extrémité C-terminale par les
GRK « G-protein-coupled receptor kinases », joue un rôle capital dans le
traffic intracellulaire et le recyclage des RCPG.
1. Ceci augmente la fixation de β-arrestines sur la surface intracellulaire du
récepteur. En masquant cette surface, les β-arrestines empêchent ainsi
le couplage du RCPG avec sa protéine G, c'est la désensibilisation du
RCPG.
2. les β-arrestines fixent le RCPG aux éléments de la machinerie
d'internalisation, la clathrine et l'adaptateur de la clathrine AP2
(clathrin,β 2-adaptin). Il y a alors endocytose du RCPG dynamin (Dyn)-
dependent
3. le RCPG est alors : - soit dirigé vers les lysosomes pour y être dégradé
- soit recyclé vers la membrane plasmique où il est de
nouveau apte à percevoir le signal
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 40
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Désensibilisation des récepteurs

Down-regulation

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 41
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La cellule peut aussi internaliser le récepteur et son ligand
pour prolonger le signal

Prolonger le receptors:
G-protein-coupled signal Signaling from the inside

Parathyroid hormone (PTH)

elicits sustained cAMP
production by stimulating a
prolonged association
between the PTH receptor,
activated G protein and
adenylyl cyclase in early
endosomes.

Original paper: Nature

Chemical Biology advance
online publication
23 August 2009 (DOI
10.1038/nchembio.206)

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 42
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les transducteurs du signal : Les protéines G

Les petites pGs : pG monomérique : GTPases non liées à la

Mb, elles interviennent dans la régulation du cycle
cellulaire, le trafic cellulaire de vésicules membranaires et
le contrôle de la synthèse des protéines. Ex : RAS, Rho…

Les Grandes pGs : pG hétérotrimérique (αβγ) : GTPases

liées à la Mb cellulaire au niveau du cytoplasme, elles sont
impliquées dans la transduction du signal.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 43
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les transducteurs du signal : Les protéines G
Les chaines α
- Membranaire 39 à 46 kDa
- Liaison non covalente aux chaînes β et γ
- Fixation du GTP et GDP
- Fixation au récepteur
- Liaison à l’effecteur

Les chaines β
- Soluble 35 à 39 kDa

Les chaines γ
- Membranaire 8 kDa
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 44
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les transducteurs du signal : Les protéines G

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 45
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les transducteurs du signal : Les protéines G
Les sous-unités (β–γ) peuvent agir sur des effecteurs
différents de ceux reconnus par la sous-unité α, après
l'activation et la dissociation des sous-unités.

Les sous-unités β et γ ne sont pas des enzymes, elles n'ont

donc pas de site catalytique : elles agissent donc comme des
modulateurs dans la signalisation liée aux protéines G via des
interactions protéine - protéine qu'elles régulent.

En conséquence, le complexe (β–γ) agit aussi comme une

molécule signal.
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 46
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs du signal

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 47
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
III - 1 : Les différents éléments du couplage
Les effecteurs duIIIsignal
-1-D : Les effecteurs
Les protéines G conduisent le signal qu’elles ont elles mêmes reçues sans quitter
la membrane. Celui-ci est diffusé dans le cytoplasme par un effecteur.
ENZYMES ENZYMES
Adénylate cyclase Adénylate cyclase
Phospholipase C-β Phospholipase C-β
Phospholipase A2 Ligands Phospholipase A2
Phosphodiestérase GMPc des RCPG Tyrosine phosphatases
CANAUX IONIQUES Tyrosine kinases
TRANSPORTEURS CANAUX IONIQUES

EFFECTEUR EFFECTEUR
par Gα par βγ

Seconds
messagers
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 48
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs du signal : enzyme

Réponse cellulaire
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 49
Février 2018
dénylate cyclase :
nsmembranaires
oplasmiques catalytiques
Acteurs de la signalisation cellulaire
alyse la Les
réaction ATPdu signal
effecteurs AMPc + PPi
: enzyme
stimuléeAdénylate unité αs-GTP provenant de
cyclase :
par la sous
- 12 segments transmembranaires
par son Ho spécifique
- 2 domaines cytoplasmiques catalytiques
- catalyse la réaction ATP --------------> AMPc + PPi (régulée par PDE)
tion ligand entraîne une
- stimulée par inhibition
αs-GTP provenant de l’activité
de l’activation de par le ligand
du RCPG

impliquée est a te
y l
Adénylate
n se
dont la sous d é la
cyclase
A y c
αι
αi-GTP) inhibe α c ATP
PP

cyclase
GGTT

! AMPc
Dans certains cas, il y a inhibition de l’activité
Marir Rafik
de AC (protéinePKA
G de type αi-GTP)
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 50
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
L'AMP cycliste
Les effecteurs du signal : enzyme
NH2
N
O O O N
5' Adénine
-O - P - O - P - O- P - O - CH2 N N
O
O- O- O-
4' 1' ATP
Phosphates
3' 2'
OH OH Ribose

Adénylate cyclase

NH2
N
N
5'
O O N N
O - CH2
-O - P - O - P - OH O
O- O- 4' 1'

Pyrophosphate 3' 2' AMPc

-O -P O OH
O
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 51
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs du signal
Activation : enzyme
de la protéine kinase A (PKA) par l'AMPc

Adénylate
cyclase
Protéine kinase A
α ATP
- 2 sous unité catalytique (C)
P

- 2 sous unités régulatrice (R)

GT

AMPc ( )

R C C R
+ AMPc +
R C R
C
PKA inactive
+ ATP

Motif consensus de la PKA : Arg - Arg - X- Ser

Protéine kinase A = Sérine/thréonine kinase (X = T ou S)

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 52
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs duTranscription
signal : enzyme
AMPc- dépendante
AMPc

R R C
R C
R PKA

C C
P
S S
133 133
CREB CREB +
CRE CRE
CREB : cyclic AMP response element binding protein

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 53
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Activation de la phospholipase C-β spécifique des
Les effecteurs du signal : enzyme
phosphatidylinositol par les protéines Gq
Phospholipase C-β :
Histamine
- enzyme transmembranaires
Angiotensine II formés de 2 domaines (SH3 et PH)
- catalyse la réaction PI(4,5)P2 --------------> IP3 + DAG
Thromboxane

- stimulée par αq-GTP provenant de l’activation du RCPG par le ligand

PLC-β
αq β γ
P +
GD

! IP3, alors
Les PLCβ participent à la production d’IP3
+ DAG
que les PLCδ sont activées par l’IP3.
Production de deux messagers lipidiques
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 54
Février 2018
PLC-β : Phospholipase spécifique des phosphatidyl inositol (PI)
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Activation de la phospholipase C-β spécifique des
phosphatidylinositol
Les effecteurs du signal : enzymepar les protéines Gq
Histamine Les différents types de phospholipases
Angiotensine II
Thromboxane
PLA1
CO O CH2

CO O CH PLC choline,
Tête éthanolamine,
CH2 O PO2 O sérine,
PLA2PLC-β polaire
inositol
αq β =γ Lipide membranaire
Phosphatidyl Inositol PLD
GD
P +
PLC
PO=
3
CO O CH2 5 O PO=
IP3 DAG 4
3
+
CO O CH 1
=O P
CH OH 3
Production de deux
2
messagers lipidiques
Marir Rafik
Diacylglycérol : DAG Inositol triphosphate : IP3
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 55
Février 2018
2nd messagers lipidiques
PLC-β : Phospholipase spécifique des phosphatidyl inositol (PI)
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs du signal : enzyme

2: Voies de
nsduction
s protéines
Marir Rafik
G
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 56
Février 2018
A: Voie de la
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les effecteurs du signal : enzyme

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 57
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Seuil de tolérance
Désensibilisation / Tolérance
par inactivation de la signalisation
La morphine agit sur un RCPG couplé à une protéine Gi qui inhibent l’adénylate
cyclase La
et morphine
la production
agit sur d’AMPc.
un récepteur RCPG couplé à une protéine Gi qui inhibent
l'adénylate cyclase et la production d'APMc, ainsi que l'activité de la PKA.
Pour sePour
désensibiliser de la
se désensibiliser morphine
à la etfaire
morphine et faire remonter
remonter led'AMPc,
le taux taux d’AMPc,
la cellule la cellule
augmente le taux
augmente d’adénylate
le taux d'adénylatecyclase.
cyclase et de PKA.
Le morphinomane est donc obligé d'augmenter la dose pour retrouver l'effet initial.
Le morphinomane est donc obligé d’augmenter la dose pour retrouver l’effet initial

Marir Rafik Cours de Signalisation cellulaire – Pr. Jérôme Guerlotté

[Link]@[Link] Université desChapitre 1 la: Guyane,
Antilles et de Signalisation cellulaire
Domaine Sciences, Technologies, Santé 58
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les seconds messagers
En générale, la liaison à l’extérieur de la cellule de l’hormone ou de la
molécule signale sur son récepteur membranaire active la production
d’une autre molécule dans le cytoplasme de la cellule (second messager)
qui transmettra à son tour le signal aux organites et aux enzymes
intracellulaires régulatrices du métabolisme.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 59
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Les seconds messagers

Le second messager doit présenter un certain nombre de propriétés pour être

considéré comme tel:

• Il doit présenter une élévation temporaire de sa concentration suite à la

liaison du ligand
• Il doit précéder l'effet biologique
• On doit pouvoir reproduire l'action du premier messager en augmentant
expérimentalement la concentration du second messager

Le relais entre les deux messagers se fait via une protéine G

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 60
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
III - 2 : Voies de transduction par les Protéines G
Les
III -2-seconds
C : Diversitmessagers
é des voies de transduction par les protéines G
Protéine G Effecteur primaire Second Effecteurs secondaires Effets biologiques
messager
Adénylate cyclase :AC AMPc PKA (protéines kinases phosphorylations
(activation) AMPc dépendantes)
Gαs
Canaux Ca++ (activation) Ca++ Activation NO synthase Synthèse de NO
Activation Ca++-ATPase Stockage de Ca++
Adénylate cyclase AMPc PKA (protéines kinases phosphorylations
(inhibition) AMPc dépendantes)
Gαi
Canaux K+ (ouverture) Sortie de K+ Hyperpolarisation cellules
musculaires coeur

IP3 Ouverture de canaux Ca++ Activation PKC

Phospholipase Cβ : du RE phosphorylations
Gαq
PLCβ (activation) Activation PKC (protéine
DAG kinase dépendante du Ca++) phosphorylations

Cyclo-oxygénase Prostaglandines
Phospholipase A2 : Acide Thromboxanes
Gα12
PLA2 (activation) arachidonique
Lipo-oxygénase Leucotriènes

Gt (Transducine) Phosphodiestérase du GMPc Fermeture canaux Na+ Hyperpolarisation du

activée par photons GMPc (activation) bâtonnet

Golf Adénylate cyclase AMPc Ouverture canaux Na+ et K+ Dépolarisation de la

(activation) cellule sensorielle

Gβγ AC,PLCβ, PLA2,

PK, PTP, Canaux
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 61
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Autres acteurs (intermédiaires internes)
REVIEWS
Protéines adaptatrices (Adaptator proteins) :
Protéines accessoires à l'action d'une protéine principale dans la
signalisation cellulaire ex: GRB2 et SH2B1
a Membrane Adaptor b Insulin D
receptor protein (GRB2) receptor pr
Plasma Plasma PH
membrane SH3 RAS membrane P PTB
P SH2
SH3 SOS P
P
P P
Recruited P
signalling
enzymes
Marir Rafik
Recru
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 62
Février 2018
c d Ion Plasma e
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Autres acteurs (intermédiaires internes)
Protéines adaptatrices (Adaptator proteins) :
Protéines accessoires à l'action d'une protéine principale dans la
signalisation cellulaire ex: GRB2 et SH2B1

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 63
Février 2018
 SH3 SOS

Recruited
Acteurs de la signalisation cellulaire signalling
enzymes
Autres acteurs (intermédiaires internes)
Protéines d’échafaudage
(Scaffolding proteins) : c d Ion
1 Signal channel

Sca old protein

Protéines s’associant avec
plusieurs protéines pour
former un complexe B Signalling
permettant l’activation
séquentielle de ces protéines.
cascade
Ex : KSR C

Focused enzy
Figure 1 | Properties of adaptor, doc
Marir Rafik
[Link]@[Link] the
Chapitre 1 : Signalisation distinguishing features 64of signal-o
cellulaire
Février 2018
Adaptor proteins, such as growth fac
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Autres acteurs (intermédiaires internes)
Protéines d’échafaudage
(Scaffolding proteins) :

Protéines s’associant avec

plusieurs protéines pour
former un complexe
permettant l’activation
séquentielle de ces protéines.
ex : KSR

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 65
Février 2018
 SH3 SOS
P
Recruited
Acteurs de la signalisation cellulaire signalling
enzymes
Autres acteurs (intermédiaires internes) R
Protéines d’échafaudage
c proteins) :
(Scaffolding d Ion Plasma e
Signal channel membrane E
2
A avec C A
Sca old protein

Protéines s’associant
plusieurs protéines et A
regrouper au sein
B d’une région
Signalling
particulière pour assurer leurs
fonctions
cascade
C B

Focused enzyme activity

Figure 1 | Properties of adaptor, docking and scaffold prote
Marir Rafik Nature Review
the distinguishing
[Link]@[Link] Chapitre features of signal-organizing proteins
1 : Signalisation cellulaire 66 and
Février 2018
Adaptor proteins, such as growth factor receptor-bound prot
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Autres acteurs (intermédiaires internes)
Protéines d’amarrage (Docking proteins) :
Protéines composées de domaines modulaires d'interaction de protéine,
elles séquestrent des composants de signalisation à la membrane
cellulaire à côté d'un récepteur ex : IRS1 (Insulin Receptor Substrate 1)

Marir Rafik Langeberg LK, et al. Nature reviews Molecular cell biology. 2015
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 67
Février 2018
 SH3 SOS P
PI3K
P P ac
Recruited P P P P at
Acteurs de la signalisation cellulaire
signalling AKT PDK1 p
enzymes
Autres acteurs (intermédiairesRecruited
internes)signalling enzymes fu
en
Protéines d’échafaudage
d (Scaffolding
Ion Plasma
proteins) : 3
e ki
channel membrane E ector Coordinated
regulation
ei
A B of an e ector by
Protéines s’associant avec C
A au sein
plusieurs protéines A
gnalling d’une plateforme pour assurer in
une fonction coordonnée
ascade C lin
B th
si
Focused enzyme activity gr
erties of adaptor, docking and scaffold proteins. The figure depicts kn
Nature Reviews | Molecular Cell Biology
se
Marir Rafik
ng features of signal-organizingChapitre
[Link]@[Link] proteins and
1 : Signalisation of scaffold proteins. 68
cellulaire
Février 2018
ns, such as growth factor receptor-bound protein 2 (GRB2) (part a), and
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Autres acteurs (intermédiaires internes)
Protéine d’ancrage aux PKA (Anchoring proteins) :
Elles jouent un rôle majeur dans la signalisation cellulaire en s’associant
aux kinases et phosphatases afin de stabiliser ces protéines et de mettre
en contact les différents sites d’interaction. Ex : AKAP (A Kinase
Anchoring Protein) et RACK (Receptor for Activated C Kinase

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 69
Février 2018
[Link] / Nov2007
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Domaines protéiques pour des interactions spécifiques
Domaine de liaison/de régulation
Site
secondaire SH2 Domaine « Src Homology 2 »
100 aa
P Spécificité: phosphotyrosine et
Site SH3 Domaine « Src Homology 3 »
primaire I environnement côté C-terminal
-Y-X-X-hy- 60 aa
Spécificité: proline

Domaine « Phospho-Tyrosine -P-X-X-P-X-

PTB
Binding »
P 200 aa
I Spécificité: phosphotyrosine et WW Domaine avec Tryptophane (W)
-hy-X-N-P-X-Y- environnement côté N-terminal 40 aa
Spécificité: proline

14.3.3 Dimère de protéine 14.3.3

-P-P-X-Y-

Spécificité: phosphosérine
P
I PH Domaine « Pleckstrin
-R-S-X-S-X-P- Homology »
100 aa
+++ +++ +++
Spécificité: interaction avec
PDZ Domaine 100 aa Phospholipides phospholipides membranaires
Spécificité: extrémité C-terminale

-E-S/T-D-V-COOH

Marir Rafik
[Link] / Nov2007 43
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 71
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale
Les réponses cellulaires peuvent être :

- Extrêmement rapide (quelques millisecondes) exemple : l’ouverture d’un

canal ionique ayant pour effet le changement de DDP au niveau
membranaire ou la contraction de fibres musculaires .

- Moyennement Rapides (quelques minutes) exemple : le mouvement

cellulaire, la synthèse de nouvelles protéines ou un changement dans
l’activité métabolique.

- Lente (plusieurs heures ou mêmes jours) exemple : la division cellulaire et

l’apoptose.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 72
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale

IV - 1 : Amplification
du signal

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 73
Février 2018 (Molecular Biology of the Cell)
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale
plusieurs types de réponses se
produisent suite à un seul
stimulus de façon coordonné et
durant différentes périodes
d’action.

Au sein des organismes

multicellulaires, une cellule
donnée est exposée à différents
signaux extracellulaires au
même moment, la réponse
cellulaire finale dépendra alors
du type cellulaire et de
l’intégration appropriée de ces
signaux.
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 74
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale

Ce qui est vrai dans une

situation biologique, ne
l’est pas nécessairement
dans une autre :
L’activation d’un récepteur
par un messager a des
effets différents selon le
type de cellule voir selon le
niveau de maturation ou de
différenciation d’une cellule
donnée.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 75
Février 2018
 IV- 2 : Interaction des voies de signalisation
Acteurs de la signalisation cellulaire
IV -2-B : voies « récepteurs enzymes » et RCPG
La réponse au signale

Cross-talk βγ

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 76
Février
(Molecular Biology 2018
of the Cell)
 Acteurs de la signalisation cellulaire
5. Présence de boucles de rétro régulation
La réponse au signale

Boucle de rétro régulation

Marir Rafik
Le problème à terme étant d’élucider le rôle qualitatif et
quantitatif des voies
[Link]@[Link] de
Chapitre signalisation.
1 : Signalisation cellulaire Approche intégrée 77
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale
Facteurs régulateurs de la transcription

Ils peuvent induire un programme de différenciation de multiples façons.

Un même facteur de transcription (FT) peut moduler (+/-) l’expression de plusieurs gènes
cibles.

Un gène peut être régulé par plusieurs facteurs de transcription.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 78
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale
Un même facteur de transcription peut activer ou inhiber la transcription d’un gène.

Un facteur de transcription peut s’auto-réguler.

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 79
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
La réponse au signale

Un facteur de transcription peut moduler l’expression d’autres facteurs de transcription

(action séquentielle).

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 80
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
L’arrêt du signal

La réponse de la cellule cesse quand le signal disparaît.

Car le signal agit sur un ensemble de molécules qui se renouvellent

rapidement : turn-over rapide ce qui efface l’effet du signal précédent.

- Turn-over des récepteurs, des transducteurs, des effecteurs, (kinases,

second messagers etc…)

- La cellule règle la perception du signal en contrôlant la synthèse et la

dégradation des protéines de signalisation

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 81
Février 2018
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Adaptation / désensibilisation
L’arrêt du signal
On distingue 3 niveaux de désensibilisation :

1 – LIG
1 - reca
2 - dég
du liga

2 – RE
a/ - ina
Régulation de la concentration en ligand par ph
OIM5 !
découp
- Recapture
- Dégradation b/ - Inte
récepte
recycla
Marir Rafik
"recept
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 82
Février 2018
3 – SIG
 Acteurs de la signalisation cellulaire
Messagers secondaires communs à toutes les cellules :
AMPc, DAG, IP3, Ca2+
Grandes voies de transduction communes :
PKA, PKC, MAPK…
Diversité des composants de chacune de ces voies
Régulations entrecroisées entre les voies
Amplification du signal jusqu’à la réponse
Identification
- Des récepteurs
- Des protéines couplées aux récepteurs
- Des effecteurs et intermédiaires

Détermination de la cible moléculaire (thérapeutique)

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 83
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Caspase
GAP/GEF
Kinase Receptor
GTPase Deacetylase
Phosphatase Enzyme
G-protein Ribosomal subunit
Transcription Factor pro-apoptotic
Direct Stimulatory Modification Acetylase
pro-survival
pro-survival
Separation of Subunits or Cleavage Products
Direct Stimulatory Modification
Joining of Subunits
Direct Inhibitory Modification
Translocation
Multistep Stimulatory Modification
Transcriptional Stimulatory Modification
Multistep Inhibitory Modification
Transcriptional Inhibitory Modification

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 84
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie PI3K/Akt

DNA-PK

mTORC2

PI3K : Phosphoinositide 3-Kinase

mTORC : mechanistic Target Of Rapamycin Complex
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 85
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie PI3K/Akt

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 86
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie PI3K/Akt
Kinase

Phosphatase

Transcription Factor
Direct Stimulatory Modification
Caspase
Direct Inhibitory Modification
Receptor
Multistep Stimulatory Modification
Enzyme Multistep Inhibitory Modification

pro-apoptotic Tentative Stimulatory Modification

Tentative Inhibitory Modification

pro-survival
Separation of Subunits or Cleavage Products
GAP/GEF
Joining of Subunits
GTPase
Translocation

G-protein Transcriptional Stimulatory Modification

Acetylase Transcriptional Inhibitory Modification

Deacetylase

Ribosomal subunit
 Grandes voies de signalisation
Voie MAPK/Erk

Marir Rafik
[Link]@[Link] 88
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie MAPK/Erk

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 89
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie MAPK/Erk

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 90
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie Jak/Stat

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 91
Février 2018
 Grandes voies de signalisation
Voie Jak/Stat
Kinase

Phosphatase

Transcription Factor
Direct Stimulatory Modification
Caspase
Direct Inhibitory Modification
Receptor
Multistep Stimulatory Modification
Enzyme Multistep Inhibitory Modification

pro-apoptotic Tentative Stimulatory Modification

Tentative Inhibitory Modification

pro-survival
Separation of Subunits or Cleavage Products
GAP/GEF
Joining of Subunits
GTPase
Translocation

G-protein Transcriptional Stimulatory Modification

Acetylase Transcriptional Inhibitory Modification

Deacetylase

Ribosomal subunit
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 92
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation

Ji-Wei Chang et al., 2016

in silico in vitro in vivo

• Prédiction des interactions • Caractérisation détaillée • Maintien du contexte
potentielles des interactions cellulaire
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 93
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
Co-immunoprécipitation

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 94
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
Double Double
hybridehybride
DA : domaine d’activation Système rapporteur
DA DL : domaine de liaison à l’ADN
TF
DL colonies de levures

pas d’expression
mARN expression du gène

DA prot 2 prot 3
Fusion protéines et modules du
facteur de transcription prot 1 DL DL

Expression du système

mARN

Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 95
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
FRET (fluorescence resonance energy transfer)
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer
L. Stryer; Annu Rev Biochem 1978; 47: 819–846

R0
excitation 10-70 Å émission

accepteur

donneur 475 nm 525 nm

nm
475 525

Principe : • excitation d’un fluorophore donneur par un photon

• émission fluorescence par le donneur
• excitation du fluorophore accepteur s’il est suffisamment proche
Marir Rafik
• mesure du rapport
[Link]@[Link]
de fluorescence
Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 96
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer
Les molécules fluorescentes ont la propriété d’absorber la lumière à certaines
longueurs d’onde et de réémettre quasi-instantanément (10-16 s) une lumière de
longueur d’onde plus élevée.
Perte d énergie

Noyau

e- Émission de fluorescence

Photon
(lumière d'excitation) Fluorescence Resonance
Energy Transfer
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 97
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer
Donneur Accepteur
Transfert
d énergie

Noyau

e-
e-

Photon
émis
Photon
d’excitation
Fluorescence Resonance
Energy Transfer
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 98
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer

Bioluminescence
Resonance Energy Transfer

wikipedia
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 99
Février 2018
 Investigation des interactions en
signalisation
FRET : Fluorescence Resonance Energy Transfer
Avantages :
• Etude dynamique en temps réel
• Applicable in vivo dans le système cellulaire originel
• Peut être couplé à un signal biologique
• Applicable dans tous les compartiments cellulaires

Inconvénients :
• Création de protéines chimériques qui peuvent modifier les
interactions
• Nécessite la surexpression des protéines testées

Application :
• Signification biologique des interactions
• Localisation cellulaire par couplage avec des techniques de
microscopie
Marir Rafik
[Link]@[Link] Chapitre 1 : Signalisation cellulaire 100
Février 2018